基因工程藥物

1、關(guān)于基因工程藥物第一張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月基因工程制藥：指利用重組DNA技術(shù)，結(jié)合發(fā)酵工程、細(xì)胞工程、酶工程等現(xiàn)代生物技術(shù)研制預(yù)防和治療人類、動(dòng)物重大疾病的蛋白質(zhì)藥物、核酸藥物以及生物制品的一門技術(shù)。第二張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月28.1 基因工程藥物的發(fā)展概況8.1.1 基因工程藥物的發(fā)展簡(jiǎn)史與現(xiàn)狀8.1.2 基因工程藥物的特點(diǎn)8.1.3 基因工程藥物的研發(fā)過(guò)程第三張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月38.1.1 基因工程藥物的發(fā)展簡(jiǎn)史與現(xiàn)狀1973年，Cohen等，tetr和strr成功重組，基因工程拉開序幕1974年，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，獲得相

2、應(yīng)抗性1976年，Genentech公司成立1982年，授權(quán)Eli Lilly公司基因重組動(dòng)物疫苗抗眼球病疫苗生產(chǎn)和使用；人胰島素生產(chǎn)和使用?？藙诎賾n解第四張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月41984年，凝血因子VIII1985年，注射用促生長(zhǎng)素1987年，tPA。第五張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月5國(guó)家 發(fā)展策略 投入資金臨床試驗(yàn)上市品種 產(chǎn)值美國(guó)支持基礎(chǔ)創(chuàng)新，主導(dǎo)領(lǐng)先水平100億US$/年350110200億US$/年日本合作，實(shí)用化，信息化2千億日元/年50種以上50五千億日元/年德國(guó)創(chuàng)新，轉(zhuǎn)讓，加大投入10068中國(guó)重視，優(yōu)先、優(yōu)惠20余種2030億人民幣主要國(guó)家基

3、因工程制藥產(chǎn)業(yè)化概況第六張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月6基因工程藥物現(xiàn)狀與前景2001年，生物技術(shù)公司4284家（上市622家），銷售總額348億美元，其中基因藥物占70%，250億美元；美國(guó)，1466家，占55%；銷售總額285億美元，占82；上市公司318家，占55%；日本歐洲表8.1第七張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月7我國(guó)國(guó)情“起步晚，發(fā)展快；項(xiàng)目不多，仿制為主；重復(fù)生產(chǎn)，后勁不足”。IL-2，干擾素，粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF），EPO，生長(zhǎng)激素。表8.3第八張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月88.1.2 基因工程藥物的特點(diǎn)1、高技術(shù)：人才、技術(shù)2、

4、長(zhǎng)周期：實(shí)驗(yàn)室、中試、臨床、規(guī)?；a(chǎn)、市場(chǎng)商品化階段、監(jiān)督環(huán)節(jié)3、高投入4、高風(fēng)險(xiǎn)5、高收益第九張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月9基因工程藥物的優(yōu)點(diǎn)1、可以得到天然狀態(tài)難以獲得的生理活性物質(zhì)，改造成新藥 胰島素2、使生理活性物質(zhì)在各種反應(yīng)器中獲得高表達(dá)，符合臨床和研究需要3、改造生理活性物質(zhì)，提高其活性：速效、長(zhǎng)效4、可以挖掘和開發(fā)更多的新藥，獲得新物質(zhì)第十張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月108.1.3 基因工程藥物的研發(fā)過(guò)程1、實(shí)驗(yàn)室研究階段（discovery，research）2、基因工程藥品的開發(fā)階段（development）3、基因工程藥品的臨床試驗(yàn)（comme

5、rcialization）: 、期臨床試驗(yàn)4、新藥申請(qǐng)和上市第十一張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月118.2 基因工程制藥的下游技術(shù)8.2.1 基因工程菌的規(guī)?；囵B(yǎng)8.2.2基因工程菌細(xì)胞膜的破碎8.2.3 基因重組蛋白的分離與純化下游技術(shù)：表達(dá)、分離純化和活性測(cè)定第十二張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月128.2.1 基因工程菌的規(guī)?；囵B(yǎng)8.2.1.1 重組大腸桿菌培養(yǎng)基8.2.1.2 基本培養(yǎng)方式8.2.1.3 培養(yǎng)工藝條件對(duì)外源基因表達(dá)的影響8.2.1.4 培養(yǎng)條件對(duì)產(chǎn)物活性、存在形式及釋放的影響8.2.1.5 高密度和高表達(dá)培養(yǎng)對(duì)策第十三張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作

6、于2022年6月138.2.1.1 重組大腸桿菌培養(yǎng)基C源、N源、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、維生素、生物素等LB培養(yǎng)基、M9培養(yǎng)基按組成物質(zhì)的來(lái)源分：合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基按存在狀態(tài)分：固體、液體培養(yǎng)基第十四張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月148.2.1.2 基本培養(yǎng)方式1、分批培養(yǎng)（batch culture）：在一個(gè)封閉培養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi)含有初始限制量的基質(zhì)的培養(yǎng)方法。培養(yǎng)過(guò)程從接種開始，經(jīng)過(guò)4個(gè)時(shí)期：遲滯期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、減速期和穩(wěn)定期。2、補(bǔ)料分批培養(yǎng)（fed-batch culture ）3、連續(xù)培養(yǎng)（continuous culture）4、透析培養(yǎng)（dialysis culture）第十

7、五張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月158.2.1.3 培養(yǎng)工藝條件對(duì)外源基因表達(dá)的影響工程菌大規(guī)模培養(yǎng)的優(yōu)化設(shè)計(jì)和控制對(duì)外源基因的高效表達(dá)至關(guān)重要。工藝：選擇合適的發(fā)酵系統(tǒng)或生物反應(yīng)器。生物學(xué)方面的因素： 與細(xì)菌生長(zhǎng)密切相關(guān)的條件或因素： 溫度、pH值、溶氧、培養(yǎng)基成分 表達(dá)條件 誘導(dǎo)物、改變溫度 提高外源基因表達(dá)產(chǎn)物的總量： 表達(dá)水平、菌體濃度第十六張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月168.2.1.4 培養(yǎng)條件對(duì)產(chǎn)物活性、存在形式及釋放的影響對(duì)產(chǎn)物活性和存在形式的影響：溫度和pH值存在形式：包涵體、融合蛋白、分泌型第十七張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月17外源基因

8、在大腸桿菌中的表達(dá)形式表達(dá)產(chǎn)物可能存在于：細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞周質(zhì)、胞外培養(yǎng)基中表達(dá)形式：可溶性蛋白、不溶性蛋白包涵體蛋白融合蛋白分泌型外源蛋白第十八張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月181、包涵體蛋白包涵體：一定條件下，外源基因的表達(dá)產(chǎn)物在大腸桿菌中積累并致密的聚集在一起形成無(wú)膜的裸露結(jié)構(gòu)。細(xì)胞質(zhì)中較多，較少細(xì)胞周質(zhì)由蛋白質(zhì)組成，氨基酸序列正確，空間構(gòu)象錯(cuò)誤，無(wú)生物學(xué)活性。包涵體優(yōu)點(diǎn)：易于分離純化對(duì)蛋白酶有較好的抗性第十九張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月192、融合蛋白融合蛋白：外源蛋白基因與受體菌自身蛋白基因重組在一起，但不改變兩個(gè)基因閱讀框。受體菌蛋白位于N端，外源蛋白位于C端

9、。融合蛋白優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定性增加：雜合構(gòu)象，不易被水解具有較高的水溶性和生物學(xué)活性能以較高的效率表達(dá)：自身蛋白易于分離純化： 酶水解第二十張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月203、分泌型外源蛋白分泌型蛋白：指外源基因的表達(dá)產(chǎn)物通過(guò)運(yùn)輸或分泌的方式穿過(guò)細(xì)胞的外膜進(jìn)入培養(yǎng)基中。分泌蛋白需在N端加上信號(hào)肽序列。分泌型蛋白優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)化了純化工藝使外源蛋白免于被降解有利于形成正確的構(gòu)象，獲得有生物活性的蛋白質(zhì)。第二十一張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月21表達(dá)蛋白在細(xì)胞中的穩(wěn)定性防止蛋白降解融合蛋白表達(dá)系統(tǒng)：封閉了水解酶作用位點(diǎn)，增加穩(wěn)定性。分泌蛋白表達(dá)系統(tǒng)：分泌到細(xì)胞周質(zhì)、培養(yǎng)基中包涵體表達(dá)系

10、統(tǒng)：難溶性的沉淀復(fù)合物,不易被宿主蛋白水解酶降解。蛋白水解酶基因缺陷型的受體系統(tǒng)：第二十二張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月228.2.1.5 高密度和高表達(dá)培養(yǎng)對(duì)策1、高密度培養(yǎng)：2、高表達(dá)培養(yǎng)：?jiǎn)我蛩貙?shí)驗(yàn)正交實(shí)驗(yàn)第二十三張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月23基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化收集細(xì)胞破碎細(xì)胞初步分離柱層析經(jīng)一步分離純化第二十四張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月248.2.2基因工程菌細(xì)胞膜的破碎（一）細(xì)胞收集離心法貝克曼beckman離心機(jī)第二十五張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25（二）破碎細(xì)胞變性劑裂解法：哺乳動(dòng)物 SDS超聲波破碎法：細(xì)菌和酵母

11、緩沖液機(jī)械破碎法適用于細(xì)菌、酵母、植物細(xì)胞石英砂、細(xì)玻璃珠： 液氮酶解裂解法：細(xì)菌、酵母、植物cell第二十六張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月268.2.3 基因重組蛋白的分離與純化8.2.3.1 重組蛋白的分離1、離心：去除未破碎的細(xì)胞和細(xì)胞碎片等2、沉淀：鹽溶和鹽析： (NH4)2SO4 ；有機(jī)溶劑沉淀：乙醇、丙酮；等電點(diǎn)沉淀3、膜分離：透析和超濾：透析膜、超濾管透析超濾第二十七張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月274、雙水相萃?。豪梦镔|(zhì)在互不相溶的兩水相間分配系數(shù)的差異進(jìn)行萃取的方法。原理：水相中加入溶于水的高分子化合物，形成密度不同的兩相體系。形成原因：聚合物的不相

12、容性，即聚合物分子的空間阻礙作用，無(wú)法形成均一相。雙聚合物：聚乙二醇(PEG)/葡聚糖(Dx)。該系統(tǒng)上相富含PEG，下相富含Dx；第二十八張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月285、反膠團(tuán)萃?。悍茨z團(tuán)：是表面活性劑分散在連續(xù)的有機(jī)溶劑中，自發(fā)形成的納米尺度的一種聚集體。第二十九張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月298.2.3.2 基因重組蛋白的純化方法進(jìn)一步分離純化離子交換層析：等電點(diǎn)的差異 陽(yáng)、陰離子凝膠柱層析（分子篩）：分子量大小親和層析：分子間特異相互作用凝膠層析柱離子交換柱親和層析柱第三十張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月30柱層析基本步驟（1）裝柱 （2）柱平

13、衡（3）上樣 （4）洗脫（5）樣品收集：鑒定脫鹽濃縮自動(dòng)核酸蛋白分離層析儀 第三十一張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月31基因表達(dá)產(chǎn)物的精細(xì)純化檢測(cè)、制備和純化蛋白質(zhì) 蛋白濃度、純度測(cè)定PAGESDSHPLC第三十二張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月328.2.3.3 重組蛋白活性的測(cè)定生物活性的保持免疫測(cè)定法第三十三張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月338.3 幾種重要基因工程藥物的研發(fā)概況8.3.1 基因工程激素類藥物8.3.2 基因工程細(xì)胞因子類藥物8.3.3 基因工程抗體8.3.4 基因工程疫苗8.3.5 基因工程受體第三十四張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022

14、年6月348.3.1 基因工程激素類藥物激素（hormone）：由生物體內(nèi)分泌腺或特異性細(xì)胞產(chǎn)生的微量有機(jī)化合物，通過(guò)體液或細(xì)胞外液運(yùn)送到特定的作用部位，能引起特殊的生理效應(yīng)。分類：多肽蛋白類激素、甾醇類激素、脂肪酸類激素如胰島素、人生長(zhǎng)激素、人促卵泡激素第三十五張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月35激素（hormones）：又稱化學(xué)信使，是特定細(xì)胞合成的，能使生物體發(fā)生一定反應(yīng)的有機(jī)分子；它們的作用力很強(qiáng)，很低的濃度就能引起很強(qiáng)的反應(yīng)；它們都是短命的，在細(xì)胞中不能積累，很快就會(huì)被破壞。激素都是有特異性的，只對(duì)某種或某幾種細(xì)胞有效，具有接受相應(yīng)激素的特異受體。第三十六張，PPT共八十二

15、頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月36激素的傳遞方式第三十七張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月378.3.1.1 胰島素（ insulin ）概況：動(dòng)物胰臟胰島的細(xì)胞以前胰島素原形式合成跨膜運(yùn)輸后成胰島素原高爾基體內(nèi)形成成熟胰島素。生理功能：治療糖尿病 降低血糖提高組織攝取葡萄糖的能力抑制肝糖原的分解促進(jìn)肝糖原和肌糖原的合成第三十八張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月38 胰島素原的結(jié)構(gòu)第三十九張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月39基因工程生產(chǎn)人胰島素的途徑用大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)胰島素原，在體外將胰島素原轉(zhuǎn)變?yōu)橐葝u素。（丹麥NovoNordisk公司）先分別大腸桿菌發(fā)酵胰島素的A鏈和B

16、鏈，純化后再在體外重組產(chǎn)生完整的人胰島素。（美國(guó)Elililly公司）酵母發(fā)酵產(chǎn)生前胰島素原。第四十張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月40已上市的基因工程胰島素藥物1、重組人胰島素：Humulin、Novoli2、重組人胰島素類似物：賴脯胰島素 Humalog，作用快3、甘精胰島素：Lantus4、門冬胰島素：Novolog：速效HumulinHumalog第四十一張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月41曾經(jīng)的II型糖尿病治療藥物第四十二張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月42研制基因工程藥物胰島素的基本路線?第四十三張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月438.3.1

17、.2 生長(zhǎng)激素（growth hormone ）概況：是一類由動(dòng)物腦垂體前葉分泌的能促進(jìn)生長(zhǎng)的蛋白類激素。191個(gè)氨基酸組成，分子量21.5kDa。侏儒癥；巨人癥；肢端肥大癥第四十四張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月44生長(zhǎng)激素生理功能：治療垂體性侏儒癥刺激骨和軟骨的生長(zhǎng)促進(jìn)黏多糖及膠原的合成影響蛋白質(zhì)、糖、脂類的代謝，最終影響肌體的生長(zhǎng)與發(fā)育第四十五張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月45第一代：大腸桿菌生產(chǎn)，N端多一甲硫氨酸第二代：分泌蛋白形式，信號(hào)肽被自動(dòng)切去第四十六張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月468.3.2 基因工程細(xì)胞因子類藥物細(xì)胞因子（Cytokine）

18、:由細(xì)胞分泌的能調(diào)節(jié)生物有機(jī)體生理功能，參與細(xì)胞的增殖、分化和凋亡的小分子多肽類物質(zhì)。干擾素（IFN）、白細(xì)胞介素（IL）、腫瘤壞死因子（TNF）、生長(zhǎng)因子（GF）第四十七張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月47細(xì)胞因子通過(guò)與靶細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合后會(huì)引發(fā)信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)和功能的變化。作用特點(diǎn)：多相性、網(wǎng)絡(luò)性、高效性細(xì)胞因子生物學(xué)功能：調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、抗病毒、抗腫瘤、調(diào)節(jié)肌體造血功能、促進(jìn)炎癥反應(yīng)?？芍委煻喾N免疫疾病、腫瘤、造血功能障礙等。第四十八張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月48第四十九張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月498.3.2.1 干擾素（in

19、terferon,IFN）1957年英國(guó)病毒生物學(xué)家Alick Isaacs和瑞士研究人員Jean Indenmann首次發(fā)現(xiàn)，利用滅活的流感病毒作用于雞胚絨毛尿囊膜后，可使細(xì)胞產(chǎn)生一種干擾病毒繁殖的可溶性物質(zhì)，稱為干擾素。普遍存在：脾臟、肝臟、腎臟、骨髓等；可被多種因素誘發(fā)分泌，如病毒，雙鏈RNA等。第五十張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月50種類 產(chǎn)生細(xì)胞 用途-干擾素 白細(xì)胞 I型干擾素 antivirus,anti-tumor-干擾素 成纖維細(xì)胞 -干擾素 活化T、NK細(xì)胞 型干擾素 immune regulation干擾素來(lái)源、分類與用途IFN-1b第五十一張，PPT共八十二

20、頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月51干擾素位置：位于人第9號(hào)染色體上無(wú)內(nèi)含子，5端非編碼區(qū)+信號(hào)肽+編碼區(qū)+ 3端非編碼區(qū)組成。表達(dá)產(chǎn)物：188-189個(gè)氨基酸前體，分泌時(shí)切去N端23個(gè)氨基酸，165-166個(gè)氨基酸的活性產(chǎn)物。四個(gè)半胱氨酸（1，29，98/99，138/139），2對(duì)二硫鍵：1 98/99，29138/139。第五十二張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月52干擾素位置：位于人第12號(hào)染色體上4個(gè)外顯子+3個(gè)內(nèi)含子表達(dá)產(chǎn)物：143個(gè)氨基酸有糖基化第五十三張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月53干擾素生理作用：抗病毒感染：作用于細(xì)胞后能合成多種抗病毒蛋白，抑制病毒的復(fù)制。調(diào)控

21、細(xì)胞的生長(zhǎng)：可抑制或促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)。調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞發(fā)揮生理效應(yīng)：在臨床上已用于治療白血病、乙型肝炎、丙型肝炎、多發(fā)性硬化癥和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等多種疾病。第五十四張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月541976年Greenberg等首先報(bào)道用人白細(xì)胞干擾素治療4例慢性活動(dòng)性乙肝，治療后有2例HBeAg消失。 1980-1982年，基因工程方法在大腸桿菌及酵母菌細(xì)胞內(nèi)獲得了干擾素，從每1升細(xì)胞培養(yǎng)物中可以得到20-40毫升干擾素。從1987年開始，用基因工程方法生產(chǎn)的干擾素進(jìn)入了工業(yè)化生產(chǎn)，并且大量投放市場(chǎng)。 第五十五張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月55可供臨床選用的干擾素惠福仁（類淋巴

22、母細(xì)胞干擾素）：葛蘭素威康（英國(guó)）重組 IFN-1b，賽若金，國(guó)產(chǎn)，深圳科興 IFN-2a，羅擾素，羅氏公司（瑞士） IFN-2b，干擾能（甘樂(lè)能），先靈葆雅（美國(guó)）組合干擾素，干復(fù)津，安進(jìn)（美國(guó)）。第五十六張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月56各種亞型的干擾素-（含1或2或2a或2b）療效近似；因?yàn)镮FN不能通過(guò)胃腸道吸收，臨床主要采取肌肉注射和皮下注射2種方式，2h后達(dá)到血液最高濃度。吸收率可達(dá)80%以上。第五十七張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月57基因工程生產(chǎn)IFN大腸桿菌表達(dá)體系：溫度誘導(dǎo)系統(tǒng)，30振蕩培養(yǎng)至AD600達(dá)0.4后將溫度升高至42 ，繼續(xù)培養(yǎng)5h。新型干

23、擾素：長(zhǎng)效rhIFN-干擾素聯(lián)合利巴韋林第五十八張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月588.3.2.2 紅細(xì)胞生成素（EPO）紅細(xì)胞生成素（EPO）：是一種集落刺激因子。它由腎臟和肝臟產(chǎn)生，其主要功能是刺激造血始細(xì)胞分化為紅細(xì)胞，維持外周血中紅細(xì)胞的正常水平。7號(hào)染色體，5個(gè)外顯子，成熟165個(gè)氨基酸糖基化：只能采用哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)如CHO細(xì)胞。治療腎功能衰退導(dǎo)致的貧血、非腎性導(dǎo)致的貧血第五十九張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月59臨床用rh EPO美國(guó)Amgen公司的Epogen日本麒麟公司的利血寶（Espo）德國(guó)寶靈曼公司的生血素（Recormon）珠海麗珠制藥廠等10多家單

24、位：益比奧，寧紅欣，愛(ài)血寶 第六十張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月60基因工程生產(chǎn)紅細(xì)胞生成素的主要步驟？第六十一張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月618.3.2.3 白介素（interleukin，IL） 1979年第二屆國(guó)際淋巴因子研討會(huì)指出，白介素是一類免疫調(diào)節(jié)因子，指由白細(xì)胞產(chǎn)生，介導(dǎo)白細(xì)胞或免疫細(xì)胞間相互作用的淋巴因子。白細(xì)胞介素在傳遞信息，激活與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞，介導(dǎo)T、B細(xì)胞活化、增殖與分化及在炎癥反應(yīng)中起重要作用。 第六十二張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月62白細(xì)胞介素（IL）生理功能：在免疫調(diào)節(jié)中起重要作用:促進(jìn)多種T細(xì)胞增殖和分化促進(jìn)天然殺傷細(xì)胞的殺

25、傷能力促進(jìn)B細(xì)胞的增殖和分化促進(jìn)多種細(xì)胞因子和細(xì)胞因子受體的表達(dá)，因而在抗腫瘤和抗感染中發(fā)揮重要功能。第六十三張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月63人白介素-2又稱T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，由133個(gè)氨基酸組成的單鏈，分子量15-17.5kD。3個(gè)半胱氨酸（cys58,105, 125），cys58,105之間形成二硫鍵才有活性。有糖基化位點(diǎn)，但糖基化與否并不影響功能?；钚约性贜端。對(duì)熱不穩(wěn)定。人白介素-11又稱脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，由178個(gè)氨基酸組成的單鏈，分子量23-24kD。無(wú)半胱氨酸，富含脯氨酸和堿性氨基酸。無(wú)糖基化位點(diǎn)。活性集中在C端和Met59。對(duì)熱穩(wěn)定，80處理不喪失活性。第六

26、十四張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月64IL生物活性和臨床應(yīng)用： IL-2：處于調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的中心環(huán)節(jié)，對(duì)機(jī)體免疫監(jiān)視和抗腫瘤免疫應(yīng)答具有重要意義。不能直接殺傷腫瘤細(xì)胞。用于治療腫瘤、免疫缺陷和感染性疾病等。用于抗感染治療，如麻風(fēng)病。先天和后天性免疫缺陷，如HIV。第六十五張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月65rhIL-21984年批準(zhǔn)用于臨床試驗(yàn)，1992年FDA批準(zhǔn)上市，Proeukin，血管肉瘤，腎癌。國(guó)內(nèi)：1997年先后上市，有安特魯克，辛洛爾，德路生等。第六十六張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月66IL-11：是一種血小板生長(zhǎng)因子，用于治療

27、癌癥患者放化療后血小板減少唯一安全有效藥物。 多功能造血細(xì)胞因子促進(jìn)骨髓增殖。銀屑病。第六十七張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月67rhIL-111997年美國(guó)FDA批準(zhǔn)Genetics Institute（GI公司）研制的rhIL-11上市。國(guó)內(nèi)2001年公布批準(zhǔn)上市，質(zhì)量與進(jìn)口相當(dāng)，一家為酵母，其余為大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)。第六十八張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月68干細(xì)胞因子（hSCF）又稱肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子，steel因子，kit配體：能刺激骨髓造血干細(xì)胞和造血始細(xì)胞增殖，是造血干細(xì)胞增殖分化的關(guān)鍵因子。與IL-3、EPO等有協(xié)同效應(yīng)。248個(gè)氨基酸組成，是一種酸性糖蛋白?？?/p>

28、用于治療原發(fā)或繼發(fā)性的干細(xì)胞功能異常的疾病第六十九張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月69人表皮生長(zhǎng)因子（hEGF）53個(gè)氨基酸組成生理作用：對(duì)多種細(xì)胞如表皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞等有刺激效應(yīng)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有刺激作用促進(jìn)新血管的生成主要用于外傷、潰瘍、燒傷等。hEGF還能促進(jìn)正常表皮細(xì)胞的新陳代謝,添加到美容護(hù)膚品中可以達(dá)到美白、抗皺、延緩衰老的作用。第七十張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月708.3.3 基因工程抗體抗體（antibody，Ab） ：在抗原物質(zhì)刺激下產(chǎn)生的，能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的的蛋白質(zhì)分子。是機(jī)體免疫細(xì)胞被抗原激活后，由分化成熟的B細(xì)胞-漿細(xì)胞合成、分泌的一類能

29、與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。 抗體是免疫系統(tǒng)在外界抗原刺激下產(chǎn)生的一種蛋白。第七十一張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月71抗體結(jié)構(gòu)與功能組成：2條輕鏈2條重鏈抗體作用：體液免疫功能與特異性抗原結(jié)合發(fā)生免疫反應(yīng)活化補(bǔ)體與不同受體結(jié)合介導(dǎo)型免疫反應(yīng)或調(diào)節(jié)吞噬細(xì)胞的吞噬功能第七十二張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月72抗體的產(chǎn)生經(jīng)歷了三個(gè)階段經(jīng)典免疫方法產(chǎn)生的異源多克隆抗體細(xì)胞工程產(chǎn)生的鼠源單克隆抗體基因工程產(chǎn)生的人源單克隆抗體 單克隆抗體是由識(shí)別一種抗原決定簇的細(xì)胞所產(chǎn)生的均一性抗體，它反應(yīng)的特異性高、親和力強(qiáng)、效價(jià)高、血清交叉反應(yīng)少。第七十三張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月73抗原制備和提純與動(dòng)物免疫 動(dòng)物免疫 (Balb/小鼠)骨髓瘤細(xì)胞及飼養(yǎng)細(xì)胞的制備和培養(yǎng) 細(xì)胞融合 陽(yáng)性克隆單克隆化 陽(yáng)性克隆篩選 有限稀釋法 篩選方法建立 單克隆抗體的制備和凍存 單克隆抗體的純化 單克隆抗體特異性鑒定單克隆抗體的功能研究 單克隆抗體應(yīng)用研究 制備單克隆抗體是復(fù)雜而費(fèi)時(shí)的工作，整個(gè)技術(shù)流程。第七十四張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月74流程第七十五張，PPT共八十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月75基因工程抗體基因工程抗體：以基因工程技