臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)：第8章 酶免疫技術(shù)

1、第八章 酶免疫技術(shù)(Chapter 8 Immunoenzyme Technique) 酶免疫技術(shù)：是將酶高效催化反應(yīng)的專一性和抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合的一種免疫標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)。第八章 酶免疫技術(shù)(Chapter 8 Immunoenzyme Technique) 利用酶標(biāo)記抗原或抗體作為主要試劑，檢測(cè)樣品中相應(yīng)的抗體或抗原，既具有抗原抗體反應(yīng)的特異性，又具有酶促催化反應(yīng)的敏感性，是免疫反應(yīng)和酶的催化放大作用相結(jié)合的技術(shù)。 酶免疫技術(shù)：是將酶高效催化反應(yīng)的專一性和抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合的一種免疫標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)。第八章 酶免疫技術(shù)(Chapter 8 Immunoenzyme Techniqu

2、e)靈敏度高特異性強(qiáng)準(zhǔn)確性好操作簡(jiǎn)便酶標(biāo)試劑能較長(zhǎng)時(shí)間保存對(duì)環(huán)境無(wú)污染1辣根過(guò)氧化物酶（HRP）第八章 酶免疫技術(shù)(Chapter 8 Immunoenzyme Technique)常用的酶鄰苯二胺（OPD）反應(yīng)液顯橙黃色，硫酸終止反應(yīng)后呈棕黃色。最大吸收峰波長(zhǎng)為492nm。應(yīng)用最早，但不穩(wěn)定，易變色，具有致癌性。1辣根過(guò)氧化物酶（HRP）第八章 酶免疫技術(shù)(Chapter 8 Immunoenzyme Technique)常用的酶四甲基聯(lián)苯胺（TMB）反應(yīng)液呈藍(lán)色，硫酸終止反應(yīng)后呈黃色。最大吸收峰波長(zhǎng)為450nm。穩(wěn)定性好、呈色過(guò)程無(wú)需避光、無(wú)致癌性。2堿性磷酸酶（ALP）第八章 酶免疫技術(shù)

3、(Chapter 8 Immunoenzyme Technique)常用的酶對(duì)-硝基苯磷酸酯（p-NPP）磷酸鹽緩沖液對(duì)ALP有抑制作用。難獲得ALP高純度制劑，穩(wěn)定性差，價(jià)格高。反應(yīng)液呈黃色，NaOH終止。最大波長(zhǎng)為405nm。3-半乳糖苷酶（-Gal）第八章 酶免疫技術(shù)(Chapter 8 Immunoenzyme Technique)常用的酶4-甲基傘形酮-D半乳糖苷（4MUG）-Gal來(lái)源于大腸埃希菌，最適PH6.08.0。人缺乏此酶，不易受干擾，特異性強(qiáng)，常用于均相酶免疫測(cè)定。酶促反應(yīng)后生成4-MU，靈敏度較HRP高3050倍。測(cè)量時(shí)需用熒光檢測(cè)儀。第八章 酶免疫技術(shù)(Chapter

4、 8 Immunoenzyme Technique)基本原理和分類基本原理： 酶標(biāo)抗體（抗原）與抗原（抗體）的特異性反應(yīng) 酶對(duì)底物的顯色反應(yīng) 對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定性、定量或定位分析 Ab-E + Ag AgAb-E 加底物顯色第八章 酶免疫技術(shù)(Chapter 8 Immunoenzyme Technique)基本原理和分類酶免疫技術(shù)酶免疫組化酶免疫測(cè)定均相 異相固相酶免疫測(cè)定液相酶免疫測(cè)定細(xì)胞或組織切片中抗原的定位分析 液體標(biāo)本中抗原或抗體的定性和定量第八章 酶免疫技術(shù)均相酶免疫分析 均相酶免疫分析是利用酶標(biāo)記物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，標(biāo)記酶的活性會(huì)發(fā)生改變的原理，可以在不將結(jié)合酶標(biāo)記物和游

5、離酶標(biāo)記物分離的情況下，通過(guò)測(cè)定標(biāo)記酶活性的改變，從而確定抗原或抗體的含量。 主要用于小分子激素、藥物等的測(cè)定，適于自動(dòng)化測(cè)定。分為酶放大免疫分析技術(shù)、克隆酶供體免疫分析。第八章 酶免疫技術(shù)均相酶免疫分析一、酶放大免疫分析技術(shù)（EMIT）常用葡萄糖-6-磷酸脫氫酶和溶菌酶第八章 酶免疫技術(shù)均相酶免疫分析二、克隆酶供體免疫分析（CEDIA）-D-半乳糖苷酶（2EA+2ED）酶供體酶受體第八章 酶免疫技術(shù)異相酶免疫分析 異相酶免疫分析是抗原抗體反應(yīng)平衡后，采用適當(dāng)?shù)姆椒ǚ蛛x游離酶標(biāo)記物和結(jié)合酶標(biāo)記物，然后對(duì)底物的顯色程度進(jìn)行測(cè)定，再推算出樣品中待測(cè)抗原（或抗體）的含量。 分為液相酶免疫分析和固相酶

6、免疫分析。第八章 酶免疫技術(shù)異相酶免疫分析一、液相酶免疫分析平衡法：待測(cè)抗原（或標(biāo)準(zhǔn)品）、酶標(biāo)抗原、特異性抗體相繼加入反應(yīng)體系，溫育，反應(yīng)達(dá)平衡后，加入分離劑，離心沉淀后棄上清，測(cè)定沉淀物中酶活性。非平衡法：先將待測(cè)抗原（或標(biāo)準(zhǔn)品）、特異性抗體加入反應(yīng)體系，反應(yīng)達(dá)平衡后再加入酶標(biāo)抗原繼續(xù)反應(yīng)。最后加入分離劑，離心沉淀后棄上清，測(cè)定沉淀物中酶活性。第八章 酶免疫技術(shù)異相酶免疫分析二、固相酶免疫分析利用固相載體預(yù)先吸附抗原或抗體，使測(cè)定時(shí)的免疫反應(yīng)在其表面進(jìn)行。這樣只需經(jīng)過(guò)洗滌即可分離IC。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)第八章 酶免疫技術(shù)異相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)1基本原理第八章 酶免疫技

7、術(shù)異相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)2方法類型第八章 酶免疫技術(shù)+-第八章 酶免疫技術(shù)異相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)2方法類型第八章 酶免疫技術(shù)異相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)2方法類型競(jìng)爭(zhēng)法第八章 酶免疫技術(shù)異相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)2方法類型間接法第八章 酶免疫技術(shù)異相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)2方法類型雙抗原夾心法第八章 酶免疫技術(shù)異相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)2方法類型ELISA在預(yù)防醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)的應(yīng)用 病原體及其抗體 蛋白質(zhì) 非肽類激素 藥物 尿中毒品 在食品檢測(cè)中的應(yīng)用 微生物 毒素