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文檔簡介

1、第七章 重組子篩選11.Genetic Methods2.Immunochemical methods3.Nucleic acid hybridization methods4.Recombinational proble5.Hybrid Released Translation(HRT) and Hybrid Arrested Released Translation (HART)21.Genetic Methods342.Immunochemical Methods567893.Nucleic Acid Hybridization Methods10111213The probe prob

2、lem1)只要有適宜的probe,就可別離任何基因;2)異源probe的利用; 某些蛋白質(zhì)編碼序列在進化過程中相對保守,種間雜交是可能的;3)從蛋白的氨基酸序列推導(dǎo)DNA序列,設(shè)計probe。1415164.Recombinational probe1718 5.HRT and HART Methods(Hybrid released translation,HRT;Hybrid arrested translation,HART)1920HRT methods1)用重組克隆“釣mRNA 重組克隆DNA整體mRNA nitrocellulose filter 洗滌，除去未雜交的mRNA dsD

3、NA/mRNA 加熱的低鹽Buf(or含甲酰胺Buf) mRNA212)mRNA Protein mRNA in vitro translation system 3H or 35S labled Protein3)Protein DNA(通過翻譯產(chǎn)物推測被 克隆DNA為何基因22HART methods原理：在in vitro translation system中，當(dāng)mRNA與其互補的DNA雜交，便不能再指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成，即mRNA轉(zhuǎn)譯被限制。23例:mRNA混合物含兔和珠蛋白mRNA) 與含兔珠蛋白的cDNA重組質(zhì)粒pG1)變性DNA雜交收集核酸加到無細胞轉(zhuǎn)譯系統(tǒng)中加有35Smet)由于- 珠蛋白mRNA與cDN

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