D二聚體的檢測(cè)及臨床意義

1、D-二聚體的檢測(cè)及臨床意義近年由于血栓性疾病的增多，檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)即時(shí)檢驗(yàn)(POCT) 在免疫測(cè)定技術(shù)方面，特別是在出凝血和血栓性疾病的研究上取得了重大的進(jìn)展。D- 二聚體的檢測(cè)方法，從傳統(tǒng)的定性試驗(yàn)，變?yōu)楹唵慰焖贉?zhǔn)確定量的即時(shí)檢驗(yàn)。金標(biāo)全定量快速檢測(cè)對(duì)于血栓性疾病的及時(shí)準(zhǔn)確診斷、以及對(duì)溶栓治療的療效監(jiān)測(cè)，是必不可少的重要指標(biāo)。D-正常人纖溶酶和抑制酶之間保持了動(dòng)態(tài)平衡，使血液循環(huán)能正常進(jìn)行。人體內(nèi)的纖溶系統(tǒng)，對(duì)保持血管壁的正常通透性；維持血液的流動(dòng)狀態(tài)和組織修復(fù)，起著重要作用。為維護(hù)正常生理狀態(tài)，在外傷或血管受損的情況下，血栓的形成可防止血液從損傷的血管中流失。病理狀態(tài)下，機(jī)體發(fā)生凝血時(shí)，凝血酶作

2、用于纖維蛋白，轉(zhuǎn)變?yōu)榻宦?lián)纖維蛋白，同時(shí)纖溶系統(tǒng)被激活，降解纖維蛋白形成各種碎片。鏈能把二個(gè)含D 片斷的碎片連接起來，形成D- 二聚體。D-二聚體水平的上升，代表血塊在血管循環(huán)系統(tǒng)中形成，急性血栓形成的一個(gè)敏感的標(biāo)記物。但不具特異性 ;下列因素如外科手術(shù)、創(chuàng)傷、感染、發(fā)炎、懷孕、產(chǎn)后等，也會(huì)導(dǎo)致凝血酶的產(chǎn)生使D-D水平的上升。D- 二聚體的升高反映了體內(nèi)存在著凝血及纖溶活性增強(qiáng)的重要分子標(biāo)志物。因此它既可反映體內(nèi)存在著血栓或繼續(xù)形成的狀況，又可反映體內(nèi)纖溶活性增強(qiáng)的指標(biāo)，因?yàn)槔w維蛋白降解產(chǎn)物中，唯有D- 二聚體可反映血栓形成后的溶栓活性，對(duì)于臨床血栓性疾病的診斷和溶栓治療有著極其重要的價(jià)值。二、

3、 D- 二聚體檢測(cè)的方法學(xué)的進(jìn)展1、三 P 試驗(yàn)： FDP 碎片 X 和可溶性纖維蛋白單體FM 復(fù)合物的定性試驗(yàn)。缺點(diǎn)：敏感性差，DIC陽性率30-60%，試驗(yàn)時(shí)間長，干擾因素多，采血不順，溶血均可影響結(jié)果，只能定性不能定量。2、膠乳凝集法：簡單快速缺點(diǎn)：敏感性低，定性或定量倍比稀釋，費(fèi)試劑，重復(fù)性差。3、 ELISA法： 敏感性高，能定量缺點(diǎn)：操作煩，時(shí)間長，無法滿足急診需求。4、免疫滲濾膠體金顯色反應(yīng)法：采用同種單克隆抗體夾心，即以包被的抗體捕獲血漿中抗原（ D- 二聚體） 加入偶聯(lián)有膠體金的同種抗體顯色。抗體特異性高，可與含D- 二聚體的多種片斷結(jié)合可提高試驗(yàn)的敏感度。特點(diǎn)：定量報(bào)告，快

4、速簡便，敏感性高。測(cè)試范圍： 0.1 5mg/L正常參考值：0.3mg/L應(yīng)考慮疾病狀態(tài)。使用說明：血漿未經(jīng)徹底離心，血漿中含有白細(xì)胞、血小板、高血脂或高粘度血漿，這些物質(zhì)停留在檢測(cè)板的膜表面，導(dǎo)致滲濾減慢時(shí)間過長，可能出現(xiàn)假性高值，應(yīng)徹底離心(4000轉(zhuǎn)20 分鐘為宜)，并小心吸取血漿。(2) 各個(gè)不同廠家的D- 二聚體試劑盒的正常參考范圍值也不一樣，有的以0.3mg/L為正常，而有的試劑盒以0.6mg/L為正常。此外有的以PEU單位模式報(bào)告，有的以mg/L的模式報(bào)告，其值正好相差一半。所以在評(píng)價(jià)D- 二聚體結(jié)果時(shí)應(yīng)注意上述問題。三、 D- 二聚體檢測(cè)的臨床應(yīng)用D- 二聚體增高提示了與體內(nèi)各

5、種原因引起的血栓性疾病相關(guān)。同時(shí)也說明了纖溶活性的增強(qiáng)；臨床上常見于彌慢性血管內(nèi)凝血（DIC ）、深靜脈血栓（DVT ）、肺栓塞（PE ）、急性心肌梗塞、腦梗塞、惡性腫瘤、卵巢癌、肺癌、敗血癥、肝病、妊高征孕婦、先兆子癇、燒傷、外科手術(shù)、創(chuàng)傷和膿毒血癥等均可使D- 二聚體升高，但是D- 二聚體檢測(cè)的升高并不能說明血栓形成的原因及位置，必須結(jié)合臨床和其他檢測(cè)分析結(jié)果。1、 DIC （休克、系統(tǒng)感染、外傷、先兆子癇、惡性疾病和燒傷等）的并發(fā)癥：血液在全身微小血管內(nèi)廣泛性凝固，形成以血小板和纖維蛋白為主要成分的微血栓。此過程消耗了大量的血小板和凝血因子，并通過激活途徑激活了纖溶系統(tǒng)。微血栓中交聯(lián)纖維

6、蛋白被纖溶酶降解而產(chǎn)生大量高于正常百倍的D- 二聚體。與其他診斷DIC的指標(biāo)相比較，D- 二聚體是唯一直接反映凝血酶和纖溶酶生成的理想指標(biāo)；診斷DIC的特異性也早于其他指標(biāo)。2、深靜脈血栓（DVT）的篩查： 血漿D- 二聚體陰性可排除DVT的可能性。造影證實(shí)DVT者D-二聚體100% 陽性，可做溶栓治療和肝素抗凝的用藥指導(dǎo)及療效觀察。靜脈栓塞是臨床上最常見的靜脈疾病，臨床醫(yī)生無法僅僅根據(jù)其臨床癥狀作出診斷。靜脈造影是診斷靜脈栓塞的黃金標(biāo)準(zhǔn)，它是創(chuàng)傷性檢查，費(fèi)用高，而靜脈造影本身具有引發(fā)深靜脈栓塞或其它并發(fā)癥的危險(xiǎn)性。靜脈血栓栓塞癥(VTE) 的危險(xiǎn)因素較低的危險(xiǎn)因素中度危險(xiǎn)因素高危險(xiǎn)因素臥床3

7、日膝關(guān)節(jié)手術(shù)骨折（髖或腿）長時(shí)間的處于靜止?fàn)顟B(tài)中央靜脈狹窄髖或膝復(fù)位（如乘車或乘長途飛機(jī)）年齡增大惡性腫瘤、化療大手術(shù)腹腔鏡外科充血性心衰、呼衰大創(chuàng)傷減肥荷爾蒙代替物口服避孕藥脊髓損傷懷孕/ 產(chǎn)后偏癱性中風(fēng)靜脈曲張懷孕/ 產(chǎn)后曾患 VTE血栓形成傾向D- 二聚體測(cè)試，配合臨床評(píng)估，可以快速、安全的排除30-50%懷疑 DVT/PE的病例，可節(jié)省醫(yī)院的成本，減少不必要的影象診斷及抗凝血治療，減少病人留院的時(shí)間，改善病人的情況，減少入侵性診斷的危險(xiǎn)，減少因不必要抗凝血治療而引起的出血。D- 二聚體可反映血栓大小的變化。含量再升高，預(yù)示血栓再發(fā)生。治療期間持續(xù)較高，提示血栓大小無變化，說明治療無效。

8、陳舊性血栓D-D不增高。3、肺栓塞病人（PE ）： PE 是一種較常見的潛在致命的疾病，尤其多見于血液病、心臟病和外科手術(shù)病人。 PE 臨床表現(xiàn)差異極大且缺乏特異性（從無任何表現(xiàn)到猝死）、常規(guī)檢查無法獲得直接證據(jù)，加上對(duì)該病的認(rèn)識(shí)不足，常造成漏診或誤診。及時(shí)治療依賴早期診斷。對(duì)于呼吸困難、胸悶、咳嗽、咯血，昏厥的患者，尤其是近期有外傷，手術(shù)及長途旅行史；既往患有深靜脈血栓，應(yīng)考慮是否存在PE 。 D- 二聚體測(cè)定是PE 必備的篩查方法；0.5mg/L可除外 PE 。 D- 二聚體測(cè)定在急性肺栓塞的篩選中具有重要作用，且操作方法簡便、設(shè)備要求不高，縣市級(jí)醫(yī)院均可開展此項(xiàng)檢測(cè)。我國目前應(yīng)用D-二聚

9、體篩選急性肺栓塞尚處于起步階段，對(duì)其在急性肺栓塞的診斷價(jià)值中積累的經(jīng)驗(yàn)仍然較少，特別是急診D- 二聚體的檢測(cè)更是剛剛起步，有待于進(jìn)一步積累臨床資料，更好地發(fā)揮其在急性肺栓塞中的診斷作用。4、婦科病人及先兆子癇：Trafatter報(bào)告204例先兆子癇婦女中79 例D-二聚體增高，而88 例正常孕婦全正常。該指標(biāo)對(duì)妊高征患者高凝狀態(tài)的診斷、療效觀察及預(yù)后判斷有重要意義。D-D檢測(cè)排除妊娠VTE:隨著妊娠期的發(fā)展，孕婦的D-D值隨之逐漸升高，可高至基礎(chǔ)值的3-4倍。若妊娠期發(fā)生 VTE ，干擾D-D排除VTE的有效性。若D-D結(jié)果陰性，仍有排除VTE的價(jià)值。5、肝臟疾?。篋- 二聚體含量明顯增高并與

10、肝病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。惡性腫瘤伴有D- 二聚體增高，提示血栓形成及栓塞，對(duì)于病情判斷及治療有重要意義。6、血管疾病：不穩(wěn)定型心絞痛病人比急性心絞痛高、急性心肌梗死（ AMI）、腦梗塞溶栓治療時(shí)，D- 二聚體增高對(duì)指導(dǎo)溶栓治療很有意義。7、溶血栓治療的監(jiān)測(cè)：D-二聚體是溶栓藥物治療監(jiān)控和療效觀察的指標(biāo)。應(yīng)用溶栓藥物后D- 二聚體明顯升高。若達(dá)到療效，該指標(biāo)在升高后很快下降；如果二聚體升高后持續(xù)維持在一定程度高水平則提示溶栓藥物劑量不足。纖維蛋白降解產(chǎn)物中，唯有D- 二聚體可反映血栓形成后的溶栓活性。因此定量檢測(cè)D- 二聚體可以反映藥物溶栓的效果。應(yīng)用溶血栓藥物（ SK 、 UK 、 rt-PA

11、等）溶解新鮮血栓，其出血的發(fā)生率高達(dá)5 30 ，建議維持在 1.2 1.5g/L、 TT 維持在正常對(duì)照的1.5 2.5 倍， FDPs維持在300 400ug/L。8、交聯(lián)衍生物D- 二聚體水平的影響 血栓的原始大?。ㄐ柙黾硬糠纸忉?，就影響狀況進(jìn)行闡述） 纖溶速率 （需增加部分解釋，就影響狀況進(jìn)行闡述） 血栓形成時(shí)間，腎功正常時(shí)，循環(huán)中的D- 二聚體半衰期約6h ；有活躍的纖維蛋白降解和纖溶酶活化；血栓的位置是否被包裹。（需增加部分解釋，就影響狀況進(jìn)行闡述）Fg四 ，D-二聚體臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)注意的問題1、D-二聚體是一項(xiàng)陰性排除試驗(yàn)。作為一種無創(chuàng)性檢查手段，在急性肺栓塞(PE) 、深靜脈栓塞(

12、DVT)、血管內(nèi)彌漫性凝血（DIC）排除診斷中有十分重要的價(jià)值，它是一項(xiàng)陰性排除試驗(yàn)。在任何情況下D- 二聚體測(cè)定值大于試劑盒推薦的CutOff值，都不能簡單的作為急性肺栓塞、深靜脈栓塞、血管內(nèi)彌漫性凝血的唯一確診依據(jù)，必須結(jié)合臨床情況綜合分析。在腦梗死、肺栓塞、彌漫性血管內(nèi)凝血、急性靜脈血栓形成時(shí)升高，從D- 二聚體的檢測(cè)目標(biāo)而言，這些歸屬陽性升高。但是只要機(jī)體血管內(nèi)有活化的血栓形成及纖維溶解活動(dòng)，D- 二聚體就會(huì)升高，比如手術(shù)、腫瘤、感染及組織壞死等均可導(dǎo)致D- 二聚體升高。特別對(duì)歲以上人群及住院患者，因患感染性等疾病易引起凝血異常而導(dǎo)致D-二聚體升高的病人應(yīng)注意結(jié)合臨床情況綜合分析，國際

13、上D- 二聚體檢測(cè)的特異性一般為50 左右。2、國內(nèi)外無D- 二聚體統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)品。D- 二聚體是血液中纖維蛋白降解產(chǎn)物，其大小和抗原決定簇不可能完全相同，因此D- 二聚體既沒有國際標(biāo)準(zhǔn)、國內(nèi)外均無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)品，也無行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品。不同公司的企業(yè)D- 二聚體標(biāo)準(zhǔn)品也不能相互通用。因此該試驗(yàn)不同廠家試劑所測(cè)的D-D具體數(shù)據(jù) ,不可能互相獲得一致的結(jié)果也就可以理解了。但是基本的要求是陰性的排除值和陽性的確定值應(yīng)總體符合。有關(guān)的權(quán)威論述如下：FACT（ Fibrin Assay Comparison Trial有關(guān)纖維蛋白化驗(yàn)的國際專職評(píng)估和研究機(jī)構(gòu)）以下由權(quán)威的 (FACT) 研究組發(fā)表的原文摘錄：“Alt

14、houghD-dimerhas gained widespreadclinicalparameter for detection of in vivo fibrin formation,the standardization issue has not been resolved andreference preparations and/or guidelines have not been distributed.”use as a中文翻譯： 雖然 D- 二聚體作為纖維蛋白形成的一項(xiàng)指標(biāo)，在臨床巳廣泛使用，但其標(biāo)準(zhǔn)化問題至今未解決，也無標(biāo)準(zhǔn)品，甚至有關(guān)參照品制備的指導(dǎo)性文件也沒有公布過。摘

15、自Thromb Haemost 2001;85:671-83、目前D- 二聚體試劑溯源標(biāo)準(zhǔn)是如何建立的？D-D DOT試劑標(biāo)準(zhǔn)的建立，D-二聚體試劑盒只能向同類公認(rèn)可靠的D- 二聚體測(cè)定方法或試劑盒靠攏。D-DDOT研發(fā)時(shí)用挪威NycoCard二聚體試劑盒測(cè)定患者樣品，從中選取高值D-Dimer陽性樣品混合，用此NycoCard二聚體試劑盒將這高值Dimer混合血漿系列稀釋后定標(biāo)，作溯源標(biāo)準(zhǔn)，建立D-D DOT試劑盒的二聚體標(biāo)準(zhǔn)曲線、企業(yè)D- 二聚體標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品。本項(xiàng)目方法轉(zhuǎn)移靠混合高值血漿的做法符合國際的通常規(guī)定。有關(guān)的權(quán)威論述如下：FACT 文獻(xiàn)摘錄：原文： “The best conf

16、ormity is achieved by the use of pooled plasma samples from patients withhigh levels of D-dimer antigen in plasma.”“As an alternative to pooled plasma samples,D-dimer antigen assays may be calibrated with invitro preparations containing predominantly H.MW -fibrin oligomers.”中文翻譯： 使用病人高值D-dimer混合血漿可取

17、得最好的一致性，作為混合血漿樣品的代用品，D- 二聚體檢測(cè)可以使用體外制備的標(biāo)準(zhǔn)品校正，體外制備的標(biāo)準(zhǔn)品主要含高分子量纖維蛋白的低聚物。摘自：Thromb Haemost 2001;85 671 84、常見品牌D- 二聚體試劑盒的檢測(cè)量程：一些品牌D- 二聚體試劑盒,為了保證陰性排除判斷的敏感性和陽性確定結(jié)果的準(zhǔn)確性，往往把檢測(cè)量程定在0.1 5mg/L,這一設(shè)計(jì)除了滿足和保證區(qū)分陰陽性區(qū)域的敏感性外, 更重要的是這種檢測(cè)量程設(shè)計(jì)已能滿足大部分血栓病人的輔助診斷和溶栓指導(dǎo)的參考。羅氏金標(biāo)層析數(shù)碼定量系統(tǒng)，CARDIACD-Dimer，測(cè) 量 范 圍 ： 0.1-4.0g/mL(0.1-4.0m

18、g/L)法國 Stago 0.22 4 g/ml(FEU) ， 0.22mg 4.0mg/L生物梅里埃 D- 二聚體測(cè)量范圍： 45-10,000ng/ml(FEU)（注： FEU mg/L mg/L 2 ， 0.025-5.0mg/L。）5、幾個(gè)常見品牌D- 二聚體試劑主要檢測(cè)數(shù)據(jù)見下表幾個(gè)品牌 D-D 二聚體試劑比較試劑名稱方法學(xué)報(bào)告單位正常值檢測(cè)范圍檢測(cè)時(shí)間奧普 D-D DOT金標(biāo)免疫法mg/L0.3mg/L0.1-5mg/L3minRoche( 羅氏）液體試劑FEU0.5ug/ml0.15 -9ug/ml(FEU)10min717 生化儀(0.5mg/L)4.5mg/LStago 法國

19、專用測(cè)定儀FEU0.4ug/ml0.22 -4ug/ml7min(0.4mg/L)0.22-4mg/L(FEU)Organon Teknika液體試劑FEU0.6ug/ml0.2 -4ug/ml12min(0.4mg/L)0.2-4mg/L (FEU)Biomerieux500ng/ml45-10000ng/ml(FEU)法國梅里埃酶免法FEU(0.5mg/L)0.045-10mg/L35min6、 FEU 單位和 mg/L 單位的報(bào)告模式及換算方法：纖維蛋白等值單位( Fibrinogen EquivalentUnits FEU) 這是目前一些測(cè)定D- 二聚體儀器和試劑盒所用的報(bào)告模式。FE

20、U 和 mg/L 之間的換算，F(xiàn)EU1ng/ml D-dimer=2ng/FEU/ml，即 FEU;1ng/ml D-dimer=2ng/ ml的非 FEU 單位。例如如果以 D- 二聚體正常值 0.3mg/L ，換算成 FEU 結(jié)果需乘 2 即為 0.6mg/L FEU 。7、奧普 D- 二聚體試劑的特點(diǎn)： 保存期長，穩(wěn)定性好。12 個(gè)月的失效期，較常見同類試劑的6個(gè)月失效期長了一半。更方便客戶應(yīng)用。 陰性結(jié)果排除試驗(yàn)的準(zhǔn)確性和鑒別排除假陽性結(jié)果的臨床符合性滿意。本試劑盒在臨床評(píng)估時(shí)發(fā)現(xiàn)6例D-D結(jié)果全正常范圍(5例0.1 ，1 例0.2mg/L),而用進(jìn)口試劑測(cè)數(shù)在值在0.3-1.1mg/

21、L之間(0.3、 0.3 、 0.4、 0.4、 0.9、1.1mg/L)，臨床追蹤證實(shí)該6 例陽性結(jié)果的病人為非血栓病人。 U2 愛國者 POCT 即時(shí)檢驗(yàn)儀器，可快速測(cè)定 CRP 、 HCG 、 ALB 、 D-dimer 多用 ,有很好的配套效應(yīng)。 D-D DOT 國產(chǎn)試劑的價(jià)格優(yōu)勢(shì)，與進(jìn)口試劑等效的產(chǎn)品質(zhì)量。8、對(duì) D-D 檢測(cè)中可能出現(xiàn)的假陰性和假陽性的評(píng)價(jià)： D-D 檢測(cè)的陰性患者中四個(gè)項(xiàng)目，一機(jī)(假陰性 )，仍有極少數(shù)患者 (2%) 伴靜脈血栓，其原因：（ 1 ）血栓體積很小/ 遠(yuǎn)端小血栓；（ 2 ）放射線 / 超聲檢查出現(xiàn)假陽性；（ 3 ）臨床表現(xiàn)與標(biāo)本采集時(shí)間相隔太長；（ 4

22、 ）纖溶活性降低因?yàn)镈-D增高所謂的假陽性，常見于老年人、孕婦、癌癥、DIC、肝病、炎癥、創(chuàng)傷、手術(shù)、冠心病等均會(huì)導(dǎo)致假陽性。9 、不同型號(hào)D- 二聚體試劑比對(duì)檢測(cè)評(píng)估應(yīng)掌握的基本原則：沒有國際標(biāo)準(zhǔn)、國內(nèi)外均無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)品，也無行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、不同公司的企業(yè)D- 二聚體試劑不同于其它試劑, 既D- 二聚體標(biāo)準(zhǔn)品也不能相互通用。生物梅里埃在宣傳資料中是這樣表達(dá)的：“D-dimer由于沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，不同試劑的測(cè)試可有不同的結(jié)果。不同商品D- 二聚體試劑盒定量值各不相同,這是因?yàn)樵噭﹩慰寺】贵w的來源/ 免疫反應(yīng)性，基質(zhì)效應(yīng)，干憂因素、定標(biāo)物的種類不同等多因素，測(cè)試X 試劑的結(jié)果不一定能與Y 測(cè)試的試劑比較

23、”，每種 D-D 試劑通過充份的臨床驗(yàn)證,通過觀察陰性結(jié)果排除試驗(yàn)的準(zhǔn)確性和真陽性,以及鑒別排除假陽性結(jié)果的臨床符合性來評(píng)估試劑優(yōu)劣。這對(duì)于傳統(tǒng)用二種數(shù)據(jù)的比對(duì)試驗(yàn)來評(píng)價(jià)試劑的方法不同 ,我們必須接受國際上通行的做法，來更新我們的觀念。D- 二聚體檢測(cè)倍受關(guān)注的原因分析中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)主任、解放軍301醫(yī)院主任、叢玉隆教授認(rèn)為：隨著生化、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)飛速發(fā)展；止血、凝血和血栓疾病的研究取得了巨大進(jìn)步，積極開展血栓與止血試驗(yàn)檢測(cè)，推廣臨床應(yīng)用，無疑具有重要意義。血栓性疾病的增多，診斷、治療、監(jiān)測(cè)的臨床需要。檢測(cè)方法學(xué)的進(jìn)步、從定性到定量，正確快速。D- 二聚體檢測(cè)試劑盒臨床研究總結(jié)報(bào)告（

24、摘要）臨床研究評(píng)估單位：上海中醫(yī)藥大學(xué)岳陽醫(yī)院上海閔行區(qū)中心醫(yī)院一、材料和方法儀器和試劑：比對(duì)評(píng)估系統(tǒng)所用的儀器試劑，均為挪威原裝進(jìn)口的NycoCardD- 二聚體測(cè)定儀和試劑，與上海奧普生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的U2 金標(biāo)斑點(diǎn)法定量讀數(shù)儀及試劑按各自操作說明作比對(duì)測(cè)定。標(biāo)本采集：疑似病例組均為臨床送檢D- 二聚體血漿，共135份（閔行醫(yī)院85 例，岳陽醫(yī)院50例）。對(duì)照組均為健康體檢人群共100 例（閔行醫(yī)院40 例，岳陽醫(yī)院60 例）。該組為隨機(jī)體檢人群，未進(jìn)行挑選，年齡分布在16-85歲，平均年齡為45.4歲。二、結(jié)果1、疑似病例組以比對(duì)法結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，共有88 例陽性， 46 例陰性， 1

25、例乳糜血有干擾不作統(tǒng)計(jì)。在陽性組（ 88 例）中， D-DDOT 檢測(cè)出 82例陽性， 6 例陰性，陽性符合率為93.2（ 82/88 ），病例追蹤不符合的 6 例，結(jié)果支持 D-D DOT的陰性結(jié)果。疑似病例組比對(duì)法陰性的46 例中， D-DDOT檢測(cè)均陰性，陰性符合率100 。陰陽不符的6 例均為比對(duì)試劑（ +），而 D-DDOT(-) ，見表 1。對(duì)該陰陽不符的 6 例進(jìn)行臨床病例追蹤，結(jié)果顯示該6 例病例均無深靜脈血栓、肺栓塞和血管內(nèi)彌漫性凝血的相關(guān)癥狀和診斷，病例追蹤結(jié)果支持D-D DOT 的可靠性，在兩家醫(yī)院臨床研究中D-D DOT特異性應(yīng)優(yōu)于進(jìn)口同類比對(duì)試劑。對(duì)照組以比對(duì)法結(jié)果為

26、標(biāo)準(zhǔn)，共有1 例陽性（閔行119號(hào)， 0.3mg/L）， 99 例陰性。該陽性樣本 D-D DOT 檢測(cè)亦為0.3 mg/L ，其它 99 例 D-D DOT 檢測(cè)均為陰性，符合率100 。在列入統(tǒng)計(jì)的全部234 例樣本中，以比對(duì)法 (NycoCard) 為標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果：陽性符合率 =93.3%陰性符合率 =100%總符合率 =97.4%配對(duì)卡方檢測(cè)結(jié)果顯示兩者結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著差別；Kappa值 0.945 （ 0.8 ），具有非常好的一致性。以比對(duì)法陽性為標(biāo)準(zhǔn)，D-DDOT的陽性符合率雖為93.3% ，但 2 個(gè)醫(yī)院對(duì)陽性不符病例（共6例）追蹤結(jié)果均支持D-D DOT的可靠性。D-D DOT

27、與比對(duì)法 (NycoCard) 6例陽性不符結(jié)果D-D DOT比對(duì)法序號(hào)(mg/L)追蹤診斷(mg/L)閔行 0.10.9肺炎，高血壓，非血栓病閔行 0.10.3糖尿病，肺炎，非血栓病閔行 0.20.3胰頭癌，非血栓病閔行 0.10.4上消化道出血，肝硬化，非血栓病岳陽 0.10.4氣管炎急性發(fā)作，非血栓病岳陽 0.11.1高血壓，心臟病，非血栓病2、對(duì)照組均為健康體檢人群共100例（閔行醫(yī)院40 例，岳陽醫(yī)院60 例）。該組為隨機(jī)體檢人群，未進(jìn)行挑選，年齡分布在16-85歲，平均年齡為45.4歲。以比對(duì)法結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，共有1 例陽性（閔行119號(hào)，0.3 mg/L）， 99例陰性。該陽性樣本D

28、-D DOT檢測(cè)亦為0.3 mg/L，其它99 例D-D DOT檢測(cè)均為陰性，符合率100 。 100 例健康人D- 二聚體讀數(shù)分布如下：在兩家醫(yī)院進(jìn)行的共100例健康體檢人群的臨床研究中，二法99 的健康人D- 二聚體讀數(shù)均0.3 mg/ml，表明D-D DOT與比對(duì)法一樣，所選的正常參考范圍0.3 mg/L設(shè)置恰當(dāng)，滿足臨床需要。D-D DOTD-D DOTD-D DOT陽性符合率陰性符合率總符合率=a/(a+c)=93.3%=d/(b+d)=100%(a+d)/(a+b+c+d)=97.4%閔行醫(yī)院和岳陽醫(yī)院的統(tǒng)計(jì)四格表分別進(jìn)行配對(duì)卡方檢驗(yàn)，兩者P 均大于0.05 。三、結(jié)論上海市閔行區(qū)

29、中心醫(yī)院和上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院的臨床研究結(jié)果表明上海奧普生物醫(yī)藥有限公司申請(qǐng)臨床研究的D- 二聚體檢測(cè)試劑盒(膠體金法 )和比對(duì)法NycoCardD- 二聚體單一試劑盒在D- 二聚體測(cè)定上有良好等效性，引用的正常人參考范圍（0.3 mg/L）恰當(dāng)，D-D DOT可以與比對(duì)法一樣，在臨床用于排除深靜脈血栓、肺栓塞和血管內(nèi)彌漫性凝血，滿足臨床應(yīng)用需要。以比對(duì)法陽性為標(biāo)準(zhǔn)，追蹤結(jié)果均支持 D-DD-D DOT的陽性符合率雖為DOT的可靠性，提示在本研究93.3% ，但 2 個(gè)醫(yī)院對(duì)陽性不符病例（共6 例）D-DDOT特異性應(yīng)優(yōu)于同類比對(duì)試劑。檢測(cè)血漿 D- 二聚體新金標(biāo)斑點(diǎn)滲濾法試劑

30、盒的臨床適用性（摘要）上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院檢驗(yàn)科張莉本研究對(duì)國產(chǎn)新研制的膠體金法D- 二聚體試劑盒作了性能評(píng)價(jià)，并將其與挪威進(jìn)口試劑盒的臨床測(cè)試結(jié)果進(jìn)行了比較。一、材料與方法儀器與試劑D- 二聚體檢測(cè)試劑盒（膠體金法）及配套Uppergold U2劑，質(zhì)控品均由上海奧普生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)。比對(duì)用挪威金標(biāo)斑點(diǎn)法定量讀數(shù)儀和NycoCard公司生產(chǎn)D-D-D DOT試二聚體試劑盒及配套測(cè)讀儀NycoCard Reader。234份臨床收集的新鮮血漿標(biāo)本，作了線性、精密度（CV ）、回收率并用統(tǒng)計(jì)軟件作了分析。結(jié)果一、試劑盒性能評(píng)價(jià)線性評(píng)價(jià)：回歸方程為：Y=0.9791X+0.0

31、684，=0.998。此結(jié)果顯示，該試劑D-D在0.3-3.0mg/范圍內(nèi)線性良好。精密度總批內(nèi)及批間精密度分別為10.77%和12.81%。總回收率為101.3%。二、臨床標(biāo)本比對(duì)結(jié)果：234例樣本中，二者陽性符合率為95.5 ，陰性符合率為100 ，總符合率為98.3 。 D-DDOT和Nycocard試劑盒結(jié)果具有非常好的一致性。討論目前 ,D-二聚體的臨床檢測(cè)主要應(yīng)用街排除靜脈血栓栓塞(VTE),其中包括了DVT和 PE 。目前快速D-二聚體測(cè)定已作為DVT診斷的首選項(xiàng)目。D- 二聚體還是早期診斷彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）較敏感的指標(biāo)。這對(duì)血栓性疾病的診斷，尤其是對(duì)于低臨床概率的排除性

32、診斷具有重要的意義。目前D- 二聚體的檢測(cè)沒有國際標(biāo)準(zhǔn)品和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品，各公司的標(biāo)準(zhǔn)品不統(tǒng)一、不通用，通常只適合于與其配套的檢測(cè)系統(tǒng)的自身校正。另外，由于各個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)所使用的免疫抗體差異較大，抗原決定簇各有不同，從而造成不同的檢測(cè)方法之間數(shù)據(jù)差異很大，其陽性率、敏感性、特異性均不同，甚至對(duì)于同一個(gè)樣本（枸櫞酸抗凝血漿）的讀數(shù)亦存在較大差異。D- 二聚體項(xiàng)目目前公認(rèn)的敏感度在90 以上，而特異性為40 60 左右7 ，因此診斷疾病時(shí)，其意義主要在于陰性結(jié)果，即它是用于排除性的診斷而非確診性的診斷。其陰性符合率達(dá)到100%， ,陰陽不符的四例病例均為Nycocard試劑盒陽性而D-D DOT陰性，對(duì)

33、于注重陰性排除試驗(yàn)的D- 二聚體檢測(cè)項(xiàng)目，這樣的結(jié)果顯示出D-D DOT更具臨床適用性。已上市的23種D-二聚體檢測(cè)試劑盒之間的比對(duì)評(píng)估，它們的Spearman等級(jí)相關(guān)系數(shù)在0.794-0.993之間。而D-DDOT與NycoCard的Spearman系數(shù)為0.87 ，說明其與國際知名試劑盒等效。以上三項(xiàng)臨床比對(duì)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)和對(duì)試劑盒基本性能的評(píng)價(jià)結(jié)果均顯示D-D DOT完全能夠滿足臨床的需要。本文摘自：核心醫(yī)學(xué)期刋“檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)”2010年1月第1 期D- 二聚體檢測(cè)試劑盒 (膠體金法 )操作規(guī)程（ SOP ）一、項(xiàng)目名稱檢驗(yàn)方法名稱D- 二聚體檢測(cè)試劑盒(膠體金法 ) D-D DOT英文名：

34、 D-Dimer assay by DIGFA method二、方法學(xué)原理反應(yīng)原理為固相雙抗體夾心法免疫試驗(yàn)。待測(cè)樣品中所含的D- 二聚體，能為固相在膜上的D- 二聚體抗體特異性地捕獲，然后由另一個(gè) D- 二聚體單抗 -膠體金綴合物標(biāo)記，呈紅色斑點(diǎn)，斑點(diǎn)紅色強(qiáng)度與樣品中 D- 二聚體濃度呈正比，可用 U2 金標(biāo)斑點(diǎn)法定量讀數(shù)儀測(cè)定。三、試劑品牌、規(guī)格、內(nèi)含物：包裝規(guī)格： 20 人份 / 盒D- 二聚體定量檢測(cè)試劑盒(膠體金法 )組份名稱主要活性成分及濃度數(shù)量1.反應(yīng)板D- 二聚體抗體、致敏濃度 0.5-1.5mg/ml20 塊2.封閉液1% 牛血清白蛋白 (BSA) ， pH7.4 PBS緩沖

35、液1 3.0ml3.洗滌液pH7.4 PBS緩沖液1 7.0ml4.金標(biāo)液凍干品D- 二聚體單抗膠體金綴合物、 1% BSA2 1.1ml5.金標(biāo)液凍干品雙蒸水， 0.66% NaCl1 3.0ml復(fù)溶液表中溶液分別以0.5-1.5mg/ml疊氮鈉防腐。四、儀器品牌、型號(hào)金標(biāo)斑點(diǎn)法定量讀數(shù)儀Uppergold U2五、操作步驟1. 從冷藏處取出試劑盒，室溫至少平衡半小時(shí)，在D- 二聚體金標(biāo)液凍干品中，準(zhǔn)確加入D- 二聚體金標(biāo)凍干品復(fù)溶液1.1ml搖勻。2. 將 D- 二聚體反應(yīng)板平放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)，在反應(yīng)孔內(nèi)滴加2 滴 D- 二聚體封閉液，待完全滲入。3. 使用潔凈吸頭準(zhǔn)確吸取100 l枸櫞酸抗凝血

36、漿，加到反應(yīng)板中，待完全滲入后，加2 滴D- 二聚體洗滌液。4. 待洗滌液完全滲入，使用潔凈吸頭準(zhǔn)確加入D- 二聚體膠體金溶液100 l。待完全滲入后，加 4 滴 D- 二聚體洗滌液。6. 立刻在U2金標(biāo)定量儀D- 二聚體項(xiàng)目下測(cè)讀，測(cè)讀時(shí)間不宜超過5 分鐘。六、正常參考值本試劑盒推薦正常人的預(yù)期讀數(shù)應(yīng)0.3 mg/L。七、臨床意義本產(chǎn)品在UppergoldU2金標(biāo)斑點(diǎn)法定量讀數(shù)儀上可快速測(cè)定血漿中的纖維蛋白降解產(chǎn)物D- 二聚體，是深靜脈血栓、肺栓塞、彌漫性血管內(nèi)凝血的陰性排除試驗(yàn)，屬即時(shí)檢驗(yàn) (POCT) 類體外診斷試劑。檢測(cè)結(jié)果可在 3 分鐘內(nèi)獲得，讀數(shù)范圍為 0.1-5.0mg/L ，適用于醫(yī)院門急診、重癥監(jiān)護(hù)病房等需快速測(cè)定D- 二聚體的場(chǎng)所。D-Dimer結(jié)果以D- 二聚體濃度mg/L表達(dá)，如要用纖維蛋白原相當(dāng)單位(FEU)