中藥鑒定學(xué)課件-中藥安全性評價

1、中藥的安全性評價 中藥的安全性評價（safety evalulation）就是利用毒理學(xué)和理化分析等方法，檢測中藥的毒性和有害物質(zhì)、評價其在臨床使用過程中的安全性。中藥的安全性評價是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中不可缺少的組成部分，也是保證臨床用藥安全可靠的重要措施。據(jù)統(tǒng)計，自19151994年間的110種醫(yī)藥學(xué)期刊上關(guān)于中藥不良反應(yīng)的報道累計達(dá)6061例。這些不良反應(yīng)主要集中在肝、腎、肺、心以及內(nèi)分泌系統(tǒng)、造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等諸多方面。近期在國外發(fā)生的中藥不良反應(yīng)，如日本的小柴胡事件、歐洲的馬兜鈴事件、新加坡、馬來西亞的黃連事件等，更加深了人們對中藥安全性的擔(dān)憂。然而，中醫(yī)藥體系具有自身

2、的特殊性，影響中藥安全性的因素也較為復(fù)雜，除劑量問題外，還涉及到品種、炮制、配伍、煎服方法等諸多因素，而且可變因素多，檢測難度大。因此，如何科學(xué)正確地評價中藥的安全性給中藥研究者提出了更高的要求。因為它既關(guān)系到臨床的用藥安全，又關(guān)系到中醫(yī)藥事業(yè)的順利發(fā)展，是一項具有戰(zhàn)略意義的重大研究課題。第一節(jié) 影響中藥安全性的物質(zhì)分類第一節(jié) 影響中藥安全性的物質(zhì)分類一、內(nèi)源性具有毒副作用的物質(zhì)這些化學(xué)成分大多是生物體的次生代謝產(chǎn)物（secondary metabolites），包括生物堿、萜類、揮發(fā)油類、酚類、醌類、內(nèi)酯類、苷類等。這些成分很早就作為藥物在臨床應(yīng)用，但隨著研究的不斷深入，逐漸地發(fā)現(xiàn)這些產(chǎn)生藥

3、效的物質(zhì)也常伴有不同程度的毒副作用。通常按其毒害的部位分類。 1具有消化系統(tǒng)毒性的中藥 常表現(xiàn)為胃腸道反應(yīng)，如惡心、嘔吐、上腹不適、腹痛、腹瀉等。同時，還有可能引起肝臟毒性反應(yīng)，如黃疸、肝腫大、肝炎、膽汁淤積、肝硬化、肝細(xì)胞壞死等。 根據(jù)臨床報道和動物實驗結(jié)果表明，常引起胃腸道反應(yīng)的中藥有：鴉膽子Brucea javanica （L.）Merr.、了哥王Wikstroemia indica（L.）C. A. Mey.、常山Dichroa febrifuga Lour.、苦楝子Melia azedarach L.、巴豆Croton tiglium L.等。具有肝臟毒性的中藥有：姜半夏Pinell

4、ia ternate（Thunb.）Breit.、桑寄生Taxillus chinensis（DC.）Danser、蒲黃Typha angustifolia L.等。天花粉Trichosanthes kirilowii Maxim.或其注射劑可引起肝功能異常；千里光Senecio argunensis Turcz.可造成肝內(nèi)血管閉塞；野百合Crotalaria sessiliflora L.提取物可引起急性肝炎。川楝子Melia toosendan Sieb. et Zucc.、蒼耳子Xanthium sibiricum Patr.、草烏Aconitum kusnezoffii Reichb.

5、、蓖麻子Ricinus communis L.、雷公藤Tripterygium wilfordii Hook. f.等中藥的煎劑可導(dǎo)致肝損害；大黃Rheum palmatum L.、澤瀉Alisma orientalis（Sam.）Juzep.或其靜脈注射液會引起膽紅素代謝障礙導(dǎo)致黃疸。 2具有泌尿系統(tǒng)毒性的中藥 毒性癥狀有尿少、尿閉、尿頻、尿急、浮腫、血尿、蛋白尿、尿毒癥、腎功能衰竭等。關(guān)木通Aristolochia manshuriensis Kom.、廣防己Aristolochia fangchi Y. C. Wu ex L. D. chou et S. M. Hwang。另據(jù)報道，具有

6、腎臟毒性的常用中藥還有草烏Aconitum kusnezoffii Reichb.、巴豆Croton tiglium L.、天花粉Trichosanthes kirilowii Maxim.、蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L. Koch、斑蝥Mylabris phalerata Pallas、光慈菇Tulipa edulis（Miq.）Baker、益母草Leonurus heterophyllus Sweet、厚樸Magnolia officinalis Rehd. et Wils.等。3具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性的中藥 癥狀為口唇麻木、嗜睡、抽搐、驚厥、牙關(guān)

7、緊閉、眩暈、意識模糊、煩躁不安、昏迷、瞳孔縮小或放大、嚴(yán)重者死亡。 臨床常用的中藥: 馬錢子Strychnos nux-vomica L.所含士的寧（strychnine）；顛茄屬Hyoscyamus植物含有的阿托品（atropine）、天仙子胺（hyoscyamine）；西紅花Crocus sativus L.所含的藏紅花素（crocetin）；罌粟Papaver somniferum L.所含的嗎啡（morphine）都被動物實驗證實具有不同程度的中樞神經(jīng)毒性。4具有造血系統(tǒng)毒性的中藥 癥狀是溶血性貧血、缺血性貧血、白細(xì)胞減少、粒細(xì)胞缺乏、再生障礙性貧血、嚴(yán)重者導(dǎo)致死亡?？梢鹪煅到y(tǒng)毒性

8、反應(yīng)的中藥有:雷公藤Tripterygium wilfordii Hook. f.、光慈菇Tulipa edulis（Miq.）Baker、八角蓮Dysosma versipellis（Hance）M. Cheng、青風(fēng)藤Sinomenium acutum（Thumb.）Rehd. et Wils.以及正清風(fēng)痛寧、蝮蛇抗栓酶、穿琥寧注射液、小檗堿（berberine）、枯痔寧、感冒清、感冒通等中成藥制劑。5具有心血管系統(tǒng)毒性的中藥 常見的心血管毒性的癥狀是心律失常、心悸、胸悶、循環(huán)衰竭、嚴(yán)重者死亡。烏頭Aconitium carmichaeli Debx.、附子及其炮制品均為臨床常用中藥，具有

9、鎮(zhèn)靜、強心、抗腫瘤等作用，常用于多種痛癥的治療。其主要藥效成分烏頭堿（aconitine）、中烏頭堿（mesaconitine）、次烏頭堿（hypaconitine）等可引起心血管毒性，并可損害外周脊髓。其它具有心血管毒性反應(yīng)的中藥還有蟾酥Venenum Bufonis、藜蘆Veratum nigrum L.、黃花夾竹桃Thevetia peruviana（Pers.）. K. Schum.等。6具有呼吸系統(tǒng)毒性的中藥 癥狀有咳嗽、呼吸困難、肺水腫、呼吸麻痹、呼吸衰竭、甚至窒息死亡。 常見產(chǎn)生呼吸系統(tǒng)毒性的中藥有： 苦杏仁Semen Armeniacae Amarum和桃仁Semen Pers

10、icae所含苦杏仁苷（amygdalin）、 鬧羊花Rhododendron molle G. Don所含毒性成分八厘麻毒素（andromedotoxin）、 烏頭Aconitium carmichaeli Debx.和附子中所含成分烏頭堿（aconitine）、 細(xì)辛Asarum heterotropoides Fr. Schmidt var. mandshuricum（Maxim.）Kitag.所含成分甲基丁香酚（methyleugenol）等，這些成分主要是通過影響延髓呼吸中樞引起呼吸困難乃至呼吸衰竭。7具有免疫系統(tǒng)毒性的中藥 最常見的免疫系統(tǒng)的毒性就是過敏反應(yīng)。通常表現(xiàn)為皮疹、蕁麻疹、

11、哮喘、發(fā)熱、黏膜水腫等癥狀，有時甚至?xí)?dǎo)致過敏性休克等嚴(yán)重后果。 常引起過敏反應(yīng)的大多是中藥注射劑。造成這種毒性作用的原因之一就是中藥注射劑中所含的大分子動、植物蛋白，以及具有抗原或半抗原性質(zhì)的物質(zhì)，如綠原酸、酶、皂苷和角質(zhì)蛋白等。有些中藥如雷公藤Tripterygium wilfordii Hook. f.、防己Stephania tetrandra S. Moore等，還存在不同程度的免疫抑制作用。8具有致畸胎、致突變及致癌作用的中藥 有些中藥可干擾胚胎的正常發(fā)育而引起畸胎。具有這種生殖毒性的中藥有雷公藤Tripterygium wilfordii Hook. f.、棉酚（gossypol

12、）、昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum（Lvl.）Hutch.、苦瓜Momordica charantia L.、 川楝子Melia toosendan Sieb.et Zucc.、天花粉蛋白（trichosanthin，TCS）有些中藥可引起基因突變和癌變，如檳榔Areca catechu L.、款冬花Tussilago farfara L.、千里光Senecio argunensis Turcz.、廣防己Aristolochia fangchi Y. C. Wu ex L. D. chou et S. M. Hwang、關(guān)木通Aristolochia manshur

13、iensis Kom.、細(xì)辛Asarum heterotropoides Fr. Schmidt var. mandshuricum（Maxim.）Kitag.、土荊芥Chenopodium ambrosioides L.、雄黃(Realgar)、砒霜(Arsenouse oxide)、土貝母Bolbostemma paniculatum(Maxim.)Franq.、野百合Crotalaria sessiliflora L.等。如果長期過量使用這類中藥，可增加基因突變和引發(fā)癌癥的概率。此外，石菖蒲Acorus tatarinowii Schott、花椒Zanthoxylum bungeanum

14、 Maxim.、八角茴香Illicium verum Hook. f.等植物所含的黃樟醚（safrole）和青木香Aristolochia debilis Sieb. et Zucc.等所含的N-硝基化合物等，現(xiàn)已證實可誘發(fā)動物產(chǎn)生肝癌。9具有內(nèi)分泌系統(tǒng)毒性的中藥 中藥引起內(nèi)分泌毒性的研究報道不多，但較為明確地是含重金屬中藥對內(nèi)分泌具有較大的毒性，例如砒霜和朱砂。砷元素破壞人和動物的內(nèi)分泌系統(tǒng)，通常是以阻斷或模仿激素的方式來干擾正常激素的作用。二、外源性具有毒害作用的物質(zhì)外源性具有毒害作用的物質(zhì)主要來自中藥材的栽培或養(yǎng)殖、采收加工、包裝、運輸和貯藏等環(huán)節(jié)。此外，中藥制劑生產(chǎn)中所涉及到的輔料、提

15、取溶劑、工藝設(shè)備、接觸器皿等也都是外源性有毒副作用物質(zhì)污染的重要途徑。 1農(nóng)藥類有害物質(zhì) 目前我國生產(chǎn)和使用的農(nóng)藥主要分為5類：第一類為有機磷農(nóng)藥，屬磷酸酯類或硫代磷酸酯類化合物，是應(yīng)用最廣泛的農(nóng)藥。長期少量接觸有機磷農(nóng)藥會出現(xiàn)慢性中毒癥狀，表現(xiàn)為神經(jīng)衰弱綜合征頭痛、頭昏、乏力、惡心、食欲不振、視物模糊。第二類為氨基甲酸酯類農(nóng)藥，屬中低毒性農(nóng)藥?？山?jīng)呼吸道、消化道侵入人體，也可經(jīng)皮膚、黏膜緩慢吸收，中毒癥狀與輕度有機磷農(nóng)藥中毒相似。第三類為殺蟲脒，皮膚吸收或消化道侵入人體，可直接對心肌和血管平滑肌引起損害以及嚴(yán)重的高鐵血紅蛋白癥造成缺氧，最終導(dǎo)致組織或器官的損害。第四類為溴氰菊酯（凱嗪靈），毒

16、癥狀主要表現(xiàn)為皮膚刺激，有燒灼感、紅斑、丘疹；神經(jīng)系統(tǒng)癥狀表現(xiàn)為：惡心、嘔吐、腹痛、頭痛、頭昏、乏力、肌肉跳動、流涎、視物模糊。第五類為百草枯，毒性非常強，不但損害腎小管，導(dǎo)致蛋白尿、血尿，引起腎功能損害，而且極易引起進(jìn)行性呼吸困難，最終導(dǎo)致呼吸衰竭而死亡，還會造成心、肝、腎上腺中毒，引起相應(yīng)癥狀和體征。由于中藥的需求量日漸增多，藥農(nóng)們不得不頻繁地使用各種農(nóng)藥，預(yù)防病蟲害，以達(dá)到提高中藥栽培品的產(chǎn)量的目的。因此，造成了中藥中農(nóng)藥的污染嚴(yán)重。目前，中藥常見的農(nóng)藥殘留（pesticide residues）種類主要有三大類：有機氯農(nóng)藥，如六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）、及五氯硝基苯（PCNB）

17、等。有機磷農(nóng)藥，如敵敵畏、對硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二嗪農(nóng)、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、乙酰甲胺磷等。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥，如氯氰菊酯、氰戊菊酯及溴氰菊酯等。2重金屬類有害物質(zhì) 在常見的重金屬元素中，鉛（Pb）、鎘（Cd）、汞（Hg）、砷（As）是目前被公認(rèn)的對人體最有害的4種元素。這些物質(zhì)的毒性作用主要是通過與體內(nèi)一系列蛋白質(zhì)、酶和氨基酸內(nèi)的官能團(tuán)上的巰基（-SH）和雙硫鍵（-S-S-）牢固地結(jié)合在一起，從而使蛋白質(zhì)變性，酶失去活性，組織細(xì)胞出現(xiàn)結(jié)構(gòu)和功能上的改變。鉛主要損害造血、消化、神經(jīng)、血液、心血管和泌尿系統(tǒng)。鎘可抑制各種氨基酸脫羧酶、組氨酸酶、淀粉酶、過氧化物酶的

18、活性，從而使肝、腎等組織中的酶系統(tǒng)正常功能受損。此外，鎘還有致癌、致畸、導(dǎo)致基因突變的作用。汞主要是損害腎臟，造成腎功能衰竭。汞中毒還嚴(yán)重影響人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)、使聽力減弱、語言失控、四肢麻痹甚至造成癡呆。砷主要是擴張毛細(xì)血管，麻痹血管舒張中樞，使腹腔臟器嚴(yán)重充血，引起肝、腎、心等實質(zhì)臟器的損害。長期吸收砷化合物會誘發(fā)肺癌和呼吸道腫瘤。3黃曲霉毒素 黃曲霉菌（aspergillus flavus）含多種黃曲霉毒素（aflatoxins），有強烈的致肝損害和致癌作用。4其它外來雜質(zhì) 中藥在采收、加工和貯藏等過程中有可能混入其它有毒有害物質(zhì)，如某些中藥在產(chǎn)地加工時，為了使藥材色澤潔白，防止霉?fàn)€，常在

19、干燥前后用硫黃熏制，造成藥材中二氧化硫（SO2）殘留。除此之外，砂石、泥塊、塵土、明礬、鹽等無機化合物以及其它非藥用部位的雜質(zhì)都直接影響著中藥的安全性。因此，中藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中常設(shè)置有專項檢查。第二節(jié) 中藥安全性評價方法 中藥安全性評價方法也分為二大類：一類是屬于中藥毒理學(xué)方面的實驗方法。主要分為三個階段：臨床前的中藥毒理學(xué)研究、臨床中藥毒理學(xué)以及中藥上市后的不良反應(yīng)監(jiān)測。另一類是物理和化學(xué)分析實驗方法。此類方法主要是利用經(jīng)典的或現(xiàn)代的物理和化學(xué)手段，針對產(chǎn)生毒副作用的中藥成分和有害物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析和測定。一、農(nóng)藥殘留量的檢查方法及限量指標(biāo)（一）農(nóng)藥殘留量檢測樣品的處理 1取樣原則 2樣

20、品的前處理 常規(guī)的提取純化方法 先進(jìn)的提取方法：固相萃取、固相微萃取、超臨界流體萃取、微波輔助萃取、凝膠滲透色譜和免疫親和色譜等先進(jìn)方法 （二）農(nóng)藥殘留量的測定方法1毛細(xì)管氣相色譜測定法 采用高效能的毛細(xì)管氣相色譜柱（CGC）和火焰光度檢測器或高靈敏度的電子捕獲器（ECD）分離和檢測常見的農(nóng)藥的殘留量。具有靈敏度高、選擇性強等特點 。應(yīng)用于中藥中的有機磷、有機氯和擬蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量的測定。 2氣相-紅外光譜測定法 可將多種微量的混合農(nóng)藥成分分離又可給出明確的結(jié)構(gòu)信息 。 缺點：靈敏度較低，檢測限每組約100ng。光管的溫度不能高于30，否則會影響色譜柱的溫度，使信號強度降低，噪聲急劇增長，造

21、成聯(lián)機檢測困難。譜庫檢索是GC-FTIR定性的主要方法，而農(nóng)藥的氣相紅外光譜庫存量很小，嚴(yán)重地影響了檢測結(jié)果的分析。 （三）農(nóng)藥殘留量的其他測定方法填充柱氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、超臨界流體色譜法、薄層色譜法、毛細(xì)管電泳色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法、流動注射化學(xué)發(fā)光法、共振光散射比濁法以及基于酶抑制原理的分光光度法等。（四）限量指標(biāo)中國藥典（2005年版）在甘草和黃芪項下規(guī)定了每2克藥材所含有機氯類農(nóng)藥限量為：六六六（總BHC）不得過千萬分之二；滴滴涕（總DDT）不得過千萬分之二；五氯硝基苯（PCNB）不得過千萬分之一。二、重金屬及有害元素的檢查方法及限

22、量指標(biāo) （一）重金屬及有害元素檢測樣品的前處理 傳統(tǒng)的方法：濕法消化 干法灰化 先進(jìn)的方法：微波消解技術(shù) 梯度升壓微波消解技術(shù) （二）重金屬及有害元素檢測方法 1比色法 目前中國藥典（2005年版）中收載的重金屬總量的測定是比色法。2原子熒光光度法 砷、銻、硒、鍺、錫、鉛、鋅、汞3原子吸收分光光度法 分為冷原子吸收法、石墨爐原子吸收法和火焰原子吸收法 （1）冷原子吸收法：冷原子吸收法較適合測定汞的含量。其主要原理是利用汞在常溫下蒸氣壓較高和在空氣中不易氧化的特點，用還原劑將高價汞還原成汞蒸氣，汞蒸氣對其特征譜線（253.7nm）具有強烈吸收作用，用載氣將汞蒸氣吹出，通過石英吸收池，汞蒸氣對汞空

23、心陰極燈的輻射產(chǎn)生吸收，從而達(dá)到定量分析的目的。（2）石墨爐原子吸收法： 較適合于鉛、鎘等重金屬元素。其主要原理是利用電能加熱盛放試樣的石墨容器，使之達(dá)到高溫，以實現(xiàn)試樣的蒸發(fā)和原子化，達(dá)到原子化的樣品通過爐內(nèi)光路產(chǎn)生吸收的目的。（3）火焰原子吸收法：銅?；鹧嬖游辗ǖ脑硎抢没瘜W(xué)火焰實現(xiàn)原子化，使被測元素由試樣中轉(zhuǎn)入氣相，并解離為基態(tài)原子。原子化器由霧化器、霧化室和燃燒器三分部分組成，霧化器將試液霧滴均勻化，然后再噴入火焰中，使進(jìn)入火焰的微粒原子化。通過測定被測元素的吸收度，計算出被測元素的含量。 4電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（ICP-MS） 原理：將樣品經(jīng)由高頻等離子炬激發(fā)電離后，在

24、電磁場中離子按照質(zhì)荷比進(jìn)行定性和定量，具有譜線簡單，干擾少、檢出限極低，適應(yīng)范圍寬達(dá)8個數(shù)量級和同時多元素測定等優(yōu)點。電感耦合等離子體質(zhì)譜配備有溶液進(jìn)樣、電熱蒸發(fā)、激光燒蝕進(jìn)樣系統(tǒng) 。 5電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜ICP-AES 高頻感應(yīng)電流產(chǎn)生的高溫將反應(yīng)氣加熱、電離、利用元素發(fā)出的特征譜線進(jìn)行測定，譜線強度與重金屬量成正比。 ICP-AES具有靈敏度高，干擾小，線性寬，可同時或順序測定多種元素，特別是對高溫金屬元素可以進(jìn)行快速分析，但靈敏度較ICP-MS略差，可用于除鎘、汞以外的大多數(shù)重金屬元素的測定。6高效液相色譜法利用痕量金屬離子與有機試劑形成穩(wěn)定的有色絡(luò)合物，然后利用HPLC分離，紫外-可見檢測器檢測，可實現(xiàn)多元素的同時測定。卟啉類試劑能和多種金屬元素生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，且靈敏度較高，因而常用來作為金屬離子的衍生試劑，但絡(luò)合試劑的選擇有限，使HPLC的廣泛應(yīng)用受到限制。 7酶抑制法利用重金屬離子與形成酶活性中心的巰基或甲巰基結(jié)合后，改變了