正常妊娠及妊高征孕婦胎盤組織中細胞凋亡及增殖基因表達的研究

1、正常妊娠及妊高征孕婦胎盤組織中細胞凋亡及增殖基因表達的研究論文摘要目的：討論正常妊娠及妊高征pih孕婦胎盤組織bl2、bax及ki67基因的表達及其互相關系。方法：采用免疫組化方法測定正常早、中、晚期妊娠30例及輕、中、重度pih36例的胎盤組織bl2、bax及ki67的表達。結果：lbl2表達主要定位在絨毛的合體滋養(yǎng)層細胞sells，而bax在sells和細胞滋養(yǎng)層細胞eiis均呈陽性，在絨毛間質(zhì)中bax也呈陽性表達，但強度低于滋養(yǎng)層細胞。ki67定位于eiis；2bl2在晚期妊娠組的陽性率低于早、中期妊娠組p005。ki67在正常早、中、晚期妊娠組，對照組與pih組，輕、中、重度pih組之

2、間均有顯著性差異p0.01；3bl2和bax表達及與ki67的表達無相關性p005。結論：bl2及bax在高程度上到達平衡，在胎盤組織中并不起介導細胞凋亡的主導作用，而且二者的表達不影響細胞的增殖。關鍵詞胎盤細胞凋亡bl-2baxki67論文人類胎盤不僅在胎兒胎盤母體的關系上起中心軸的作用，而且功能上失調(diào)會導致母體和胎兒的病理性變化，隨著妊娠的進展，絨毛和滋養(yǎng)層不斷成熟和分化，已發(fā)現(xiàn)許多物質(zhì)包括原癌基因產(chǎn)物，在胎盤有生理性的表達。胎兒的開展特征是細胞群增殖和誘導或抑制細胞凋亡成熟起來的，因此，胎盤在妊娠期間也經(jīng)歷著相似的變化。我們通過測定胎盤組織中細胞凋亡調(diào)控基因bl-2、bax及細胞增殖基因

3、ki67，進一步討論了妊娠高血壓綜合征pih的病理性變化。1資料與方法1.1臨床資料隨機選擇1998年11月至1999年4月白求恩醫(yī)科大學第二臨床醫(yī)院及長春市婦產(chǎn)醫(yī)院婦科門診及產(chǎn)科病房的孕產(chǎn)婦66例。1妊高征組36例，平均26.143.42歲,平均孕37.443.9周,輕度9例,中度10例,重度17例；(2)正常妊娠組30例，孕早期10例，平均25.253.80歲，平均孕9.031.11周；孕中期5例，平均26.553.93歲，平均孕24.053.63周；孕晚期對照組15例，平均27.763.38歲，平均孕39.821.32周。1.2標本采集及處理孕早期是行人工流產(chǎn)術者，孕中期是來自無妊娠合并

4、癥、并發(fā)癥，要求終止妊娠而行水囊引產(chǎn)者，孕晚期為單胎足月初產(chǎn)婦，無妊娠合并癥、并發(fā)癥、以自然分娩及擇期剖宮產(chǎn)手主完畢分娩，其剖宮產(chǎn)指標主要是頭盆不稱及社會因素。妊高征組孕婦是無慢性高血壓、慢性腎炎及其它心腎疾病的病史者。早孕絨毛組織不需進一步處理，取出后用生理鹽水沖洗凈，即用10%福爾馬林液固定。中、晚期胎盤組織于分娩后立即在母體面避開鈣化、機化灶隨機取3個不同區(qū)域約222胎盤組織，生理鹽水沖洗干凈后立即放入10%福爾馬林固定液中。1.3方法用免疫組化sp法，抗bl-2、抗bax、抗ki67單克隆抗體即用型及sp試劑盒均購自福州邁新生物工程公司。每次染色均設陽性和陰性對照。1.4結果斷定由2名

5、醫(yī)師獨立觀察切片中10個高倍視野。1陽性標準：sp法顯示bl-2及bax定位于胞漿和胞膜內(nèi)，反響產(chǎn)物為棕黃色。根據(jù)顯色程度分為4級：-為無著色，+為淡黃色，+為棕黃色，+為棕褐色;2sp法顯示ki67以細胞核呈明晰棕褐色為陽性，按陽性細胞占-ells的比例分為：陽性細胞數(shù)10%為-；10%-20%為+；20%-30%為+；30%為+。1.5統(tǒng)計學分析fisher準確概率檢驗法，兩組計數(shù)資料用等級相關分析。2結果2.1正常妊娠期胎盤組織中bl-2、bax及ki67的基因表達bl-2表達主要定位在絨毛的s-ells，而bax在s-ells和-ells均呈陽性，同時在絨毛間質(zhì)中bax也呈陽性表達，但

6、強度低于滋養(yǎng)層細胞；ki67蛋白主要定位在-ells。bl-2在晚期妊娠組的陽性率明顯低于早、中期妊娠組p0.05；ki67在晚期妊娠組的陽性率明顯低于早、中期妊娠組p0.01。早、中、晚期妊娠組bl-2的表達強度與ki67的表達強度無相關性p0.05，bax與ki67也無相關性p0.05。2.2妊高征與正常晚期妊娠胎盤組織中bl-2、bax及ki67的基因表達bl-2的陽性率在對照組與pih兩組間差異無顯著性p0.05，bax兩組差異無顯著性p0.05，對照組ki67的陽性率明顯低于pih組p0.01。bl-2與ki67的表達強度無相關性p0.05，bax與ki67也無相關性p0.05。2.

7、3妊高征胎盤組織中bl-2、bax及ki67的基因表達bl-2的陽性率在輕、中、重度pih3組間差異無顯著性p0.05，bax在3組間差異也無顯著性p0.05，而ki67在輕度pih組的陽性率明顯低于中、重度組p0.01。pih輕、中、重度組妊娠bl-2的表達強度與ki67的表達強度經(jīng)等級相關分析無相關性p0.05，bax與ki67也無相關性p0.05。3討論3.1正常妊娠與妊高征胎盤組織bl2、bax的基因表達bl2是細胞凋亡的重要抑制基因。本研究中免疫組化已確定bl2定位在sell表達，并且從正常早孕到晚期妊娠持續(xù)出現(xiàn)3，6，因此保存滋養(yǎng)層細胞團可能是維持妊娠的一種機制1。晚期妊娠bl2表

8、達下降、可能是因為bl2正常生理性功能，在孕晚期組成胎盤的細胞不再需要存活，可能是細胞凋亡的一種早期生物學變化，也可能與分娩有關2。目前bl2和bax是bl2家族中重要成員。bl2表達程度較高時，可形成bl2和bax的異源二聚體，細胞凋亡受到抑制；bax表達程度較高時，可形成baxbax同源二聚體，加速細胞凋亡。本研究中，對照組bl2與bax的陽性率為667與80，pih組的陽性表達均為75，說明大多數(shù)胎盤組織均呈bl2與bax高表達。bl2和bax表達已在一定程度上到達平衡，所以在胎盤組織中不起介導細胞凋亡的主導作用。pih組的bax并無隨病情的嚴重程度而有下降的趨勢，說明bax會進一步影響

9、妊娠的結局，反映病情的嚴重程度。這些結果可能提示，胎盤的細胞凋亡并不是bax單獨起作用，但有待進一步證實。32正常妊娠與妊高征胎盤組織中ki67的表達及bl2、bax的關系ki67同細胞增殖核抗原pna、拓樸異構酶一樣，在細胞群和組織中可作為增殖細胞的選擇性標記。在細胞周期s、g2、期均有表達，而g0期缺如。本研究中在ells中表達，妊娠早期表達最豐富，妊娠中期次之、晚期表達最少，提示早期胎盤活性是高增殖的3。在妊高征組中ki67表達多為強陽性，提示hi67的過度表達與ells活性有關。在pih中，胎盤部分缺血是由于子宮胎盤血流下降引起4，因為sells對缺血缺氧敏感，導致sells受損，所以出現(xiàn)代償性的過早成熟的ells增生。這種病理變化可能是sells損傷或壞死的指征，增生的ells修復和補償受損的sells，這種結果可能是絨毛對血流障礙的代償性反響。redline等5報道在前兆子癇胎盤中間層滋養(yǎng)細胞表達pna時顯示陽性，但bl2為陰性。本組孕32周重度pih胎死宮內(nèi)1例，其bl2表達為陰性，bax與ki67均為陽性，但病例少，需積累更多病例討論。分析ki67與bl-2及bax的關系，未發(fā)現(xiàn)它們之間有相關性，說明bl2和bax在胎盤發(fā)生過程中不引起細胞增殖，只是通過阻止細胞凋亡和延長細胞存活，增多細胞數(shù)量。ki67的表達增加說明ells增殖可能與其他基因的異常有關，如