實驗一雙向瓊脂擴散試驗

1、關(guān)于實驗一雙向瓊脂擴散試驗第一張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第二張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第三張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第四張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第五張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗?zāi)康模毫私怆p向瓊脂擴散的原理和用途。掌握抗體效價的測定方法。觀察抗原、抗體在瓊脂板中形成的沉淀線。第六張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月可溶性抗原（如細菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他來源的蛋白質(zhì)、多糖質(zhì)、類脂體等）與其相應(yīng)的抗體相遇后，在電解質(zhì)參與下，抗原抗體結(jié)合形成白色絮狀沉淀，出現(xiàn)白色沉淀線，此種現(xiàn)象稱為沉淀反應(yīng)。沉淀

2、反應(yīng)中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,與沉淀原發(fā)生反應(yīng)的抗體稱為沉淀素（precipitin）。沉淀反應(yīng)主要包括有環(huán)狀沉淀反應(yīng)、絮狀沉淀反應(yīng)和瓊脂擴散反應(yīng)。實驗原理第七張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第八張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 將可溶性抗原和抗體置于瓊脂凝膠板的對應(yīng)孔中，兩者各自在凝膠中向四周自由擴散， 當(dāng)抗原與抗體相遇，在比例合適時形成可見的白色沉淀線。沉淀線的特征與抗原抗體的濃度、純度和擴散速率等有關(guān)。雙向瓊脂擴散試驗第九張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月一種抗原抗體系統(tǒng)只出現(xiàn)一條沉淀帶根據(jù)沉淀帶出現(xiàn)的數(shù)目、位置以及相鄰二條沉淀帶之間的

3、融合、交叉、分枝等情況，就可了解該復(fù)合抗原的組成。第十張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 A：Ag、Ab濃度及擴散率近似；B ： Ag、Ab濃度近似，擴散率Ag Ab ；C：Ag、Ab濃度近似，擴散率Ag Ab ；D： 擴散率近似，濃度Ag Ab ；E：濃度Ag Ab，擴散率Ag Ab ；F：濃度Ag Ab，擴散率Ag Ab沉淀線形狀、位置與抗原抗體擴散率及濃度的關(guān)系第十一張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 (1) 沉淀線吻合：待檢抗原與標(biāo)準抗原完全相同。(2) 沉淀線相切：待檢抗原中含有與標(biāo)準抗原相同的抗原，還含有另外的抗原與抗血清相對

4、應(yīng)。(3) 沉淀線相交：待檢抗原有與抗血清對應(yīng)的抗原，但和標(biāo)準抗原不同。(4) 沉淀線部分吻合：待測抗原和標(biāo)準抗原性質(zhì)相同，但含量較低。A1：待檢抗原；A2：標(biāo)準抗原第十二張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月抗體效價滴定 用梅花型孔，中間放抗原，周圍孔放下不同稀釋度的相應(yīng)抗體，以出現(xiàn)沉淀線的最高稀釋倍數(shù)為該抗體的效價。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗第十三張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月材料與試劑1瓊脂粉2平皿3打孔器4生理鹽水或其他緩沖液5. 抗原、抗體第十四張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第十五張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月操作方法1稱取一定量的瓊脂粉，按1.5%

5、的比例加入生理鹽水或緩沖液，煮沸融化。2將融化的瓊脂倒入平皿內(nèi)，使厚度2mm3mm。自然冷卻。3根據(jù)要求（孔徑即孔的直徑，孔距即兩孔圓心之間的距離，包括兩孔的半徑35mm）打成梅花形孔圖。第十六張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第十七張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月4挑出孔內(nèi)瓊脂，注意不要挑破孔緣。5在火焰上緩緩加熱，使孔底邊緣的瓊脂少許熔化，以封底，以免加樣后液體從孔底滲漏。6吸取樣品加入孔內(nèi)(約15ul)，以加滿為度。7加畢后，蓋上平皿蓋，將平皿翻過來，置濕盤中，37自由擴散24h48h。第十八張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第十九張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十張，PPT共二十三頁，創(chuàng)作于2022年6月結(jié)果判定用以檢測抗原或比較抗原差異時，將抗血清置中心孔，將待測抗原或需比較的抗原置于周圍相鄰孔。若出現(xiàn)沉淀帶完全融合，證明為同種抗原；若二者有部分相連，表明二者有共同抗原決定簇；若二條沉淀線相互交叉，說明二者抗原完全不同。第二十一張，PPT共二十