實驗具體方案的格式

1、【實驗題目】：土壤中細(xì)菌地分離純化實驗【實驗設(shè)計思想】：細(xì)菌是具有很高實用價值地一類微生物，世界各國對其研究與資源開發(fā)極為重視.目前，國 內(nèi)有關(guān)細(xì)菌地區(qū)系調(diào)查及資源開發(fā)雖然有一些報道，但對不同作物根際細(xì)菌地研究很少.甘 肅天水麥積山海拔，屬黃土高原潮濕區(qū)，植物生長土壤區(qū)有機質(zhì)含量豐富，本次實驗將以該 地區(qū)地落葉松、馬尾松、白巖松、野豌豆等作物生長地區(qū)地土壤為材料分離鑒定其中地細(xì) 菌，探討不同作物根際土壤中細(xì)菌分布數(shù)量及種類地差異，并且分析每一種菌種在植物生長 過程中所起地作用，最后以此為依據(jù)來推斷麥積山大片地區(qū)內(nèi)土壤中微生物地分布豐富情況 和它們對植物生長作出地巨大貢獻.個人收集整理勿做商業(yè)用

2、途三【實驗?zāi)康亍浚?學(xué)會培養(yǎng)基最基本地制備方法.學(xué)會最基本地微生物滅菌、接種等基本操作過程.掌握最基本地分離、純化微生物地一系列操作操作.四.【試驗方法】：取天水麥積山不同植物根部地土壤作為土樣，通過對其土壤中微生物地一系列培養(yǎng)、分離、 篩選最終分離出細(xì)菌得菌株，并稀釋平板菌落計數(shù)法進行數(shù)量測定個人收集整理勿做商業(yè) 用途四.實驗原理：.菌種來源：由于各種細(xì)菌對營養(yǎng)物質(zhì)需求不同，在不同地方采樣對選取所要地細(xì)菌含量和 其它雜菌含量地多少直接有關(guān)，所以選擇微生物含量有可能豐富地土壤（天水麥積山植物根 區(qū)）中采樣.個人收集整理勿做商業(yè)用途.培養(yǎng)基地選?。簽榱耸顾丶?xì)菌能很好地生長，其它微生物生長受到

3、一定地抑制，要用 選擇培養(yǎng)基.還要把細(xì)菌與其他微生物相區(qū)別，還要用鑒別培養(yǎng)基.為了達到既是選擇培養(yǎng)基 又是鑒別培養(yǎng)基，選取牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基.個人收集整理勿做商業(yè)用途.培養(yǎng)及分離純化：通過涂布培養(yǎng)法、平板劃線法等方法達到分離純化地目地.保藏：通過分離純化得到地菌種，接種與斜面培養(yǎng)基上，到一定時間后進行傳代培養(yǎng)保藏， 使其不死亡、減少突變所引起地生物學(xué)性狀地改變.個人收集整理勿做商業(yè)用途.通過形態(tài)與染色鑒定：由于各種微生物有其特定地菌落形態(tài)特征和單細(xì)胞形態(tài)特征，可通 過這些形態(tài)進行鑒定.還由于細(xì)胞壁組成不同可進行鑒別染色法進行鑒定，也可用產(chǎn)生不產(chǎn) 生芽孢進行芽孢染色.通過以上方法可對所分離純化地

4、菌種進行初步地鑒定.個人收集整理 勿做商業(yè)用途.通過生理生化反應(yīng)進行鑒定：各種微生物在代謝類型上表現(xiàn)了很大地差異，如表現(xiàn)在對對 大分子糖類和蛋白質(zhì)地分解能力，以及分解代謝地最終產(chǎn)物地不同，反映出他們有不同地酶 系.我們在實驗室允許地條件下做了糖類發(fā)酵與氧化、是否能產(chǎn)生過氧化氫酶以及是否含有 細(xì)胞色素氧化酶等生理生化試驗，進行再次鑒定.個人收集整理勿做商業(yè)用途五【.實驗材料】：.器材：玻璃燒杯、天平、搪瓷燒杯、三角瓶、量筒、漏斗、試管、培養(yǎng)皿、吸管、培養(yǎng)基 分裝器、電爐、接種環(huán)、移液槍、試紙（一）、牛角匙、牛皮紙、棉花、紗繩、高壓蒸汽滅 菌鍋等.個人收集整理勿做商業(yè)用途.牛肉膏、蛋白胨、.六.實

5、驗步驟：.配置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：（）.配方及其配量：().稱取藥品:按培養(yǎng)及配方與配量分別稱取藥品，取少于總量地水于燒杯中，將各個培養(yǎng) 及成分(瓊脂除外)逐一加入水中待溶.個人收集整理勿做商業(yè)用途().加熱溶解：將玻璃被放在石棉網(wǎng)上(搪瓷燒杯可直接用文火加熱)，用文火加熱并不斷 攪拌，促使各藥品快速溶解，然后補充水分之所需培養(yǎng)基地量個人收集整理勿做商業(yè)用途()調(diào)節(jié)值：初配好地牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液是微酸性地，故需用調(diào)至.為避免調(diào)解時過堿， 應(yīng)緩慢加入液，即要邊滴加邊攪勻培養(yǎng)液，然后用試紙側(cè)其酸堿度值.檢測培養(yǎng)基地，若 偏 酸，可滴加，邊加邊攪拌，并隨時用試紙檢測，直至達到所需范圍.若偏堿，則用個

6、 人收集整理勿做商業(yè)用途進行調(diào)節(jié).地調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂之前.應(yīng)注意值不要調(diào)過頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi) 各離子地濃度.個人收集整理勿做商業(yè)用途().過濾:液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾，固體培養(yǎng)基可用層紗布趁熱過濾，以利結(jié)果地觀察 但是供一般使用地培養(yǎng)基.此步可省略個人收集整理勿做商業(yè)用途()分裝:披實驗要求，可將配制地培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶內(nèi).分裝時可用三角漏斗以免使 培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上面造成污染.個人收集整理勿做商業(yè)用途分裝量：固體培養(yǎng)基約為試管高度地/，滅菌后制成斜面.分裝入三角瓶內(nèi)以不超過其容 積內(nèi)一半為宜.半固體培養(yǎng)基以試管高度地為宜.滅菌后垂直待凝.個人收集整理勿做商業(yè) 用途().加

7、棉塞 試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)制作地棉塞，棉塞地形狀、大小 和松緊度要合適，四周緊貼管壁，不留縫隙，才能起到防止雜菌侵入和有利透氣地個人收集 整理勿做商業(yè)用途作用.要使棉塞總長約/塞人試管口或瓶口內(nèi)，以防棉塞脫落.有些微生物需要更好地透氣， 則可用層紗布制成通氣塞.有時也可用試管帽或塑料蓋代替棉塞.個人收集整理勿做商業(yè) 用途()包扎:加塞后，將三角瓶地棉塞外包一層牛皮紙或雙層報紙，以防滅菌時冷凝水沾濕棉塞. 若培養(yǎng)基分裝于試管中，則應(yīng)先把試管扎成捆后，再于棉塞外包一層牛皮紙.然后用記號筆 注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期.個人收集整理勿做商業(yè)用途()滅菌:將上述培養(yǎng)基于。濕熱滅菌.

8、如因特殊情況沒能及時滅菌，則應(yīng)放人冰箱內(nèi)暫時保 存.個人收集整理勿做商業(yè)用途().擺斜面 滅菌后，待培養(yǎng)基冷卻至一C，然后制斜面，則需趁熱將試管口端擱在一根長 木條上，并調(diào)整斜度，使斜面長度不超過試管總長地一半.個人收集整理勿做商業(yè)用途().無菌檢查:將滅菌地培養(yǎng)基放入。溫箱中培養(yǎng)，無菌生長時可以使用，或放置在冰箱或清 潔地櫥內(nèi)，備用.個人收集整理勿做商業(yè)用途.配置無菌生理鹽水：稱至盛有蒸餾水地三角瓶中，塞上棉塞，塞外包上一層牛皮紙，至加壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)在C 下滅菌即為無菌生理鹽水.個人收集整理勿做商業(yè)用途取樣并制備土壤稀釋液：().土壤前處理；取出采集地土樣，去除其中較大地雜質(zhì)，將其攆碎、攆細(xì)

9、待用.()制土液：稱出克于帶有無菌玻璃珠地錐形瓶中，用已滅菌地量筒量取無菌水溶解，振搖 約分鐘，使土樣與水充分混勻.點燃酒精燈在火焰附近，用無菌移液槍從中吸取土壤懸液加 入盛有無菌水地大試管中充分混勻，然后用無菌移液槍從此試管中吸取加入另一盛有無菌 水地試管中，混合均勻，以此類推制成 不同稀釋度地土壤溶液.個人收集整理勿做 商業(yè)用途.涂布接種：將上述個平板分別貼上標(biāo)簽、各三個，然后用無菌移液槍分別由、三管土壤稀釋液中各 吸取對號放入已寫好稀釋度地平板中，用無菌玻璃涂棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，室 溫下靜置到分鐘，使菌液吸附進培養(yǎng)基.【注意：所有地接種工作必須在無菌室里面進行， 在接種之前必須

10、先進行滅菌】個人收集整理勿做商業(yè)用途.培養(yǎng).攝氏度恒溫室中培養(yǎng)天.觀察并進一步分離純化.觀察菌落特征，并記錄.再倒兩個平板.點燃地酒精燈附近，從稀釋度合適地培養(yǎng)平板 上挑取帶有溶磷圈地菌落，在新制地平板上劃線分離，攝氏度恒溫室中培養(yǎng)天個人收集整理 勿做商業(yè)用途.斜面培養(yǎng) 放置斜面.挑取單個菌落接種到個斜面上培養(yǎng).置于。C恒溫箱中培養(yǎng)7 2.與此 同時，用單菌落進行以下鑒定試驗個人收集整理勿做商業(yè)用途 革蘭氏染色涂片常規(guī)涂片法初染滴加結(jié)晶紫(以剛好將菌膜覆蓋為宜)于涂片上，染色，傾去染色液，細(xì)水沖洗至 洗出液為無色.個人收集整理勿做商業(yè)用途媒染用碘液媒染約，水洗.脫色用濾紙吸去玻片上地殘水，將玻

11、片傾斜，在白色背景下，用滴管流加地乙醇脫色，直至 流出地乙醇無紫色時，立即水洗，終止脫色，干燥.個人收集整理勿做商業(yè)用途復(fù)染在涂片上滴加番紅液復(fù)染約，水洗，然后用吸水紙吸干.鏡檢干燥后，用油鏡觀察.判斷兩種菌體染色反應(yīng)性.菌體被染成藍(lán)紫色地是革蘭氏陽性菌()，被 染成紅色地為革蘭氏陰性菌().個人收集整理勿做商業(yè)用途清潔顯微鏡.先用擦鏡紙擦去鏡頭上地油，然后再用擦鏡紙沾取少許二甲苯擦去鏡頭上地殘留油跡，最后 用擦鏡紙擦去殘留地二甲苯.個人收集整理勿做商業(yè)用途芽孢染色()將培養(yǎng)地菌，作涂片、干燥、固定.()滴加一滴孔雀綠染液于已固定地涂片上.()用木夾夾住載玻片在火焰上加熱，使染液冒蒸汽但勿沸騰

12、，切忌使染液蒸干，必要時可 添加少許染液.加熱時間從染液冒蒸汽時開始計算約一分鐘.這一步也可不加熱，改用飽和地 孔雀綠水溶液(約.)染分鐘.個人收集整理勿做商業(yè)用途()傾去染液，待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再褪色為止.()用番紅水溶液復(fù)染分鐘，水洗.()待干燥后，置油鏡觀察，七.計數(shù)：常用地有平板菌落計數(shù)法，是根據(jù)每個活地細(xì)菌能長出一個菌落地原理設(shè)計地.取一定容量 地菌懸液，作一系列地倍比稀釋，然后將定量地稀釋液進行平板培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)出地菌落數(shù)， 可算出培養(yǎng)物中地活菌數(shù).此法靈敏度高，是一種檢測污染活菌數(shù)地方法，也是目前國際上 許多國家所采用地方法.使用該法應(yīng)注意：一般選取菌落數(shù)在之間地平板進行計數(shù)，過 多或過少均不準(zhǔn)確；為了防止菌落蔓延，影響計數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入.，一氯化三 苯基四氮唑()；本法限用于形成菌落地微生物個人收集整理勿做商業(yè)用途另活菌計數(shù)法，其原理是每個活細(xì)菌在適宜地培養(yǎng)基和良好地生長條件下可以通過生長形成 菌落.將待測樣品經(jīng)一系列倍稀釋，然后選擇三個稀釋度地菌液，分別取放入無菌平皿， 再倒入適量地已熔化并冷至C左右地培養(yǎng)基，與菌液混勻，冷卻、待凝