海楓藤提取物對(duì)Na+K+ATP酶活力的影響

1、海楓藤提取物對(duì)Na+，K+-ATP酶活力的影響沈放，楊黎江，路斌，王德斌【摘要】目的通過(guò)該研究確證彝族傳統(tǒng)草藥海楓藤中是否含具有強(qiáng)心作用的活性身分，并開(kāi)端相識(shí)該活性身分的存在部位及藥效。要領(lǐng)運(yùn)用大鼠心肌Na+，K+-ATP酶活力測(cè)定要領(lǐng)檢測(cè)海楓藤提取物中是否具有強(qiáng)心類(lèi)物質(zhì)。結(jié)果海楓藤莖、葉中均含有按捺Na+，K+-ATP酶活力的物質(zhì)；莖提取物的按捺結(jié)果顯著優(yōu)于別的，且其強(qiáng)心活性與劑量呈正相干；同強(qiáng)心苷類(lèi)物質(zhì)地高辛比力，海楓藤莖水提取物與地高辛對(duì)心肌Na+，K+-ATP酶活力的按捺作用無(wú)明顯性差異。結(jié)論海楓藤提取物中具有雷同于強(qiáng)心苷的活性身分存在，該活性物質(zhì)重要存在于莖中，且莖的水提取物中含有的

2、強(qiáng)心身分與地高辛的強(qiáng)心作用相近?！娟P(guān)鍵詞】海楓藤Na+K+-ATP酶強(qiáng)心蘿藦科植物富含強(qiáng)心苷類(lèi)身分1，如杠柳屬的美葉杠柳Periplaalphylla(ight.)Falner2，杠柳PeriplasepiuBge.3、馬利筋屬的馬利筋A(yù)slepiasurassaviaL.4，以及馬達(dá)加斯加膠藤ryptstegiaadagasariensisBjer.等5。心肌細(xì)胞膜上的Na+，K+-ATP酶的活性與心肌緊縮速率有直接接洽，研究表白，強(qiáng)心苷類(lèi)物質(zhì)可通過(guò)按捺心肌Na+，K+-ATP酶活力來(lái)進(jìn)步心臟搏動(dòng)速率6，7。1東西1.1質(zhì)料1.2儀器UV-1600雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)北京瑞利闡發(fā)儀器公司

3、；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀東京理化；水浴鍋；循環(huán)水式多用真空泵；低溫離心機(jī)eppendrf；搗碎機(jī)；超低溫冰箱美國(guó)熱電；凍干機(jī)德國(guó)hristAlpha1-2；枯燥箱。1.3試劑構(gòu)造勻漿液蔗糖0.25l/L，EDTA25l/L，Tris10l/L，pH7.0，反響液ATP5.0l/L，gl25.0l/L，Nal120l/L，Kl2.5l/L，Tris25l/L，NaN35.0l/L，pH7.4，反響液即在反響液I中加100g/L的地高辛，反響液反響液中參加差異濃度的樣品溶液；鐵劑含10%三氯醋酸，1%硫脲，3%硫酸亞鐵，定磷試劑為11g鉬酸銨與22.5l濃硫酸先溶于100l水中，再稀釋至250l，別的未注明試

4、劑均為國(guó)產(chǎn)闡發(fā)純。2要領(lǐng)2.1海楓藤果實(shí)、莖和葉中有機(jī)身分的提取分散流程按照海楓藤果實(shí)、葉、莖有機(jī)身分提取分散流程，分散得到樣品g1，g2，j1，j2，y1，y2。2.2心肌構(gòu)造勻漿的制備7取康健SD大鼠8只，擊頭致昏，速取心臟，放入預(yù)冷的0.9%Nal中洗去血液，濾紙吸干，稱(chēng)量后按251V/參加構(gòu)造勻漿液，在冰浴中用玻璃勻漿器制成心肌構(gòu)造勻漿，經(jīng)三層紗布過(guò)濾，濾液于04冰箱保存。2.3酶促反響7每管加0.1l心肌構(gòu)造勻漿，空缺管加0.4l10%三氯醋酸和0.5l反響液；總酶管加0.5l反響液；g2-ATP酶管加0.5l反響液；給藥管加0.5l反響液。置37恒溫水浴中振蕩20in取出，立即放入

5、冰裕除空缺管外，別的管敏捷參加0.4l10%三氯醋酸停頓反響，振蕩后3000r/in離心10in，取上清液用Harry法測(cè)定無(wú)機(jī)磷含量。與此同時(shí)汲取0.1l構(gòu)造勻漿作得當(dāng)稀釋后用Bradfrd法測(cè)定卵白質(zhì)含量。尺度卵白質(zhì)溶液接納牛血清卵白配制，正確稱(chēng)取12.5g，加蒸餾水至50l，酶活力單元以每小時(shí)每毫克卵白水解ATP產(chǎn)生的無(wú)機(jī)磷的微摩爾數(shù)表現(xiàn)即lpi/(gprh)。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)闡發(fā)兩組間數(shù)據(jù)差異比力接納Studentt查驗(yàn)，多組間數(shù)據(jù)差異接納Dunans新復(fù)極差法查驗(yàn)，當(dāng)P0.05時(shí)以為差異明顯，P0.01時(shí)以為差異極明顯。3結(jié)果3.1海楓藤提取物對(duì)大鼠心肌細(xì)胞膜Na+,K+-ATP酶活力的

6、影響用上述要領(lǐng)測(cè)得大鼠心肌細(xì)胞膜Na+,K+-ATP酶活力為0.712lpi/(gprh)，占總酶活力的15.1%，海楓藤提取物對(duì)Na+,K+-ATP酶活力的影響見(jiàn)表1。表1海楓藤提取物對(duì)大鼠心肌細(xì)胞膜Na+,K+-ATP酶活力的影響略由以上結(jié)果可以看出，海楓藤莖、葉提取物中含有顯著按捺Na+,K+-ATP酶活力的物質(zhì)，即含有強(qiáng)心類(lèi)物質(zhì)。與葉提取物結(jié)果比擬可知，海楓藤的強(qiáng)心物質(zhì)重要存在于莖中。3.2差異濃度的海楓藤莖提取物對(duì)大鼠心肌細(xì)胞膜Na+,K+-ATP酶活力的影響用10，5，2.5，1g/l差異濃度海楓藤莖醇提物和水提物測(cè)定大鼠心肌Na+,K+-ATP酶的活力，結(jié)果見(jiàn)表2。表2差異濃度海

7、楓藤莖提取物對(duì)大鼠心肌細(xì)胞膜Na+,K+-ATP酶活力的影響(略)由以上結(jié)果可以看出，海楓藤莖提取物中含有能顯著按捺Na+,K+-ATP酶活力的物質(zhì)，按捺率與劑量呈正相干。海楓藤莖醇提物的按捺回歸方程為Y0.7190.0507X,r=0.9994，其半數(shù)按捺濃度I50為7.16g/l。海楓藤莖水提物的按捺回歸方程為Y=0.7311-0.056X，r=0.9879，其半數(shù)按捺濃度I50為6.72g/l。3.3海楓藤莖提取物與強(qiáng)心類(lèi)藥物按捺大鼠心肌細(xì)胞膜Na+,K+-ATP酶活力的比力用5g/l海楓藤莖提取物和強(qiáng)心類(lèi)藥物測(cè)定大鼠心肌Na+,K+-ATP酶活力，比力海楓藤提取物的強(qiáng)心成果，結(jié)果見(jiàn)圖1

8、。結(jié)果表白，地高辛和海楓藤提取物均具有顯著按捺大鼠心肌細(xì)胞膜Na+,K+-ATP酶活力的作用。在同樣濃度5g/l條件下海楓藤莖醇提物對(duì)大鼠心肌細(xì)胞膜Na+,K+-ATP酶活力的按捺結(jié)果顯著低于地高辛海楓藤莖醇提物按捺率為35.0%，地高辛為47.7%，而海楓藤莖水提物對(duì)大鼠心肌細(xì)胞膜Na+,K+-ATP酶活力的按捺結(jié)果41.4%與地高辛的按捺結(jié)果沒(méi)有明顯性差異。4討論本研究通過(guò)海楓藤果實(shí)、莖和葉的乙醇及水提取物對(duì)大鼠心肌細(xì)胞膜Na+,K+-ATP酶活性影響的檢測(cè)實(shí)行，創(chuàng)造海楓藤莖、葉的提取物能明顯按捺大鼠心肌細(xì)胞膜Na+,K+-ATP酶的活性P0.05，表白該植物中含有雷同于強(qiáng)心苷的活性身分存

9、在。海楓藤葉的水提取物和莖的乙醇提取物、水提取物均能顯著按捺Na+,K+-ATP酶的活性，但比擬力而言，莖提取物的按捺結(jié)果較葉提取物按捺結(jié)果顯著。莖提取物對(duì)Na+,K+-ATP酶活性的按捺率與其劑量呈正相干干系，莖醇提物的半數(shù)按捺濃度I50為7.16g/l，海楓藤莖水提物的半數(shù)按捺濃度I50為6.72g/l。由此可知，海楓藤含有具強(qiáng)心作用的化合物，即含有強(qiáng)心類(lèi)物質(zhì)，且該強(qiáng)心類(lèi)物質(zhì)重要存在于莖中?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1姚新生.自然藥物化學(xué)，第3版.北京：人民衛(wèi)生出書(shū)社，2002：299.2鄧士賢,王德成,何功倍，等.美葉杠柳Periplaalphylla(ight)Falner的強(qiáng)心作用J.藥學(xué)學(xué)報(bào),1980,4:55.3李玉紅，高秀梅，張柏禮，等.香加皮提取物對(duì)離體心臟心成果的影響J.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2022,7(4):396.4張?jiān)ⅲ瑴剡h(yuǎn)影，匡廷云.蘿藦科馬利筋族植物化學(xué)身分研究希望()J.自然產(chǎn)物研究與開(kāi)拓,2000,12