厚樸內生真菌的研究（Ⅰ）：菌種分離及其鑒定

1、厚樸內生真菌的研究：菌種別離及其鑒定【關鍵詞】厚樸；,內生真菌；,多樣性摘要：從兩個不同來源的厚樸agnliaffiinalisRehd.etils.的莖中，別離獲得內生真菌48株，經(jīng)顯微形態(tài)觀察，鑒定為1綱、3目、6科、16屬。不同來源的厚樸內生真菌的種群、數(shù)量及分布部位存在顯著差異。關鍵詞：厚樸；內生真菌；多樣性StudynEndphytiFungiinagnliaffiinalisRehd.etils.:IslatinandIdentifiatinfEndphytiFungiAbstrat：48strainsfendphytifungiereislatedfrthestefagnliaf

2、fiinalisRehd.etils.Theyererphlgiallyidentifiedbelngingt16genera,6failies,3rdersand1lass.Theresultftheexperienthasshnthatquantity,speiesanddistributingftheendphytesvariedinagnliaffiinalisRehd.etils.fdifferenthabitat.Keyrds：agnliaffiinalisRehd.etils.；Endphytifungi；Diversity厚樸agnliaffiinalisRehd.etils.

3、是著名的川產(chǎn)道地藥材,屬國家二級保護的珍惜瀕危藥用植物。用于濕滯傷中，脘痞吐瀉，食積氣滯，腹脹便秘，痰飲咳喘等病癥1。厚樸多以復方入藥，用量較大；而厚樸原植物生長周期長，曾出現(xiàn)厚樸資源匱乏，采用環(huán)剝技術確保進展了枝皮剝除的植株能繼續(xù)生長的方法來保存資源的現(xiàn)象。如今厚樸雖已進展大面積規(guī)模化種植，但從長遠觀點看，厚樸資源仍顯缺乏。植物內生真菌可以產(chǎn)生與宿主一樣或相似化學成分這一特性在一定程度上可以緩解植物資源短缺問題。厚樸內生真菌的研究未見報道。筆者對厚樸內生真菌進展了菌株別離、鑒定等工作?，F(xiàn)將研究結果報道如下。1材料與方法1.1材料1.1.1來源采集四川峨眉山唐山安康植株的枝條；四川都江堰市虹口

4、鄉(xiāng)安康植株的枝條作為樣本。原植物經(jīng)鑒定為厚樸agnliaffiinalisRehd.etils.。1.1.2培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基馬鈴薯培養(yǎng)基用于培養(yǎng)、PDA培養(yǎng)基青鏈霉素混和液用于別離、查氏培養(yǎng)基NaN3，K2HP4，Kl，gS4，F(xiàn)eS4，蔗糖用于鑒別、促孢培養(yǎng)基KH2P4，KN3，gS47H2，Kl，淀粉，葡萄糖，蔗糖用于鑒別。1.2方法1.2.1內生真菌的別離用自來水將新穎植物外表洗凈，稍干后切成適宜長度的小段，在75酒精中浸泡35in，用無菌水沖洗34次，無菌濾紙吸干。然后用無菌刀片將組織表皮削去，分別取韌皮部、木質部和髓部切成551的小塊貼放于別離培養(yǎng)基上，置2528恒溫箱中培養(yǎng)320

5、d，待培養(yǎng)基上各植物組織周圍長出菌絲后，采用尖端菌絲挑取法對所別離的內生真菌進展純化，即得內生真菌。轉貼于論文聯(lián)盟.ll.1.2.2內生真菌的鑒定采用插片培養(yǎng)和點植法，對別離獲得的銀杏內生真菌進展顯微形態(tài)特征的觀察、分類鑒定。分類檢索參照文獻2,3。2結果與討論2.1厚樸內生真菌種群多樣性分析從厚樸中共別離出48株內生真菌，經(jīng)顯微形態(tài)觀察，鑒定為1綱、3目、6科、16屬。厚樸內生真菌種群組成見表1。表1厚樸內生真菌種群組成略由表1可以看出，厚樸內生真菌在種類上存在著極其豐富的多樣性特征。在厚樸內生真菌中，從數(shù)量上看，以曲霉屬Aspergillus、青霉屬Peniilliu和鐮孢屬Fusariu

6、為優(yōu)勢種群，包含菌株分別占總菌株數(shù)的31.3，18.8，14.6。局部屬種代表性顯微形態(tài)特征參見圖16。2.2不同采集地點厚樸內生真菌的分布從不同地點采集的厚樸植株中均別離到了一定數(shù)量、不同類群的內生真菌，說明內生真菌在厚樸體內廣泛存在。不同采集地的厚樸中內生真菌的優(yōu)勢菌群不同。其中，采集于峨眉山唐山的厚樸優(yōu)勢菌群為青霉屬Peniilliu；采集于都江堰市虹口鄉(xiāng)的厚樸優(yōu)勢菌群為曲霉屬Aspergillus。結果見表2。圖1葡萄孢Btrytissp.顯微特征略圖2鐮孢菌Fusariusp.顯微特征略圖3阜孢霉Papulariasp.顯微特征略圖4膠帚霉Gliladiusp.顯微特征略圖5曲霉As

7、pergillussp.顯微特征略圖6青霉Peniilliusp.顯微特征略由表2可以看出，采集于峨眉山的厚樸植株中的內生真菌在種類上較之采自都江堰者顯得豐富，兩地植株中別離出的內生真菌數(shù)量相當。鐮孢屬Fusariu為不同來源厚樸植株的共有菌群，而兩地植株的優(yōu)勢菌群也成為各自的特有菌群之一。表2不同采集地點厚樸內生真菌數(shù)量及種類分布情況略本次實驗從兩個不同來源的厚樸中共別離到48株內生真菌，經(jīng)鑒定為1綱、3目、6科、16屬，顯示出該植物內生真菌在種類和數(shù)量上的多樣性。采自不同地點的厚樸植株內生真菌種群差異較為明顯，采集于峨眉山唐山的厚樸優(yōu)勢菌群為青霉屬Peniilliu，而采自都江堰市虹口鄉(xiāng)的厚樸優(yōu)勢菌群為曲霉屬Aspergillus。鐮孢屬Fusariu是不同來源厚樸植株的共有菌群。采集于峨眉山的厚樸植株中的內生真菌在種類上較之采自都江堰者顯得豐富。我們認為這與采集地的詳細環(huán)境及厚樸的樹齡有關。樹齡較長的植株可以提供應微生物一個相對較長的與宿主之間的“磨合期，使一些致病菌轉變成暫時不致病的內生菌，內生真菌的種類也就相對較多。這再一次說明，植物內生真菌的數(shù)量和種類與植物自身狀況及其所處環(huán)境親密相關。有關厚樸內生真菌中活性菌株的挑選研究，將在隨后的文章中給予報道。參