同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科ISO15189體系文件12乙型肝炎病毒前S1抗原測(cè)定

1、同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫組項(xiàng)目操作指導(dǎo)書TJYYJYKMY/XMZ712第2版標(biāo)題：乙型肝炎病毒前S1抗原測(cè)定第7章 第12號(hào)第 PAGE 3 頁(yè) 共 NUMPAGES 3 頁(yè)1 目的：檢測(cè)血清標(biāo)本中的乙型肝炎病毒前S1抗原。2. 適用范圍：同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室。3 項(xiàng)目名稱:乙型肝炎病毒前S1抗原測(cè)定。4 方法：酶免疫分析法。5 檢測(cè)原理：采用雙抗體夾心ELISA法，用抗- PreS1和抗-HBs作為固相化抗體和酶標(biāo)抗體，如果標(biāo)本中存在乙肝病毒 PreS1抗原，則形成抗體-抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，反之無(wú)顯色反應(yīng)。適用于血漿和血清類標(biāo)6. 試劑：6.1 品牌：上海阿

2、爾法生物技術(shù)有限公司。6.2 包裝規(guī)格：48人份。6.3 內(nèi)含物：每盒試劑含以下成分：6.3.1 微孔反應(yīng)條:12孔X4；6.3.2 酶聯(lián)試劑：3mlXl瓶；6.3.3 陽(yáng)姓對(duì)照：0.5ml Xl瓶；6.3.4 陰性對(duì)照：0.5mlXl瓶；6.3.5 洗滌液 (使用前25倍稀釋)：20mlXl瓶；6.3.6 顯色劑A：3mlXl瓶；6.3.7 顯色劑B：3mlXl瓶；6.3.8 終止掖：3mlXl瓶；6.3.9 封片：2片；6.3.10 說(shuō)明書：1份。7. 儀器品牌、型號(hào)：BIO-RAD-3550酶標(biāo)儀，測(cè)定波長(zhǎng)為450nm。8 操作步驟：8.1 打印工作單:8.1.1打開(kāi)LIS電腦及打印機(jī)電

3、源，8.1.2 雙擊齊效檢驗(yàn)系統(tǒng)，登陸工號(hào)與密碼；8.1.3 雙擊報(bào)告處理，單擊標(biāo)本申請(qǐng)信息，打開(kāi)標(biāo)本申請(qǐng)明細(xì)信息查詢，打開(kāi)左上角的所有信息，選擇未生成報(bào)告信息。8.1.4在檢驗(yàn)項(xiàng)目處選擇S1AG執(zhí)行查詢，點(diǎn)擊打印申請(qǐng)單，打印出工作單。8.2 排列被檢測(cè)標(biāo)本:根據(jù)工作單上的庫(kù)位號(hào)找出相應(yīng)標(biāo)本，并按工作單上的順序排列。8.3 按以下步驟開(kāi)始操作:8.3.1 每孔加入待測(cè)液50微升，設(shè)陰性陽(yáng)性對(duì)照各2孔，每孔加入陰性陽(yáng)性對(duì)照各50微升，并設(shè)空白對(duì)照1孔，置37溫育30分鐘。8.3.2 洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復(fù)五次后拍千。8.3.3 每孔加入酶結(jié)合物1滴或50微升（空

4、白對(duì)照孔除外）置37溫育30分鐘。8.3.4 同步驟2。8.3.5 每孔（空白對(duì)照孔除外）先 后加顯色液A 顯色液B一滴，充分混勻后，置37溫育15分鐘（避光）。8.3.6 每孔加入終止液一滴，混勻8.3.6 用酶標(biāo)儀讀數(shù) 取波長(zhǎng)450nm（建議使用雙波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀比色，參考波長(zhǎng)630 nm）先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。8.3.7 結(jié)果判斷：所有陰性對(duì)照 陽(yáng)性對(duì)照和標(biāo)本的讀數(shù)減去空白對(duì)照孔讀數(shù)即為計(jì)算值。陽(yáng)性對(duì)照讀數(shù)必須比陰性對(duì)照讀數(shù)大0.300。實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。結(jié)果判斷：臨界值=2.1陰性對(duì)照平均OD值測(cè)試標(biāo)本計(jì)算值大于或等于臨界值為陽(yáng)性。測(cè)試標(biāo)本計(jì)算值小于臨界值為陰性。陰性對(duì)照平均OD

5、值小于或等于0.05，按0.05計(jì)算；大于0.05時(shí)，按實(shí)際值計(jì)算。8.4 發(fā)送報(bào)告：詳見(jiàn)免疫報(bào)告發(fā)送程序。9 正常范圍：陰性。10 臨床意義：前S1抗原陽(yáng)性提示病毒復(fù)制活躍，具有較強(qiáng)的傳染性。11 病人準(zhǔn)備、標(biāo)本要求：標(biāo)本為血清時(shí)最好空腹采血，脂血、溶血不可使用。其它體液標(biāo)本無(wú)特殊要求12 注意事項(xiàng)：12.1 使用前試劑盒應(yīng)預(yù)先在室溫下平衡30分鐘。12.2 試劑盒在2-8度避光保存，起用后盡快用完。12.3 不同批次的試劑組分不能混用。12.4 檢測(cè)標(biāo)本不可用Nan3防腐，如需稀釋標(biāo)本，請(qǐng)用小牛血清稀釋。12.5 使用本試劑盒應(yīng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。12.6 用滴瓶滴加時(shí)，滴瓶應(yīng)垂直，用力和速度均勻；加樣后，充分混勻。12.