現(xiàn)代分析技術(shù)綜述

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔傾情為你奉上精選優(yōu)質(zhì)文檔傾情為你奉上專心專注專業(yè)專心專注專業(yè)精選優(yōu)質(zhì)文檔傾情為你奉上專心專注專業(yè)現(xiàn)代分析技術(shù)在生藥學(xué)中的應(yīng)用姚 曉 (南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 11碩（8） ,江蘇南京)摘要介紹色譜法、光譜法、核磁共振波譜、質(zhì)譜及其聯(lián)用技術(shù)、DNA分子診斷技術(shù)、X射線衍射法等幾種現(xiàn)代分析方法在生藥學(xué)中的應(yīng)用。關(guān)鍵詞生藥學(xué)；現(xiàn)代分析技術(shù)Application of modern analytical technology in PharmacognosyYAO Xiao (Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing

2、 ,China)AbstractApplication of modern analytical technology in Pharmacognosy are introduced in this paper, including chromatographic techniques, spectral techniques, nuclearmagnetic resonance (NMR),mass spectrometry(MS,GC-MS, LC-MS, CE-MS, ICP-MS),DNA fingerprint techniques,X-ray diffraction techniq

3、uesKey wordsPharmacognosy；modern analytical technology我們即將跨入21世紀(jì),生命科學(xué)將對(duì)21世紀(jì)的科學(xué)發(fā)展產(chǎn)生重大影響,生藥學(xué)這一門研究生藥的古老學(xué)科將面臨新的挑戰(zhàn)。以儀器分析為主的分析技術(shù),包括高效液相色譜、薄層色譜、氣相色譜、超臨界流體色譜、高效毛細(xì)管電泳、紅外光譜與拉曼光譜、原子吸收光譜、核磁共振、質(zhì)譜及其聯(lián)用技術(shù)(氣質(zhì)聯(lián)用、液質(zhì)聯(lián)用、電感耦合等離子體-質(zhì)譜)、DNA分子診斷技術(shù)、X射線衍射法等。伴隨著生物技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、聯(lián)用技術(shù)等新技術(shù)不斷滲入，并在生藥學(xué)科得到應(yīng)用;圍繞全球從中藥中開(kāi)發(fā)新藥研究熱點(diǎn)的興起,及我國(guó)中醫(yī)藥走向世界面臨

4、的困境,生藥學(xué)研究將以提高中藥材(原料藥)的質(zhì)量和中藥新藥在國(guó)際市場(chǎng)上的競(jìng)爭(zhēng)力為主要目的。我們將現(xiàn)代分析技術(shù)在生藥學(xué)中的應(yīng)用展開(kāi)討論,闡述現(xiàn)代分析技術(shù)在21世紀(jì)生藥學(xué)研究的新領(lǐng)域的運(yùn)用。1色譜法色譜法是現(xiàn)代分離分析的一個(gè)重要方法,它主要包括薄層色譜、紙色譜法、氣相色譜、液相色譜、凝膠色譜、超臨界流體色譜、高效毛細(xì)管電泳等。色譜法是以其高超的分離能力特點(diǎn),具有分離效率高、應(yīng)用范圍廣、樣品用量少、靈敏度高、易于自動(dòng)化。在中藥材和中成藥分析中已廣泛應(yīng)用,成為中藥質(zhì)量控制的基本方法。1.1薄層色譜薄層色譜法是將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上,成一均勻薄層,待點(diǎn)樣、展開(kāi)后,與適宜的對(duì)照物按同法

5、在同板上所得的色譜圖作對(duì)比,并可用薄層掃描儀進(jìn)行掃描。TLC操作簡(jiǎn)單,具有分離、鑒定雙重功能,是中藥分析的常用手段。莫善列等建立喉舒寧片含量測(cè)定的薄層色譜掃描法,并用該法測(cè)定不同產(chǎn)地樣品中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量15。馮彥琳等采用薄層色譜掃描測(cè)定刺五加注射液中紫丁香苷的含量16。1.2紙色譜法紙色譜法是一種分配色譜，可用于氨基酸、糖類等水溶性成分的分析。1.3氣相色譜法(GC)氣相色譜法(GC)是以氣體為流動(dòng)相,分離效率高、樣品用量少、分析速度快。適用于分離、鑒別和定量測(cè)定揮發(fā)性成分。對(duì)于揮發(fā)性成分的中藥,多采用氣相色譜法鑒別和測(cè)定含量,在大孔吸附樹(shù)脂溶劑殘留檢測(cè)、中藥中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)也有大量的應(yīng)

6、用。黃月純等采用程序升溫對(duì)10批石菖蒲中揮發(fā)油成分進(jìn)行氣相色譜分析,共標(biāo)出6個(gè)特征峰,建立石菖蒲揮發(fā)油的氣相指紋圖譜,控制其質(zhì)量1。1.4高效液相色譜法(HPLC)HPLC是以液體溶劑作為流動(dòng)相的色譜技術(shù),有分離效能高、選擇性高、檢測(cè)靈敏度高和分析速度快的特點(diǎn)。高效液相色譜法是一種非常有效并普遍實(shí)用的中藥分析方法,可用于高分子、極性、離子和熱不穩(wěn)定性化合物的分離分析。劉永剛采用C18柱,梯度洗脫,建立藿香正氣水中橙皮苷、甘草苷、厚樸酚和厚樸酚含量的測(cè)定方法6。朱文良采用HPLC法,C18柱,檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm,同時(shí)測(cè)定復(fù)方黃芪注射液中人參皂苷Re、Rg1的含量7。1.5超臨界流體色譜超臨界流

7、體可以用作色譜的流動(dòng)相,使混合物質(zhì)在色譜柱上得到分離,這種分離方法被稱為超臨界流體色譜。超臨界流體對(duì)物質(zhì)的溶解能力比一般氣體大的多,相當(dāng)于有機(jī)溶劑,但比有機(jī)溶劑的擴(kuò)散速度快、黏度低、表面張力小。超臨界流體溶解能力的大小隨其壓力的變化而改變。由于超臨界流體的黏度很低,SFC就可采用比高效液相色譜(HPLC)高的流速,因此具有分析/制備快的優(yōu)點(diǎn)。SFC作為一種新的分離手段,對(duì)天然產(chǎn)物的分離純化有較大優(yōu)勢(shì),它既不破壞天然產(chǎn)物的活性,又可快速達(dá)到分離,是一種高效的分離和制備方法。王學(xué)軍等采用C18色譜柱,流動(dòng)相為超臨界CO2-005%三氟乙酸的乙醇溶液 (101),檢測(cè)波長(zhǎng)360nm,同時(shí)測(cè)定銀杏葉提

8、取物中槲皮素和蘆丁的含量21。1.6高效毛細(xì)管電泳(HPCE)高效毛細(xì)管電泳是以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,毛細(xì)管為分離通道,依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一類液相分離技術(shù),具有分離效率高、速度快、所需樣品少、溶劑消耗少和抗污染能力強(qiáng)等特點(diǎn)。HPCE已經(jīng)日益廣泛地應(yīng)用于中藥生藥化學(xué)成分的分離、鑒別和含量測(cè)定,分析成分主要包括生物堿、黃酮、苷類、酚類、有機(jī)酸、香豆素、醌類及其它成分。吳江明等采用膠束毛細(xì)管電泳法同時(shí)測(cè)定黃連-吳茱萸藥對(duì)中小檗堿、巴馬汀、藥根堿、吳茱萸堿和吳茱萸次堿5種主要生物堿含量24。1.7凝膠電泳根據(jù)蛋白分子大小將其分離，經(jīng)染色后通過(guò)譜帶的顏色深淺和數(shù)目，作為不

9、同中藥材的鑒別依據(jù)。適合于肽類、核酸、多糖等大分子化合物的分析鑒定。史克莉采用SDSPAGE電泳鑒別3種蜂王漿、金錢白花蛇、烏梢蛇、炮制前后的蝎子以及鹿蹄筋，該方法為動(dòng)物類中藥鑒別提供可靠得鑒別特征【16】。2光譜法1.1可見(jiàn)一紫外分光光度法(UV)此方法原理是根據(jù)不同藥材的紫外吸收光譜互異這一特性進(jìn)行鑒別。一般用于總提取物或部分提取物中某類成分的含量分析，也可通過(guò)導(dǎo)數(shù)光譜法進(jìn)行混合物中單一組分的測(cè)定，或通過(guò)指紋圖譜進(jìn)行定性分析。李同芬利用紫外光譜分析把柴胡、狹葉柴胡、大葉柴胡三者區(qū)分開(kāi)1。湯迎爽根據(jù)子外吸收峰位置和數(shù)目的差異，鑒別了粉防己及其混淆品2。2.2紅外光譜與拉曼光譜紅外光譜和拉曼光

10、譜均屬于分子振動(dòng)光譜,紅外光譜是有機(jī)分子的吸收光譜,而拉曼光譜是有機(jī)分子的散射光譜,二者都是利用有機(jī)物在低能量照射下分子發(fā)生振動(dòng)的原理來(lái)提供結(jié)構(gòu)信息,雖然二者基本原理有所不同,但所得信息均豐富而且能相互補(bǔ)充?？商峁┓肿又杏嘘P(guān)官能團(tuán)的內(nèi)在信息, “指紋”區(qū)對(duì)異構(gòu)體有選擇性,可進(jìn)行定量及無(wú)損分析。許良等對(duì)止瀉子及其兩種混淆品的紅外光譜進(jìn)行比較,從藥材的紅外光譜數(shù)據(jù)可知, 3種藥材各有獨(dú)特的紅外指紋特征,其各峰位及相對(duì)強(qiáng)度不同,說(shuō)明3種藥材所含化學(xué)成分和各成分的相對(duì)含量不同,能夠快速鑒別蒙藥材止瀉子及其混淆品地梢瓜和連翹34。2.3原子吸收光譜(AAS)由待測(cè)元素?zé)舭l(fā)出的特征譜線通過(guò)供試品蒸氣時(shí),被

11、蒸氣中待測(cè)元素的基態(tài)原子所吸收,吸收遵循一般分光光度法的吸收定律,通過(guò)測(cè)定輻射光強(qiáng)度減弱的程度可求出待測(cè)元素的含量。在中草藥無(wú)機(jī)微量元素含量分析上得到廣泛的應(yīng)用。陳惠玲等采用火焰原子吸收光譜法,測(cè)定粗毛淫羊藿生品及3種不同炮制品中10種微量元素的含量并作比較40。3核磁共振波譜(NMR)核磁共振波譜是一種物理方法,它檢測(cè)的是組成有機(jī)化合物分子的原子核的性質(zhì)及其周圍化學(xué)環(huán)境的相互作用。在適當(dāng)?shù)拇艌?chǎng)條件下,樣品能夠吸收射頻區(qū)的電磁輻射,所吸收的輻射頻率取決于樣品的特性,吸收與分子中的某一給定的原子核有關(guān),吸收峰頻率對(duì)吸收峰強(qiáng)度作圖構(gòu)成NMR譜圖。自1946年發(fā)現(xiàn)核磁共振現(xiàn)象以來(lái),NMR儀器和方法迅

12、猛發(fā)展,二維(2D)和多維NMR技術(shù)的發(fā)展就是一個(gè)突出的例子。NMR主要應(yīng)用領(lǐng)域是測(cè)定分子的結(jié)構(gòu),中藥基礎(chǔ)研究的關(guān)鍵問(wèn)題之一就是中藥治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)研究,研究中藥治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ),首先就要研究清楚中藥有效成分的化學(xué)結(jié)構(gòu),這已經(jīng)成為中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵內(nèi)容。張慶英等利用現(xiàn)代1D-和2D-NMR技術(shù)對(duì)aromoline(崖藤中生物堿)的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)進(jìn)行正確全歸屬,并報(bào)道該化合物的CD譜44。4質(zhì)譜及其聯(lián)用技術(shù)質(zhì)譜分析是通過(guò)對(duì)樣品離子的質(zhì)量和強(qiáng)度的測(cè)定,來(lái)進(jìn)行化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)分析的一種分析方法。有機(jī)質(zhì)譜能夠給出有機(jī)化合物的分子量、分子式,分子離子和碎片離子、碎片離子和碎片離子之間的

13、生緣關(guān)系,以及揭示生成碎片離子的裂解方式和有機(jī)分子結(jié)構(gòu)類型關(guān)系的規(guī)律性。主要用于中草藥及植物的化學(xué)成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定和測(cè)定。色譜聯(lián)用技術(shù)的出現(xiàn)加快中藥研發(fā)的步伐,該技術(shù)具有所需樣品量少、速度快等特點(diǎn),且可得到更多信息,目前,正處于快速發(fā)展階段并廣泛應(yīng)用的色譜聯(lián)用技術(shù)包括氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)、液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用 (LC/MS)、液相色譜/質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用(LC/MS/MS)、毛細(xì)管電泳/質(zhì)譜聯(lián)用(CE/MS)、電感耦合等離子體/質(zhì)譜聯(lián)用(ICP-MS)等。4.1質(zhì)譜應(yīng)用竇建鵬等采用電噴霧多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-MS)技術(shù),對(duì)從朝鮮淫羊藿分離得到的組分A、組分B分別進(jìn)行指認(rèn),確定它們的化學(xué)

14、成分,并系統(tǒng)研究其質(zhì)譜碎裂規(guī)律與結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系,為快速鑒定這兩種化合物提供一種新方法50。4.2氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用(GC-MS)魏剛探討GC-MS建立中藥特征指紋圖譜色譜條件的參數(shù)設(shè)置,建議采用特征指標(biāo)成分群開(kāi)展方法學(xué)(精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性)的考察,且將相對(duì)含量的RSD值定為不得大于5%比較符合實(shí)際情況52。4.3液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用(LC-MS)張潔等對(duì)HPLC-ESI-MS/MS條件進(jìn)行優(yōu)化,研究紫杉醇電噴霧質(zhì)譜的一級(jí)電離規(guī)律和二級(jí)質(zhì)譜裂解規(guī)律,并結(jié)合液相色譜的保留時(shí)間判斷東北紅豆杉及其傷愈組織粗提物中紫杉醇色譜峰的歸屬56。周欣等研究用液相色譜-電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)定量測(cè)定銀杏內(nèi)酯A, B,

15、C和白果內(nèi)酯BB的方法57。4.4毛細(xì)管電泳/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用(CE /MS)柳仁民等以非水毛細(xì)管電泳對(duì)粉防己甲醇提取物中的生物堿進(jìn)行分離,并利用在線電噴霧離子阱質(zhì)譜得到的準(zhǔn)分子離子及碎片信息對(duì)其進(jìn)行鑒定;使用未涂層毛細(xì)管, 50mmo1L-1醋酸銨-4%HAc-甲醇溶液為運(yùn)行緩沖液,分離電壓為25kV,質(zhì)譜接口為同軸鞘液接口;電噴霧電壓為45kv,鋁毛細(xì)管溫度為170;鞘液組成為60%異丙醇-39%水-%lHAc,鞘液流速為5Lmin-161。4.5電感耦合等離子體/質(zhì)譜應(yīng)用( ICP-MS)電感耦合等離子體-質(zhì)譜技術(shù)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的新型的元素和同位素分析技術(shù)。與傳統(tǒng)的元素分析技

16、術(shù)相比, ICP-MS技術(shù)提供極低的檢出限,極寬的動(dòng)態(tài)線性范圍、干擾少、分析精密度高、分析速度快、可提供同位素信息。它在分析能力上可取代傳統(tǒng)的石墨爐原子吸收、電感耦合等離子體光譜技術(shù),已廣泛應(yīng)用于環(huán)境、半導(dǎo)體、生物醫(yī)藥分析等領(lǐng)域。夏斌鋒等使用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀測(cè)定西洋參、丹參等10個(gè)品種藥材中的銅、砷、鎘、汞、鉛,數(shù)據(jù)的重復(fù)性和回收率符合痕量分析要求62。5 X射線衍射法X衍射技術(shù)是一種研究物質(zhì)的物相和晶體結(jié)構(gòu)的分析方法，被廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)、科研等領(lǐng)域，在中藥鑒定中的應(yīng)用也日益廣泛。其應(yīng)用原理是當(dāng)X射線通過(guò)晶體時(shí)，可以產(chǎn)生衍射效應(yīng)，在空間形成一幅由不同晶面產(chǎn)生的衍射線構(gòu)成的圖譜，圖譜包含了反

17、映晶體空間結(jié)構(gòu)的信息(Fourier變換)，通過(guò)計(jì)算(Fourier反變換)可獲得晶體分子精確的三維立體結(jié)構(gòu)。如果被測(cè)定物質(zhì)是混合物，所得的應(yīng)是各組分衍射效應(yīng)的疊加，故只要成分恒定，圖譜也就恒定。中藥粉末X衍射圖譜是其所含全部成分的一次Fourier變換，它與所含化學(xué)成分呈一一對(duì)應(yīng)的關(guān)系。因此，可通過(guò)X衍射Fourier譜分析，獲得每種中藥特定的X衍射圖譜，實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥的鑒定34。在中藥鑒定中的應(yīng)用主要有以下幾方面。5.1在植物類中藥中的應(yīng)用周俊國(guó)等5對(duì)3種不同產(chǎn)地12個(gè)樣品的蛇床子進(jìn)行粉末X射線衍射分析，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地蛇床子衍射圖譜按其幾何拓?fù)浯笾驴煞譃?類相似的衍射模糊圖形，與TCL法分

18、析的結(jié)果一致，為中藥鑒定提供了新的譜學(xué)分析依據(jù)。5.2在動(dòng)物類中藥中的應(yīng)用李蘭燕等6采用粉末X射線衍射Fourier譜鑒定法，對(duì)1個(gè)廣地龍藥材對(duì)照品、4個(gè)廣地龍中藥材進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析，結(jié)果得到了其標(biāo)準(zhǔn)X射線衍射Fourier圖譜及特征標(biāo)記峰值。結(jié)果表明5個(gè)廣地龍樣品的X射線衍Fourier圖譜幾何拓?fù)鋱D形規(guī)律是一致的。5.3在礦物類中藥中的應(yīng)用古令等7分析了8種馬寶和一種偽馬寶的成分，證明了正品和偽品的化學(xué)成分完全不同。5.4在菌類中藥中的應(yīng)用X射線衍射法同樣已在菌類中藥中得到了應(yīng)用。如羅俊等8報(bào)道，采用波譜和X射線衍射分析赤芝子實(shí)體的化學(xué)結(jié)構(gòu)，分離得到4個(gè)化合物，鑒定為麥角甾醇、麥角甾-7，22

19、-二烯-3-醇和兩個(gè)新化合物。6 計(jì)算機(jī)模式分類技術(shù)原理是采用先進(jìn)的色譜和光譜分析進(jìn)行化學(xué)量測(cè)，從中獲取中藥質(zhì)量?jī)?yōu)劣的化學(xué)信息，用計(jì)算機(jī)模式分類技術(shù)進(jìn)行分類決策，依此來(lái)鑒定中藥。不同的中藥樣品在化學(xué)成分及含量上存在著差異，可用色譜和光譜等反映出來(lái)，并將從色譜、光譜中提取的有用信息特征轉(zhuǎn)化為計(jì)算機(jī)能夠接受n行m列數(shù)量化矩陣，屬于不同類別的樣品則相互分離。主要的計(jì)算機(jī)模式分類技術(shù)有K最近鄰分類法(KNN)、非線形映照法(NLM)、主成分分析法(PCA)、SIMC法、PRIMA法、星區(qū)圖法、模糊聚類分析法、人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)法等。計(jì)算機(jī)模式技術(shù)用于中藥鑒定與當(dāng)前國(guó)家對(duì)中藥質(zhì)量現(xiàn)代化研究的宏觀要求相吻合。蘇

20、薇薇從5種黃芬的薄層色譜中獲取分類特征，用模糊聚類分析法準(zhǔn)確的區(qū)分了藥典規(guī)定的正品黃琴與4種非正品黃芬在所含化學(xué)成分上差異的大小19。7 分子生物技術(shù)傳統(tǒng)的中藥鑒別主要依據(jù)形態(tài)學(xué)特征和理化性質(zhì)，但是最具有決定意義的應(yīng)該是DNA鑒定，因?yàn)槲锓N的差異歸根結(jié)底是由于它們DNA之間的核酸序列不同，中藥的DNA鑒定即中藥的DNA指紋圖構(gòu)建，通過(guò)對(duì)中藥品種基因組的直接分析，不僅有助于正本清源，而且對(duì)于建立我國(guó)一些地道名貴中藥材的基因庫(kù)，了解這些品種的遺傳變遷狀況及代用品間血緣關(guān)系遠(yuǎn)近都有重大意義。可應(yīng)用于藥用植物鑒別的分子生物學(xué)方法主要有:限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)

21、、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(AFLP)、隨機(jī)引物PCR(AP一PCR)、DNA指紋技術(shù)(DAF)和生物芯片術(shù)等。7.1限制性片段多態(tài)性(RFLP) 限制性片段多態(tài)性(RFLP)是依據(jù)不同植物個(gè)體來(lái)源的DNA所形成的不同的譜帶模型與低拷貝的DNA探針雜交得到DNA的限制性片段多態(tài)性，它代表的是基因組DNA在限制性內(nèi)切酶消化后產(chǎn)生的片段在長(zhǎng)度上的差異。其結(jié)果穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好，但是操作復(fù)雜，費(fèi)用高，易造成污染，應(yīng)用較少。張婷利用PCRRFLP成功鑒定了25件市售束花石、解、流蘇石解及其形態(tài)相似種21。7.2隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD) 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)原理是根據(jù)DNA聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)

22、(PCR)，采用人工合成的隨機(jī)引物，以植物組織分離的基因組DNA為模板，進(jìn)行多態(tài)性DNA片段的隨機(jī)合成反應(yīng)，從而根據(jù)DNA片段，將植物不同基因組予以區(qū)別。張艷波等收集了6種拘祀屬植物，7個(gè)正品，4個(gè)混淆品，運(yùn)用RAPD技術(shù)，獲得了構(gòu)祀屬不同種植物的DNA指紋圖譜，為構(gòu)祀地道品種鑒別提供分子水平的依據(jù)。曹暉采用任意引物聚合酶鏈反應(yīng)和隨意引物擴(kuò)增的多態(tài)性DNA方法，擴(kuò)增蒲公英及其6種土公英混淆品的基因組DNA，獲得清晰并可靠的DNA指紋圖譜，根據(jù)瓊脂糖凝膠上顯示的DNA帶型差異可鑒別蒲公英及其混淆品22。7.3擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(AFLP)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(AFLP)是RFLP和RAPD兩種技術(shù)

23、相結(jié)合的一種分子標(biāo)記技術(shù)，既有RFLP的專一性、可靠性，又有RAPD技術(shù)的隨機(jī)性、方便性。YamaZaki利用AFLP鑒別甘草屬植物23。7.4 DNA測(cè)序法以PCR擴(kuò)增產(chǎn)物作為測(cè)序引物，提高了DNA序列分析的效率。馬小軍通過(guò)比較不同人參的ITS序列進(jìn)行鑒別24。7.5生物芯片生物芯片是將大量探針?lè)肿?DNA，RNA或多肽)固定在支持物上后與標(biāo)記的樣品分子進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)每個(gè)探針?lè)肿拥碾s交信號(hào)強(qiáng)度，對(duì)樣品分子進(jìn)行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析。李紹平采用生物芯片鑒定川貝母25。8 結(jié)語(yǔ)本文對(duì)現(xiàn)代分析技術(shù)在生藥分析中應(yīng)用作了簡(jiǎn)要綜述與分析。由每種技術(shù)各有優(yōu)缺點(diǎn)和適用對(duì)象，故在生藥分析的實(shí)際應(yīng)用中可從材料

24、特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)條件和已有的研究基礎(chǔ)出發(fā)，選擇一種或幾種方法，以找出快速有效、經(jīng)濟(jì)穩(wěn)定的實(shí)用基因技術(shù)以分析生藥。相信隨著PCR，DNA測(cè)序，核昔酸引物合成、核酸內(nèi)切酶分離純化等技術(shù)向低成本商業(yè)化(試劑盒)、高效率自動(dòng)化(分析儀器)方向發(fā)展，不久的將來(lái)以內(nèi)切酸探針和引物探針為代表的基因技術(shù)PCR分析法有可能成為繼顯微、理化方法之后生藥分析領(lǐng)域又一常規(guī)分子分析方法。應(yīng)用此方法只要選擇特異的探針通過(guò)PCR擴(kuò)增或酶解，電泳分離即可達(dá)到生藥分析目的。參考文獻(xiàn) 1李萍，徐國(guó)鈞，徐珞珊.21世紀(jì)生藥學(xué)研究展望J. 中國(guó)藥學(xué)雜志，1997， 32（9）5135172黃月純,魏剛.石菖蒲揮發(fā)油的氣相色譜指紋圖譜研究J

25、.中國(guó)藥房, 2005, 16(21) 166616773莫善列,思秀玲,韋松.薄層掃描法測(cè)定喉舒寧片中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量J.中成藥, 2005, 27(12) 1481 14824馮彥琳,李美萍,李俊.薄層色譜掃描法測(cè)定刺五加注射液中紫丁香苷的含量J.藥物分析雜志, 2006, 26(6) 8538545劉永剛,盧建秋,劉珍清，等.高效液相色譜法測(cè)定藿香正氣水中橙皮苷等4種成分的含量J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2006, 17(10) 194719486朱文良,李發(fā)美.HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方黃芪注射液中人參皂苷Re、Rg1含量, 2006, 23(9) 5775807王學(xué)軍,許振良,趙鎖奇.銀杏葉

26、提取物中槲皮素和蘆丁的超臨界流體色譜法測(cè)定J.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志, 2005, 36(7) 415418吳江明,欒連軍,程翼宇.膠束毛細(xì)管電泳法同時(shí)測(cè)定黃連-吳茱萸藥對(duì)5種生物堿的含量J.藥物分析雜志, 2006, 26(3)3253289史克莉等.幾種動(dòng)物類中藥材SDS的電泳鑒別J.中成藥.2004, (5) 41110李同芬等.北柴胡、南柴胡與大葉柴胡紫外光譜及導(dǎo)數(shù)光譜指紋鑒別J.中草藥.1990: (3) 3111湯迎爽等.紫外光譜法鑒別粉防己及其混淆品木防己、小果微花藤J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥.2003, (1) 2612許良,王志民,吳香杰等.止瀉子及其混淆品的傅立葉變換紅外光譜法鑒別J.時(shí)珍

27、國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2006, 17(1)798013陳惠玲,王建科,任永全等.粗毛淫羊藿及其不同炮制品中10種微量元素的含量J.中國(guó)中藥雜志, 2001, 26(3)15916114張慶英,梁鴻,蔡少青,等.崖藤中生物堿aromoline的結(jié)構(gòu)及NMR研究J.中草藥, 2005, 36(11)1627162915竇建鵬,劉志強(qiáng),劉淑瑩.兩種黃酮醇苷同分異構(gòu)體的電噴霧質(zhì)譜區(qū)分N.質(zhì)譜學(xué)報(bào), 2004, 25(增刊)535416魏剛.氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用建立中藥特征指紋圖譜的色譜條件探討J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2005, 16(8)72872917張潔,段繼誠(chéng),梁振,等.東北紅豆杉及其傷愈組織粗提物中紫杉醇HPLC-ESI-MS/MS分析研究N.藥學(xué)學(xué)報(bào), 2006, 41 (9)8