免疫組織化學(xué)(傅琦博)-免疫組織化學(xué)

1、免 疫 組 織 化 學(xué)傅 琦 博引言酶工程是生物工程的重要組成部分，近幾十年來(lái)，隨著研究手段的更新和技術(shù)水平的提高，產(chǎn)生了一門(mén)以研究酶在細(xì)胞內(nèi)的存在及其動(dòng)態(tài)，以闡明組織細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能為主要內(nèi)容的科學(xué)酶組織化學(xué)。酶組織化學(xué)是利用酶化學(xué)反應(yīng)的產(chǎn)物可在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下被識(shí)別的特性，借以從形態(tài)學(xué)角度判定酶在組織細(xì)胞內(nèi)的存在的部位的一門(mén)技術(shù)，其基礎(chǔ)是組織化學(xué)。它具有將形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和生理學(xué)聯(lián)系起來(lái)的特點(diǎn)，在生物學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)生物領(lǐng)域內(nèi)日益發(fā)揮著重要的作用。研究組織細(xì)胞內(nèi)特定酶分布的酶組織化學(xué)方法大致分為：（1）利用酶的活性反映的方法；（2）利用抗原抗體反應(yīng)（免疫應(yīng)答）證實(shí)酶的存在部位的方

2、法。后者也被稱(chēng)之為免疫組織化學(xué)。免疫組織織化學(xué)概概述免疫組織織化學(xué)簡(jiǎn)簡(jiǎn)稱(chēng)免疫疫組化，是應(yīng)用用免疫學(xué)學(xué)及組織織化學(xué)原原理，對(duì)對(duì)組織切切片或細(xì)細(xì)胞標(biāo)本本中的某某些化學(xué)學(xué)成分，進(jìn)行原原位的定定性、定定位或定定量的研研究。這這種技術(shù)術(shù)稱(chēng)為免免疫組織織化學(xué)技技術(shù)。免免疫組化化是利用用抗體與與抗原的的結(jié)合具具有高度度特異性性的特點(diǎn)點(diǎn)，采用用一直的的抗體檢檢測(cè)組織織或細(xì)胞胞的抗原原物質(zhì)，以期確確定組織織或細(xì)胞胞是否存存在未知知抗原，并進(jìn)行行定性、定位或或定量的的研究?？乖c與抗體結(jié)結(jié)合形成成的免疫疫復(fù)合物物是無(wú)色色的，故故必須借借助組織織化學(xué)方方法，將將抗體抗抗原反應(yīng)應(yīng)部位顯顯示出來(lái)來(lái)。它的的主要研研究方法

3、法是免疫疫組織染染色法（簡(jiǎn)稱(chēng)免免疫染色色法），食用該該方法檢檢測(cè)細(xì)胞胞內(nèi)物質(zhì)質(zhì)，必須須具備兩兩個(gè)條件件：作為檢檢測(cè)對(duì)象象的物質(zhì)質(zhì)須具有有抗原性性，能制制作出與與之相應(yīng)應(yīng)的特異異、高效效價(jià)的抗抗體；在免疫疫反應(yīng)發(fā)發(fā)生之前前，目標(biāo)標(biāo)物質(zhì)要要保持抗抗原性，同時(shí)還還要保持持在組織織細(xì)胞內(nèi)內(nèi)的穩(wěn)定定狀態(tài)。要檢測(cè)測(cè)抗原，就要用用與之相相應(yīng)的抗抗體進(jìn)行行免疫反反應(yīng)，同同時(shí)要用用可視的的標(biāo)記標(biāo)標(biāo)出抗原原或抗體體，采用用這種方方法的免免疫染色色法稱(chēng)為為標(biāo)識(shí)抗抗體法或或標(biāo)識(shí)抗抗原法，常用的的表示抗抗體法有有直接法法、間接接法、補(bǔ)補(bǔ)體結(jié)合合法以及及多重染染色法等等。直接接法是標(biāo)標(biāo)識(shí)要檢檢出的抗抗原的抗抗體，然然后進(jìn)

4、行行反應(yīng)的的方法，其特異異性高，但檢出出的敏感感度不如如間接法法，標(biāo)識(shí)識(shí)抗體的的食用范范圍手局局限。間間接法是是以未標(biāo)標(biāo)識(shí)的第第一抗體體進(jìn)行反反應(yīng)，接接著標(biāo)識(shí)識(shí)以第一一抗體為為抗原所所制作的的抗體（即第二二抗體）進(jìn)行重重疊反應(yīng)應(yīng)，間接接的證明明抗原，這種方方法的缺缺點(diǎn)是容容易出現(xiàn)現(xiàn)非特異異性反應(yīng)應(yīng)，但敏敏感度較較高，標(biāo)標(biāo)識(shí)抗體體的用途途也廣；補(bǔ)體結(jié)結(jié)合法是是將間接接法中的的第二抗抗體作為為標(biāo)識(shí)抗抗補(bǔ)體抗抗體食用用；多重重染色法法則是在在同一標(biāo)標(biāo)本上檢檢出多種種抗原物物質(zhì)的方方法，可可以用反反復(fù)進(jìn)行行的重復(fù)復(fù)標(biāo)記的的直接法法，也可可以用酶酶標(biāo)記的的重復(fù)進(jìn)進(jìn)行的間間接法。此外，還有后后標(biāo)識(shí)抗抗體的

5、免免疫染色色法，此此法先采采用未標(biāo)標(biāo)識(shí)的抗抗體進(jìn)行行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)結(jié)束后，通過(guò)免免疫化學(xué)學(xué)反應(yīng)或或其他化化學(xué)反應(yīng)應(yīng)，用適適當(dāng)?shù)臉?biāo)標(biāo)記物質(zhì)質(zhì)來(lái)識(shí)別別已與組組織細(xì)胞胞內(nèi)抗原原發(fā)生結(jié)結(jié)合的抗抗體。免疫組織織化學(xué)技技術(shù)的發(fā)發(fā)展免疫組織織化學(xué)技技術(shù)是形形態(tài)學(xué)研研究領(lǐng)域域一門(mén)新新興方法法學(xué)。自自它問(wèn)世世以來(lái)發(fā)發(fā)展迅猛猛,用“日新月月異”一詞形形容它毫毫不過(guò)分分。酶標(biāo)標(biāo)免疫組組織化學(xué)學(xué)技術(shù)是是由Naakanne 等等人于660 年年代末期期創(chuàng)立的的最早的的免疫酶酶組織化化學(xué)技術(shù)術(shù),之后Stternnberrgerr 等人人于700 年代代初期便便在此基基礎(chǔ)上建建立了非非標(biāo)記抗抗體酶法法(又稱(chēng)間間接法) 和PA

6、PP 法(過(guò)氧化化酶抗過(guò)過(guò)氧化酶酶法) 。80 年代初初期美籍籍華人HHsu 又建立立了卵白白素生物物素復(fù)合合物法(ABCC法) ,自此之之后,免疫金金銀染色色法、免免疫電鏡鏡等技術(shù)術(shù)相繼問(wèn)問(wèn)世。880 年年代末期期人們又又發(fā)現(xiàn)鏈鏈霉菌抗抗生物素素蛋白(或譯成成鏈霉菌菌親合素素,Stt reeptaaviddin) 與生生物素結(jié)結(jié)合力極極強(qiáng),遂用它它標(biāo)記過(guò)過(guò)氧化酶酶建立起起了SPP 法,或稱(chēng)LSSAB 法(鏈霉菌菌親合素素生物素素過(guò)氧化化酶法) 。由由于鏈霉霉菌親合合素不與與人組織織中的內(nèi)內(nèi)源性生生物素起起非特異異性結(jié)合合反應(yīng),故背景景染色更更加清晰晰,且敏感感性比AABC 法高48 倍,比P

7、APP 法高高816 倍。進(jìn)進(jìn)入900 年代代,免疫組組織化學(xué)學(xué)又向基基因水平平深入發(fā)發(fā)展,與分子子生物學(xué)學(xué)技術(shù)的的結(jié)合日日益緊密密。如原原位雜交交后信號(hào)的放大大與顯示示便是采采用了免免疫組織織化學(xué)顯顯色技術(shù)術(shù),因而又又可稱(chēng)之之為原位位雜交免免疫組織織化學(xué)技技術(shù)。而而圖象分分析、流流式細(xì)胞胞儀的運(yùn)運(yùn)用，是是免疫細(xì)細(xì)胞化學(xué)學(xué)定量分分析技術(shù)術(shù)提高到到更精確確的水平平。現(xiàn)就就該技術(shù)術(shù)的發(fā)展展及其應(yīng)應(yīng)用作一一概述。1利用用免疫熒熒光標(biāo)記記技術(shù)可可以分辨辨出標(biāo)記記抗原抗抗體所在在的位置置及其性性質(zhì), 并可利利用熒光光定量技技術(shù)計(jì)算算抗原(或抗體體) 的含含量, 以達(dá)到到對(duì)定性性、定位位、定量量測(cè)定的的目

8、的2 。如黃黃祥瑞等等人(119999) 利利用免疫疫熒光細(xì)細(xì)胞化學(xué)學(xué)技術(shù)研研究西藏藏環(huán)狀病病毒細(xì)胞胞生物學(xué)學(xué)特性和和敏感細(xì)細(xì)胞范圍圍(CPPE) , 成成功地觀觀察到該該病毒的的細(xì)胞病病變效應(yīng)應(yīng)特異熒熒光發(fā)生生的部位位、細(xì)胞胞數(shù)量和和病毒的的形態(tài)發(fā)發(fā)生。辛辛德畢斯斯熱是由由辛德畢畢斯病毒毒Sinndbiis VV irrus (SiiN ) 引起起的人獸獸共患蟲(chóng)蟲(chóng)媒病毒毒病, 19774 年年南非發(fā)發(fā)生辛德德畢斯熱熱大流行行。19991年年梁國(guó)棟棟等通過(guò)過(guò)免疫熒熒光技術(shù)術(shù)首次從從新疆分分離到SSiN 病毒。19999 年年陳振光光等利用用間接免免疫熒光光試驗(yàn)檢檢測(cè)到福福建寧化化林區(qū)人人群、野

9、野兔、狐狐貍、狗狗存在SSiN 感染, 抗體陽(yáng)陽(yáng)性率分分別為112. 86%、5. 88%、14. 299%、6. 45%。因而而判定福福建寧化化林區(qū)可可能存在在辛德畢畢斯熱自自然疫源源地。2抗生生物素生物素素過(guò)氧化化酶復(fù)合合物技術(shù)術(shù)(A vvidiin BB ioo t in 2Peeroxxidaase Commp llex tecchniiquee, 簡(jiǎn)簡(jiǎn)稱(chēng)ABBC 技技術(shù)) 是H ssu 等等于19981 年創(chuàng)立立, 其特特點(diǎn)是利利用抗生生物素分分別連接接生物素素標(biāo)記的的第二抗抗體和生生物素標(biāo)標(biāo)記的酶酶。該方方法簡(jiǎn)便便、節(jié)約約時(shí)間, 敏感感性、特特異性高高, 背景景染色淡淡。由于于生物

10、素素與抗生生物素具具有與多多種示蹤蹤物結(jié)合合的能力力, 可用用于雙重重或多重重免疫染染色。如如李月白白等采用用ABCC 法研研究發(fā)現(xiàn)現(xiàn)絨毛層層滋養(yǎng)細(xì)細(xì)胞、絨絨毛中軸軸的基質(zhì)質(zhì)細(xì)胞、毛細(xì)血血管的內(nèi)內(nèi)皮細(xì)胞胞、毛細(xì)細(xì)血管腔腔內(nèi)的淋淋巴細(xì)胞胞以及血血島細(xì)胞胞均表現(xiàn)現(xiàn)為P 物質(zhì)(SSP) 受體免免疫反應(yīng)應(yīng)陽(yáng)性, 陽(yáng)性性物質(zhì)分分布于胞胞質(zhì)和胞胞膜上, 胞核核呈陰性性反應(yīng)。該研究究為其對(duì)對(duì)胎盤(pán)及及胚胎發(fā)發(fā)育的作作用提供供形態(tài)學(xué)學(xué)依據(jù)。張雅萍萍在ABBC 法法基礎(chǔ)之之上改進(jìn)進(jìn), 建立立了生物物素- 抗生物物素- 過(guò)氧化化物酶復(fù)復(fù)合物( sAABC) 法, 探討討了ILL 288 在甲甲狀腺腫腫瘤組織織中的表

11、表達(dá)及意意義。3葡萄萄球菌蛋蛋白A (Sttaphhyloococcal P rro tteinn A , SSPA 或SP) 具有有免疫特特性, 發(fā)展成成為免疫疫學(xué)上一一種極為為有用的的工具。其優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)是不受受種屬特特異性的的限制, 染色色時(shí)間短短、靈敏敏性高和和背景染染色淡等等。故在在目前各各種免疫疫細(xì)胞化化學(xué)技術(shù)術(shù)中得到到廣泛的的應(yīng)用。如肖華華亮等9 用此法法檢測(cè)、探討骨骨肉瘤MMDM 2 和和p 553 蛋蛋白定位位、表達(dá)達(dá)水平及及相互關(guān)關(guān)系和其其對(duì)骨肉肉瘤轉(zhuǎn)移移及預(yù)后后的影響響。應(yīng)用用SPAA 與膠膠體金或或鐵蛋白白相結(jié)合合, 可在在電鏡水水平檢查查抗原抗抗體反應(yīng)應(yīng)的定位位。自PPom

12、aano 和Rommanoo (119777) 首首次報(bào)告告用蛋白白A -膠體金金技術(shù)(P rro tteinn A 2Goo ldd teechnniquue, PGAA 技術(shù)術(shù)) 標(biāo)記記細(xì)胞表表面抗原原、包括括淋巴細(xì)細(xì)胞、血血小板、大鼠腎腎臟細(xì)胞胞及感染染的病毒毒細(xì)胞獲獲得成功功以來(lái), SPP 法已已得到愈愈來(lái)愈廣廣泛的應(yīng)應(yīng)用, 并發(fā)展展成為一一種較為為理想的的免疫電電鏡技術(shù)術(shù)。4堿性性磷酸酶酶抗堿性性磷酸酶酶方法(簡(jiǎn)稱(chēng)A PAAA P 法) 克服服了辣根根過(guò)氧化化酶(HHRP) 的不不足。沈沈巖等用用A PPAA P 法法結(jié)合單單克隆抗抗體(mmA bb) KKL 221 (廣譜抗抗人細(xì)

13、胞胞角蛋白白, 德國(guó)國(guó)) 比較較分析不不同腫瘤瘤細(xì)胞間間同種細(xì)細(xì)胞凝集集力、靶靶器官定定植力、細(xì)胞增增殖和細(xì)細(xì)胞凋亡亡現(xiàn)象、癌基因因及腫瘤瘤相關(guān)抗抗原表達(dá)達(dá)等生物物學(xué)特征征。進(jìn)一一步明確確腫瘤細(xì)細(xì)胞相關(guān)關(guān)生物學(xué)學(xué)特性與與腫瘤細(xì)細(xì)胞轉(zhuǎn)移移能力間間的關(guān)系系。而鏈鏈霉素親親和素(St repp taaviddin, SAA ) 具有高高度的親親和力, 利用用生物素素結(jié)合的的二抗與與酶標(biāo)記記的SAA 親和和(L SABB 法) 是免免疫組化化中非常常有用的的方法。沈靖南南等采用用該法, 檢測(cè)測(cè)84 例骨肉肉瘤中pp2糖蛋蛋白(pp 2ggp ) 表達(dá)達(dá), 半定定量化計(jì)計(jì)量p22gp 的著色色強(qiáng)度及及陽(yáng)

14、性率率, 通過(guò)過(guò)多因素素相關(guān)分分析和生生存分析析, 探討討骨肉瘤瘤預(yù)后的的相關(guān)因因素和高高危因素素, 研究究骨肉瘤瘤多藥耐耐藥性的的表達(dá)與與預(yù)后, 并證證實(shí)p22gp 介導(dǎo)骨骨肉瘤的的MDRR 現(xiàn)象象, 明確確p2ggp 表表達(dá)與肺肺轉(zhuǎn)移的的關(guān)系。5凝集集素( (Phhytooaggglutt inn, PPHA ) 作作為一種種探針研研究細(xì)胞胞膜上特特定的糖糖基, 具有多多價(jià)結(jié)合合能力。直接將將標(biāo)記物物標(biāo)記在在凝集素素上, 再與切切片中的的相應(yīng)糖糖蛋白或或糖脂相相結(jié)合, 該法法簡(jiǎn)便, 但靈靈敏性不不夠高。經(jīng)研究究發(fā)現(xiàn)將將凝集素素直接與與切片中中的相應(yīng)應(yīng)糖基結(jié)結(jié)合, 可提高高敏感性性高5 10

15、0 倍或或更多一一些, 有人認(rèn)認(rèn)為若將將凝集素素與特定定的糖基基作成三三明治樣樣的糖22凝集素素2糖的結(jié)結(jié)合物, 特異異性、靈靈敏度將將會(huì)更高高。而且且能與熒熒光素、生物素素、酶、膠體金金和鐵蛋蛋白等示示蹤物結(jié)結(jié)合, 從而在在光鏡與與或電鏡鏡水平顯顯示其結(jié)結(jié)合部位位。N ewmman 等(19979)以熒光光素標(biāo)記記凝集素素PHAA 實(shí)驗(yàn)驗(yàn), 發(fā)現(xiàn)現(xiàn)在大鼠鼠乳腺上上皮的不不同分化化時(shí)期顯顯示不同同的熒光光強(qiáng)度。Kivvelaa 和Farrkkaanenn (119877)用凝凝集素作作為細(xì)胞胞特殊類(lèi)類(lèi)型的標(biāo)標(biāo)記實(shí)驗(yàn)驗(yàn)發(fā)現(xiàn), 在人人視網(wǎng)膜膜上PHHA 標(biāo)標(biāo)記視錐錐細(xì)胞而而不標(biāo)記記視桿細(xì)細(xì)胞。在在

16、乳腺、乳腺上上皮細(xì)胞胞呈PHHA 陽(yáng)陽(yáng)性反應(yīng)應(yīng), 而肌肌上皮細(xì)細(xì)胞和間間質(zhì)細(xì)胞胞呈PHHA 陰陰性反應(yīng)應(yīng)。他以以多種凝凝集素對(duì)對(duì)小鼠、大鼠和和兔的腎腎組織切切片進(jìn)行行染色結(jié)結(jié)果表明明, 刀豆豆素A 和蓖麻麻素存在在于腎臟臟的各部部, PPHA 和雙花花扁豆凝凝集素(DBAA ) 主要分分布于遠(yuǎn)遠(yuǎn)曲小管管和集合合小管上上皮細(xì)胞胞, 荊豆豆凝集素素(U EA ) 主主要分布布在血管管內(nèi)皮細(xì)細(xì)胞, 而麥芽芽素分布布在腎小小球。SSt rreitt 和Kreeutzzberrg (19887)發(fā)發(fā)現(xiàn)Grrifffoniia SSimpp liiciffo llia 凝集素素能特異異性標(biāo)記記面神經(jīng)經(jīng)節(jié)內(nèi)

17、的的小膠質(zhì)質(zhì)細(xì)胞, 而其其它類(lèi)型型的膠質(zhì)質(zhì)細(xì)胞如如星狀膠膠質(zhì)細(xì)胞胞(A st ro22cytte) 等都顯顯示陰性性反應(yīng)。如果在在切斷面面神經(jīng)后后, 增殖殖的小膠膠質(zhì)細(xì)胞胞對(duì)Grrifffoniia SSimpp liiciffo llia 凝集素素的反應(yīng)應(yīng)加強(qiáng)。大量研研究發(fā)現(xiàn)現(xiàn), 凝集集素可作作為腫瘤瘤組織源源性的標(biāo)標(biāo)記、腫腫瘤特異異性診斷斷的標(biāo)志志、腫瘤瘤惡性的的標(biāo)記和和不同腫腫瘤的分分化標(biāo)記記。如張張華忠等等(19987)報(bào)道1115 例例胃癌標(biāo)標(biāo)記PHHA 陽(yáng)陽(yáng)性率高高達(dá)900. 443% , 而而正常胃胃粘膜基基本是陰陰性, 故認(rèn)為為PHAA 是胃胃癌的診診斷性標(biāo)標(biāo)志。BBSA對(duì)對(duì)乳

18、腺惡惡性腫瘤瘤陽(yáng)性率率達(dá)799% , 而對(duì)對(duì)良性病病變均呈呈陰性反反應(yīng),提示BSSA 可可能為乳乳腺惡性性腫瘤的的相關(guān)標(biāo)標(biāo)志。HHRP 本身雖雖含有甘甘露糖, 能與與刀豆凝凝集素AA、扁豆豆凝集素素和豌豆豆凝集素素結(jié)合。但對(duì)其其它的凝凝集素, 需要要將糖基基化(GGlycco ssylaat iion) 過(guò)氧氧化物酶酶結(jié)合到到該凝集集素上, 且糖糖基化過(guò)過(guò)氧化物物酶品種種尚有限限, 故目目前本法法在應(yīng)用用還有一一定困難難。免疫細(xì)胞胞化學(xué)技技術(shù)尚在在繼續(xù)改改進(jìn)和完完善中, 除目目前國(guó)內(nèi)內(nèi)外已廣廣泛應(yīng)用用的免疫疫金技術(shù)術(shù)和免疫疫金銀技技術(shù)外, 新的的免疫細(xì)細(xì)胞化學(xué)學(xué)技術(shù)不不斷出現(xiàn)現(xiàn)。19984 年

19、國(guó)外外學(xué)者首首次將CCRNAA 探針針應(yīng)用于于原位雜雜交, 核酸探探針為單單鏈的RRNA 分子, 產(chǎn)生自自具有質(zhì)質(zhì)粒逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)統(tǒng)的cDDNA 克隆。在19987 年Wo lf 等建議議插入確確定長(zhǎng)度度的寡核核苷酸至至載體內(nèi)內(nèi)產(chǎn)生ccRNAA 分子子, 這種種cRNNA 分分子稱(chēng)為為“寡核苷苷酸核酸酸探針”(o liggo rriboop rrobees) , 現(xiàn)現(xiàn)在已被被廣泛的的用于原原位雜交交實(shí)驗(yàn)。國(guó)內(nèi)的的楊春花花等采用用免疫組組化和ccDNAA 2mmRNAA 原位位分子雜雜交技術(shù)術(shù)分別檢檢測(cè)了224 例例RA , 118 例例骨關(guān)節(jié)節(jié)炎(OOA ) 和6 例正正常滑膜膜組織中中uPAA

20、 , uPAAR 蛋蛋白和mmRNAA 的分分布及表表達(dá)情況況。科研研工作者者根據(jù)免免疫組織織化學(xué)中中材料的的特性把把同位素素、生物物素、光光敏生物物素、酶酶促生物物素、地地高辛標(biāo)標(biāo)記cRRNA上上成功的的制成探探針。尤尤其地高高辛與放放射性標(biāo)標(biāo)記相比比, 標(biāo)記記探針具具有非放放射性探探針的優(yōu)優(yōu)點(diǎn), 對(duì)人體體無(wú)害, 不受受半衰期期限制, 探針針可長(zhǎng)期期保存; 與生生物素標(biāo)標(biāo)記探針針相比, 不受受組織、細(xì)胞中中內(nèi)源性性生物素素的干擾擾, 敏感感性、分分辨率較較高, 反應(yīng)產(chǎn)產(chǎn)物顏色色鮮艷, 反差差好, 背景染染色低, 制備備探針可可較長(zhǎng)期期保存, 對(duì)人人體無(wú)害害等優(yōu)點(diǎn)點(diǎn),已日益益顯示出出它的優(yōu)優(yōu)越

21、性和和廣泛的的應(yīng)用前前景。并并且進(jìn)一一步研究究發(fā)現(xiàn)它它能根據(jù)據(jù)需要人人工用DDNA 合成儀儀合成, 其長(zhǎng)長(zhǎng)度及分分子大小比較一一致, 可控地地高辛同同位素寡寡核苷酸酸探針。另外, 放射射性同位位素、熒熒光素、生物素素也能成成功標(biāo)記記寡核苷苷酸作為為探針, 成功功地運(yùn)用用于培養(yǎng)養(yǎng)細(xì)胞、組織切切片和染染色體鋪鋪片等的的原位雜雜交中。雖然有有些人認(rèn)認(rèn)為其敏敏感度不不如來(lái)自自質(zhì)粒擴(kuò)擴(kuò)增的ccRNAA 或DNAA探針, 但由于于探針制制備簡(jiǎn)便便再加之之于近年年非放射射性標(biāo)記記的成功功, 寡核核苷酸探探針在生生物基礎(chǔ)礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及及臨床學(xué)學(xué)科領(lǐng)域域中得到到較為廣廣泛的應(yīng)應(yīng)用。免疫細(xì)胞胞化學(xué)技技術(shù)與流流式細(xì)胞胞術(shù)

22、(FFCM ) 結(jié)結(jié)合進(jìn)行行多參數(shù)數(shù)FCMM 分析析血液淋淋巴細(xì)胞胞免疫表表型(亞群) 方法學(xué)學(xué)因素對(duì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)結(jié)果的影影響。當(dāng)當(dāng)血液采采集后11h 和和6h 測(cè)定淋淋巴細(xì)胞胞免疫表表型結(jié)果果差異無(wú)無(wú)顯著。如黃勇勇華等采采用單標(biāo)標(biāo)或雙標(biāo)標(biāo)直接免免疫熒光光標(biāo)記法法標(biāo)記220 種種細(xì)胞表表面分化化抗原, 經(jīng)流流式細(xì)胞胞儀測(cè)定定。后進(jìn)進(jìn)行分析析1855 例白白血病患患者骨髓髓或外周周血白血血病細(xì)胞胞的免疫疫分型及及CD1117 的表達(dá)達(dá)細(xì)胞表表面分化化抗原(CD) 1117 在在各型白白血病中中的表達(dá)達(dá)及其意意義。免疫細(xì)胞胞化學(xué)技技術(shù)先進(jìn)進(jìn)儀器和和方法結(jié)結(jié)合已呈呈現(xiàn)新的的趨勢(shì)，如用熒熒光顯微微分光光光

23、度計(jì)和和圖像分分析儀等等定量檢檢測(cè), 將結(jié)果果客觀打打印、報(bào)報(bào)告, 這更適適合于臨臨床診斷斷和科學(xué)學(xué)研究。如楊希希謙等采用非非放射碘碘標(biāo)記人人直腸癌癌相關(guān)抗抗原單克克隆抗體體(M cA b)技技術(shù)與生生物導(dǎo)向向CT 顯像進(jìn)進(jìn)行腫瘤瘤的免疫疫組化鑒鑒定與免免疫顯像像研究。免疫組織織化學(xué)技技術(shù)在臨臨床病理理診斷中中的重要要作用1000 年前前發(fā)明的的用光學(xué)學(xué)顯微鏡鏡觀察HHE 染染色切片片法仍然然是當(dāng)前前各級(jí)醫(yī)醫(yī)院病理理科中的的基本方方法。該該方法的的局限性性在于僅僅能從細(xì)細(xì)胞水平平反映疾疾病性質(zhì)質(zhì),診斷中中觀察者者的主觀觀推測(cè)成成份高,常常是是同一疾疾病出現(xiàn)現(xiàn)分歧頗頗大的數(shù)數(shù)個(gè)不同同診斷,多年來(lái)

24、來(lái)成為臨臨床病理理診斷中中的突出出問(wèn)題。而免疫疫組織化化學(xué)方法法是通過(guò)過(guò)抗原抗抗體反應(yīng)應(yīng)客觀地地反映疾疾病性質(zhì)質(zhì),在觀察察HE 切片基基礎(chǔ)上,再結(jié)合合免疫組組織化學(xué)學(xué)染色結(jié)結(jié)果可對(duì)對(duì)某一疾疾病做出出較為客客觀公正正的評(píng)價(jià)價(jià),從而可可避免主主觀因素素的影響響。自免免疫組織織化學(xué)技技術(shù)應(yīng)用用于臨床床病理診診斷以來(lái)來(lái),在以下下幾類(lèi)疾疾病的鑒鑒別診斷斷中發(fā)揮揮著重要要作用。1 高高度未分分化腫瘤瘤細(xì)胞起起源的鑒鑒別:發(fā)生在在胃腸道道的這類(lèi)類(lèi)腫瘤應(yīng)應(yīng)首選CCEA 與Vimmenttin 兩種抗抗體鑒別別是上皮皮源性抑抑或是間間葉源性性腫瘤。因?yàn)镃CEA 在消化化道上皮皮源性腫腫瘤的陽(yáng)陽(yáng)性率高高,但在鱗鱗

25、癌時(shí)陽(yáng)陽(yáng)性率低低;而消化化道以外外部位發(fā)發(fā)生者,上皮性性標(biāo)記物物宜選用用EMAA ,該該抗體在在90 %以上上上皮源源性腫瘤瘤呈陽(yáng)性性表達(dá)。2 小小圓細(xì)胞胞腫瘤的的鑒別:小圓細(xì)細(xì)胞腫瘤瘤包括小小細(xì)胞未未分化癌癌、惡性性淋巴瘤瘤、小細(xì)細(xì)胞軟組組織肉瘤瘤、神經(jīng)經(jīng)內(nèi)分泌泌腫瘤以以及小細(xì)細(xì)胞黑色色素瘤。這類(lèi)腫腫瘤鑒別別診斷時(shí)時(shí)應(yīng)使用用EMAA 或CEAA , LCAA , Vimmenttin , NNSE ,S1100 和HMBB45抗抗體。3 大大細(xì)胞型型腫瘤鑒鑒別:這類(lèi)腫腫瘤可以以是大細(xì)細(xì)胞未分分化癌、低分化化肉瘤、大細(xì)胞胞性黑色色素瘤和和大細(xì)胞胞性惡性性淋巴瘤瘤。在鑒鑒別診斷斷時(shí)應(yīng)該該選用EE

26、MA 或CEAA ,VVimeentiin ,S1000 和和LCAA 抗體體。4 梭梭形或多多形性軟軟組織肉肉瘤的鑒鑒別:此類(lèi)腫腫瘤包括括平滑肌肌肉瘤、滑膜肉肉瘤、梭梭形細(xì)胞胞血管肉肉瘤、梭梭形細(xì)胞胞黑色素素瘤、多多形性橫橫紋肌肉肉瘤、多多形性惡惡性纖維維組織細(xì)細(xì)胞瘤以以及多形形性脂肪肪肉瘤。以下抗抗體可用用于鑒別別診斷: Acctinn , EMAA , F Ag , SS1000 , MB445 ,Myoogloobinn ,DDesmmin ,12AAT 以以及12AACT。5 惡惡性淋巴巴瘤分型型:在免疫疫組織化化學(xué)研究究領(lǐng)域，當(dāng)前對(duì)對(duì)惡性淋淋巴瘤的的免疫組組織化學(xué)學(xué)研究最最為活躍躍

27、與細(xì)致致。截止止目前為為止,已有下下列亞型型可以通通過(guò)免疫疫組織化化學(xué)染色色確立。它們是是:B 細(xì)胞淋淋巴瘤,L266 陽(yáng)性性,LNN2 陽(yáng)陽(yáng)性; T 細(xì)細(xì)胞淋巴巴瘤,MMT1 陽(yáng)性,UUCHLL1 陽(yáng)陽(yáng)性;NN K細(xì)細(xì)胞淋巴巴瘤C1233C 陽(yáng)性;樹(shù)突網(wǎng)網(wǎng)織細(xì)胞胞淋巴瘤瘤,Beer2MMAC22DRCC 陽(yáng)性性; 指狀狀突網(wǎng)織織細(xì)胞淋淋巴瘤,S1000 陽(yáng)陽(yáng)性; 真性組組織細(xì)胞胞淋巴瘤瘤, MMac3387 陽(yáng)性,LLysoozymme 陽(yáng)陽(yáng)性,12AACT 陽(yáng)性; 何杰金金病R22S 細(xì)細(xì)胞,LLeuMM1 陽(yáng)陽(yáng)性,BBer22H2 陽(yáng)性;大細(xì)胞胞間變型型淋巴瘤瘤Berr2H22 (或或稱(chēng)

28、Kii21) 陽(yáng)性性。6 神神經(jīng)內(nèi)分分泌腫瘤瘤的確立立:900 %以以上的神神經(jīng)內(nèi)分分泌腫瘤瘤NSEE 陽(yáng)性性。由于于NSEE 與其其它腫瘤瘤有交叉叉反應(yīng), 故必必要時(shí)可可加染CChroomoggrannin A 或或Synnapttophhysiin 抗抗體。當(dāng)當(dāng)需要弄弄清神經(jīng)經(jīng)內(nèi)分泌泌腫瘤有有否內(nèi)分分泌功能能時(shí),再加染染多肽類(lèi)類(lèi)激素抗抗體。7 腫腫瘤預(yù)后后的推測(cè)測(cè):最早用用于推測(cè)測(cè)腫瘤預(yù)預(yù)后的抗抗體有抗抗雌激素素受體EER 及及抗孕激激素受體體PR ,二者者陽(yáng)性時(shí)時(shí)預(yù)后較較好。新新近又發(fā)發(fā)現(xiàn), 轉(zhuǎn)移抑抑制基因因產(chǎn)物nnm233 呈高高表達(dá)時(shí)時(shí)預(yù)后較較好。而而下列幾幾種抗體體呈高表表達(dá)時(shí)均均

29、提示預(yù)預(yù)后差：C2eerbBB22 , C2mmyc , P533 , EGFFR , PCNNA , Ki2267 , BrddU , P1220 , P1005。8 感感染性疾疾病病原原體的檢檢測(cè): 其中HBBsAgg 及HBccAg 抗體常常用于肝肝病研究究與診斷斷。而尖尖銳濕疣疣及宮頸頸癌時(shí)常常?？梢砸詸z測(cè)到到乳頭狀狀瘤病毒毒HPVV。鼻咽咽癌、何何杰金病病時(shí)EBB 病毒毒抗體多多呈陽(yáng)性性。免疫組織織化學(xué)技技術(shù)由于于它自身身獨(dú)有的的特點(diǎn), 使得得廣大科科研作者者在組織織細(xì)胞定定位、定定性、定定量研究究中經(jīng)常常選取的的技術(shù), 因此此隨著科科研工具具的更新新, 科研研工作者者對(duì)免疫疫組織化

30、化學(xué)更廣廣泛深入入的理解解、并與與其他研研究手段段深入結(jié)結(jié)合, 優(yōu)化技技術(shù)路線線地設(shè)計(jì)計(jì),而推動(dòng)動(dòng)免疫組組織化學(xué)學(xué)技術(shù)的的進(jìn)一步步發(fā)展。如范少少地等運(yùn)運(yùn)用GAA P2243ccDNAA 探針針(生長(zhǎng)相相關(guān)蛋白白2433 (GGroww thh asssocciatted p rro2tteinn 433, GGA PP2433) 原原位雜交交技術(shù)來(lái)來(lái)觀察這這一變化化過(guò)程中中GA P2443mRRNA 表達(dá)水水平, 陽(yáng)性細(xì)細(xì)胞定位位及分布布的變化化。李月月白等應(yīng)應(yīng)用免疫疫組化LL SAAB 法法和原位位雜交方方法, 觀察了了骨肉瘤瘤患者pp 211w aaf1c iip 11 表達(dá)達(dá)水平與與臨床

31、預(yù)預(yù)后之間間的關(guān)系系。而倪倪燦榮等等應(yīng)用他他們實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室制備備的催化化信號(hào)放放大(CCataalyzzed siggnall ammp llifii2caat iion, CSSA ) 試劑劑應(yīng)用于于IHCC 檢測(cè)測(cè)50 例10 種不同同類(lèi)型的的腫瘤切切片中440 種種不同的的抗原和和ISHH 檢測(cè)測(cè)6 種不不同的RRNA 成分, 并與常常規(guī)方法法進(jìn)行敏敏感性比比較: CSAA 2IIHC 法較傳傳統(tǒng)的PPA PP 法、ABCC 法和和L SSAB 法敏感感5000 1 0000 倍, 較EnVV issionn 法敏敏感200 1000 倍倍。參考文獻(xiàn)獻(xiàn)1巴德年年 當(dāng)代代免疫學(xué)學(xué)技術(shù)與與應(yīng)用

32、北京京醫(yī)科大大學(xué)中國(guó)國(guó)協(xié)和醫(yī)醫(yī)科大學(xué)學(xué)聯(lián)合出出版社, 19999. 1- 111.2沈關(guān)心心, 周汝汝麟 現(xiàn)代免免疫學(xué)實(shí)實(shí)驗(yàn)技術(shù)術(shù) 湖北科科學(xué)出版版社, 19998. 1- 50.3黃翔瑞瑞, 陳娟娟, 李曉曉萸等 西藏環(huán)環(huán)狀病毒毒細(xì)胞生生物學(xué)特特性研究究 軍事醫(yī)醫(yī)學(xué)科學(xué)學(xué)院院刊刊, 220000, 224 (3) : 1173- 1776.4P rritccharrd LL I, Goouldd ARR. PPhyllogeenett icc coompaarisson of theeserro ttypee2sppeciificc V P2 p rro tteinn off bllue t

33、onnguee annd rrelaateddo rrbivviruusessJ . V iiruss Rees, 19995, 39 (2- 3) : 2077- 2210.5梁國(guó)棟棟, 李其其平, 何英等等 我國(guó)首首次分離離到辛德德畢斯病病毒 病毒學(xué)學(xué)報(bào)19993, 5 (1) : 55- 5776陳振光光, 陳娟娟, 黃翔翔瑞等 福建寧寧化辛德德畢斯熱熱血清學(xué)學(xué)調(diào)查 中國(guó)國(guó)媒介生生物學(xué)及及控制雜雜志, 20000, 11 (2) : 1377-1339.7李月白白, 秦國(guó)國(guó)斌, 王義生生等 人骨肉肉瘤中pp 211w aaf1/cipp 1 基因的的表達(dá) 中華骨骨科雜志志, 220000

34、, 220 (1) : 330- 33.8張雅萍萍, 姬秋秋和, 張南雁雁等 甲狀腺腺腫瘤組組織中IIL 228 的的表達(dá)及及意義 第四軍軍醫(yī)大學(xué)學(xué)學(xué)報(bào), 20000, 211 (66) : 1225-1128.9肖華亮亮, 陳俐俐, 王東東 MDDM 22 蛋白白和P553 蛋蛋白在骨骨肉瘤組組織中的的表達(dá)及及意義 第三三軍醫(yī)大大學(xué)學(xué)報(bào)報(bào), 220000, 222 (4) :3557- 3599.10沈巖巖, VVogeel IIKallthooff H, 于吉人人, 等. 不同同轉(zhuǎn)移能能力腫瘤瘤細(xì)胞間間轉(zhuǎn)移相相關(guān)特征征的比較較研究J . 中中華腫瘤瘤雜志,20000, 22 (3) : 2

35、011- 2204.11沈靖靖南, 王晉, 韓士英英等 骨肉瘤瘤p2糖蛋蛋白表達(dá)達(dá)水平與與肺轉(zhuǎn)移移 中華華骨科雜雜志, 20000, 20 (1) : 21- 233.12蔡文文琴, 王伯倪倪 實(shí)用免免疫細(xì)胞胞化學(xué)與與核酸分分子雜交交技術(shù) 成都都: 四川川科學(xué)技技術(shù)出版版社, 19994. 1- 20.13N eewmaan RRA. B iindiing of peaanutt leect in to breeastt epp itthe22liuum , huumann caarciinomma aand cullturred ratt maammaary steemceellss:U se of thee leect in as a mmarbber ofmmammmaryy diiffeerenn2t iatt ioonJJ . J N aat ll Caanceer IInstt, 119799, 663: 13339- 13442.14Kivverlla TT annd TTarkkaneen AA. AA leect in cyttochhem icaal sstuddyoff gllycooconnjuggatees iin tthe humman rett inna J . CC