中國獸藥典 2015版一部抗生素部分

1、中國獸藥典2015版宣貫 -抗生素部分內(nèi)容一、附錄 無菌檢查法； 微生物限度檢查法； 含量均勻度檢查法； 效價測定法。二、中國獸藥典2015版新增抗生素品種。三、中國獸藥典2015版修訂抗生素品種。四、標準物質(zhì)通則和指導原則。一、附錄無菌檢查法總的修訂原則： 照2015版中國藥典（2015版CP）附錄修定。2015版CP修改幅度較大。無菌檢查內(nèi)容與國外藥典接軌。列表比較如下：一、附錄無菌檢查法 不同項 2010年版 2015年版1、試驗環(huán)境萬級環(huán)境下的百級單向流或隔離系統(tǒng)應在無菌條件下進行，試驗條件必須達到無菌檢查要求*2、試驗員應具備微生物專業(yè)知識和培訓刪除此要求3、培養(yǎng)基(1) 硫乙醇酸鹽

2、流體培養(yǎng)基(2) 改良馬丁培養(yǎng)基 置23-28培養(yǎng)(3) 選擇性培養(yǎng)基(4) 0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基(5) 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(6) 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(7) 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基(1) 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（FTG）(2) 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB） 置20-25培養(yǎng)(3) 中和或滅活用培養(yǎng)基（加了中和或滅火劑的FTG或TSB）(4) 0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基（和FTG、TSB一起 參與硫酸鏈霉素的無菌檢查）(5) 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(6) 沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基(7) 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基*2015版CP中的藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導原則指導意見 ：“應在B級背景下的A級單向流潔凈區(qū)域內(nèi)或隔

3、離系統(tǒng)進行”；2015版CP中的無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗證指導原則中給出：“隔離器安裝位置為D級潔凈環(huán)境” (潔凈環(huán)境級別參考藥品現(xiàn)行版“GMP”分為A、B、C、D四個級別)。一、附錄無菌檢查法 不同項 2010年版 2015年版4、培養(yǎng) 基的靈敏度檢查硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌 （4種菌）（9支）枯草芽孢桿菌生孢梭菌 (2) 改良馬丁培養(yǎng)基白色念珠菌黑曲霉 （2種菌）（5支）(3)菌液制備：0.9%無菌氯化鈉溶液硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基生孢梭菌 金黃色葡萄球菌 （3種菌）（7支）銅綠假單胞菌(2) 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基枯草芽孢桿菌白色念珠菌 （3種菌)(7支)黑曲霉(3) 菌液制

4、備：pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液。5、方法適用性試驗(1)名稱的修訂：方法驗證試驗(2)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基接入小于100cfu的金黃色葡萄球菌大腸埃希菌 4種菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌(3)改良馬丁培養(yǎng)基接入小于100cfu的白色念珠菌黑曲霉 2種菌(4)培養(yǎng)時間 3-5天(1)改為：方法適用性試驗(2)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中接入小于100cfu的金黃色葡萄球菌大腸埃希菌 3種菌生孢梭菌(3)胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基接入小于100cfu的枯草芽孢桿菌白色念珠菌 3種菌黑曲霉(4)培養(yǎng)時間 不得超過5天一、附錄無菌檢查法注：10年版中藥二部和一部的無菌檢查方法一致， 15年

5、版建議中藥也同樣修訂。不同項 2010年版 2015年版6、培養(yǎng)時間(1) 陽性對照 培養(yǎng)48-72小時(2) 轉(zhuǎn)種的情況 細菌培養(yǎng) 2天、真菌培養(yǎng) 3天(1) 72小時內(nèi)(2) 培養(yǎng) 3天7、試驗用量(1)檢驗數(shù)量的修訂檢驗數(shù)量是指一次試驗用供試品最小包裝容器的數(shù)量。除另有規(guī)定外，出廠產(chǎn)品按表1，上市產(chǎn)品監(jiān)督檢驗按表2、表3 。表1、表2、表3中最少檢驗數(shù)量不包括陽性對照試驗的供試品用量。一般情況下，如采用薄膜過濾法，應增加1/2的最小檢驗數(shù)量做陽性對照用；如采用直接加入法，應增加每種培養(yǎng)基中所接種的量做陽性對照用。(2) 檢驗量的修訂檢驗量是指一次實驗所用的供試品總量（g或ml）。除另有規(guī)

6、定外，每份培養(yǎng)基接種的供試品量按表2、表3規(guī)定。若每支（瓶）供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩份培養(yǎng)基，則應分別接種硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基。采用薄膜過濾法時，檢驗量應不少于直接接種法供試品的總接種量，只要供試品特性允許，應將所有容器內(nèi)的全部內(nèi)容物過濾。(3) 表2、表3的修訂表2 液體制劑 檢驗量 +檢驗數(shù)量表3 固體制劑 檢驗量 +檢驗數(shù)量(1)檢驗數(shù)量的修訂檢驗數(shù)量是指一次試驗用供試品最小包裝容器的數(shù)量。成品每亞批均應進行無菌檢查。除另有規(guī)定外，出廠產(chǎn)品按表1，上市產(chǎn)品監(jiān)督檢驗按表2、表3 。表1、表2中最少檢驗數(shù)量不包括陽性對照試驗的供試品用量。刪除該規(guī)定。刪除原因：在陽性對照項已有

7、原則要求：“供試品用量同供試品無菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量?！?2) 檢驗量的修訂檢驗量是指供試品每個最小包裝接種至每份培養(yǎng)基的最小量（g或ml）。除另有規(guī)定外，供試品檢驗量按表3規(guī)定。如每支（瓶）供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩份培養(yǎng)基，則應分別接種硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。采用薄膜過濾法時，只要供試品特性允許，應將所有容器內(nèi)的全部內(nèi)容物過濾。(3) 表2、表3的修訂表2 為固體、液體 和醫(yī)療器具的檢驗數(shù)量表3為固體、液體 和醫(yī)療器具的檢驗量一、附錄微生物限度檢查法總修訂原則：照2015年版CP藥典附錄修定CP2015版修改幅度較大，其內(nèi)容與國外藥典接軌。 2010版 2015版

8、 微生物限度檢查法(1) 非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查： 微生物計數(shù)法(2) 非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查： 控制菌檢查(3) 非無菌產(chǎn)品微生物限度標準一、附錄微生物限度檢查法 不同項 2010年版 2015年版1、試驗環(huán)境萬級環(huán)境下的百級應符合微生物限度檢查的*微生物計數(shù)法2、計數(shù)方法(1) 平皿法 傾注法(2) 薄膜過濾法(1) 平皿法 傾注法 涂布法(2) 薄膜過濾法(3) 最可能數(shù)法（MPN法）3、目標檢測菌細菌、霉菌及酵母菌需氧菌、霉菌和酵母菌4、培養(yǎng)基適用性檢查菌種：大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠桿菌黑曲霉(2) 培養(yǎng)基：細菌計數(shù)：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基霉菌及酵母菌計數(shù)：玫瑰紅鈉瓊脂

9、培養(yǎng)基和酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(3) 結(jié)果判定：被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%。菌種：銅綠假單胞菌菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠桿菌黑曲霉(2)培養(yǎng)基：需氧菌總數(shù)：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和胰酪大豆 胨液體培養(yǎng)基霉菌及酵母菌總數(shù)：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（含抗生素）和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基(3)結(jié)果判定：被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應在0.5-2范圍內(nèi)。(4)增加了陰性對照 。*要求D級背景下的B級單向流空氣區(qū)域一、附錄微生物限度檢查法不同項 2010年版 2015年版5、方法適用性試驗名稱的修訂：計數(shù)方法的驗證(2) /(3) 抗

10、菌活性的去除或滅活常用供試液的抑菌活性消除的方法培養(yǎng)基稀釋法離心沉淀法薄膜過濾法中和法幾種方法的聯(lián)合使用(1) 名稱改為：計數(shù)方法適用性試驗(2) 增加了供試品微生物的回收方法(3) 抗菌活性的去除或滅活供試液接種后，按“微生物回收”規(guī)定的方法記性微生物計數(shù)。如試驗組菌落數(shù)的值小于菌液對照組菌數(shù)值得50%，可采用下述方法消除供試品的抑菌活性。增加稀釋液或培養(yǎng)基體積 加入適宜的中和劑或活滅活劑 采用薄膜過濾法 上述幾種方法的可聯(lián)合使用 刪去了離心沉淀法6、供試品檢查方法平皿法：傾注法薄膜過濾法(2) 培養(yǎng)條件營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：30-35, 3天玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：23

11、-28，5天方法平皿法：傾注法和涂布法薄膜過濾法MPN法：適用于含菌量較低的供試品需氧菌總數(shù)測定； 精確度不及薄膜過濾法和平皿計數(shù)法； 優(yōu)點在于少量菌在經(jīng)過增菌后進行直接觀察結(jié)果， 通過查表得到計數(shù)結(jié)果； 該法不適合霉菌計數(shù)。(2) 培養(yǎng)條件胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基：30-35, 3-5天沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：20-25，5-7天(3) 增加了陰性對照7、計數(shù)標準菌數(shù)應：10cfu100cfu1000cfu10000cfu菌數(shù)應：101cfu 可接受的最大菌數(shù)為20102cfu 可接受的最大菌數(shù)為20015.0A+S=18.215.0不符合規(guī)定A+2.2S=19.315.0A+S=18.215.0

12、不符合規(guī)定B20131001101.7、101.6、102.1、101.8、102.0、102.0、101.8、101.4、102.0、102.1、101.4、101.8、101.2、101.8、101.3、100.9、100.8、100.8、102.0、101.2101.6%0.4492.42.6C2013100299.4、98.7、98.6、98.6、98.9、99.0、98.5、98.1、98.5、98.2、98.7、98.6、98.7、98.5、99.0、98.7、97.9、98.4、99.0、99.298.7%0.3642.02.1D20131001105.0、104.8、107.7

13、、107.7、107.1、107.2、106.6、106.2、105.7、105.7、106.9、106.8、107.1、107.0、107.4、107.8、106.1、106.1、106.1、106.1106.5%0.8648.18.4E2013101899.3、100.4、100.7、101.3、100.1、100.0、100.1、99.8、99.4、99.5、100.3、100.0、100.2、99.9、100.7、100.4、100.2、99.9、99.2、98.8100.0%0.5771.11.3F13100199.9、99.8、100.3、100.4、100.3、100.3、99.

14、9、99.4、99.9、100.4、99.6、99.7、99.9、100.0、100.2、99.8、99.9、99.7、100.0、99.6100.0%0.2870.60.6 一、附錄含量均勻度檢查法 舉例2 模擬測定數(shù)據(jù)（%）參數(shù) 2010版 2015版90、90、90、90、90110、110、110、110、110A=0S=10.5A+1.8S=18.9 A+S=10.5應復試A+2.2S=23.1A+S=10.5應復試90、90、90、90、90、90、90、90、90、90110、110、110、110、110、110、110、110、110、110A=0S=10.2A+1.45S=

15、14.7小于15符合規(guī)定A0.25L A2+S2=1040.25L2=56.310456.3不符合規(guī)定一、附錄抗生素微生物檢定法抗生素微生物檢定法是利用抗生素在低微濃度下有選擇地抑制或殺死微生物的特點，以抗生素的抗菌活性為指標，來衡量抗生素中的有效成分效力的方法。抗生素微生物檢定法可分為： （1）稀釋法 （2）濁度法 （3）瓊脂擴散法（管碟法和打孔法）。 目前各國藥典通常采用后兩種方法測定抗生素的效價。一、附錄抗生素微生物檢定法一、附錄抗生素微生物檢定法抗生素效價單位的確定由于抗生素生產(chǎn)工藝的復雜性（發(fā)酵、提取），早期的抗生素試制初期并非都能制備得到純品，有些含有多種組份，有些已習慣上使用一種

16、效價單位，從生產(chǎn)及臨床使用上考慮均不宜更改計量方法，因此造成目前抗生素效價單位有多種確定方法，大致可按單組分和多組分抗生素兩大類來闡述。一、附錄抗生素微生物檢定法抗生素效價單位的確定單組分抗生素效價單位重量單位：以抗生素中所含特定的抗菌活性部分的重量計量效價單位。如：鏈霉素硫酸鹽，活性成分為鏈霉素堿，則鏈霉素堿1g1單位，折算硫酸鏈霉素1mg=798單位。類似重量單位：以特定的純抗生素制品鹽的重量作為單位，其包括無效的部分（鹽）在內(nèi)。沿襲早期的用法，理論上是不合理的，目前獸藥上只有鹽酸四環(huán)素和鹽酸金霉素2個品種。一、附錄抗生素微生物檢定法抗生素效價單位的確定特定效價單位：以特定的純抗生素的某一

17、重量為1單位加以折算。例如：青霉素單位最初定為一個青霉素單位系在50ml肉湯培養(yǎng)基內(nèi)完全抑制金黃色葡萄球菌生長的最小青霉素量。早期國際標準品青霉素G鈉稱重0.6g規(guī)定為1單位，即1667單位/mg。隨著青霉素的純化，青霉素G鈉只需0.5988g即可。因此，第二次定為0.5988g為1單位。一、附錄抗生素微生物檢定法抗生素效價單位的確定多組分抗生素效價單位以其中單一組分的活性成分的重量確定效價單位。如慶大霉素含有C1、C1a、C2a、C2等多個組分，慶大霉素的效價單位以C1（C21H43O7N5）來計量，1g的C11慶大霉素單位。用這種方法確定效價單位在“溯源性”方面較為明確，這是目前鼓勵采用的

18、方法。一、附錄抗生素微生物檢定法抗生素效價單位的確定多組分抗生素效價單位將多個抗生素組分按一定比例混合，以混合組分活性成分的重量確定效價單位。如螺旋霉素主要為含I、II、III三個組分的混合物，其效價單位定義為1g混合物50的組分I（C43H74N2O14）、25的組分II（C45H76N2O14）和25的組分III（C46H78N2O14）1螺旋霉素單位。多個抗生素組分不定比例的混合物，以混合組分活性成分的重量確定效價單位。如吉它霉素為含有A1、A3、A4、A5、A6、A7等的多組分抗生素，其效價單位定義為1g吉它霉素混合物（C3742H6169NO1415）1吉它霉素單位。此效價單位類似于

19、特定效價單位，其“溯源性”較模糊，目前不鼓勵使用。一、附錄抗生素微生物檢定法抗生素制劑規(guī)格的表示：例如：鹽酸土霉素 1g（ 100萬單位) 青霉素鈉 0.6g（ 100萬單位)這里的g是指按實際效價單位折算的重量單位，并不是實際重量。 實際稱取重量= 抗生素總單位/含量一、附錄抗生素微生物檢定法二劑量法原理 抗生素微生物檢定法基于量反應平行線原理，因此供試品和對照品形成的對數(shù)計量-反應關(guān)系曲線應當相互平行?？股乜偭?效價)的對數(shù)lgM與所形成抑菌圈半徑的平方r2呈直線關(guān)系 一、附錄抗生素微生物檢定法二劑量法同質(zhì)性：效價測定的計算式，是假定兩者劑量反應直線是互相平行的。非平行的計量-反應關(guān)系曲

20、線 一、附錄抗生素微生物檢定法管碟法測定中的影響因素抑菌圈圓正的控制滴加抗生素溶液從小管口或毛細滴管口濺出落在瓊脂培養(yǎng)基表面上；小鋼管二端面不夠平、雙碟底不平、制備瓊脂培養(yǎng)基平板時，工作臺不夠水平，結(jié)果使培養(yǎng)基層厚度不均勻；雙碟、小鋼管、鋼管放置器被微量抗生素（或其他殺菌劑）污染，使抑菌圈破裂；瓊脂培養(yǎng)基上，小鋼管彼此間隔距離太小而抑菌圈較大時，形成互相影響的卵圓形或橢圓形抑菌圈；雙碟培養(yǎng)過程中，溫度不均勻；底層平板上有冷凝水；培養(yǎng)基內(nèi)有小凝塊。一、附錄抗生素微生物檢定法管碟法測定中的影響因素抑菌圈邊緣清晰度的控制試驗菌種的純化；培養(yǎng)基的質(zhì)量；試驗菌的菌齡和試驗菌的菌量；雙碟的培養(yǎng)時間；等等。

21、一、附錄抗生素微生物檢定法濁度法原理：是利用抗生素在液體培養(yǎng)基中對實驗菌生長的抑制作用，通過測定培養(yǎng)后細菌濁度值的大小，比較標準品與供試品對實驗菌生長抑制的程度，以測定供試品效價的一種方法，這種方法在國外普遍被采用。優(yōu)點：檢測快速，易于操作，擴散因素影響小，檢測結(jié)果的正確程度和精密度都優(yōu)于管碟法。一、附錄抗生素微生物檢定法 濁度法 缺點：對試驗儀器的性能及試驗器具的要求較高，如培養(yǎng)溫度要求一致，比色管的清潔等。溫度的均勻性直接影響試驗菌的生長速率。美國藥典35版中對管碟法的培養(yǎng)溫度要求為0.5，而比濁法的溫度要求0.1 ，更為嚴格。任何影響液體培養(yǎng)基內(nèi)微生物生長的因素都會影響抗生素效價的測定。

22、適用范圍小。并不適用于所有抗生素，需選擇適宜的菌種來檢測。一、附錄抗生素微生物檢定法濁度法一、附錄抗生素微生物檢定法濁度法注意事項玻璃容器與清潔 所用玻璃儀器，必須用硬質(zhì)中性玻璃，軟質(zhì)玻璃易吸附抗生素。使用的移液管要求管壁不掛液；由于比濁法的靈敏度較高，所用比色皿的清潔更為重要，用清洗溶液洗滌浸泡后，必須用蒸餾水沖洗干凈。菌液需新鮮配制 菌液最好當天制備，當天使用，若在冰箱放置一段時間后再使用，所測定的數(shù)據(jù)不穩(wěn)定，誤差大。因為菌液在放置一段時間后，部分細菌老化甚至死亡，從而影響試驗時活菌的量，使結(jié)果產(chǎn)生偏差。試驗用菌種 不宜超過5代 。一、附錄抗生素微生物檢定法濁度法測定注意事項菌液的濃度 菌

23、液過濃可使?jié)舛?光吸收度不成直線關(guān)系；菌液過稀，則讀數(shù)偏低，誤差增大。分光光度計的最正確測量范圍在36.8%T處，最好將吸光度控制在0.30.7范圍內(nèi)。溫度 溫度的恒定與均勻性直接影響試驗菌的生長速率。培養(yǎng)用的試管厚度、玻璃質(zhì)地應一致，否則會影響傳熱速度，同一批樣品的各支培養(yǎng)管，應按正交拉丁方排列，以抵消各位置溫度的差異。一、附錄抗生素微生物檢定法濁度法測定注意事項各種溶液的放置順序 一、附錄抗生素微生物檢定法濁度法測定注意事項通氣 各培養(yǎng)管靜止培養(yǎng)時，試驗菌慢慢沉降至底部，就會產(chǎn)生梯度的微生物生長區(qū)及代謝環(huán)境。培養(yǎng)基的上半部分為微親氧性，底部為厭氧性，如采用振搖或攪拌培養(yǎng)法，增加氧的供應，可

24、促進生長。培養(yǎng)時間 培養(yǎng)時間的差異可導致誤差。已接種試驗菌種的培養(yǎng)基加至含有抗生素溶液的各支試管的次序有先后，抗生素與試驗菌接觸時間也存在著差異。含菌培養(yǎng)基從加第一支試管至加最后一支試管，在室溫的時間也不同。要使每管盡量一致，最好將培養(yǎng)基冷卻至4，然后種入試驗菌種。二、新增品種增加四個抗生素品種（10個標準）：乙酰氨基阿維菌素：原料+注射液延胡索酸泰妙菌素：原料+可溶性粉+預混劑芐星氯唑西林：原料+注入劑硫酸頭孢喹肟：原料 +注射用+注射液特點：均為獸用專用抗生素品種，充分體現(xiàn)獸藥典的特色； 芐星氯唑西林注入劑，為獸用專用劑型，與藥典附錄配套。二、新增品種乙酰氨基阿維菌素乙酰氨基阿維菌素B1a

25、 ：R= C2H5 C50H75NO14 914.13乙酰氨基阿維菌素B1b：R=CH3 C49H73NO14 900.10為乙酰氨基阿維菌素B1a和乙酰氨基阿維菌素B1b的混合物。二、新增品種乙酰氨基阿維菌素乙酰氨基阿維菌素屬大環(huán)內(nèi)酯類體內(nèi)外殺蟲劑國內(nèi)標準情況：獸藥質(zhì)量標準匯編中收載了乙酰氨基阿維菌素及其注射液的3個不同的質(zhì)量標準，分別為644號、804號和942號公告。國外標準情況：美國藥典收載該標準。結(jié)合國內(nèi)標準、國外標準及產(chǎn)品特性修訂此標準，充分體現(xiàn)該標準的適用性。二、新增品種乙酰氨基阿維菌素有關(guān)物質(zhì)和含量測定方法：來源于USP方法同一色譜條件：用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.1%

26、高氯酸溶液為流動相A，乙腈為流動相B，流速為每分鐘1.5ml，按下表進行線性梯度洗脫；檢測波長為245nm。理論板數(shù)按乙酰氨基阿維菌素B1a峰計算不低于4500，乙酰氨基阿維菌素B1a和B1b的分離度應大于3。 時間（分鐘） 流動相A(%) 流動相B（%） 0 45 55 15 45 55 25 5 95 30 45 55 35 45 55二、新增品種乙酰氨基阿維菌素有關(guān)物質(zhì)和含量測定方法：來源于USP方法根據(jù)USP標準，雜質(zhì)A、乙酰氨基阿維菌素B1b、乙酰氨基阿維菌素B1a、雜質(zhì)C+D和雜質(zhì)E的相對保留時間為0.55、0.77、1.00、1.05和1.28。實際系統(tǒng)適用性溶液的圖譜中，沒有發(fā)

27、現(xiàn)有雜質(zhì)A峰，B1b、乙酰氨基阿維菌素B1a、雜質(zhì)C+D和雜質(zhì)E的相對保留時間為0.77、1.00和1.05和1.29，但實驗中發(fā)現(xiàn)，該相對保留時間并不固定，每次試驗會有一定偏差。二、新增品種乙酰氨基阿維菌素有關(guān)物質(zhì)和含量測定方法：來源于USP方法考慮到各企業(yè)生產(chǎn)工藝不同，導致其雜質(zhì)不同，因此沒有按相對保留時間逐一定位各雜質(zhì)。只規(guī)定：單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積（1.0%），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的5倍（5.0%）。系統(tǒng)適用性圖譜二、新增品種乙酰氨基阿維菌素 對照品溶液的色譜圖 max=245nm二、新增品種乙酰氨基阿維菌素參照USP增加了8氧代-B1a測定二、新增

28、品種乙酰氨基阿維菌素增加了殘留溶劑測定綜合各企業(yè)的生產(chǎn)工藝及企業(yè)標準，確定可能存在的溶劑為乙醇、乙腈與丙酮。乙醇、乙腈與丙酮 以二乙烯基-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作為固定相的毛細管柱為色譜柱，初始溫度為50，以每分鐘2的速率升溫至80，再以每分鐘5的速率升溫至220；進樣口溫度為170；檢測器溫度為170；出峰順序依次為乙腈、乙醇、丙酮與二甲基甲酰胺，各峰之間的分離度均應符合要求。按外標法以峰面積計算，均應符合規(guī)定。二、新增品種乙酰氨基阿維菌素殘留溶劑 乙腈、乙醇、丙酮對照品混合溶液色譜圖二、新增品種延胡索酸泰妙菌素C28H47NO4SC4H4O4 609.82該標準合并了國內(nèi)2個標準：山東

29、魯抗和江蘇賽奧生化有限公司；同時參照進口獸藥質(zhì)量標準和英國獸藥典進行了修訂。二、新增品種延胡索酸泰妙菌素比旋度原定加二氧六環(huán)溶解并定量稀釋制成每1ml中含本品2mg的溶液，但旋光度均較小，測量誤差大。根據(jù)企業(yè)建議修訂為：稀釋成每1ml中含本品5mg的溶液。廠家批號比旋度ATMF131223725TMF131223827TMF131223928B131104127131104226131104326C019813050682701981305101270198130510428二、新增品種延胡索酸泰妙菌素有關(guān)物質(zhì)和含量測定：照EP方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲

30、醇-碳酸銨溶液取碳酸銨10g，加水800ml使溶解，加6高氯酸溶液（取高氯酸8.5ml，加水至100ml，搖勻）24ml，用水稀釋至1000ml，搖勻，濾過-乙腈（492823）為流動相，柱溫30，流速為每分鐘1.2ml，檢測波長為212nm。分別取延胡索酸泰妙菌素對照品和苯甲磺酰截短側(cè)耳素對照品適量，用流動相溶解并稀釋成每1ml各含0.08mg的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液；取系統(tǒng)適用性溶液20l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，泰妙菌素峰與苯甲磺酰截短側(cè)耳素峰的分離度應大于2.0，理論板數(shù)按泰妙菌素峰計算不低于10000。二、新增品種延胡索酸泰妙菌素有關(guān)物質(zhì)和含量測定延胡索酸和泰妙菌素色譜圖二

31、、新增品種延胡索酸泰妙菌素有關(guān)物質(zhì)和含量測定供試品色譜圖歐洲藥典雜質(zhì)標準色譜圖二、新增品種延胡索酸泰妙菌素有關(guān)物質(zhì)和含量測定EP對各相對保留時間的雜質(zhì)都有明確規(guī)定：供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，相對保留時間約為0.25、0.3、0.5、0.6、0.8、1.1、1.3、1.4和2.3的單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液的主峰面積（1.0%）。而實際考核9批樣品在相對保留時間約為0.4普遍存在一個雜質(zhì)峰，且該雜質(zhì)峰的峰面積大于對照溶液的主峰面積的0.5倍。（見下表）鑒于樣品的復雜性，相對保留時間一般情況下無法準確定位、最后定稿為：單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液的主峰面積（1.0%），各雜質(zhì)峰面積的和不

32、得大于對照溶液峰面積的3倍（3.0%）。二、新增品種延胡索酸泰妙菌素有關(guān)物質(zhì)和含量測定批號各相對保留時間雜質(zhì)峰占對照品主峰面積的倍數(shù)0.250.30.50.60.81.11.31.42.30.4大于0.5倍的其它峰雜質(zhì)和10.600.22/0.23/0.33無1.520.600.22/0.23/0.35無1.530.120.230/0.54/0.70無2.040.510.170.070.05/0.40/0.15/0.39無1.850.550.160.060.05/0.29/0.16/0.39無1.860.470.160.040.08/0.28/0.16/0.39無1.77/0.270.050.

33、16/0.09/0.160.130.32無1.48/0.20/0.43/0.16/0.23無1.29/0.040.060.21/0.40/0.20/0.09無1.1二、新增品種延胡索酸泰妙菌素延胡索酸測定取供試品約0.2g,精密稱定，加50%乙醇溶液60ml溶解后，照電位滴定法（附錄0701）用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當于5.804mg的延胡索酸,滴定結(jié)果用空白試驗校正。按干燥品計算，含延胡索酸應為18.6%19.4%（98%102%）。 延胡索酸與泰妙菌素1:1成鹽，其理論含量為19.0%。鑒別 按上述HPLC方法，色譜圖中出現(xiàn)延胡

34、索酸和泰妙菌素兩個峰，因此可同時進行延胡索酸和泰妙菌素的鑒別。二、新增品種芐星氯唑西林原名：芐星鄰氯青霉素，為氯唑西林的二芐基乙二胺鹽。國內(nèi)標準：原收錄在獸藥質(zhì)量標準2003年版以及新頒布的獸藥國家標準（化學藥品、中藥卷）第一冊中，但原名為芐星鄰氯青霉素注射液。國外標準：美國和英國藥典中均已收錄。中國獸藥典2010年版第一次收入了乳房注入劑制劑通則，配合該制劑通則，2010版藥典中就擬收入該品種，由于方法未研究充分，直至本版藥典才完成。二、新增品種芐星氯唑西林氯唑西林含量測定用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液-乙腈（3：1），用磷酸調(diào)pH值至4.60.2為流動相；

35、檢測波長220nm；柱溫40。理論板數(shù)按氯唑西林計算不低于3000。二芐基乙二胺的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（端基封尾）；以0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5.1）-乙腈（87:13）為流動相；檢測波長為220nm。理論板數(shù)按二芐基乙二胺峰計算不低于3000，拖尾因子應不得過2.0。二、新增品種芐星氯唑西林注意：二芐基乙二胺對色譜柱的要求較高，應采用端基封尾的色譜柱無菌檢查是該品種的難點：芐星氯唑西林在水中不溶原料無菌檢查：原標準：取本品約0.6g，加30%吐溫80ml，搖勻，取1ml置含青霉素酶500萬單位的瓶內(nèi)，取1ml用薄膜過濾法

36、處理后，依法檢查。問題：檢查量太少，無代表性。USP34標準：將供試品加入青霉素酶和含0.5%吐溫80的無菌培養(yǎng)基中，按直接接種法測定。問題：消耗大量酶，且接入培養(yǎng)基后，培養(yǎng)基混濁，無法觀察。二、新增品種芐星氯唑西林無菌檢查是該品種的難點：原料無菌方法 取供試品10g，加入無菌聚山梨酯80 10g，攪拌使供試品浸潤。加無菌十四烷酸異丙酯50ml，混勻，轉(zhuǎn)至500ml無菌分液漏斗中，充分搖勻，靜置4分鐘，緩慢排出下層沉淀，取全部上清液，加無菌十四烷酸異丙酯200ml，搖勻，經(jīng)薄膜過濾法處理，每管培養(yǎng)基中加入不少于600萬單位青霉素酶溶液，依法檢查（附錄1101），應符合規(guī)定。二、新增品種芐星氯唑

37、西林無菌檢查是該品種的難點注入劑無菌 注入劑為滅菌油混懸液，輔料包括注射用油、單硬脂酸甘油酯等。按原標準取本品不少于2瓶，檢查量太少，不符合要求。新無菌方法萃取離心與薄膜過濾相結(jié)合的方法。二、新增品種芐星氯唑西林無菌檢查是該品種的難點注入劑無菌 取本品約100ml，加無菌十四烷酸異丙酯200ml，搖勻，再加無菌pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液400ml，充分振搖后，離心20分鐘（每分鐘3000轉(zhuǎn)），取全部下層溶液，置無菌分液漏斗中，振搖，靜置使油水明顯分層，取全部水層，用無菌pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液稀釋至800ml；照薄膜過濾法處理，用含0.1%聚山梨酯80的無菌pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩

38、沖液為沖洗液，每張濾膜沖洗量為400ml，分8次沖洗后；再用0.9%無菌氯化鈉溶液沖洗3次，每張濾膜每次沖洗量為50ml。每管培養(yǎng)基中加入不少于600萬單位的青霉素酶溶液，搖勻，置37下作用1小時，依法檢查（附錄1101），應符合規(guī)定。二、新增品種芐星氯唑西林無菌檢查是該品種的難點注入劑無菌測定時應注意：在棄去上層和中層的液體和藥物時，用無菌一次性吸管緊貼離心管壁旋轉(zhuǎn)一周，使黏貼在離心管壁的藥物層脫離管壁，以便倒出，倒出時可以用吸管輕輕的往外剝離，以提高效率。在吹打液體混勻時，不要吹打高于液體并粘附于管壁的藥物，使藥物盡量去除干凈。應充分清洗干凈，為了防止殘余抗生素干擾測定，還應加入中和用的青

39、霉素酶。二、新增品種頭孢喹肟硫酸頭孢喹肟是獸醫(yī)專用第四代頭孢類抗生素。本標準是對現(xiàn)有的7個部頒質(zhì)量標準的統(tǒng)一。C23H24N6O5S2 H2SO4 626.61二、新增品種頭孢喹肟晶型確認經(jīng)熱分析確認，該化合物不含結(jié)晶水。二、新增品種頭孢喹肟有關(guān)物質(zhì)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.025mol/L高氯酸鈉溶液-磷酸-乙腈（100012115）（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.6）為流動相；檢測波長為270nm。取頭孢噻肟約25mg，加流動相100ml使溶解，另取頭孢喹肟約25mg，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻；取5ml置25ml量瓶中，加上述頭孢噻肟溶液1

40、 ml，用流動相稀釋至刻度。取20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，頭孢喹肟與頭孢噻肟的分離度應大于1.0。取5,6,7,8-四氫喹啉對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含5g的溶液，量取20l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。二、新增品種頭孢喹肟有關(guān)物質(zhì)標準上寫2,3-環(huán)己基吡啶，有標準上寫2,3-環(huán)己烷吡啶，現(xiàn)統(tǒng)一修訂為化學名稱：5,6,7,8-四氫喹啉原7個部頒標準中描寫5,6,7,8-四氫喹啉與頭孢喹肟相對保留時間有0.20，也有0.3的，為準確定位并判斷雜質(zhì)峰，修訂標準中增加5,6,7,8-四氫喹啉對照定位。隨著樣品溶液放置時間的增長，5,6,7,8-四氫喹啉峰面積會逐漸增大，為防

41、止樣品溶液因放置而影響檢測結(jié)果，增加：“臨用現(xiàn)配”注意事項。另外實驗單位在檢測過程中采取4控溫低溫進樣。二、新增品種頭孢喹肟有關(guān)物質(zhì)5,6,7,8-四氫喹啉對照溶液色譜圖系統(tǒng)適用性色譜圖頭孢喹肟頭孢噻肟三、修訂品種序號 名稱 修訂情況1吉他霉素 修訂【性狀】，刪除“味苦” 。吉他霉素預混劑增加了100g:30g（3000萬單位）規(guī)格2伊維菌素注射液增加規(guī)格3紅霉素1.增加附注：紅霉素組分色譜圖和各組分結(jié)構(gòu)、名稱、分子式。2.刪去“紅霉素維生素B、C組分”和“紅霉素A組分”，合并為“紅霉素組分”；3.單獨列出“有關(guān)物質(zhì)”項。4阿莫西林修訂【檢查】項下“阿莫西林聚合物”的計算方法。5純化水修訂【檢

42、查】項下“微生物限度”6青霉素鈉1.增加“附：有關(guān)物質(zhì)色譜圖和各雜質(zhì)信息”；2.修訂【檢查】項下的“有關(guān)物質(zhì)”注射用青霉素鈉增加規(guī)格2.4 g（400萬單位）三、修訂品種序號名稱修訂情況7苯唑西林鈉增加“附：雜質(zhì)信息”注射用苯唑西林鈉增加規(guī)格2.0g8乳糖酸紅霉素修訂【檢查】項下“紅霉素A組分測定法”的限度。88.0%59.1%9氟苯尼考修訂【檢查】項下“有關(guān)物質(zhì)”氟苯尼考注射液增加規(guī)格10鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉增加規(guī)格100g大觀霉素10g（1000萬單位）與林可霉素5g（按C18H34N2O6S計算）11注射用鹽酸四環(huán)素1.修訂【檢查】項下“有關(guān)物質(zhì)”：濃度由每ml含0.5mg改

43、為0.8mg；2.增加規(guī)格三、修訂品種序號名稱修訂情況12鹽酸多西環(huán)素片增加規(guī)格13氨芐西林鈉修訂【鑒別】項的紅外14酒石酸吉他霉素可溶性粉15替米考星1.修訂【鑒別】（1）、2.【檢查】項下“有關(guān)物質(zhì)”、3.【含量測定】替米考星預混劑修訂【鑒別】替米考星溶液1.增加規(guī)格；2.修訂【性狀】16硫氰酸紅霉素增加【檢查】項下“紅霉素BC組分及有關(guān)物質(zhì)”、“硫氰酸鹽”和“紅霉素A組分”硫氰酸紅霉素可溶性粉1.增加【檢查】項下“紅霉素A組分”，2.增加規(guī)格三、修訂品種序號名稱修訂情況17硫酸卡那霉素修訂【檢查】項下“無菌”：薄膜過濾前的處理方法不同。18硫酸慶大霉素1.修訂【性狀】下的溶解性;2.【檢

44、查】項下“硫酸鹽”液相法改為滴定法、【檢查】項下“有關(guān)物質(zhì)”：總雜質(zhì)限度5.0%4.5%；“慶大霉素C組分”：改變色譜條件等硫酸慶大霉素注射液1.修訂【性狀】;2.【有關(guān)物質(zhì)】和“慶大霉素C組分”19硫酸鏈霉素修訂【性狀】：刪去味微苦硫酸鏈霉素可溶性粉增加規(guī)格20氯唑西林鈉修訂【性狀】：刪去味苦三、修訂品種替米考星本品為大環(huán)內(nèi)酯類藥物，抗菌作用與泰樂菌素相似，主要抗革蘭氏陽性菌，對少數(shù)革蘭氏陰性菌和支原體也有效。對胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌及畜禽支原體的活性比泰樂菌素強。95%的溶血性巴氏桿菌菌株對本品敏感。主要用于防治家畜肺炎、禽支原體病及泌乳動物乳腺炎。替米考星原料及3個制劑的標準在中國獸

45、藥典一部（2005年版）中正式統(tǒng)一收錄，美國藥典中收載有替米考星原料及注射液的質(zhì)量標準。三、修訂品種替米考星替米考星反式異構(gòu)體保留時間（min）替米考星順式異構(gòu)體保留時間(min)中監(jiān)所對照品8.59.7企業(yè)A8.69.8企業(yè)B8.69.7企業(yè)C8.59.7【鑒別】 在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液替米考星順式異構(gòu)體峰和反式異構(gòu)體峰的保留時間應與對照品溶液兩峰的保留時間一致。三、修訂品種替米考星三、修訂品種替米考星中國獸藥典中收載的有關(guān)物質(zhì)方法與最新版的USP35標準略有不同，主要體現(xiàn)在梯度洗脫過程中流動相比例的變化、相對保留時間的變化和增加了供試品溶液的使用期限規(guī)定。三、修訂品種替米

46、考星 2010版獸藥典 USP35流動相比例梯度洗脫：0-30分鐘流動相A與B的比例從80:20線性變化到58:42梯度洗脫：0-30分鐘流動相A與B的比例從82:18線性變化到60:40相對保留時間替米考星反式異構(gòu)體（兩個不完全分開的峰）的相對保留時間為0.8，替米考星順式異構(gòu)體的相對保留時間為1.0，替米考星順式-8-差向異構(gòu)體的相對保留時間為1.2。替米考星反式異構(gòu)體（兩個不完全分開的峰）的相對保留時間為0.9，替米考星順式異構(gòu)體的相對保留時間為1.0，替米考星順式-8-差向異構(gòu)體的相對保留時間為1.1。供試品溶液的使用期限規(guī)定無24小時內(nèi)使用三、修訂品種替米考星USP35CVP2010

47、企業(yè)進樣次數(shù)最大單個雜質(zhì)含量（%）總雜質(zhì)含量(%)最大單個雜質(zhì)含量（%）總雜質(zhì)含量(%)A第1針1.69.21.69.2第2針1.69.11.69.4B第1針1.06.31.07.0第2針1.06.31.06.7C第1針2.17.52.17.3第2針2.17.52.17.5三、修訂品種替米考星USP35CVP2010生產(chǎn)企業(yè)比較項目反式異構(gòu)體順式異構(gòu)體順-8-差向異構(gòu)體反式異構(gòu)體順式異構(gòu)體順-8-差向異構(gòu)體A保留時間9.3099.91110.8659.0999.96111.1069.3069.91110.8669.36710.24211.414相對保留時間0.91.01.10.91.01.1B

48、保留時間9.2629.87310.7999.1289.97711.0979.3149.92310.8648.7299.56010.644相對保留時間0.91.01.10.91.01.1C保留時間9.2909.89110.8389.51610.40311.6059.1189.71410.6469.52610.42211.651相對保留時間0.91.01.10.91.01.1三、修訂品種替米考星時間（h）最大單個雜質(zhì)峰面積總雜質(zhì)峰面積最大單個雜質(zhì)含量（%）總雜質(zhì)含量(%)099148634056402.067.062100512336799012.087.63498531135518922.047

49、.36698572535988112.047.46898521635619302.047.391098487036191012.047.501298097835256372.037.311498962237128462.057.701699136636608532.067.591898572536096712.047.482099972836485852.077.562299711436860712.077.642499671536616502.077.59三、修訂品種硫氰酸紅霉素目前有4家原料生產(chǎn)廠，這次修訂3家企業(yè)提供了原料。增加了“紅霉素組分、有關(guān)物質(zhì)和硫氰鹽”的檢查，使標準更嚴謹完善。

50、方法依據(jù)：2010版獸藥典中紅霉素組分和有關(guān)物質(zhì)的液相色譜方法。 色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽溶液（取磷 酸氫二鉀8.7g，加水1000ml，用20%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至8.2）-乙腈（4060）為流動相；流速為每分鐘0.81.0ml；柱溫35；檢測波長為215nm。取紅霉素標準品適量，130加熱破壞4小時，加甲醇適量（10mg加甲醇1ml）溶解后，用磷酸鹽緩沖液（pH7.0)-甲醇（15:1）稀釋制成每1ml中約含4mg的溶液，取20l注入液相色譜儀。三、修訂品種紅霉素（紅霉素A組分）出峰順序：紅霉素C、紅霉素A、雜質(zhì)1、紅霉素B和紅霉素烯醇醚峰三、修訂品種硫氰酸紅霉素

51、生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)批號取樣量峰面積檢測結(jié)果干燥品計（%）A130411-1110.09883278299382.26%87.7130508-1110.09825279296783.14%81.6130507-1130.09812279091183.20%88.2B1203502300.10694257594078.92%83.91203502500.10598254251978.60%83.51203502400.10581253874278.61%83.5C2013032380.09623250449185.27%90.62013032390.09634249839184.97%89.720130

52、32400.09651251241385.30%90.2原料紅霉素A組分結(jié)果三、修訂品種硫氰酸紅霉素原料紅霉素A組分限度依據(jù)：根據(jù)紅霉素A的限度不得少于88.0%，按1:1硫氰酸成鹽計，紅霉素與硫氰酸紅霉素的分子量分別為733.94和793.02，則紅霉素A的理論限度應為：88.0%733.94/793.02100%=81.40%適當放寬限度為80.0%，各企業(yè)結(jié)果也均在此限度范圍內(nèi)。三、修訂品種硫氰酸紅霉素A/批號供試品溶液（峰面積）對照溶液峰面積（0.6倍）C峰B峰（0.7校正后）雜質(zhì)1（0.15校正后）烯醇醚（0.09校正后）雜質(zhì)總和最大雜質(zhì)峰130411-1113780695392（1

53、4309）73439（6610）1139584736193656（56194）130508-1113910296531（14480）70442（6340）1168595130193160（55896）130507-1133691195403（14310）67860（6107）1001694657594814（56888）結(jié)論不符合規(guī)定原料紅霉素B、C組分和有關(guān)物質(zhì)結(jié)果三、修訂品種紅霉素B/批號供試品溶液（峰面積）對照溶液峰面積（0.6倍）C峰B峰（0.7校正后）雜質(zhì)1（0.15校正后）烯醇醚（0.09校正后）雜質(zhì)總和最大雜質(zhì)峰1203502309609227796（19457）34901（52

54、35）97486（8774）7439839053108774（65264）1203502509790126757（18730）35499（5325）92651（8339）7480237543110956（66574）1203502409737127267（19087）35121（5268）90116（8110）7608937749106841（64105）結(jié)論符合規(guī)定原料紅霉素B、C組分和有關(guān)物質(zhì)結(jié)果三、修訂品種硫氰酸紅霉素C/批號供試品溶液（峰面積）對照溶液峰面積（0.6倍）C峰B峰（0.7校正后）雜質(zhì)1（0.15校正后）烯醇醚（0.09校正后）雜質(zhì)總和最大雜質(zhì)峰20130323821169

55、13914（9740）109874（9889）257342573459153（35492）2013032392083912786（8950）105139（9463）236652366557765（34659）2013032401891512228（8560）107275（9655）246712467161842（37105）結(jié)論符合規(guī)定紅霉素B、C組分和有關(guān)物質(zhì)結(jié)果紅霉素B、C組分和有關(guān)物質(zhì)限度依據(jù)：與紅霉素一致。三、修訂品種硫氰酸鹽紅霉素企業(yè)ABC批號130411-111130508-111130507-113120350230120350250120350240201303238201303239201303240結(jié)果（%）6.696.576.556.936.976.976.666.526.58結(jié)論符合規(guī)定硫氰酸鹽測定結(jié)果三、修訂品種硫氰酸紅霉素硫氰酸：測定方法：取本品約0.1g，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精密量取2ml，置50ml棕色量瓶中，