厚樸內(nèi)生真菌的研究（Ⅰ）：菌種分離及其鑒定

1、厚樸內(nèi)生真菌的研究：菌種別離及其鑒定【關(guān)鍵詞】厚樸；,內(nèi)生真菌；,多樣性摘要：從兩個(gè)不同來源的厚樸agnliaffiinalisRehd.etils.的莖中，別離獲得內(nèi)生真菌48株，經(jīng)顯微形態(tài)觀察，鑒定為1綱、3目、6科、16屬。不同來源的厚樸內(nèi)生真菌的種群、數(shù)量及分布部位存在顯著差異。關(guān)鍵詞：厚樸；內(nèi)生真菌；多樣性StudynEndphytiFungiinagnliaffiinalisRehd.etils.:IslatinandIdentifiatinfEndphytiFungiAbstrat：48strainsfendphytifungiereislatedfrthestefagnliaf

2、fiinalisRehd.etils.Theyererphlgiallyidentifiedbelngingt16genera,6failies,3rdersand1lass.Theresultftheexperienthasshnthatquantity,speiesanddistributingftheendphytesvariedinagnliaffiinalisRehd.etils.fdifferenthabitat.Keyrds：agnliaffiinalisRehd.etils.；Endphytifungi；Diversity厚樸agnliaffiinalisRehd.etils.

3、是著名的川產(chǎn)道地藥材,屬國(guó)家二級(jí)保護(hù)的珍惜瀕危藥用植物。用于濕滯傷中，脘痞吐瀉，食積氣滯，腹脹便秘，痰飲咳喘等病癥1。厚樸多以復(fù)方入藥，用量較大；而厚樸原植物生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，曾出現(xiàn)厚樸資源匱乏，采用環(huán)剝技術(shù)確保進(jìn)展了枝皮剝除的植株能繼續(xù)生長(zhǎng)的方法來保存資源的現(xiàn)象。如今厚樸雖已進(jìn)展大面積規(guī)模化種植，但從長(zhǎng)遠(yuǎn)觀點(diǎn)看，厚樸資源仍顯缺乏。植物內(nèi)生真菌可以產(chǎn)生與宿主一樣或相似化學(xué)成分這一特性在一定程度上可以緩解植物資源短缺問題。厚樸內(nèi)生真菌的研究未見報(bào)道。筆者對(duì)厚樸內(nèi)生真菌進(jìn)展了菌株別離、鑒定等工作?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。1材料與方法1.1材料1.1.1來源采集四川峨眉山唐山安康植株的枝條；四川都江堰市虹口

4、鄉(xiāng)安康植株的枝條作為樣本。原植物經(jīng)鑒定為厚樸agnliaffiinalisRehd.etils.。1.1.2培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基馬鈴薯培養(yǎng)基用于培養(yǎng)、PDA培養(yǎng)基青鏈霉素混和液用于別離、查氏培養(yǎng)基NaN3，K2HP4，Kl，gS4，F(xiàn)eS4，蔗糖用于鑒別、促孢培養(yǎng)基KH2P4，KN3，gS47H2，Kl，淀粉，葡萄糖，蔗糖用于鑒別。1.2方法1.2.1內(nèi)生真菌的別離用自來水將新穎植物外表洗凈，稍干后切成適宜長(zhǎng)度的小段，在75酒精中浸泡35in，用無菌水沖洗34次，無菌濾紙吸干。然后用無菌刀片將組織表皮削去，分別取韌皮部、木質(zhì)部和髓部切成551的小塊貼放于別離培養(yǎng)基上，置2528恒溫箱中培養(yǎng)320

5、d，待培養(yǎng)基上各植物組織周圍長(zhǎng)出菌絲后，采用尖端菌絲挑取法對(duì)所別離的內(nèi)生真菌進(jìn)展純化，即得內(nèi)生真菌。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.1.2.2內(nèi)生真菌的鑒定采用插片培養(yǎng)和點(diǎn)植法，對(duì)別離獲得的銀杏內(nèi)生真菌進(jìn)展顯微形態(tài)特征的觀察、分類鑒定。分類檢索參照文獻(xiàn)2,3。2結(jié)果與討論2.1厚樸內(nèi)生真菌種群多樣性分析從厚樸中共別離出48株內(nèi)生真菌，經(jīng)顯微形態(tài)觀察，鑒定為1綱、3目、6科、16屬。厚樸內(nèi)生真菌種群組成見表1。表1厚樸內(nèi)生真菌種群組成略由表1可以看出，厚樸內(nèi)生真菌在種類上存在著極其豐富的多樣性特征。在厚樸內(nèi)生真菌中，從數(shù)量上看，以曲霉屬Aspergillus、青霉屬Peniilliu和鐮孢屬Fusariu

6、為優(yōu)勢(shì)種群，包含菌株分別占總菌株數(shù)的31.3，18.8，14.6。局部屬種代表性顯微形態(tài)特征參見圖16。2.2不同采集地點(diǎn)厚樸內(nèi)生真菌的分布從不同地點(diǎn)采集的厚樸植株中均別離到了一定數(shù)量、不同類群的內(nèi)生真菌，說明內(nèi)生真菌在厚樸體內(nèi)廣泛存在。不同采集地的厚樸中內(nèi)生真菌的優(yōu)勢(shì)菌群不同。其中，采集于峨眉山唐山的厚樸優(yōu)勢(shì)菌群為青霉屬Peniilliu；采集于都江堰市虹口鄉(xiāng)的厚樸優(yōu)勢(shì)菌群為曲霉屬Aspergillus。結(jié)果見表2。圖1葡萄孢Btrytissp.顯微特征略圖2鐮孢菌Fusariusp.顯微特征略圖3阜孢霉Papulariasp.顯微特征略圖4膠帚霉Gliladiusp.顯微特征略圖5曲霉As

7、pergillussp.顯微特征略圖6青霉Peniilliusp.顯微特征略由表2可以看出，采集于峨眉山的厚樸植株中的內(nèi)生真菌在種類上較之采自都江堰者顯得豐富，兩地植株中別離出的內(nèi)生真菌數(shù)量相當(dāng)。鐮孢屬Fusariu為不同來源厚樸植株的共有菌群，而兩地植株的優(yōu)勢(shì)菌群也成為各自的特有菌群之一。表2不同采集地點(diǎn)厚樸內(nèi)生真菌數(shù)量及種類分布情況略本次實(shí)驗(yàn)從兩個(gè)不同來源的厚樸中共別離到48株內(nèi)生真菌，經(jīng)鑒定為1綱、3目、6科、16屬，顯示出該植物內(nèi)生真菌在種類和數(shù)量上的多樣性。采自不同地點(diǎn)的厚樸植株內(nèi)生真菌種群差異較為明顯，采集于峨眉山唐山的厚樸優(yōu)勢(shì)菌群為青霉屬Peniilliu，而采自都江堰市虹口鄉(xiāng)的厚樸優(yōu)勢(shì)菌群為曲霉屬Aspergillus。鐮孢屬Fusariu是不同來源厚樸植株的共有菌群。采集于峨眉山的厚樸植株中的內(nèi)生真菌在種類上較之采自都江堰者顯得豐富。我們認(rèn)為這與采集地的詳細(xì)環(huán)境及厚樸的樹齡有關(guān)。樹齡較長(zhǎng)的植株可以提供應(yīng)微生物一個(gè)相對(duì)較長(zhǎng)的與宿主之間的“磨合期，使一些致病菌轉(zhuǎn)變成暫時(shí)不致病的內(nèi)生菌，內(nèi)生真菌的種類也就相對(duì)較多。這再一次說明，植物內(nèi)生真菌的數(shù)量和種類與植物自身狀況及其所處環(huán)境親密相關(guān)。有關(guān)厚樸內(nèi)生真菌中活性菌株的挑選研究，將在隨后的文章中給予報(bào)道。參