MaxPlax噬菌體包裝試劑盒中文說明書(epicentreofillumina)

1、MaxPlaxad噬菌體包裝提取物中文操作說明書Cat.Nos.MP5105,MP5110,andMP5120ConnectwithEpicentreonourblog(),Facebook(/EpicentreBio),andTwitter(EpicentreBio).TM噬菌體包裝提取物中文操作說明書techhelp(800)284-8474 /5介紹MaxPlaxLambda噬菌體包裝提取物是一款快速簡便、高效的體外Lambda噬菌體包裝系統(tǒng)。MaxPlaxLambdaPackagingExtracts提供有分裝后的單管反應(yīng)體系，可用于甲基化或未甲基化的DNA實(shí)驗(yàn)。本包裝系統(tǒng)包裝后的噬菌

2、體文庫能夠收獲1x109U滴度。本系統(tǒng)主要用于-噬菌體或柯斯質(zhì)粒的cDNA文庫和基因組文庫的構(gòu)建實(shí)驗(yàn)。傳統(tǒng)的包裝提取物來源于2個互補(bǔ)的溶源大腸桿菌菌株BHB2690和BHB2688(Hohn,1979)。而MaxPlaxLambda噬菌體包裝提取物由新型包裝菌株NM759(Gunther,Murray和Glazer,1993)和BHB2688共同制備，菌株NM759屬于-噬菌體衣殼蛋白D缺陷型的無限制的大腸桿菌K12菌株；BHB2688是-噬菌體衣殼蛋白E缺陷型菌株。*NM759:*W3110recA56,A(mcrA)e14,A(mrrmdcr-(入imm434,clts,b2,red3,D

3、am15,Sam7)/入+*26:N205iecAn434clts,b2,red3,Eam4,Sam7)/入組份名稱濃度規(guī)格MaxPlaxLambdaPackagingExtracts5次、10次和20次MaxPlaxLambda噬菌體包裝提取物(20次)：MaxPlaxLambda噬菌體包裝提取物50管20次LigatedLambda對照DNA(c1857am7)1g002g/l50l大腸桿菌菌株LE392MP,甘油儲存250lFe14(McrA)(mcnrr)(et)hsd514suE44suF58lac1or(lacZY)6galK2galT22metB1trpR55注意:MaxPlax

4、Lambda包裝提取物是無標(biāo)記的凍融/超聲波聲處理的提取物。提取物、連接后的對照DNA和LE392MP均包裝于同一密封的稀薄袋。MaxPlaxLambda噬菌體包裝提取物需置于70C避光保存。TM噬菌體包裝提取物中文操作說明書techhelp(800)284-8474 /5產(chǎn)品說明儲存：將對照宿主菌株和MaxPlaxLambda包裝提取物置于70C避光保存。避免用干冰長期保存產(chǎn)品，產(chǎn)品一旦開封后，請勿放置于干冰保存。將其他組份置于20C保存。對照DNA融解后置于4C保存。貯存液:MaxPlaxLambda包裝提取物是凍融/超聲波聲處理的提取物，已分裝于無標(biāo)記的單管。對照宿主菌株是在甘油中保存。

5、連接好的對照DNA存儲于1XLigationBuffer中。有保證的穩(wěn)定性：MaxPlaxLambda噬菌體包裝提取物可以保證文庫有1.0 x109pfu/的滴度。產(chǎn)品在正常保存下，從購買日起1年內(nèi)有效。包裝噬菌體本操作適用于陽性對照組和實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)。陽性對照反應(yīng)產(chǎn)物必須鋪板在對照宿主菌株(LE392MP)中。實(shí)驗(yàn)組的宿主菌株因所用的克隆載體而異，請參考載體廠商對菌株和培養(yǎng)基的推薦。包裝提取物可直接加到連接產(chǎn)物中，之后您還需要：a)向反應(yīng)中加入10或更少的包裝提取物；b)加熱失活載體(例如65C處理15minutes)。溶液:噬菌體稀釋緩沖液LB液體培養(yǎng)基(1L,pH=7.0)LB固體培養(yǎng)基10

6、mMTris-HCl(pH8.3)10g蛋白胨LBBrothwith1.5%(w/v)瓊脂100mMNaCl5g酵母提取物L(fēng)B頂層瓊脂10mMMgCl210gNaClLB液體培養(yǎng)基，含0.7%(w/v)瓊脂大腸桿菌鋪板準(zhǔn)備:1在噬菌體包裝反應(yīng)前1d，挑取單菌落加入50ml補(bǔ)充(10mMMgSO4)LBbroth，37C震蕩培養(yǎng)過夜。2.在噬菌體包裝反應(yīng)當(dāng)天，取5ml過夜培養(yǎng)的菌體加到50ml補(bǔ)充(10mMMgSO4+0.2%maltose)LB液體培養(yǎng)基，37C震蕩培養(yǎng)，當(dāng)0D600=0.8-1.0，將菌體4C保存，最多可保存72hours。600TM噬菌體包裝提取物中文操作說明書techhe

7、lp(800)284-8474 /5噬菌體包裝反應(yīng):室溫解凍合適數(shù)量的噬菌體包裝提取物，然后置于冰上。對于每2個包裝反應(yīng)，只需在解凍1管提取物。解凍后立即取一半體積(25I)的包裝提取物加到另一個1.5-mI離心管中，然后冰上放置。然后加入10I0.2DNA,若您進(jìn)行的是奇數(shù)管的包裝反應(yīng)，可將剩余的25包裝提取物置于70C保存?；靹虿⑺矔r(shí)離心，避免產(chǎn)生氣泡。30C孵育90minutes。在反應(yīng)快結(jié)束時(shí)，再向反應(yīng)管中各加入25l解凍后的提取物，30C再孵育90minutes。加入500I噬菌體稀釋緩沖液，輕柔漩渦混勻。加入25I氯仿，輕柔漩渦混勻。然后4C保存。通過侵染宿主菌株來鑒定噬菌體的滴度

8、(對照實(shí)驗(yàn)的宿主菌株為LE392MP)。噬菌體滴度測定:1使用噬菌體稀釋緩沖液對噬菌體進(jìn)行梯度稀釋，對照實(shí)驗(yàn)的稀釋度選擇10e5和10e6。10e2稀釋度：取10I包裝后的噬菌體顆粒，加入990I噬菌體稀釋緩沖液，漩渦混勻。10e4稀釋度：取10I10e2稀釋的噬菌體顆粒，加入990I噬菌體稀釋緩沖液，漩渦混勻。10e5稀釋度：取100I10e4稀釋的噬菌體顆粒，加入990I噬菌體稀釋緩沖液，漩渦混勻。10e6稀釋度：取10I10e4稀釋的噬菌體顆粒，加入990I噬菌體稀釋緩沖液，漩渦混勻。取100I合適稀釋度的噬菌體顆粒加到100準(zhǔn)備好的宿主菌株，37C孵育15minutes。加入3.0mI融化的補(bǔ)充(10mMMgSO4)LB頂層瓊脂(冷卻到48C),輕柔漩渦混勻，然后將混合物鋪在預(yù)熱(37C)的LB培養(yǎng)板上，待頂層瓊脂凝固后，將培養(yǎng)板置于37C培養(yǎng)過夜。4記數(shù)菌斑，計(jì)算噬菌體文庫滴度(pfu/mI)和包裝效率。TM噬菌體包裝提取物中文操作說明書techhelp(800)284-8474 /5樣本計(jì)算:若在10e6稀釋培養(yǎng)板上有110個噬菌斑，滴度pfu/ml計(jì)算公式和包裝效率計(jì)算公式如下:i盧ofp(dImienfa：10pf、i.：|:/cli-Jlicrp卩曲心茁i.12.