血小板和組織因子

1、血小板和組織因子【摘要】組織因子(tissuefatr,TF)在凝血和血管內(nèi)血栓形成中起重要作用，它不僅存在于血管外組織細(xì)胞中，而且也存在于血循環(huán)細(xì)胞中。血中單核細(xì)胞可以被內(nèi)毒素等誘導(dǎo)表達(dá)組織因子。近年來許多研究證明，血小板上的P-選擇蛋白、D40配體及GPb/a受體等也影響單核細(xì)胞表達(dá)組織因子。除此之外，有相當(dāng)多的證據(jù)說明，在生理情況下，血循環(huán)中也存在組織因子，血小板內(nèi)的組織因子是其中一部分，它在一定的條件下釋放，啟動(dòng)凝血反響。本文就參與凝血的血小板和組織因子的關(guān)系作一綜述性分析?！娟P(guān)鍵詞】血小板；組織因子；凝血；血栓形成PlateletandtissueFatrRevieKeyrdspla

2、telet;tissuefatr;agulatin;thrbusfratin血小板的主要生理作用是參與正常的止血，防止損傷后血液?jiǎn)适?，血小板的黏附、聚集、釋放反響以及凝血功能是完成正常止血功能的根本因素。組織因子tissuefatr,TF是凝血級(jí)聯(lián)反響的啟動(dòng)子，它的相對(duì)分子量約為47kD，與血中/a結(jié)合形成復(fù)合物，啟動(dòng)外源性凝血途徑，生成凝血酶原酶復(fù)合物，并與血小板互相作用，形成纖維蛋白。兩者共同都參與止凝血反響和血栓形成的過程，并起著不可或缺的作用。TF是一種細(xì)胞跨膜糖蛋白，廣泛分布于各種組織中，很多非血管細(xì)胞都可以合成和表達(dá)TF。在組織損傷后，這些細(xì)胞和循環(huán)血接觸，啟動(dòng)凝血反響。作為凝血反

3、響的啟動(dòng)子，TF主要分布于血管壁外膜，對(duì)凝血和血栓形成的調(diào)節(jié)都是有必要的。在正常情況下，與血液直接接觸的細(xì)胞不產(chǎn)生TF，但內(nèi)皮細(xì)胞和單核細(xì)胞可以被誘導(dǎo)表達(dá)。某些細(xì)胞因子誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞外表表達(dá)TF，而血小板、內(nèi)毒素等可以誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)TF1。近年來，許多研究者對(duì)血小板誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)TF的機(jī)制進(jìn)展了深化的研究。血小板對(duì)單核細(xì)胞表達(dá)TF的影響P-選擇蛋白誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)TFP-選擇蛋白為黏附分子選擇蛋白家族的成員，是一種完好的膜蛋白，貯藏在血小板-顆粒膜內(nèi)和內(nèi)皮細(xì)胞的-P體內(nèi)；介導(dǎo)血小板和內(nèi)皮細(xì)胞與中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的互相作用。eli等1用3種不同P-選擇蛋白活化血小板表達(dá)的P-選擇蛋白、轉(zhuǎn)染含

4、P選擇蛋白重組子的中華倉(cāng)鼠卵母細(xì)胞(H)表達(dá)的P-選擇蛋白、純化的P-選擇蛋白進(jìn)展實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了P-選擇蛋白可以誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)TF；純化的P-選擇蛋白以劑量依賴的方式刺激單核細(xì)胞TF的表達(dá)。表達(dá)P-選擇蛋白的中華倉(cāng)鼠卵母細(xì)胞(H)也能刺激單核細(xì)胞表達(dá)TF，而表達(dá)E-選擇蛋白和不表達(dá)P-選擇蛋白的該種細(xì)胞卻不能刺激TF表達(dá)；抗P-選擇蛋白抗體能抑制純化的P-選擇蛋白和表達(dá)P-選擇蛋白的H細(xì)胞誘導(dǎo)TF的作用；單核細(xì)胞和表達(dá)P-選擇蛋白的H細(xì)胞共同培養(yǎng)，可以檢測(cè)到單核細(xì)胞內(nèi)TFRNA增加和外表表達(dá)的增加。以上均說明P-選擇蛋白在介導(dǎo)單核細(xì)胞和血小板結(jié)合的同時(shí)，上調(diào)了TF的表達(dá)。但是活化的血小板上調(diào)T

5、F表達(dá)作用比單用P-選擇蛋白或轉(zhuǎn)染P選擇蛋白的中華倉(cāng)鼠卵母細(xì)胞(H)更大，可能血小板除P-選擇蛋白還有其他的分子作用于單核細(xì)胞TF的表達(dá)1。D40L在誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)TF方面的作用D40是一個(gè)50kD的膜結(jié)合糖蛋白，主要表達(dá)于B淋巴細(xì)胞，還有樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等。它的配體D40L,D154是腫瘤壞死因子超家族的成員，主要表達(dá)于D4+T輔助細(xì)胞，還可表達(dá)于平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、激活的嗜堿性細(xì)胞。最近發(fā)現(xiàn)，其還表達(dá)于激活的血小板2，且在P-選擇蛋白依賴的誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)TF方面起一定的作用。Lindark等3報(bào)道，在凝血酶受體沖動(dòng)劑活化的血中，77%單核細(xì)胞TF陽性，而參加抗D40L的

6、抗體的血中單核細(xì)胞TF的表達(dá)比前者減少17%；但是同時(shí)參加P-選擇蛋白抗體和D40L抗體，TF的表達(dá)并沒有比單加P-選擇蛋白抗體時(shí)顯著減少?？赡?，D40L輔助加強(qiáng)P-選擇蛋白誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)TF的作用。GPb/a拮抗劑表非替得eptifibatide對(duì)單核細(xì)胞表達(dá)TF的作用GPb/a是血小板外表纖維蛋白原的受體，它與纖維蛋白原結(jié)合后，纖維蛋白原起到“膠水樣作用，把血小板彼此聚集起來。GPb/a拮抗劑eptifibatide能抑制血小板的聚集，但是大量臨床試驗(yàn)說明，它卻不能減少冠心病急性事件的發(fā)生率。有資料說明，eptifibatide不能阻止血小板的激活，如釋放反響和包括P-選擇蛋白在內(nèi)的黏附

7、分子細(xì)胞外表的表達(dá)4，5。Shlz等6發(fā)現(xiàn)，eptifibatide在(0.0625-1.5g/l)范圍內(nèi)以劑量依賴的方式增加血小板和單核細(xì)胞的結(jié)合和單核細(xì)胞外表TF的表達(dá)；eptifibatide在0.5g/l時(shí)能使TF表達(dá)增加60%-120%。故在臨床上應(yīng)用時(shí)其抗血栓形成的才能減少。以上說明活化的血小板不是通過GPb/a受體上調(diào)單核細(xì)胞表達(dá)TF的。循環(huán)血中存在TF以往認(rèn)為，在生理情況下直接與循環(huán)血液接觸的血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)TF。只有當(dāng)血管損傷暴露組織細(xì)胞，或血管內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞受到內(nèi)毒素等刺激時(shí)，表達(dá)的TF才得以與血液接觸。但近年來很多研究說明，血中也存在TF，稱為血生的TF或血漿T

8、F,也能止血和形成血栓。在安康人體中，血漿TF平均濃度為(187.3108.7)pg/l7。在正常情況下，由于其濃度較低，TF是加密而無活性的，它只結(jié)合Fa和TF抗體8，而且血漿中也含有組織因子途徑抑制物TFPI，故不能啟動(dòng)凝血反響。Giesen等8研究發(fā)現(xiàn)：在體外用包被膠原的玻片與提取的外周血反響，可看到有血栓形成；該血栓用a和TF抗體檢測(cè)都可以發(fā)現(xiàn)大量的TF，而該膠原玻片上沒有TF，提示血中存在TF；當(dāng)用抗TF抗體抑制循環(huán)中的TF活性時(shí)，上述實(shí)驗(yàn)中血栓的形成減少，而對(duì)照組仍有大量的纖維蛋白形成；從新穎的血中能別離到TF。而且循環(huán)中的TF抗原在心血管疾病9，敗血癥10及凝血紊亂如彌散性血管內(nèi)

9、凝血11等高凝性疾病中都有升高。由于TF是一種跨膜蛋白，故其在血中以微粒12或表達(dá)在細(xì)胞膜上的形式存在。微粒是活化的或凋亡的細(xì)胞脫落的膜部分，常與細(xì)胞激活和損傷有關(guān)，也可作為細(xì)胞間的效應(yīng)分子13。在膠原活化的外周血中，TF可在直徑約300-600n的微粒外表檢測(cè)到；選擇性移除循環(huán)中微?？蓽p少血漿中2/3以上的TF活性14。隨著對(duì)血生的TF研究深化，有人發(fā)現(xiàn)血小板中也有TF14-16,它可能是血生的TF來源之一。血小板中存在TFZillann等17在富血小板的血漿中，用前列腺素預(yù)防其聚集，屢次用氯化鈉緩沖液洗滌血小板，然后裂解血小板，可檢測(cè)到大量的TF。有資料報(bào)道，用細(xì)胞分類法把血小板來源的微粒

10、從血漿中別離出來，TF分子全長(zhǎng)都能在微粒內(nèi)檢測(cè)到；在靜止的血小板中，在免疫顯微鏡下可觀察到TF貯藏在膜上和基質(zhì)的顆粒內(nèi)及開放管道系統(tǒng)；用膠原或凝血酶激活的血小板，在其胞膜上也可看到TF表達(dá)，即當(dāng)血小板被強(qiáng)沖動(dòng)劑激活后，原先合成并貯藏在血小板中的TF暴露在細(xì)胞外表，或以顆粒的形式分泌出去14。另有報(bào)道，用流式細(xì)胞儀可在未活化的血小板及用凝血酶、膠原和ADP活化的血小板外表檢測(cè)到TF的表達(dá)；同時(shí)在這些血小板離心后的上清液中，斑點(diǎn)雜交證實(shí)TF抗原的存在16。另外，最近發(fā)如今用于輸注的濃縮血小板中用免疫細(xì)胞化學(xué)方法和功能試驗(yàn)都能檢測(cè)到大量的TF18。血小板中有TFRNA最近發(fā)現(xiàn)，血小板中有TFRNA1

11、5，血小板盡管沒有細(xì)胞核，但是可以保持有從巨核細(xì)胞來源的RNA，這些RNA在細(xì)胞的整個(gè)生命過程中都是完好的，體外實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)血小板可以合成蛋白質(zhì)19。在排除白細(xì)胞的污染情況下，aera等15采用RT-PR發(fā)現(xiàn)，未活化的血小板中有TFRNA；GPbRNA共擴(kuò)增證實(shí)，TFRNA來源于血小板；但是他們發(fā)現(xiàn)，嘌啉霉素不能抑制TF暴露在活化的血小板外表，由血小板合成的TF可能對(duì)早期膜上表達(dá)的TF影響不大，而且蛋白質(zhì)可能在幾小時(shí)后才合成。其他細(xì)胞傳遞TF給血小板血小板中的TF除自己合成外，也可能來源于其他細(xì)胞的傳遞。目前內(nèi)皮細(xì)胞20、動(dòng)脈血管的平滑肌細(xì)胞21和白細(xì)胞8都有合成TF的才能。D15是一種白細(xì)

12、胞膜糖蛋白，屬細(xì)胞黏附分子成員，與P-選擇蛋白互相作用，促使白細(xì)胞在血小板和內(nèi)皮細(xì)胞上的黏附。如將靜脈血與包被膠原的玻片接觸產(chǎn)生的血栓，在免疫顯微鏡下可發(fā)現(xiàn)TF微粒偽足從白細(xì)胞伸向血小板。雙免疫標(biāo)記檢測(cè)顯示，白細(xì)胞參與這過程的黏附分子為D15和TF抗原。從循環(huán)血中單采血小板，未檢測(cè)到TF，但單核細(xì)胞經(jīng)TNF的誘導(dǎo)后，再與單采的血小板混合，那么共聚焦顯微鏡顯示TF在血小板內(nèi)；在血小板和單核細(xì)胞的黏附處可檢測(cè)到大量的TF和D15，用抗TF抗體或D15抗體都能減少血小板TF的表達(dá)22。以上資料說明，白細(xì)胞傳遞TF給血小板，而傳遞的過程是依賴D15和TF與血小板的互相作用，獲得TF的活化血小板可以啟動(dòng)

13、凝血和生成血栓?？傊?，血小板中存在TF已經(jīng)明確，但是由血小板自己合成還是從其他細(xì)胞傳遞過來，或者兩種情況都存在，目前尚無一致定論。血小板釋放TF的調(diào)節(jié)一般認(rèn)為，血小板在靜息情況下，其內(nèi)的TF以無活性的方式存在，只有在一定條件下才釋放TF。血小板沖動(dòng)劑作用后釋放TF用人TF的多克隆抗體檢測(cè)非活化的和活化的血小板離心后懸浮液中的TF抗原發(fā)現(xiàn)，活化的血小板釋放TF抗原量明顯比非活化血小板多；用雙相FXa試驗(yàn)法檢測(cè)說明，凝血酶、膠原和ADP激活血小板后，活化的血小板的TF活性比比非活化血小板的TF活性高1倍以上；用ELISA法檢測(cè)非活化和活化血小板離心后懸浮液中TF抗原的量，結(jié)果說明TF抗原量活化血小

14、板比非活化的血小板平均多20%-30%16。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果均說明血小板活化后釋放TF。血小板釋放TF的其他調(diào)節(jié)提純的血小板在受膠原刺激后可表達(dá)TF，而同樣的刺激對(duì)白細(xì)胞卻無明顯的作用；但是血小板和白細(xì)胞的懸液受膠原刺激后，那么白細(xì)胞TF活性比提純的血小板明顯增強(qiáng)23。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞和含TF的微?；蜓“逯g的互相作用對(duì)TF活性的調(diào)節(jié)起關(guān)鍵的作用,而活性氧系統(tǒng)和血小板-白細(xì)胞黏附時(shí)分泌出來的細(xì)胞因子可以上調(diào)TF活性23。此外,活性氧可能還會(huì)通過中性粒細(xì)胞蛋白酶來滅活組織因子的抑制物17，并促進(jìn)加密的TF的表達(dá)24。從過氧化氫酶和超氧化物歧化酶的抑制TF活性效果中可看到，活性氧不僅可進(jìn)步TF的活性，

15、而且可增強(qiáng)TF誘導(dǎo)纖維蛋白形成和活化血小板的才能；嗜中性粒細(xì)胞和含TF的微粒及血小板結(jié)實(shí)的結(jié)合，以及中性粒細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子都可以加強(qiáng)血液中TF的功能14。在血栓形成過程中，許多細(xì)胞因子都可調(diào)節(jié)血小板微粒的釋放，如可溶的D40配體，也可以促進(jìn)血小板的釋放25。血小板TF在凝血過程中的作用普遍認(rèn)為，TF位于血管壁，與血漿中各種凝血因子分隔，從而防止血栓在完好的血管內(nèi)生成。凝血和血栓生成是在血管損傷后形成的，因?yàn)檠軗p傷后血管壁上的TF暴露于血，與Fa結(jié)合形成復(fù)合物，從而啟動(dòng)凝血級(jí)聯(lián)反響，形成血栓止血。同時(shí)，血栓的擴(kuò)大還需要血小板的黏附，使其聚集于血管壁。血管壁上TF啟動(dòng)的活化凝血因子需要與血小板上的磷脂結(jié)合才能形成凝血酶原酶復(fù)合物。然而，黏附于血管壁的血小板白色血栓及早期生成的少量纖維蛋白是一道屏障，阻止活化的凝血因子與上層的血小板接觸，使血栓不能擴(kuò)大。即使凝血因子是通過理想的自由擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)也要數(shù)小時(shí)才能到達(dá)1血栓的頂端，而損傷血管壁形成的血栓一般有1-3大校因此假如血細(xì)胞或微粒攜帶TF可以在逐漸形成的血栓外表激活凝血因子，而不需擴(kuò)散26，即血小板外表本身可以形成一個(gè)纖維蛋白生成體系，使纖維蛋白不斷生成,這樣就可以穩(wěn)定和穩(wěn)固新形成的血栓27。問題和