高效毛細(xì)管電泳法同時(shí)分離測(cè)定蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ號(hào)

1、高效毛細(xì)管電泳法同時(shí)別離測(cè)定蘇丹紅、號(hào)高效毛細(xì)管電泳法同時(shí)別離測(cè)定蘇丹紅號(hào)【摘要】目的采用高效毛細(xì)管電泳法hpe同時(shí)別離及測(cè)定蘇丹紅和蘇丹紅。方法利用非涂層彈性融硅石英毛細(xì)管75i.d.60為別離通道，優(yōu)化選擇檢測(cè)波長、緩沖溶液種類、濃度及ph值、運(yùn)行電壓、進(jìn)樣濃度、進(jìn)樣時(shí)間等試驗(yàn)參數(shù)后進(jìn)展別離測(cè)定。結(jié)果在最正確實(shí)驗(yàn)條件下：紫外檢測(cè)波長297n,30l/ltris(ph=9.5)緩沖溶液，別離電壓15kv,進(jìn)樣時(shí)間20s，較好地實(shí)現(xiàn)了蘇丹紅和蘇丹紅的基線別離及檢測(cè)。結(jié)論該法簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高。【關(guān)鍵詞】高效毛細(xì)管電泳法；蘇丹紅；蘇丹紅蘇丹紅作為一種工業(yè)染料，被廣泛用作染色的原料，但因其具有一

2、定的致癌、致敏性和遺傳毒性23，被國際癌癥研究機(jī)構(gòu)(iar)列為第2類(對(duì)動(dòng)物疑心有致癌性物質(zhì))或第3類致癌物質(zhì)，因此嚴(yán)禁在食品中使用，我國也明文制止其作為色素在食品中進(jìn)展添加4。目前國內(nèi)外食品中蘇丹紅染料的常用檢測(cè)方法是高效液相色譜法(hpl)5，6，液相色譜/質(zhì)譜分析法(l/s)7，薄層色譜-紫外可見分光光度法8等。而國內(nèi)運(yùn)用高效毛細(xì)管電泳法對(duì)食品中的蘇丹紅進(jìn)展檢測(cè)未見報(bào)道，故此我們建立了毛細(xì)管電泳法同時(shí)別離測(cè)定蘇丹紅和蘇丹紅。1器材1.1儀器l2001高效毛細(xì)管電泳儀紫外檢測(cè)器北京彩陸科學(xué)儀器；石英毛細(xì)管柱75i.d.55(河北永年光纖廠)；kq520db型超聲波清洗器;1810型石英自

3、動(dòng)雙重純水蒸餾器江蘇省宜興市石英玻璃儀器廠。1.2試劑辣椒粉廣西南寧；蘇丹紅蘇丹紅97%，ajhsnattheypany；三羥甲基氨基甲烷(tris，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑，b.r.)；硼酸(gb)a.r.中國上海試劑總廠；其他為分析純?cè)噭凰疄閷?shí)驗(yàn)室自備二次蒸餾水。2方法分別準(zhǔn)確稱量0.0005g蘇丹紅和蘇丹紅，甲醇溶解后再分別定容至10.00l，配制成50.0g/l的蘇丹紅和蘇丹紅的單標(biāo)儲(chǔ)藏液；分別準(zhǔn)確稱取0.0005g蘇丹紅和蘇丹紅于同一燒杯中，甲醇溶解后定容至10.00l，配制成50.0g/l的蘇丹紅和蘇丹紅的混合儲(chǔ)藏液。取枯燥辣椒粉末，準(zhǔn)確稱量1.0000g加30.0l甲醇，超聲波提取30

4、in,冷卻后減壓抽濾，取濾液用甲醇定容至50.00l，搖勻，作為供試液。避光保存于冰箱中待用。所有溶液進(jìn)樣前先用0.45微孔濾膜過濾。3結(jié)果與討論3.1檢測(cè)波長的選擇采用紫外-可見分光光度計(jì)分別對(duì)蘇丹紅號(hào)的甲醇溶液進(jìn)展掃描，得到蘇丹紅的最大紫外吸收波長都為228n。本實(shí)驗(yàn)探究了216，228，254，297，332，478，491n等7個(gè)檢測(cè)波長，結(jié)果顯示在297n的檢測(cè)波長下蘇丹紅的別離效果較好，因此選用297n作為別離檢測(cè)波長。3.2緩沖體系的選擇實(shí)驗(yàn)討論了硼砂-硼酸，tris-it,tris-硼酸，tris-nah2p4，磷酸鹽等緩沖體系對(duì)別離的影響。結(jié)果說明tris-硼酸體系可以得到較

5、好的別離效果。3.3ph值的影響ph值是影響別離度的一個(gè)重要因素。在30.0l/ltris中分別參加硼酸調(diào)節(jié)ph值為8.00，8.50，9.00，9.50，10.00的緩沖體系。結(jié)果顯示采用ph值為9.50的30l/l的tris-硼酸緩沖體系能獲得較好的別離。3.4緩沖溶液濃度的選擇增加緩沖溶液的濃度，離子濃度增大，改變緩沖容量，減少溶質(zhì)和管壁之間物質(zhì)的作用，從而改善別離效果。緩沖溶液的濃度過大將產(chǎn)生大量的焦耳熱，導(dǎo)致基線不穩(wěn)，峰形變差。試驗(yàn)討論了10.0，20.0，30.0，40，50，60l/l這幾個(gè)濃度的緩沖溶液對(duì)別離檢測(cè)的影響，結(jié)果說明30l/ltrisph=9.50別離效果較好。3.

6、5運(yùn)行電壓的選擇別離電壓的大小不僅影響被測(cè)化合物的遷移時(shí)間，而且對(duì)別離度也有影響。高別離電壓可以改善別離度，縮短分析時(shí)間。但是電壓過高，毛細(xì)管內(nèi)產(chǎn)生的焦耳熱不容易散發(fā)，將引起柱效和別離度的降低，電壓過低那么別離時(shí)間過長。試驗(yàn)討論了12，15，18，21，24kv5個(gè)運(yùn)行電壓，結(jié)果說明15kv別離效果最正確。3.6進(jìn)樣時(shí)間的選擇進(jìn)樣時(shí)間決定了進(jìn)樣量的大校進(jìn)樣量太小，達(dá)不到檢測(cè)器的靈敏度；進(jìn)樣量太大，樣品塞長度超過擴(kuò)散引起的區(qū)帶增寬，使別離效率和別離度變差。實(shí)驗(yàn)采取重力進(jìn)樣,討論了10，15，20，25，30s5種進(jìn)樣時(shí)間,結(jié)果說明，20s為最正確進(jìn)樣時(shí)間。3.7標(biāo)準(zhǔn)曲線及重現(xiàn)性準(zhǔn)確配制不同濃度的

7、蘇丹紅號(hào)標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，以30l/ltris+硼酸為緩沖溶液，運(yùn)行電壓為15kv，ph=9.50，進(jìn)樣時(shí)間20s，檢測(cè)波長為297n。以峰面積v/s與質(zhì)量濃度(g/l)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖，得到線性回歸方程為y=17311x+20371，r=0.9994，線性范圍為0.054g/l，檢出限為0.05g/l。同法繪制蘇丹紅的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖，得到線性回歸方程為y=8261.1x-78353，r=0.9996，濃度在20.0050.00g/l范圍有良好的線性關(guān)系，檢出限為20.00g/l。3.8樣品分析優(yōu)化條件下，利用加標(biāo)法，分別比擬確認(rèn)蘇丹紅號(hào)的電泳圖，以到達(dá)對(duì)蘇丹紅號(hào)的定性分析目的。與圖2比擬，在蘇

8、丹紅混合溶液中單加蘇丹紅號(hào)標(biāo)準(zhǔn)樣品，1號(hào)峰峰高明顯增加，可推知1號(hào)峰為蘇丹紅號(hào)；同法，單加蘇丹紅號(hào)標(biāo)準(zhǔn)樣品，2號(hào)峰變高，可推知2號(hào)峰為蘇丹紅號(hào)。如圖3。取提取液在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，直接進(jìn)樣。如圖4。在樣品中分別參加一定量的蘇丹紅號(hào)標(biāo)準(zhǔn)樣品，得到如圖4加標(biāo)電泳圖譜。通過分析比擬圖4、圖5可推知圖5b的2號(hào)峰為在辣椒樣品里參加的標(biāo)準(zhǔn)品蘇丹紅號(hào)的峰，可推知辣椒粉里沒有蘇丹紅號(hào)。并分別進(jìn)展加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，平行測(cè)定5次。結(jié)果見表1。表1蘇丹紅回收率實(shí)驗(yàn)略4結(jié)論本文建立了同時(shí)別離檢測(cè)蘇丹紅的新方法-高效毛細(xì)管電泳紫外檢測(cè)法。與高效液相色譜方法相比擬,樣品處理步驟大大簡(jiǎn)化,操作更方便，用于測(cè)定辣椒粉,回收率在

9、90%109%之間，結(jié)果令人滿意?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1秦菲.食品中蘇丹紅的毒性及檢測(cè)方法j.北京結(jié)合大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2022,22(2):51.2宋雁.食品中蘇丹紅的危險(xiǎn)性評(píng)估j.國外醫(yī)學(xué)衛(wèi)生學(xué)分冊(cè),2022,32(2):129.3stibrv,artnekv,rdlvah，etal.expressinfythrep4501a1anditsntributintxidatinfaptentialhuanaringen1-phenylaz-2-naphthl(sudan)inhuanliversj.anerletters,2022,220(2):145.4米建萍,劉青華,黃崢，等.食品中蘇丹紅檢測(cè)方法的應(yīng)用進(jìn)展j.分析實(shí)驗(yàn)室，2022,27:427.5吳銀良，李存,劉勇軍，等.高效液相色譜法快速測(cè)定鴨肉和鴨蛋中蘇丹紅染料j.分析化學(xué)研究簡(jiǎn)報(bào),2022，366：843.6羅遠(yuǎn)宏,邱巍,李衛(wèi)崗，等.高效液相色譜法測(cè)定禽蛋產(chǎn)品中蘇丹紅類染料j.理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè)，2022，4311：913.7zhangyan,uhai-lng,xiaa-lin,erferene-free