高通量測(cè)序技術(shù)臨床應(yīng)用質(zhì)量管理

1、高通量測(cè)序技術(shù)臨床應(yīng)用質(zhì)量管理李金明 國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心第1頁(yè)基因測(cè)序技術(shù)發(fā)展1953年：DNA雙股螺旋發(fā)覺(jué)（英國(guó)劍橋大學(xué)James Watson 和Francis Crick ）1965年：酵母tRNA測(cè)序（美國(guó)Comell大學(xué)Rober Holley，小片段重合法）1971年：噬菌體兩個(gè)粘性末端完整序列（吳瑞博士，華裔分子生物學(xué)教授，引物延伸測(cè)序）1975年：加減法 DNA測(cè)序（英國(guó)劍橋大學(xué)Fred ）1977年：Sanger測(cè)序（英國(guó)劍橋大學(xué)Fred Sanger）和Maxam-Gillbert DNA化學(xué)降解法測(cè)序(美國(guó)哈佛Alan Maxam &Walter Gilbert）

2、1996年：焦磷酸測(cè)序（瑞典皇家技術(shù)研究所Ronaghi M等）:Genome Sequencer20新一代測(cè)序儀(大規(guī)模并行焦磷酸合成測(cè)序法，454 life Science企業(yè)創(chuàng)始人Jonathan Rothberg)年:454、Solexa企業(yè)和Agencourt（SoliD測(cè)序儀）企業(yè)分別被Roche、illumina和ABI企業(yè)收購(gòu)。新一代測(cè)序技術(shù)（next-generation sequencing）年被Nature Methods評(píng)為生物領(lǐng)域影響力最大技術(shù)第2頁(yè)精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)不等于高通量測(cè)序高通量測(cè)序是精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)支點(diǎn)第3頁(yè)高通量測(cè)序技術(shù)臨床應(yīng)用染色體非整倍體無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查（NIPT）胚胎植

3、入前遺傳學(xué)篩查（ Preimplantation Genetic Screening，PGS）和胚胎植入前基因診療（Preimplantation Genetic Dignosis，PGD）腫瘤靶向治療基因突變檢測(cè)單基因遺傳病檢測(cè)病原微生物檢測(cè)：如HPV基因分型、宏基因組（Metagenomics）測(cè)序第4頁(yè)高通量測(cè)序技術(shù)臨床應(yīng)用規(guī)范化和質(zhì)量管理國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委醫(yī)政醫(yī)管局高通量測(cè)序臨床應(yīng)用試點(diǎn)試驗(yàn)室：評(píng)審標(biāo)準(zhǔn)、評(píng)審、試點(diǎn)試驗(yàn)室基本要求、管理試點(diǎn)試驗(yàn)室增加質(zhì)評(píng)調(diào)查：全國(guó)腫瘤診療與治療高通量測(cè)序檢測(cè) 年新增質(zhì)評(píng)計(jì)劃：染色體非整倍體（21、13、18）無(wú)創(chuàng)產(chǎn)篩年即將增加質(zhì)評(píng)調(diào)查：腫瘤游離DNA（ctD

4、NA）檢測(cè)第5頁(yè)第6頁(yè)同意第一批四個(gè)專業(yè)試點(diǎn)單位第7頁(yè)第8頁(yè)國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委高通量測(cè)序試點(diǎn)試驗(yàn)室要求第9頁(yè)基本要求（1）1. 試點(diǎn)試驗(yàn)室應(yīng)在國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委同意試點(diǎn)專業(yè)范圍內(nèi)開(kāi)展臨床檢測(cè)工作。2. 試點(diǎn)試驗(yàn)室需采取高通量測(cè)序開(kāi)展不少于一項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目。3. 為防止污染所致假陽(yáng)性結(jié)果，各試點(diǎn)試驗(yàn)室應(yīng)依據(jù)所開(kāi)展檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行分區(qū)，詳細(xì)各專業(yè)試驗(yàn)室分區(qū)要求由國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心負(fù)責(zé)公布。第10頁(yè)產(chǎn)前篩查與產(chǎn)前診療（全基因組低拷貝測(cè)序技術(shù)）緩沖間測(cè)序區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向文庫(kù)擴(kuò)增與檢測(cè)區(qū)標(biāo)本與文庫(kù)制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本與文庫(kù)制備區(qū)文庫(kù)擴(kuò)增與檢測(cè)區(qū)測(cè)序區(qū)第11頁(yè)植

5、入前胚胎遺傳學(xué)診療(全基因組低拷貝測(cè)序)緩沖間測(cè)序區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊文庫(kù)檢測(cè)區(qū)WGA制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)緩沖間緩沖間空氣流向空氣流向電泳區(qū)擴(kuò)增一區(qū)第12頁(yè)遺傳病診療+腫瘤診療與治療（雜交捕捉測(cè)序技術(shù)+Sanger測(cè)序驗(yàn)證）DNA打斷區(qū)緩沖間緩沖間雜交捕捉區(qū)（擴(kuò)增一區(qū)）空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊文庫(kù)擴(kuò)增區(qū)（擴(kuò)增二區(qū)）標(biāo)本與文庫(kù)制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)文庫(kù)檢測(cè)區(qū)測(cè)序區(qū)電泳區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間雜交捕捉區(qū)（擴(kuò)增一區(qū)）空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊文庫(kù)擴(kuò)增區(qū)（擴(kuò)增二區(qū)）標(biāo)本與文

6、庫(kù)制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)文庫(kù)檢測(cè)區(qū)測(cè)序區(qū)電泳區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間第13頁(yè)關(guān)于“分區(qū)”、緩沖間和生物安全柜“各區(qū)獨(dú)立注意風(fēng)向因地制宜方便工作”試驗(yàn)室應(yīng)依據(jù)自己檢驗(yàn)項(xiàng)目、所采取檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)和工作量來(lái)決定分區(qū)多少及各區(qū)域空間大小。最少詳細(xì)需要多少個(gè)區(qū)，一樣是“個(gè)體化”，以“工作有序、互不干擾、預(yù)防污染、匯報(bào)及時(shí)“作為基本標(biāo)準(zhǔn)。緩沖間功效是“控制空氣流向”。生物安全柜可考慮“A2”。緩沖間測(cè)序區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向文庫(kù)擴(kuò)增與檢測(cè)區(qū)標(biāo)本與文庫(kù)制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)第14頁(yè)高通量測(cè)序試驗(yàn)室設(shè)計(jì)需注意幾點(diǎn)電泳區(qū)：DNA提取、DNA片段化后大小

7、判定等步驟需要用到電泳，單獨(dú)成區(qū)，但不一樣檢測(cè)項(xiàng)目能夠共用該區(qū)域。測(cè)序區(qū)：應(yīng)為恒溫恒濕試驗(yàn)室，2小時(shí)溫度波動(dòng)應(yīng)小于2。分區(qū)設(shè)置可依據(jù)自動(dòng)化儀器設(shè)備引入做適當(dāng)流程、區(qū)間整合。無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查試驗(yàn)室，因血漿提取為胎兒微量DNA，為預(yù)防污染，不能與其它項(xiàng)目標(biāo)標(biāo)本制備區(qū)共用。其它：試驗(yàn)室通風(fēng)換氣（10次/小時(shí)）、生物安全柜等要求普通基因擴(kuò)增試驗(yàn)室。第15頁(yè)基本要求（2）4. 試點(diǎn)試驗(yàn)室如使用商品化試劑，則應(yīng)該使用經(jīng)過(guò)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）同意試劑，臨床應(yīng)用前應(yīng)經(jīng)過(guò)性能驗(yàn)證；如使用自配試劑（LDT），必須建立自配試劑標(biāo)準(zhǔn)操作程序，并經(jīng)過(guò)性能評(píng)價(jià)。以上均須保留對(duì)應(yīng)試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)。5. 試點(diǎn)試驗(yàn)室應(yīng)對(duì)對(duì)

8、應(yīng)檢測(cè)儀器設(shè)備進(jìn)行日常維護(hù)和定時(shí)校準(zhǔn)，并保留儀器維護(hù)校準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)。第16頁(yè)“性能驗(yàn)證”（“verification”）定義“verification”： broadly as “confirmation through the provision of objective evidence, that specified requirements have been fulfilled” . （廣義為經(jīng)過(guò)提供客觀證據(jù)證實(shí)特定要求得到滿足）CLIA uses the term “verification”： specifically to relate to confirmation that th

9、e laboratory using a test can replicate the manufacturers performance claims when the test is used according to the package insert. （CLIA性能驗(yàn)證術(shù)語(yǔ)特指使用某特定檢測(cè)試劑或系統(tǒng)試驗(yàn)室按照所提供試劑盒或檢測(cè)系統(tǒng)說(shuō)明書(shū)使用時(shí)，能復(fù)現(xiàn)生產(chǎn)廠家所宣稱檢測(cè)性能。）第17頁(yè)“性能確認(rèn)”（“validation” ）定義The FDA and ISO both define the term “validation” as “confirmation by examina

10、tion and provision of objective evidence that the particular requirements for a specific intended use can be consistently fulfilled” . （經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)和提供客觀證據(jù)證實(shí)，對(duì)一特定預(yù)期應(yīng)用要求一直能得到滿足）The FDA and ISO terms for verification and are similar, with the distinction having to do with intended use. （性能驗(yàn)證和性能確認(rèn)FDA和ISO術(shù)語(yǔ)相同，差

11、異在后者“預(yù)期用途”）第18頁(yè)“intended use”預(yù)期用途 The term “intended use” in these documents is established by the manufacturer or developing laboratory at the time of assay development and has to do with the purpose and population for which the test was intended (e.g., diagnosis, following treatment, etc.). Releva

12、nt performance characteristics are then determined based on the intended use of the test. Some people interpret “intended use” as referring to the relevant clinical laboratory in which the test is performed, rather than the manufacturer or developing laboratory, thus causing confusion. The World Hea

13、lth Organization (WHO) defines validation as “the action (or process) of proving that a procedure, process, system equipment or method used works as expected and achieves the intended result” . （WHO將validation定義為，證實(shí)所使用一個(gè)程序、過(guò)程、系統(tǒng)設(shè)備或方法能按預(yù)期進(jìn)行工作以及取得預(yù)期結(jié)果活動(dòng)（或過(guò)程）第19頁(yè)“validation” 通俗一點(diǎn)定義the term “validation”

14、 will be used to refer to the analytic performance characteristics that need to be initially established at the time of assay development. （指在測(cè)定方法研發(fā)時(shí)，最早建立分析性能特征）第20頁(yè)NGS性能評(píng)價(jià)指標(biāo)有哪些？精密度（precision）：重復(fù)性研究準(zhǔn)確度（accuracy）：方法學(xué)比較研究分析靈敏度（analytical sensitivity）：測(cè)定下限研究分析特異性（analytical specificity）：干擾物質(zhì)研究可匯報(bào)范圍（ re

15、portable range)：可測(cè)定基因區(qū)域研究第21頁(yè)基本要求（3）6. 試點(diǎn)試驗(yàn)室應(yīng)對(duì)技術(shù)人員制訂培訓(xùn)計(jì)劃，進(jìn)行相關(guān)在崗連續(xù)培訓(xùn)，保留人員培訓(xùn)統(tǒng)計(jì)。7. 試點(diǎn)試驗(yàn)室應(yīng)建立日常檢測(cè)試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方式，并保留對(duì)應(yīng)統(tǒng)計(jì)。8,試點(diǎn)試驗(yàn)室應(yīng)建立規(guī)范檢測(cè)結(jié)果匯報(bào)與解釋模式。第22頁(yè)第23頁(yè)第24頁(yè)第25頁(yè)第26頁(yè)第27頁(yè)第28頁(yè)第29頁(yè)第30頁(yè)第31頁(yè)第32頁(yè)第33頁(yè)基本要求（4）9. 試點(diǎn)試驗(yàn)室 應(yīng)建立室內(nèi)質(zhì)量控制程序，在日常檢測(cè)中開(kāi)展室內(nèi)質(zhì)量控制，保留室內(nèi)質(zhì)控及其失控及定時(shí)綜合分析統(tǒng)計(jì)，并有質(zhì)量改進(jìn)辦法。10. 試點(diǎn)試驗(yàn)室應(yīng)參加由國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委組織對(duì)應(yīng)項(xiàng)目標(biāo)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)或進(jìn)行有效試驗(yàn)室室間比對(duì)，并保留

16、室間質(zhì)量評(píng)價(jià)或試驗(yàn)室室間比對(duì)統(tǒng)計(jì)，對(duì)不合格結(jié)果應(yīng)進(jìn)行原因分析，并采取質(zhì)量改進(jìn)辦法。第34頁(yè)室內(nèi)質(zhì)量控制（Internal quality control, IQC）采用已知陰性和弱陽(yáng)性質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控是保證檢測(cè)質(zhì)量關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其監(jiān)控是實(shí)驗(yàn)室測(cè)定最重要性能指標(biāo)即重復(fù)性，并決定了當(dāng)批實(shí)驗(yàn)測(cè)定是否有效，報(bào)告能否發(fā)出，是對(duì)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定即時(shí)性評(píng)價(jià)。是質(zhì)量改進(jìn)不可缺少措施。陰性質(zhì)控品：不是指突變陰性樣本，而是采用無(wú)模板對(duì)照（No Template Control, NTC）作為陰性質(zhì)控品，陰性質(zhì)控品需包含在所有擴(kuò)增步驟中，以證實(shí)在樣本和試劑中沒(méi)有核酸污染。陽(yáng)性質(zhì)控品：包括至少一個(gè)已知突變位點(diǎn)，最好變異百分比

17、接近檢測(cè)下限，以證實(shí)低百分比突變可在每批次中檢出。質(zhì)控樣本無(wú)需在每批檢測(cè)中包括所有突變類型，只需加入一個(gè)已知突變位點(diǎn)質(zhì)控品。但是，實(shí)驗(yàn)室最好有多個(gè)突變質(zhì)控品，并在日常檢測(cè)中輪流使用。質(zhì)控樣本可以采用人基因組DNA或其他合成帶有突變基因組DNA（不建議采用質(zhì)粒）。但是這種質(zhì)控品不能監(jiān)測(cè)提取過(guò)程。臨床樣本當(dāng)然是最理想質(zhì)控品，但是樣原來(lái)源有限，很難長(zhǎng)期使用。第35頁(yè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（External quality assessment, EQA）EQA或試驗(yàn)室間比正確目標(biāo)：監(jiān)測(cè)試驗(yàn)室測(cè)定準(zhǔn)確性或結(jié)果可比性；是質(zhì)量改進(jìn)不可缺乏辦法。EQA樣本：腫瘤靶向治療包括基因位點(diǎn)較多，EQA往往難以覆蓋全部情況，而

18、且為確保EQA樣本起源和重復(fù)性，EQA組織者可能采取細(xì)胞系或人基因組DNA作為評(píng)價(jià)樣本臨床試驗(yàn)室可經(jīng)過(guò)臨床樣本試驗(yàn)室間比對(duì)，來(lái)作為補(bǔ)充。第36頁(yè)基本要求（5）11. 試點(diǎn)試驗(yàn)室應(yīng)制訂包含以下內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）及相關(guān)統(tǒng)計(jì)表格： （1）樣本采集、運(yùn)輸、保留、接收、登記和處理； （2）知情同意通知； （3）檢測(cè)方法和步驟； （4）試劑和耗材選擇和保留（如為自配試劑，需詳細(xì)寫明試劑制備過(guò)程以及各原料起源）； （5）試劑性能驗(yàn)證或自配試劑性能評(píng)價(jià)和方法確認(rèn)； （6）儀器使用、維護(hù)和校準(zhǔn)； （7）人員培訓(xùn)； （8）結(jié)果匯報(bào)與解釋； （9）試驗(yàn)室數(shù)據(jù)、相關(guān)文件統(tǒng)計(jì)與保留； （10）室內(nèi)質(zhì)量控制； （

19、11）室間質(zhì)量評(píng)價(jià)或試驗(yàn)室間比對(duì)； （12）知情同意和保密程序。12. 其它未盡事項(xiàng)要求，試點(diǎn)試驗(yàn)室均應(yīng)參考醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室管理方法。第37頁(yè)試驗(yàn)室質(zhì)量管理“靈魂”源于一些標(biāo)準(zhǔn)文件（如儀器試劑說(shuō)明書(shū)、國(guó)際國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)文件）和試驗(yàn)室實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)積累。所以高于相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)文件！SOP等于試劑盒說(shuō)明書(shū)嗎？標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）是試驗(yàn)室“最高標(biāo)準(zhǔn)”！有可操作性SOP是質(zhì)量管理“靈魂”！第38頁(yè)試點(diǎn)試驗(yàn)室可參考一些指南性文件第39頁(yè)個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)管理方法及相關(guān)指南和導(dǎo)則制訂分工指南名稱責(zé)任人藥品代謝與效應(yīng)基因多態(tài)性檢測(cè)相關(guān)技術(shù)指南 周宏灝院士腫瘤相關(guān)個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)指南詹啟敏院士曾益新院士遺傳病

20、相關(guān)個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)指南曾溢滔院士病原微生物相關(guān)個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)指南尚 紅教授芯片技術(shù)個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)應(yīng)用技術(shù)指南程 京院士測(cè)序技術(shù)個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)應(yīng)用技術(shù)指南于 軍教授原位雜交技術(shù)個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)應(yīng)用技術(shù)指南陳 杰教授個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)LDT相關(guān)技術(shù)指南程 京院士個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)試驗(yàn)室管理方法尚 紅教授李金明教授 第40頁(yè)美國(guó)CLSI制訂一些與分子檢測(cè)相關(guān)導(dǎo)則或指南項(xiàng)目名 稱內(nèi) 容1CLSI/NCCLS MM1A基因疾病分子診療方法2CLSI/NCCLS MM2-A2免疫球蛋白和T細(xì)胞基因重排檢測(cè)3CLSI/NCCLS MM3-P2傳染性疾病分子診療方法4CLSI/NCCLS MM5-A分子血液病理

21、學(xué)核酸擴(kuò)增檢測(cè)5CLSI/NCCLS MM6傳染性疾病定量分子檢測(cè)方法6CLSI/NCCLS MM7-A醫(yī)學(xué)遺傳檢測(cè)中熒光原位雜交方法7CLSI/NCCLS MM9-A試驗(yàn)室診療醫(yī)學(xué)中核酸測(cè)序方法8CLSI/NCCLS MM10-P傳染性疾病基因分型9CLSI/NCCLS MM12-P診療用核酸芯片10CLSI/NCCLS MM13-A分子診療方法中標(biāo)本搜集、運(yùn)輸、處理和儲(chǔ)存11CLSI/NCCLS MM14-A分子診療方法中能力驗(yàn)證12 CLSI/NCCLS MM14-A2分子檢測(cè)能力驗(yàn)/室間質(zhì)量評(píng)價(jià)設(shè)計(jì)13CLSI/NCCLS MM16-P外源RNA對(duì)照用于基因表示檢測(cè)14 CLSI/NC

22、CLS MM20-A分子遺傳檢測(cè)質(zhì)量管理 第41頁(yè)高通量測(cè)序室間質(zhì)量評(píng)價(jià)染色體非整倍體（T21、T18和T13）無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查腫瘤基因突變高通量測(cè)序檢測(cè)第42頁(yè)全國(guó)外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測(cè)序檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)調(diào)查活動(dòng)樣本信息樣本編號(hào)預(yù)期結(jié)果樣本性質(zhì)胎兒游離DNA濃度是否計(jì)分21號(hào)染色體非整倍體18號(hào)染色體非整倍體13號(hào)染色體非整倍體1401陰性陰性陰性染色體正常陰性樣本是1402陽(yáng)性陰性陰性T21610%是1403陰性陽(yáng)性陰性T184%否1404陰性陰性陰性性染色體異常XXX是1405陰性陰性陽(yáng)性T13610%是1406陰性陽(yáng)性陰性T1810%, 70%嵌合是14

23、07陰性陰性陰性染色體正常陰性樣本是1408陰性陽(yáng)性陰性T18610%是1409陰性陰性陰性染色體正常陰性樣本是1410陽(yáng)性陰性陰性T2110%, 30%嵌合否1411陰性陽(yáng)性陰性T1810%, 30%嵌合否1412陰性陰性陰性染色體正常陰性樣本是1413陰性陰性陽(yáng)性T1346%是1414陽(yáng)性陰性陰性T2146%是1415陽(yáng)性陰性陰性T2110%, 70%嵌合是1416陰性陰性陰性染色體正常陰性樣本是1417陰性陰性陽(yáng)性T134%否1418陰性陽(yáng)性陰性T1846%是1419陽(yáng)性陰性陰性T215M3.2M41.9646M2M41.9640.200ng/lNA3.0M3.112.393.113.5

24、M1.8M3NA3233.52.53.53pM5M3M31.9632 ng/l 10 M4M3.52.83.51 nmol/LNA3M3230.20ng/lNA3M3233NA4245ng/ul6M5M3.52.5-3.510%EGFRNM_005228.3(EGFR):c.493CT(p.Arg165Trp)450%FGFR3NM_000142.4(FGFR3):c.1948AC(p.Lys650Gln)1450%IDH1NM_005896.2(IDH1):c.395GA(p.Arg132His)450%RETKIF5BENST00000302418:r.1_2183_RETNM_02097

25、5:r.2327_5629E15:E1220%1502FGFR2NM_000141.4(FGFR2):c.1124AG(p.Tyr375Cys)950%PTPN11NM_002834.3(PTPN11):c.182AG(p.Asp61Gly)320%ROS1SDC4ENST00000372733:r.1_239_ROS1NM_002944:r.5448_7368E2:E3210%TP53NM_000546.5(TP53):c.448_459del12(p.Thr150_Pro153del)550%1503BRAFNM_004333.4(BRAF):c.1799TA(p.Val600Glu)15

26、20%EGFRNM_005228.3(EGFR):c.2573TG(p.Leu858Arg)2150%FLT3NM_004119.2(FLT3):c.2520_2521insGGATCC(p.Ser840_Asn841insGlySer)2050%KRASNM_033360.3 (KRAS):c.34GC(p.Gly12Arg)210%1504ALKEML4ENST00000318522:r.1_1751_ALKENST00000389048:r.4080_6220E13:E2020%EGFRNM_005228.3(EGFR):c.2237_2254del18(p.Glu746_Ser752d

27、elinsAla)1950%ERBB2NM_004448.2(ERBB2):c.2263_2264TTCC(p.Leu755Pro)1950%NOTCH1NM_017617.3(NOTCH1):c.5965GA(p.Asp1989Asn)3250%NRASNM_002524.4(NRAS):c.35GA(p.Gly12Asp)220%PDGFRANM_006206.4(PDGFRA):c.1664AG(p.Tyr555Cys)1250%1505AKT1NM_001014432.1(AKT1):c.49GA(p.Glu17Lys)250%PDGFRANM_006206.4(PDGFRA):c.1681_1682insAGAGGG(p.Arg560_Val561insGluArg)1220%KRASNM_004985.3(KRAS):c.34GT(p.Gly12Cys)21%1506EGFRNM_005228.3(EGFR):c.2156GC(p.Gly719Ala)1850%JAK2NM_004972.3(JAK2):c.1821GC(p.lys607Asn)1450%NRASNM_002524.4(NRAS):c.38GA(p.Gly13Asp)250%GNASNM_000516.4(GNAS):c.601CA(p.Arg201