動(dòng)物布病診斷技術(shù)

1、關(guān)于動(dòng)物布病診斷技術(shù)第一張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月布魯氏菌病檢驗(yàn)方法：依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)：GB/T18646-2002 適用范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物布魯氏菌病的診斷技術(shù)。 本規(guī)定的虎紅平板凝集試驗(yàn)、乳牛全乳環(huán)狀試驗(yàn)適用于家畜布病田間篩選試驗(yàn)和乳牛場(chǎng)布病的監(jiān)測(cè)及診斷泌乳母牛布病的初篩試驗(yàn)；試管凝集試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)適用于診斷羊種、牛種和豬種布病感染的家畜。 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的試管凝集試驗(yàn)不適用于犬種和綿羊副睪種布病感染家畜的檢疫。第二張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月虎紅平板凝集試驗(yàn)第三張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月材料準(zhǔn)備抗原、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、陰性血清由指標(biāo)單位提供，按說(shuō)明用。

2、受檢血清應(yīng)新鮮，無(wú)明顯蛋白凝塊，無(wú)溶血和無(wú)腐敗氣味。準(zhǔn)備一塊潔凈玻璃板，畫成若干個(gè)4厘米小格或虎紅平板凝集試驗(yàn)卡片。吸管或移液器，適于滴加0.03ml（即300l）液體。牙簽或火柴桿供攪拌用。第四張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第五張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月操作方法 將玻璃板上各格標(biāo)記受檢血清號(hào)(或在布病反映卡上操作)，然后加相應(yīng)血清0.03ml。圖1.在受檢血清旁滴加抗原0.03ml。用牙簽類小棒攪動(dòng)血清和抗原使之混合。圖2每次試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陰性、陽(yáng)性血清對(duì)照?qǐng)D1圖2第六張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月結(jié)果判定 判定結(jié)果前最好將抗原與血清混合物搖動(dòng)幾下.如圖3.

3、在陰性、陽(yáng)性血清對(duì)照成立的條件下，方可對(duì)被檢血清進(jìn)行判定。被檢血清在4分鐘內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象者判為陽(yáng)性（+），無(wú)凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性（）。圖4.圖5每份被檢血清在規(guī)定時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)凝集反應(yīng)者判為陽(yáng)性，不出現(xiàn)凝集為陰性反應(yīng)。圖3第七張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月陽(yáng)性陰性圖 4第八張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月陰性陽(yáng)性圖5第九張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月注意事項(xiàng)： 本抗原適合于大數(shù)量田間檢疫和篩選診斷試驗(yàn)用。本試驗(yàn)出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的動(dòng)物，需經(jīng)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)或其它輔助試驗(yàn)方可定性。本抗原使用前應(yīng)充分搖勻，方可使用。凡本抗原出現(xiàn)污染或搖不散的凝集塊者不得使

4、用。第十張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月布魯氏菌病乳環(huán)試管凝集試驗(yàn) 第十一張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月布病全乳環(huán)狀抗原，由指標(biāo)單位提供，按說(shuō)明用。 乳樣受檢乳樣須為新鮮全乳。采乳樣時(shí)應(yīng)將母畜的乳房用溫水洗凈、擦干，然后將乳液擠入潔凈的器皿中。采集的乳樣夏季時(shí)應(yīng)于當(dāng)日內(nèi)檢查；保存于2時(shí)，7d內(nèi)仍可適用。需要器具有：水浴鍋、100l移液器、1000l移液器、小試管、試管架、移液器槍頭、乳環(huán)抗原等。材料準(zhǔn)備：第十二張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十三張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月操作方法 取乳樣1ml，加于滅菌凝集試驗(yàn)管內(nèi)。取充分震蕩混合均勻的全乳環(huán)狀

5、抗原1滴（約50l）加入乳樣中充分混勻。置3738水浴中60min。加熱后取出試管勿使震蕩，立即進(jìn)行判定。第十四張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月結(jié)果判定 強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)（+），乳柱上層乳脂形成明顯紅色環(huán)帶，乳柱白色，臨界分明；陽(yáng)性反應(yīng)（+），乳脂層的環(huán)帶呈紅色，但不顯著，乳柱略帶顏色；弱陽(yáng)性反映（+）乳脂層的環(huán)帶顏色較淺，但比乳柱上顏色略深；疑似反映（）乳脂層的環(huán)帶顏色不明顯，于乳柱分界不清，乳柱不褪色；陰性反映（）乳柱上層無(wú)任何變化，乳柱顏色均勻。第十五張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月乳環(huán)試驗(yàn)陽(yáng)性第十六張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月乳環(huán)試驗(yàn)陽(yáng)性第十七張，PPT共三

6、十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月乳環(huán)試驗(yàn)陰性，乳汁顏色均勻，未見(jiàn)紅色乳環(huán)第十八張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月布魯氏菌病試管凝集試驗(yàn) 第十九張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月材料準(zhǔn)備 稀釋液：0.5%石碳酸生理鹽水。檢驗(yàn)羊血清時(shí)用含0.5%石碳酸的10%鹽溶液，如果血清稀釋用含0.5%石碳酸的10%鹽溶液，抗原的稀釋亦用含0.5%石碳酸的10%鹽溶液。1.2抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清由指標(biāo)單位提供，按說(shuō)明書使用。1.3 凝集試驗(yàn)管（三分管）、試管架、吸管及溫箱等。 3分是英制管道直徑長(zhǎng)度的叫法，換算成毫米為9.525mm，這里指內(nèi)徑約為10mm試管第二十張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于

7、2022年6月操作方法 1.按常規(guī)方法采血分離血清。2.運(yùn)送和保存血清樣品時(shí)防止凍結(jié)和受熱，以免影響凝集價(jià)。若3d內(nèi)不能送檢，按每9ml血清加1ml5%石碳酸生理鹽水防腐，也可冷藏方法運(yùn)送血清。3.被檢血清的稀釋以羊和豬為例，每份血清用4支凝集試管。3.1 第1管標(biāo)記檢驗(yàn)編碼后加1.15mL稀釋液。3.2 第24管各加入0.5mL稀釋液。3.3 然后向第1管內(nèi)加入0.1mL被檢血清，并混合均勻。充分混勻后棄去混合液0.25mL。第二十一張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3.4 取0.5ml混合液加入第2管，混合均勻。3.5 再吸第2管混合液0.5mL至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第

8、4管棄去混勻液0.5mL。3.6 稀釋完畢，從第1至第4管的血清稀釋度分別為1:12.5、1:25、1:50和1:100。3.7 牛、馬、鹿、駱駝血清稀釋法與上述基本一致，差異是第1管加1.2mL稀釋液和0.05mL被檢血清。第二十二張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3.8 將0.5mL稀釋好（具體稀釋倍數(shù)參照試劑生產(chǎn)廠家的要求，一般是1：10）的抗原加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，羊和豬的血清稀釋則依次變?yōu)?:25、1:50、1:100和1:200，牛、馬和駱駝的血清稀釋度則依次變?yōu)?:50、1:100、1:200和1:400。大規(guī)模檢疫時(shí)也可只用2個(gè)稀釋度，即牛、馬、鹿、駱駝

9、用1：50和1：100，豬、山羊、綿羊和狗用1:25和1:50。 第二十三張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月布魯氏菌病試管凝集反應(yīng)試驗(yàn)（羊、豬） 1號(hào)管2號(hào)管3號(hào)管4號(hào)管.n0.5%石炭酸10%鹽水1.150.50.50.5.最后一管棄去0.5ml 被檢血清或陽(yáng)陰性血清對(duì)照加0.1ml血清，混勻后棄去0.25ml最后體積為1ml0.50.50.5. 試管中加抗原以前液體量0.50.50.50.50.50.5加抗原液（1：10稀釋好的） 0.50.50.50.50.50.5血清稀釋度1:251:501:1001:200.充分混勻3718-24小時(shí)溫育 結(jié)果判定 +-吸0.5ml第二十四張

10、，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月布魯氏菌病試管凝集反應(yīng)試驗(yàn)（牛） 1234.n0.5%石炭酸鹽水1.20.50.50.5.最后一管棄去0.5ml 被檢血清或陽(yáng)陰性血清對(duì)照加0.05ml血清，混勻后棄去0.25ml最后體積為1ml0.50.50.5.試管中加抗原以前液體量0.50.50.50.50.50.5加抗原液（1：10稀釋好的） 0.50.50.50.50.50.5血清稀釋度1:501:1001:2001:400.充分混勻3718-24小時(shí)溫育 結(jié)果判定 +-吸0.5ml第二十五張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3.9 每次試驗(yàn)均應(yīng)設(shè)陽(yáng)性血清、陰性血清和抗原對(duì)照，a)陰性血

11、清對(duì)照：陰性血清的稀釋和加抗原的方法與被檢血清相同。b)陽(yáng)性血清對(duì)照：陽(yáng)性血清須稀釋到原有滴度，加抗原的方法與被檢血清相同。c)抗原對(duì)照：稀釋好的抗原液0.5ml,再加0.5ml稀釋液，觀察抗原是否有自凝現(xiàn)象。 3.10 將稀釋好各管置3740溫箱24小時(shí)，取出檢查并記錄結(jié)果。第二十六張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月結(jié)果判定 1供判定參照比濁管制備方法略2 結(jié)果判定2.1凝集成度分為：參照比濁管，按各試管上層液體清亮度判讀菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮；菌體凝集顯著，液體50%清亮；凝集物有沉淀，液體25%清亮；凝集物無(wú)沉淀，液體均勻混濁。第二十七張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2.2牛、馬、鹿、駱駝1：100血清稀釋，豬、山羊、綿羊和狗1：50血清稀釋，出現(xiàn)“”以上凝集現(xiàn)象時(shí)，被檢血清判定為陽(yáng)性。2.3牛、馬、鹿、駱駝1：50血清稀釋，豬、山羊、綿羊、狗1：25血清稀釋，出現(xiàn)“”以上凝集現(xiàn)象時(shí)，被檢血清判定為可疑反應(yīng)?？梢煞磻?yīng)家畜經(jīng)34周后重檢，如果仍為可疑，該牛、羊判為陽(yáng)性。豬和馬經(jīng)重檢仍保持可疑水平，而農(nóng)場(chǎng)的牲畜沒(méi)有臨床癥狀和大批陽(yáng)性患畜出現(xiàn)，該畜被判為陰性。第二十八張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月試管凝集試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果（液體上層清亮，底部凝集）第