臨床免疫學檢驗：第11章 固相膜免疫分析技術

1、第十二第十一章固相膜免疫分析技術概 念 固相膜免疫分析技術是以微孔膜作為固相載體，利用液體可以流過微孔膜也可以通過毛細管作用在膜上向前移行的特性，以酶或膠體金等標記抗體（抗原），通過抗原抗體反應進行抗原或抗體檢測的快速檢驗方法。微孔膜的特點多孔性 毛細管作用非共價鍵高度吸附抗體或抗原 高度敏感性易于漂洗 操作簡便硝酸纖維素膜（NC膜）常用固相膜免疫測定種類膠體金免疫技術斑點酶免疫吸附試驗免疫印跡法第一節(jié)膠體金免疫技術 膠體金免疫技術是以膠體金作為示蹤物的一種標記免疫學技術。該技術與膜載體配合，可形成特定的測定模式，進行定性或半定量的快速免疫檢測。一、膠體金膠體金（colloidal gold）

2、是金鹽（HAuCl4）被還原成金原子后形成的金顆粒懸液。膠體金顆粒由一個基礎金核及外層的雙離子層構成，由于靜電作用，顆粒之間相互排斥而呈穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。大量的膠體金顆粒聚集后可出現肉眼可見的紅色斑點。最常用的制備方法為檸檬酸三鈉還原法。膠 體 金優(yōu) 質 劣 質二、免疫金免疫金（immunogold）是指膠體金與抗原或抗體的結合物。穿流 斑點金免疫滲濾試驗橫流 斑點金免疫層析試驗三、方法學種類（一）斑點金免疫滲濾試驗（DIGFA）微孔膜（固定Ag/Ab)吸水墊底蓋滲濾裝置紅色斑點檢測原理雙抗體夾心法待測標本免疫金洗滌液（二）斑點金免疫層析試驗（DICA）DICA是將膠體金標記技術和蛋白層析技術相

3、結合，以NC膜為載體的快速固相膜免疫分析技術 檢測原理雙抗體夾心法G區(qū)：金標特異性抗體(兔型)C區(qū)：羊抗兔IgT區(qū)：特異性抗體 吸水紙標本結果判斷 陽性陰性無效T C結果判斷：在T區(qū)出現紅色條帶為陰性，無顏色為陽性；C區(qū)出現紅色條帶為質控條帶。標本G區(qū)：金標特異性抗體(兔型)C區(qū)：羊抗兔IgT區(qū)：標準抗原 吸水紙競爭法測小分子抗原間接法測抗體 為了消除待測血清標本中大量的非特異性IgG與特異性IgG競爭結合金標記抗人IgG，降低了試驗敏感性，膠體金間接免疫層析法測抗體常設計成反流免疫層析法。有色染料臨床應用及評價該技術具有操作簡便、快捷以及操作人員不需技術培訓，無需特殊儀器設備，試劑穩(wěn)定，便于

4、保存等特點，因此特別符合“床邊檢驗（POCT）”的要求。本法靈敏度不及酶標法，在臨床應用中應引起高度重視。該技術不能準確定量，只能作為定性或半定量試驗，目前主要應用于正常體液中不存在的物質（如傳染病抗原和抗體以及毒品類藥物等）和正常含量極低而在特殊情況下異常升高的物質（如HCG等）的檢測。第二節(jié)其他膜載體免疫分析技術一、斑點酶免疫吸附試驗 Dot-ELISA不溶性的產物方法學評價靈敏度較ELISA高6-8倍試劑用量較ELISA節(jié)約10倍操作簡單，不需特殊設備條件吸附抗原/抗體或已有結果的NC膜可長期保存（-20 可達半年）二、免疫印跡法（IBT） IBT（immunoblot test）是一種將高分辨率凝膠電泳和固相膜免疫分析相結合的