枯草芽孢桿菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化研究

1、. 畢業(yè)設計(論文)課 題 名 稱枯草芽孢桿菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化研究 2014 年 5 月 15 日. 目 錄TOC o 1-3 h u HYPERLINK l _Toc10481 摘 要2 HYPERLINK l _Toc10481 Abstract3 HYPERLINK l _Toc26464 1 前言4 HYPERLINK l _Toc13219 2 材料與方法7 HYPERLINK l _Toc2 2.1實驗試劑與材料7 HYPERLINK l _Toc2 2.2主要儀器與設備7 HYPERLINK l _Toc2 2.3試驗方法8 HYPERLINK l _Toc17111 3 結果與分

2、析8 3.1枯草芽孢桿菌的標準曲9 HYPERLINK l _Toc4833 3.2單因素試驗結果10 HYPERLINK l _Toc24454 3.3正交試驗結果分析 PAGEREF _Toc24454 13 HYPERLINK l _Toc17111 4 結論和討論155 HYPERLINK l _Toc17111 參考文獻166 HYPERLINK l _Toc17111 致17. 枯草芽孢桿菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化研究摘 要本文通過單因素實驗和正交試驗研究枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的發(fā)酵條件PH、溫度、時間、接種量對枯草芽孢桿菌生長量的影響。本實驗的枯草芽孢桿菌在BP

3、G液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，通過單因實驗及正交試驗得到最正確的發(fā)酵培養(yǎng)條件為：初始pH 7.0；溫度35；時間20h；接種量為5%。在此培養(yǎng)條件下的活菌液量為3.785107CFU/ml，相比在LB培養(yǎng)基下培養(yǎng)時的活菌液量3.2106CFU/ml提高了10倍左右。關鍵字：枯草芽孢桿菌；正交試驗；生長量Optimization study of bacillus subtilis culture conditionsAbstractIn this paper, we study Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) fermentation conditions (

4、PH, temperature, time, quantity of) the impact on the growth of Bacillus subtilis. The e*periment of bacillus subtilis in bined cultivated in liquid medium, is obtained by single for e*periment and the orthogonal e*periment the best fermentation culture conditions as follows: the initial PH 7.0. Tem

5、perature 35 ; Time 20 h; Inoculation quantity was 5%. Under the condition of the cultivation of the best amount of bacterium fluid is 3.785 * 107 cfu/ml, pared to when cultured in LB medium under the microbial quantity: 3.231 * 107 cfu/ml by about 10 times.Key words: Bacillussubtilis; Culture condit

6、ions; increment1前言枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)是一種好氧性產芽孢桿狀細菌(G+)1，其根本特征：桿菌：一般 0.7-0.82.0-3.0 m，電子顯微鏡測量為 0.5-0.61.1-3.5 m，著色均勻，無莢膜，周生鞭毛，能運動。革蘭氏陽性菌，芽孢0.60.91.01.5微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。菌落外表粗糙不透明，污白色或微黃色，在液體培養(yǎng)基中生長時，常形成皺醭。 由于枯草芽孢桿菌是需氧菌在水質凈化2、工業(yè)發(fā)酵中發(fā)揮著重要的作用，人們開場致力于研究枯草芽孢桿菌應用于這些方面的研究。關于枯草芽孢桿菌的研究與應用已有100

7、多年的歷史，早期大局部工作集中在形態(tài)觀察、分類鑒定、生理機制、功能開掘及防治等方面。近年來，對枯草芽孢桿菌的研究漸進到遺傳學與分子生物學領域，研究容表達在特定功能基因的尋找并克隆到需要的物種中或者通過誘變、基因工程等手段對枯草芽孢桿菌生產菌進展遺傳改造等。但目前對該菌種的研究仍然處于實驗室的初始階段的水平。但是枯草研報桿菌有一系列的優(yōu)良性狀吸引這一些的科學家的目光，他們相信隨著經濟的開展，枯草芽抱桿菌資源對在工、農、醫(yī)等方面有重大應用價值，開發(fā)利用更具有重要意義?？莶菅挎邨U菌是一類廣泛分布于各種不同生活環(huán)境中的革蘭氏陽性桿狀好養(yǎng)型細菌，可以產生生芽孢，耐熱抗逆性強3，在土壤和植物的外表普遍存在

8、，同時還是植物體常見的一種生菌，對人畜無毒無害，不污染環(huán)境。由于枯草芽孢桿菌生長速度快，營養(yǎng)需求簡單，易于存活，定殖與繁殖，無致病性，并可以分泌多種酶和抗生素4,5，而且還具有良好的發(fā)酵根底，用途十分廣泛，國外有眾多研究單位和學者對此菌進展了大量研究，也積累了豐富的研究資料。通過對枯草芽孢桿菌系列的研究，一方積累枯草芽孢桿菌規(guī)律信息為以后開發(fā)提供依據；另一方面也可了解芽孢桿菌與生態(tài)環(huán)境間的相互關系，為芽孢桿菌資源的利用奠定根底6 ?，F(xiàn)在對于枯草芽孢桿菌的主要運用方面：1在水產養(yǎng)殖中的應用隨著水產養(yǎng)殖業(yè)的迅猛開展和集約化經營程度的不斷提高，養(yǎng)殖水體污染日趨嚴重，許多養(yǎng)殖池中有害藻類及病菌大量繁殖

9、，水質條件不斷惡化，其后果影響到了水產品平安和產業(yè)的可持續(xù)開展7。利用常規(guī)藥物防治方法，不但易加重水質惡化程度，本錢也較高，而利用微生物制劑改善養(yǎng)殖水體環(huán)境受到人們越來越多的關注。枯草芽孢桿菌是一種好氧的革蘭氏陽性菌，在自然界廣泛存在，生命力極強，代旺盛，對人畜無害，不污染環(huán)境，具有廣譜的抗菌活性和極強的抗逆能力8?？莶菅挎邨U菌能有效的降解水體中的氨氮、亞硝酸鹽和硫化物，到達凈化水質的目的。因此，枯草芽孢桿菌在養(yǎng)殖水體的生物修復方面得到了廣泛的應用9,10。在水體或飼料中添加枯草芽孢桿菌制劑，可以有效抑制或殺滅水體中或養(yǎng)殖生物體的*些有害致病菌，并且能增強有益菌的群落，而到達防治水產疾病的目的

10、；芽孢桿菌可以降低水體中硝酸鹽、亞硝酸鹽的含量，從而起到改善水質的作用11；芽孢桿菌還可以通過消滅病原體或減少病原體的影響來改善水質；枯草芽孢桿菌對水產中的弧菌、大腸桿菌和桿狀病毒等有害微生物有很強的抑制作用，有效預防水產動物腸炎，爛鰓等疾病。同時枯草芽孢桿菌也可以分泌大量幾丁質酶的功能。幾丁質酶可分解病原真菌的細胞壁而抑制真菌病害，分解養(yǎng)殖池中的有毒有害物質，凈化水質12-14；也可以分解池中殘餌、糞便、有機物等，具有很強的清理水中垃圾小顆粒的作用?？莶菅挎邨U菌還可以改善有害藍藻泛溢造成的水質渾濁問題，水質由渾變清，具有很強的凈化水質功能。其在水量繁殖時分泌的胞外酶可分解、吸收水及底泥中的蛋

11、白質、淀粉、脂肪等有機物，有降低水體富營養(yǎng)化和去除底泥的作用。在作用過程中，能夠促進飼料中營養(yǎng)素降解，有機營養(yǎng)一局部轉化為細胞物質，大局部轉化為細菌活動的能量。在其轉化過程中，氨氣、氮氣就從水中逸散到大氣用這種方法，水中氨氮和硝基氮可除去 。另一局部有機營養(yǎng)轉化為優(yōu)勢的有益菌體，此法廣泛應用于河蟹、育苗、蝦、甲魚養(yǎng)殖15。 2在食品工業(yè)上的應用血栓性疾病嚴重威脅著人類的生命與安康，其發(fā)病率和死亡率居各種疾病之首。大量的研究說明，飲食習慣與動脈硬化和血栓等疾病有密切的關系，納豆是日本的傳統(tǒng)食品，已經有2000多年的歷史。納豆是由納豆芽孢桿菌或枯草芽孢桿菌發(fā)酵大豆而成。日本學者發(fā)現(xiàn)在枯草桿菌發(fā)現(xiàn)的

12、傳統(tǒng)納豆(Natto)食品中含有一種具有溶解血栓功能的納豆激酶(Nattokinase)是一種枯草桿菌蛋白激酶16，可簡稱為枯激酶(Bacillokinase)。該酶在體除可溶解血栓外，明顯地縮短優(yōu)球蛋白的溶解時間(ELT)，以及激活體的血管皮細胞產生t-PA，由此可見，可探索開發(fā)一種新的溶栓藥品。納豆是日本的傳統(tǒng)食品，已經有2000多年的歷史。由于納豆中含有能溶解血栓的納豆激酶17，因此很適合作為一種保健食品每天食用。研究說明，每天食用150 g新鮮納豆可起到預防血栓類疾病的作用。另外，常吃納豆對癌癥、糖尿病、高血壓、動脈硬化、肥胖病等均可起到預防和緩解及治療作用.納豆枯草芽孢桿菌能在腸道生

13、長，分泌各種酶和維生素，促進小腸黏膜細胞的增殖18-19，促進胃腸道各種消化酶活性，并具有抑制腸道有害菌的作用，能夠將人類及其他動物難以消化吸收的大豆蛋白發(fā)酵形成大豆多肽和小分子物質的混合物；同時此菌在不利環(huán)境中形成芽胞，能耐高溫高壓，經受飼料加工工藝要求，易貯存。目前很多研究均顯示，枯草芽胞桿菌可以產生多種抗菌物質20抑制病原菌的繁殖并且對生物體本身無害，可提高養(yǎng)殖動物的產品質量，是一種應用非常廣泛的益生菌。因此，近年來枯草芽胞桿菌在飼料開發(fā)和生物防治等領域的應用成為研究熱點。 3在醫(yī)藥方面的應用枯草芽孢桿菌的活菌制劑可以作為口服液用于治療腸炎、支氣管炎和腹瀉等多種疾病，也用來預防和治療燒傷

14、面的感染?？茖W家發(fā)現(xiàn)從枯草芽孢桿菌提取到的淀粉酶、纖維素酶能夠補充體消化酶的缺乏，恢復正常消化機能；蛋白酶能夠分解發(fā)炎部位纖維蛋白的凝結物，消除傷口周圍的壞疽腐肉和碎屑?？莶菅挎邨U菌能夠分泌多種酶，其中能夠應用到醫(yī)藥領域的酶主要有絲氨酸纖溶性蛋白酶 ( 納豆激酶) 和脂肪酶兩種21。日本人日常生活中食用的納豆就是利用枯草芽孢桿菌生產的，納豆中含有的納豆激酶對心血管疾病有很好的預防和治療作用。近年來，我國也掀起對納豆激酶的研究和開發(fā)熱潮，納豆激酶的藥用價值日益突出，在我國傳統(tǒng)大豆發(fā)酵食品豆豉中發(fā)現(xiàn)了類似納豆激酶的高活力的纖溶酶，將其產生菌株鑒定為枯草芽孢桿菌，并將豆豉纖溶酶基因克隆到了畢赤酵母中

15、。同樣由枯草芽孢桿菌合成的聚谷氨酸也可用作藥物緩釋材料和醫(yī)用高分子纖維材料等 。隨著人們對枯草芽孢桿菌性質的深入，發(fā)現(xiàn)芽孢桿菌具有穩(wěn)定性好、抗性強、耐高溫、耐酸堿1、抑制病原菌繁殖、 產生多種酶類、提高動物消化酶活性、分解有機污染物、凈化水質等優(yōu)點，而被廣泛應用于水產動物養(yǎng)殖中；于此同時枯草芽孢桿菌又可以產生微生物源性抗菌蛋白2；從而國外研究者掀起對拮抗菌株的篩選、鑒定以及其抗菌物質理化特點等方面進展了大量研究工作的熱潮，雖然在實際的應用中，大多停留在實驗室等機構試驗階段，但它所展現(xiàn)的應用前景卻十分廣闊?？莶菅挎邨U菌在培養(yǎng)過程中，由于培養(yǎng)條件掌握不好，常出現(xiàn)活菌數量低、芽孢形成率低等問題，所以

16、本課題嘗試通過改變BPG培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件來提高枯草芽孢桿菌的產量，期望解決在現(xiàn)階段的工業(yè)化生產中存在著的菌數量低、本錢高的問題。本課題是針對菌株適宜培養(yǎng)基的發(fā)酵條件進展研究。針對發(fā)酵液培養(yǎng)基中不同溫度、pH、菌種接種量、時間分別進展單因素水平的試驗，確定三個較好的水平，在進展四因素三水平正交試驗以確定枯草芽孢桿菌的最正確條件。對此我們對發(fā)酵培養(yǎng)基進展優(yōu)化試驗，以提高枯草芽孢桿菌的產量并降低生產本錢。研究的目的是通過優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件，提高芽孢桿菌菌株發(fā)酵液的含菌量，為大規(guī)模工業(yè)化生產奠定根底，有助于降低生產本錢。2 材料與方法2.1 實驗試劑與材料2.2.1材料枯草芽孢桿菌師大學微生物實

17、驗室提供2.2.2實驗試劑 牛肉膏；蛋白胨；葡萄糖；可溶性淀粉；氯化鈉；磷酸氫二鉀；硫酸錳；瓊脂；去離子水2.2主要儀器與設備 超凈工作臺；滅菌鍋；培養(yǎng)皿假設干；電子天平；250ml錐形瓶假設干；玻璃棒；酒精燈；試管；移液管；移液槍；分光光度計2.3 試驗方法2.3 實驗過程 曲線制備 單因素測定 正交試驗培養(yǎng)基及根底條件確定培養(yǎng)基 BPG培養(yǎng)基22：牛肉膏3.3、蛋白胨3.3、葡萄糖3.3、淀粉3.3、Nacl 3.3、KH2PO4 3.3、MnSO47H2O 0.2，加純化水定容至1 000ml，調PH值為7.0初始培養(yǎng)條件：接種量：5-10%；pH：7.0-7.2；溫度：30-35；時間

18、：16-20 h。2.3.2 比濁法測定細菌濃度比濁法原理是在一定圍，菌懸液中細胞的濃度與混濁度成正比，即與光密成正比，菌越多，光密度越大。因此用分光光度計在一定波長420nm下，測定菌懸液的以光密度即OD值表示菌量?？莶菅挎邨U菌標準生長曲線確實定在BPG液體培養(yǎng)基上接種枯草芽孢桿菌原菌液，按優(yōu)化條件培養(yǎng)，并每隔3h取樣測定OD值和平板菌落計菌數。3 結果與分析3.1 枯草芽孢桿菌的標準生長曲線在確定的培養(yǎng)基的根底上，每隔3小時取樣測定OD值，并且通過平板菌落計菌數如下表一。時間h03691215182124OD0.0080.0340.0850.1120.1530.2110.2780.2460

19、.245活菌數(107CFU/ml)0.100.501.301.802.603.103.603.303.10OD值與活菌數的關系如下列圖1。從圖1可以看出OD值與活菌數呈現(xiàn)的關系，得到的關系式Y=1.3108*+1.6106 R2=0.9706。在OD值在小于0.278時OD值和活菌數呈現(xiàn)線性的關系。3.2單因素試驗結果 桿菌外在確定BPG液體培養(yǎng)基的根本組成成分0.34g牛肉膏、0.34g蛋白胨、0.34g葡萄糖、0.33g磷酸二氫鉀、0.33g氯化鈉、0.33g淀粉、0.02g硫酸錳、pH7.0、100ml水的前提下，通過四個單因素實驗確定葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、磷酸二氫鉀的最適含量。實驗

20、結果如下。溫度對枯草芽孢桿菌生長量的影響本實驗選取25、30、35、40、45 5個溫度為培養(yǎng)溫度的變化來研究溫度對枯草芽孢桿菌的生長量的影響。培養(yǎng)基的接種量為5%、初始pH 7.0，培養(yǎng)18 h，的其他因素的變量不變的條件下，測定OD420值，根據最大生長量，選出最適溫度。實驗結果如表二及圖2。表二 不同溫度對枯草芽孢桿菌的OD420值影響 溫度 OD420值2530354045A10.2010.2400.2700.2190.199A20.2030.2410.2710.2210.199A30.2050.2420.2720.2230.199平均值0.2030.2410.2710.2210.19

21、9 圖2溫度對枯草芽孢桿菌生長量的影響圖2顯示，當溫度的變化分別為25、30 、35 、40 以及45時，到的活菌數107CFU/ml分別為2.799、3.293 、3.683、 3.033以及2.747。所以有圖2分析可知，起初隨著溫度的升高，活菌數目會增加，當溫度為35時，枯草芽孢桿菌的數量到達最多；隨后繼續(xù)升高溫度，反而枯草芽孢桿菌的數量呈現(xiàn)下降趨勢。由于溫度對微生物生長的影響是影響在生物體所進展的許多生化反響，到達影響微生物的生長。在一定溫度圍，生化反響速率隨溫度上升而加快；超過一定限度，則細胞功能下降以至死亡。故此溫度的選擇為35 適宜。 pH值對枯草芽孢桿菌生長量的影響 本實驗選取

22、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0 5個PH為培養(yǎng)時PH的變化來研究PH對枯草芽孢桿菌的生長量的影響。培養(yǎng)基的接種量為5%、初始溫度35，培養(yǎng)18 h，的其他因素的變量不變的條件下，測定OD420值，根據最大生長量，選出最適PH。實驗結果見表三及圖3。表三不同pH對枯草芽孢桿菌的OD420值影響pH值 OD420值5.06.07.08.09.0A10.1790.2130.2550.2010.178A20.1780.2130.2560.2020.176A30.1770.2130.2570.2000.177平均值0.1780.2130.2560.2010.177 圖3PH對枯草芽孢桿菌生長量的

23、影響 從圖3顯示，當PH變化分別為5、6、7、8以及9時，得到的活菌數為：107CFU/ml分別為2.474、2.929、3.488、2.773以及2.461。所以從圖3直觀分析可知：開場隨著PH的增加，活菌數量呈現(xiàn)增加，當PH為7.0時枯草芽孢桿菌的數量到達最多；隨后繼續(xù)PH增加，反而枯草芽孢桿菌的數量呈現(xiàn)下降趨勢。由于不同微生物對pH條件的要求各不一樣它們只能在一定的pH圍生長，對pH條件的不同要求在一定程度上反映出微生物對環(huán)境的適應能力。本實驗的枯草芽孢桿菌在PH6到PH8之間的生長時的活菌數相對變化差距不大，從而可知在中性環(huán)境下相對適合枯草芽孢桿菌的生長；在PH9下的活菌數相比擬少，可

24、知在過酸和過堿的環(huán)境相對不適應枯草芽孢桿菌的生長，故此最適PH為7.0。3.2.3 接種量對枯草芽孢桿菌生長量的影響本實驗選取1%、3%、5%、7%、9% 5個接種量為培養(yǎng)時接種量的變化來研究接種量對枯草芽孢桿菌的生長量的影響。培養(yǎng)基的初始PH為7.0、初始溫度35，培養(yǎng)18 h，的其他因素的變量不變的條件下，測定OD420值，根據最大生長量，選出最適PH。實驗結果如表四及圖4。表四不同接種量對枯草芽孢桿菌的OD420值影響 接種量 OD420值 1% 3% 5% 7%9%A10.1440.1770.2340.2100.188A20.1450.1780.2340.2120.189A30.146

25、0.1790.2340.2110.190平均值0.1450.1780.2340.2110.189圖4接種量對枯草芽孢桿菌生長量的影響 從圖4顯示，當接種量變化分別為1%、3%、5%、7%以及9%時，得到的活菌數為107CFU/ml：2.045、2.474、3.202、2.903以及2.617。所以從圖4直觀分析可知：接種量從1%到5%之間增加接種量，活菌數隨著接種量的增加而增多，當接種量5%活菌數到達最多；大于5%時隨著接種量的增加反而活菌數減少，反到不利于培養(yǎng)枯草芽孢桿菌。應選擇最正確的接種量為5%。時間對枯草芽孢桿菌生長量的影響本實驗選取14h、16h、18h、20h、22h 5個時間為培

26、養(yǎng)時時間的變化來研究時間對枯草芽孢桿菌的生長量的影響。培養(yǎng)基的初始PH為7.0、初始溫度35，接種量為5%，的其他因素的變量不變的條件下，測定OD420值，根據最大生長量，選出最適PH。實驗結果如表五及圖5。表五不同培養(yǎng)時間對枯草芽孢桿菌的OD420值影響 時間 OD420值 14h16h18h20h22hA10.1610.2200.2760.2750.245A20.1610.2210.2770.2750.246A30.1610.2220.2780.2750.247平均值0.1610.2210.2770.2750.246圖5時間對枯草芽孢桿菌生長量的影響圖5顯示，當時間的變化分別為14h、16

27、h 、18h、20h以及22h時，到的活菌數107CFU/ml分別為2.253、3.033 、3.761、 3.735以及3.258。所以有圖5分析可知，起初隨著時間的推移，活菌數目會增加，當時間為18h時，枯草芽孢桿菌的數量到達最多；隨后繼續(xù)增加培養(yǎng)時間，反而枯草芽孢桿菌的數量呈現(xiàn)下降趨勢。由于時間主要影響枯草芽孢桿菌的生長周期，培養(yǎng)的時間過長反而使得其處于衰退期不利于枯草芽孢桿菌的生長，影響它的數量。故時間的選擇為18h適宜。3.3正交試驗結果分析 參照單因素實驗結果，確定了BPG培養(yǎng)基牛肉膏3.3、蛋白胨3.3、葡萄糖3.3、淀粉3.3、Nacl3.3、KH2PO4 3.3、MnSO47

28、H2O 0.2、水1000ml以影響枯草芽孢桿菌的生長條件PH、溫度、時間、接種量為四個影響因素，取各自的三個不同水平進展正交試驗，因素水平表見表表3.3正交試驗設計直觀分析表序列號因素活菌數107CFU/mlA溫度BpHC接種量濃度D時間(h)11301613%1(16)2.643212725%2(18)3.566313837%3(20)2.26642351233.163522312.916623122.59173401322.162832133.162933212.747K18.4757.9688.3968.306K28.6709.6449.4768.319K38.0717.6047.34

29、48.591R0.1990.6800.7110.095最優(yōu)組合A2B2C2D3由表數據可知，因素主次關系為C(接種量濃度) B(PH) A(溫度) D時間。通過實驗結果的直觀分析，2號組合A1B2C2D2的菌體含量最高；但是經過計算分析的最優(yōu)水平為A2B2C2D3。所以為了確定最優(yōu)水平組合，分別按照這兩個水平組合的培養(yǎng)基配方，配制BPG液體培養(yǎng)基下培養(yǎng)，測定其OD420值，根據生長量，確定最優(yōu)水平。實驗結果如表六。 表六 組合活菌數107CFU/ml 直觀最優(yōu)組合 A1B2C2D2分析的最優(yōu)組合A2B2C2D3A13.5603.768A23.5623.766A33.5613.777平均值3.5

30、613.777 從表六看出直觀的最優(yōu)組合A1B2C2D2與分析得到最優(yōu)組合A2B2C2D3比擬，在直觀的最優(yōu)組合A1B2C2D2下活菌數量為3.561107CFU/ml，但是分析得到最優(yōu)組合A2B2C2D3下得到的活菌數量為3.777107CFU/ml。再由表3.3分析可知，因素主次關系為C(接種量濃度) B(PH) A(溫度) D時間，所以分析的得到的最優(yōu)組合A2B2C2D3較好。即在溫度為35，接種量為5%，PH為7.0培養(yǎng)時間為20h。在這條件下培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌數量最多。4結論和討論本文針對的是枯草芽孢桿菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化研究 ，在培養(yǎng)基BPG的根底上優(yōu)化培養(yǎng)條件PH，時間，溫度，接種量

31、濃度四個因素，再進展L934正交試驗確定枯草芽孢桿菌的最正確培養(yǎng)條件。最終確定在保證其他因素不變的情況下枯草孢桿菌在BPG培養(yǎng)基在接種量為5%，PH為7.0，溫度為35攝氏度，時間為20h的時候適合枯草芽孢桿菌的生長，在此培養(yǎng)條件下得到的活菌液量為3.785107CFU/ml，相比在LB培養(yǎng)基下培養(yǎng)時的菌液量3.2106CFU/ml提高了10倍左右，進一步提高的枯草芽孢桿菌的產量。在本次實驗過程中，有以下幾點心得體會1本文在優(yōu)化培養(yǎng)條件時，得到接種量濃度為最主要的因素，相對而言時間為次要的因素。接種量濃度對于枯草芽孢桿菌的生長影響較大，從而工業(yè)化大規(guī)模培養(yǎng)時候需要注意接種量的濃度。培養(yǎng)的時間從

32、圖4可以看出18h到20h之間活菌數相對穩(wěn)定，如果需要得到是枯草芽孢桿菌的菌體或者產物時，需要控制發(fā)酵時間在18h到20h之間有利于菌體和產物的積累。2本文是枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)條件的優(yōu)化，在培養(yǎng)基BPG的根底上優(yōu)化培養(yǎng)條件PH，時間，溫度，接種量濃度四個因素，再進展L934正交試驗確定枯草芽孢桿菌的最正確培養(yǎng)條件得到的活菌量為3.785107CFU/ml，但是唐家毅23等在一株水產芽孢桿菌的鑒定及其培養(yǎng)基優(yōu)化的研究得到的最正確細胞濃度為8.42109CFU/ml，相比對于培養(yǎng)條件對于枯草芽孢桿菌的影響，沒有培養(yǎng)基對枯草芽孢桿菌的影響明顯。3相對與普通培養(yǎng)基得到的活菌量3.2106CFU/ml，

33、本實驗優(yōu)化得到的活菌量3.785107CFU/ml還有有明顯的提高10倍，所以本文枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)條件的優(yōu)化對于工業(yè)化大規(guī)模的培養(yǎng)枯草芽孢桿菌還是能夠提供一些依據。4由于條件的因素本實驗操作相對簡單，各因素水平的跨度相對較大，如溫度的變化梯度為5，時間的變化梯度2h，接種量變化跨度為2%，PH的變化梯度為1。對于以后的實驗可以繼續(xù)縮小這變化的跨度，來進一步研究枯草芽孢桿菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化。5參考文獻1惠明,竇麗娜,田青等.枯草芽孢桿菌的應用研究進展J.農業(yè)科2008,36(27)11623-11624.2尚智,胡勇有.枯草芽孢桿菌對微污染水體的凈化作用J.環(huán)境科學報,2011(8):1594-

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