2015中藥藥學(xué)基礎(chǔ)講義

1、第三部分第六章紫外-可見分光光度法一、概述波長(zhǎng)范圍：紫外區(qū) 200-400nm可見光區(qū) 400-760nm能級(jí)躍遷類型：分子外層電子的能級(jí)躍遷用途：定性、定量和結(jié)構(gòu)分析特點(diǎn)：靈敏度較高，檢測(cè)限為 10-4-10-6g/ml相對(duì)誤差一般為 2-5%適用樣品？二、紫外-可見吸收光譜幾種有機(jī)化合物的紫外-可見吸收光譜圖。1、吸收光譜的形成分子三種運(yùn)動(dòng)形式和相應(yīng)的能級(jí)電子能級(jí)分子軌道能級(jí)分子軌道能級(jí)示意圖不同分子軌道對(duì)應(yīng)不同的能量，軌道的能級(jí)由低到高為 spnp*s*。通常外層電子均處于分子軌道的基態(tài)，即成鍵軌道或非鍵軌道上。電子躍遷類型吸收光譜的形成過(guò)程：運(yùn)動(dòng)的分子外層電子-吸收外來(lái)輻射-產(chǎn)生電子能

2、級(jí)躍遷紫外-可見吸收光譜吸收光譜中吸收帶位置和強(qiáng)度電子躍遷 紫外-可見吸收光譜吸收帶的位置（最大吸收波長(zhǎng)）是由電子躍遷能級(jí)間的能量差所決定，反映了分子況，是物質(zhì)定性的依據(jù)。能級(jí)分布狀吸收譜帶的強(qiáng)度（吸光系數(shù)）與躍遷幾率有關(guān)，也是由物質(zhì)的結(jié)構(gòu)決定，也可作為定性的依據(jù)。三、透光率和吸光度透光率的負(fù)對(duì)數(shù)稱為吸光度 A（absorbance）四、Lambert - Beer 定律吸光度愈大，溶液對(duì)光的吸收愈多溶液對(duì)光的吸收除與溶液本性有關(guān)外，還與入射光波長(zhǎng)、溶液濃度、液層厚度及溫度等有關(guān)。式中 A 為吸光度，T 為透光率，E 為吸收系數(shù)，C 為被測(cè)物質(zhì)溶液的濃度，L 為液層厚度。1760 年，Lamb

3、ert 從實(shí)驗(yàn)中找到了A 與液層厚度的關(guān)系式：A=k1bk1 為與被測(cè)物性質(zhì)、入射光波長(zhǎng)、溶劑、溶液濃度和溫度有關(guān)的常數(shù)當(dāng)入射光波長(zhǎng)、溶劑和吸光物質(zhì)種類、濃度和溶液的溫度都一定時(shí)，該溶液的吸光度只與液層厚度成正比1852 年，Beer 從實(shí)驗(yàn)中找到了 A 與溶液濃度的關(guān)系式：A=k2ck2 為與被測(cè)物性質(zhì)、入射光波長(zhǎng)、溶劑、液層厚度和溫度有關(guān)的常數(shù)當(dāng)入射光波長(zhǎng)、溶劑和吸光物質(zhì)種類、液層厚度和溶液的溫度都一定時(shí)，該溶液的吸光度只與溶液濃度成正比合并這兩個(gè)式子，得到 Lambert - Beer Low A=lc吸光度吸光系數(shù)介質(zhì)厚度濃度吸收系數(shù)：吸收系數(shù) E 是物質(zhì)的物理常數(shù)，隨濃度 C的不同，

4、吸收系數(shù) E 有不同的意義和表示方法。摩爾吸收系數(shù)：在某一波長(zhǎng)下，溶液濃度為 1mol/L、液層厚度為 1cm 時(shí)的吸光度，用表示。五、應(yīng)用1、定性鑒別依據(jù)：相同的化合物有相同的光譜核對(duì)吸收光譜的特征參數(shù)：最大吸收波長(zhǎng)（max）、吸收系數(shù)（）、吸光度（A）如圖：布洛芬 0.4%氫氧化鈉溶液制成每 1ml 中含 0.25 mg 的溶液，在 265nm 與 273nm 的波長(zhǎng)處有最大吸收,在 245nm 與 271nm 的波長(zhǎng)處有最小吸收，在 259nm 的波長(zhǎng)處有一肩峰。對(duì)比吸收度（或吸收系數(shù)）比值：吸收峰較多，比較幾個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度比值A(chǔ)1/A2E1/E2如圖：布洛芬 265nm 和 273nm 下吸光度的比值應(yīng)該為一定值。對(duì)比吸收光譜的一致性：光譜曲線完全一致，才有可能是同一物質(zhì)（也有并非同一物質(zhì)的可能性），光譜曲線有明顯差別時(shí)，肯定兩物不是同一物質(zhì)2、雜質(zhì)檢查雜質(zhì)檢查雜質(zhì)限量：規(guī)定波長(zhǎng)下，一定濃度的樣品吸光度是否符合要求3、含量測(cè)定（1）單組分樣品的定量方法對(duì)照品比較法：條件苛刻，應(yīng)用較少。方法：分別配制供試品和對(duì)照品溶液，在規(guī)定波長(zhǎng)處分別測(cè)定它們的吸光度，按溶液中被測(cè)組分的濃度。公式計(jì)算供試品吸收系數(shù)法應(yīng)用最多。方法：配制供試品溶液，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)，按下式計(jì)算供試品溶液的濃度。注意：某些時(shí)候吸收系數(shù)需要試驗(yàn)測(cè)定。多