植物組織培養(yǎng)技術考試要點

1、精選文庫 名詞解釋植物組織培養(yǎng)： 是指植物的任何器官、 組織或細胞， 在人工預知的控制條件下， 放在含有營養(yǎng)物質和植物生長調節(jié)物質等的培養(yǎng)基中，使其生長、分化，形成完整植株的過程。培養(yǎng)基： 是離體植物（外植體）賴以生長、分化的基礎，是根據(jù)植物的需求，人工配制的含有各種營養(yǎng)成分的營養(yǎng)液。污染： 在組織培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。褐變： 在組培過程中， 由培養(yǎng)材料向培養(yǎng)基中釋放褐色物質， 致使培養(yǎng)基逐漸變成褐色，培養(yǎng)材料也隨之慢慢而死亡的現(xiàn)象。玻璃化： 當植物材料進行離體繁殖時， 有些培養(yǎng)物的嫩莖、 葉片往往會出現(xiàn)半透明狀和水漬狀，這種現(xiàn)象稱為玻璃化。脫分化： 已有特定

2、結構與功能的植物組織， 在一定的條件下， 細胞改變原來的分化狀態(tài)，失去原來的結構和功能，轉變?yōu)榫哂蟹稚芰Φ募毎@個過程稱為脫分化。再分化： 在愈傷組織生長到一定階段后即可通過更換培養(yǎng)基或改變培養(yǎng)條件， 誘導促使其中的“芽點”或“原始胚狀體”逐漸發(fā)育成一個幼小的植物體，這一過程就叫做再分化。愈傷組織： 植物各種器官的外植體在離體的條件下， 細胞經脫分化等一系列過程， 轉變 為分化細胞，繼而轉變形成一種能迅速增殖的無特定結構和功能的細胞團，稱為愈傷組織。馴化： 開始繼代培養(yǎng)要加入生長調節(jié)物質， 其后加入少量或不加入生長調節(jié)物質就可以生長，這種現(xiàn)象稱為“馴化” 。種質 ：親代通過生殖細胞或體細胞

3、傳遞給子代的遺傳物質。植物種質保存： 利用天然或人工創(chuàng)造的適宜環(huán)境， 使個體中含有的遺傳物質保持其遺傳完整性，有高的活力，能通過繁殖將其遺傳特性傳遞下去。常溫保存 ：在常溫（ 20 5） OC 條件下，通過改變培養(yǎng)基中某些營養(yǎng)物質的濃度，改變培養(yǎng)的環(huán)境條件，可達到種質保存的目的。低溫保存 ： 低溫保存也稱為緩慢生長保存， 是通過改變培養(yǎng)基和環(huán)境條件使培養(yǎng)基的生長降到最低限度，又不致死亡，以達到延長保存時間的目的。超低溫保存： 也稱為冷凍保存， 主要是指在液氮的超低溫下使細胞代謝和生長處于基本停止的狀態(tài)，在適宜的條件下細胞可迅速繁殖，再生出新的植株，并保持原來的遺傳特性。1、簡述植物組織培養(yǎng)技術

4、的主要特點。（ 1 ）基礎理論植物組培的基礎理論是植物細胞全能性的理論， 即每個細胞都擁有該物種的所有遺傳信息， 并在條件適合的情況下能夠發(fā)揮該物種的各種功能和具有發(fā)育成為一個正常和完整的獨立個體的能力。（ 2 ）技術特點無菌培養(yǎng)和外植體培養(yǎng)（3）生產特點不占用耕地，生產不受季節(jié)控制周年連續(xù)生產，不受災害天氣和病蟲害限制 生長環(huán)境可人工控制并人為創(chuàng)造2、植物組培的意義和作用主要有哪些？（ 1 ）培育新品種的有效手段（ 2 ）種質資源保存的有效方法（ 3 ）去除病毒、真菌和細菌等病害和無性系的快速繁殖（ 4 ）促進有機物的生產和生理學的研究3、簡述通用實驗室的構成和用途。此區(qū)包括藥品儲存室、洗滌

5、室、培養(yǎng)基配制室和滅菌室等。（一）藥品儲存室藥品儲存室主要存放組織培養(yǎng)常用的各種化學試劑， 如無機鹽、 有機物、生長調節(jié)劑、消毒劑及各種生化試劑等。（二）洗滌室 洗滌室用于清洗各種培養(yǎng)器皿、用具及培養(yǎng)材料等。（三）培養(yǎng)基配制室 培養(yǎng)基配制室用于培養(yǎng)基的配制、分裝、封口，以及培養(yǎng)基滅菌前暫時存放。（四）滅菌室 滅菌室用于培養(yǎng)基、器皿、工具的滅菌消毒工作。4、 接種室包括哪些設備和用具？接種室又稱無菌室， 是進行菌種分離和接種的專用房間， 室內安裝一空調， 使室溫可控，接種室外面設緩沖間門不宜對開，最好安裝滑動門窗，接種室內的地面和墻壁要求光滑潔凈，室內根據(jù)要求配置一定數(shù)量的超凈工作臺、接種用的小

6、推車以及接種工具和消毒用的乙醇、酒精燈等，室內和緩沖間裝紫外線燈和日光燈。5、培養(yǎng)設備是什么，主要包括哪些？培養(yǎng)設備是指專為培養(yǎng)物創(chuàng)造適宜的光、 溫、 水、 氣等條件的設備， 包括： 空調器、 定時器、恒溫器、增濕機或去濕機、培養(yǎng)架、搖床或旋轉床、光照培養(yǎng)箱、照度計及溫、濕度計。6、簡述一個標準組培實驗室應具備設施。（ 1 ）玻璃器皿和其他實驗器皿的清洗和儲存（2）培養(yǎng)基的制備、滅菌和存放（3）植物材料的無菌操作（ 4 ）將接種材料培養(yǎng)在適宜的溫度、濕度和光照條件下（ 5 ）培養(yǎng)材料的細胞學及解剖學觀察、實體照相、切片觀察7、玻璃器皿的清洗的總體要求、標準和不同玻璃器皿的清洗方法。（1） 總體

7、要求：有機物、油脂等污物去掉（2 ）標準：瓶壁透明發(fā)亮，內外碧水膜均一，不形成水珠（3）不同器皿的清洗新器皿1%稀HCl浸泡12h,再用肥皂水洗凈，清水沖洗，最后用蒸餾水沖洗1 遍， 晾干后備用 用過器皿先將器皿中的殘渣除去， 用清水洗凈， 再用溫肥皂水或洗潔精洗凈，清水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗1 次，晾干后備用 污染器皿 在 121OC 高溫蒸汽滅菌 30min 后，倒去殘渣，用清水沖洗，蒸餾水，曬干，有菌斑用毛刷刷凈，再用清水沖洗干凈， ，浸泡于濃的重鉻酸鉀洗滌液中，浸泡2 小時，清水沖洗后用蒸餾水洗，晾干8、組織培養(yǎng)工廠有哪些廠房和場地組成？各自的功能和作用是什么？組培育苗工廠一般劃分

8、為以下幾個生產車間： 培養(yǎng)瓶清洗車間、 培養(yǎng)基母液調配車間、 培養(yǎng)基制備車間、無菌操作車間、培養(yǎng)車間、煉苗溫室和苗圃。（ 1 ）培養(yǎng)瓶清洗車間 可承擔大量的培養(yǎng)器皿如三角瓶、試管、培養(yǎng)皿等的洗滌與試管苗出瓶工作。（2）培養(yǎng)基母液調配車間已知的培養(yǎng)基組成成分不下 10 種， 為了減少工作量， 提高工作效率，在配制培養(yǎng)基時，一般先配成比所需濃度高 10100 倍的母液，配制使用時可按比例稀釋。（ 3 ）培養(yǎng)基制備車間完成培養(yǎng)基配制、分裝、包扎和高壓滅菌等工作。（ 4 ）無菌操作車間也稱接種車間，是組培工廠最核心和關鍵部分。（ 5 ）培養(yǎng)車間將接種的材料在人為控制溫度、 濕度和光照等條件下進行培養(yǎng)生

9、長的場所。（ 6 ）煉苗溫室和苗圃煉苗溫室 創(chuàng)造適宜溫度條件苗圃 直接向社會提供各種良種壯苗，可根據(jù)市場信息、林業(yè)生產等需要靈活安排各種林業(yè)苗木、觀賞花卉等的育苗計劃。9、組織培養(yǎng)工廠有哪些主要設備？這些設備各有什么作用？（ 1 ）超凈工作臺 是一種提供局部無塵無菌工作環(huán)境的單向流型空氣凈化設備。（ 2 ）高壓蒸汽滅菌鍋最基本的滅菌裝備，用于培養(yǎng)基的滅菌。（ 3 ）培養(yǎng)架擺放大量培養(yǎng)物，以利于大量生產的需要。（ 4 ）照明光源補充植物光合作用的需要。10、培養(yǎng)基的成分主要有哪些？主要包括 5 大類： 無機養(yǎng)分、 有機養(yǎng)分、 植物生長調節(jié)物質、 糖（碳源） 以及介質或載體 （紙橋或瓊脂等） ，此

10、外還含有大量的水分，可提供植物所需的碳、氫、氧，配制培養(yǎng)基時一般用離子交換水、蒸餾水或重蒸餾水。11、什么是外植體？如何進行外植體的選擇？外植體是指第一次接種用的植物材料。（ 1 ）選擇合適的部位木本植物、 較大的草本植物采取莖段， 本身矮小或缺乏顯著的莖的草本植物采用葉片、葉柄、花葶或花瓣等作外植體，滿天星、勿忘我、情人草和菊花等都是帶芽的材料作為外植體。（ 2 ）取材季節(jié)合理 多年生植物生長期取材，特別是春芽 一年生植物幼嫩組織（ 3 ）考慮器官的生理狀態(tài)和發(fā)育年齡幼嫩年齡的組織器官更適于組培（4）選擇合適大小的外植體0.5 1cm（ 5 ）選擇健壯的植株（ 6 ）選擇優(yōu)良的種質（7）選擇

11、合適的植物種類雙子葉單子葉、草本木本12、外植體的接種主要有哪些技術步驟？（ 1 ）在接種前4h 用甲醛熏蒸接種室，并打開室內紫外燈進行滅菌。（2）在接種前20min ，打開超凈工作臺的風機以及臺上的紫外燈。（ 3 ）接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實驗服，并換穿拖鞋等。（ 4 ）上工作臺后，用乙醇棉球擦拭雙手，特別是指甲處，然后擦拭工作臺面。（ 5 ）先用乙醇棉球擦拭接種工具，再將鑷子和剪子從頭至尾過火一遍，然后反復過火尖端處，對培養(yǎng)皿要過火烤干。（ 6 ）接種時，接種員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動和咳嗽等。（7）接種完畢后要清理干凈工作臺，可用紫外燈滅菌30min 。若連續(xù)接種，每

12、5 天要大強度滅菌 1 次。13、簡述培養(yǎng)基配制的主要技術步驟。將已配種好的各種母液按順序排好， 根據(jù)母液倍數(shù)或濃度計算和吸收相應量的各種母液和生長調節(jié)物質；計算和稱取瓊脂和蔗糖。由于瓊脂較難溶解， 所以先在燒杯或量杯中放入一定量的水， 加入瓊脂， 在電爐上加熱并不斷攪拌，使之溶解。按照大量元素、 微量元素、 鐵鹽、 有機物和生長調節(jié)物質母液的順序倒入已融化的瓊脂中，繼續(xù)加溫，不斷攪拌，使之均勻溶解。若母液在貯藏過程中產生沉淀或結晶，或是變色，則不能使用，應重新配制。加入蔗糖，待蔗糖溶解后，加水定容至所需體積。調整培養(yǎng)基的 pH 。大多數(shù)的園林植物都要求在pH5.65.8 的條件下進行組織培養(yǎng)

13、。一般用 1mol/L 的 HCl 或 1mol/L 的 NaOH 調節(jié)。培養(yǎng)基的分裝：一般占培養(yǎng)容器的1/41/3為宜。14、外植體為什么褐變？如何防止其褐變？（ 1 ）原因 由于外植體中的酚類化合物與多酚氧化酶作用被氧化形成褐色的醌類化合物， 醌類化合物在酪氨酸酶的作用下， 與外植體組織中的蛋白質發(fā)生聚合， 進一步引起其他酶系統(tǒng)失活，導致組織代謝紊亂，生長受阻，最終逐漸死亡。（ 2 ）措施 正確選擇外植體選擇適宜的培養(yǎng)基創(chuàng)造合適的培養(yǎng)條件連續(xù)轉移15、配制母液的原則。(1)相同類型試劑混合(2)容易形成沉淀的藥劑要分開(3)母液濃度適宜(4)用量認真計算核對(5)藥品準確稱量 16、用于外

14、植體滅菌的常用藥劑有哪些？各自特點如何？最常用的是次氯酸鈉，所需的滅菌時間稍長，但性質比較溫和，對植物材料殺傷較輕，比較滅菌的材料經常用它，但滅菌的徹底程度不如氯化汞，使用質量濃度2%,滅菌時間530min。 氯化汞相對滅菌效果最好，但必須較嚴格地掌握滅菌時間，并需多次無菌水沖洗才能洗脫表 面附著的殘液，否則植物材料易產生毒害或受到強烈抑制，使用質量濃度0.11%,滅菌時間 530min。乙醇 使用體積分數(shù) 7075% ,滅菌時間0.22min。17、各種植物組織器官的滅菌方法。消毒程序外植體前處理沖洗備注莖段自來水沖洗后，70% 乙醇中浸泡數(shù)秒2%次氯酸鈉溶液中浸泡 1530min無菌水沖洗

15、34次以莖段或頂芽為外 植體葉片自來水沖洗后，70% 乙醇中浸泡數(shù)秒0.1%氯化汞溶液中浸泡1min ,再在2%次氯酸鈉溶液中浸泡 1530min無菌水反復沖洗，吸 干過多的水分以葉片或葉柄切段 為外植體器官自來水沖洗后，70% 乙醇中浸泡數(shù)秒2%次氯酸鈉溶液中浸泡 2030min無菌水沖洗34次， 尢菌濾紙吸干水分以芽眼或內音B器官 為外植體果實70%乙醇中浸泡數(shù) 秒2%次氯酸鈉溶液中浸泡10min無菌水沖洗34次培養(yǎng)幼胚獲得植株 或取果肉為外植體種子70%乙醇中浸泡數(shù) 分鐘，尢菌水沖洗10%次氯酸鈣浸泡2030min,再用 1%無菌水沖洗34次， 尢菌濾紙吸干水分以萌芽的幼苗各部位為外植體

16、的濱水浸泡5min18、組培中污染原因有哪些？如何預防？(1)微生物細菌感染 材料帶菌或培養(yǎng)基滅菌不徹底操作人員不慎 工作人員使用了未經充分滅菌的工具及呼吸時呼出的細菌，或手接觸材料或器皿邊緣，使微生物落入材料或器皿器械環(huán)境 周圍環(huán)境不清潔或空氣不潔凈， 灰塵很多，或超凈工作臺的過濾裝置失效，培養(yǎng)用器皿口徑過大，瓶口邊緣污染真菌(2)防止材料帶菌外植體滅菌 玻璃器皿的滅菌金屬器械滅菌布質制品滅菌操作室培養(yǎng)室操作人員嚴格按照無菌操作規(guī)范操作19、玻璃化的原因及預防措施。(1)激素濃度 高濃度的細胞分裂素有利于促進芽的分化，也會使玻璃化的發(fā)生比例提高溫度高溫或溫度變化幅度大會提高玻璃化的發(fā)生率濕度

17、高濕條件使玻璃化發(fā)生頻率升高瓊脂濃度 隨著瓊脂濃度的增加，玻璃化苗的比例減少光照強度增加光照強度使玻璃化發(fā)生比例降低培養(yǎng)基成分 提高培養(yǎng)基的碳氮比，可以減少玻璃化的比例(2)調整培養(yǎng)基中無機成分提高培養(yǎng)基中蔗糖和瓊脂的濃度降低細胞分裂素和赤霉素的濃度增加自然光照，控制光照時間控制溫度改善培養(yǎng)容器的氣體交換狀況20、組培苗的特點，愈傷組織再生形成新植物體途徑。(1)組培苗生長細弱，莖、葉表面角質層不發(fā)達，氣孔的調節(jié)能力差。組培苗莖、葉雖呈綠色，但葉綠素的光合作用較差。根的吸收能力極低，根系吸收的水分難以滿足小苗蒸騰作用的消耗，小苗體內的水 分達不到平衡。(2)愈傷組織一不定芽一植株一組織幼嫩，結

18、構較松散，細胞含水率高，機械組織很不發(fā)達，容易發(fā)生機械損傷, 對逆境的適應和抵抗能力差。先芽后根先根后芽不同部分產生芽根愈傷組織一胚狀體一植株21、哪些組織適合進行組培快速繁殖？(1)通過培養(yǎng)生產不帶病毒的種苗，使生產力得到大幅度的提高，例如馬鈴薯、香蕉和大(2)有性繁殖時變異幅度大的品系，可以從這些群體中選擇優(yōu)良的個體，進行無性繁殖, 生產出整齊劃一的大量種苗，例如某些果樹和蘭花等。(3)雌雄異株植物，通過組培快繁技術繁殖具有更高栽培價值的雌性植株或雄性植株。(4)需要用較大量的目的產品作為種苗材料進行種植的物種，如大蒜、甘蔗等。(5)組培快繁技術簡單、繁殖系數(shù)高的植物，如雜種芹菜、胡蘿卜等

19、。(6)在野生或傳統(tǒng)的栽培條件下個體繁殖效率低下的植物，如蘭花等。22、組織培養(yǎng)有哪些途徑可以實現(xiàn)繁殖植物種苗的目的？(1)短枝發(fā)生型：微型桿插特點：能一次成苗，遺傳穩(wěn)定，成活率高，但繁殖系數(shù)低(2)叢生芽發(fā)生型特點：不經過愈傷階段，后代變異小(3)不定芽發(fā)生型特點：繁殖系數(shù)高，但變異大(4)胚狀體發(fā)生型特點：成苗量大，速度快，結構完整，但對其發(fā)育過程了解不足，應用不十分廣泛(5)原球莖發(fā)生型：蘭科植物特有 23、組培快繁有哪些步驟？第一階段：初代培養(yǎng) 第二階段：芽苗的增殖第三階段：誘導芽苗生根第四階段：煉苗和移栽24、組培快繁方式的優(yōu)勢？(1)繁殖效率高，生長速度快(2)組培快繁不受季節(jié)和環(huán)

20、境條件限制(3)培養(yǎng)條件的可控性強(4)占用空間小，管理方便，有利于自動化管理(5)不存在種子繁殖過程中的世代問題25、影響莖段組培快繁效果的因素及具體措施。(1)外植體材料的選取 選取生長健壯、無病蟲和生長迅速的幼嫩莖段，優(yōu)先選用頂部材料。（ 2 ）培養(yǎng)基中植物激素及其濃度 常用的細胞分裂素 6-BA 促進腋芽增殖，質量濃度0.55mg/L ， 常用的生長素 NAA 改善芽苗的生長狀況， 質量濃度 0.051.0mg/L ， 赤霉素 GA3 質量濃度為 1mg/L 以下。（ 3 ） 防止褐變和有害物質的積累 防止褐變措施： 在培養(yǎng)基中單獨添加或配合使用蕓香苷，20%硫代硫酸鈉溶液、檸檬、活性

21、炭、維生素C 及聚乙烯吡咯烷酮 pH 為 5.5 是可以取得較好的培養(yǎng)效果降低培養(yǎng)光照強度可以明顯減輕外植體的褐變程度 發(fā)現(xiàn)外植體近旁培養(yǎng)基有褐變物質積累時馬上轉接到新的培養(yǎng)基上（ 4）培養(yǎng)方式和條件液體振蕩培養(yǎng)增殖率高，縮短增殖周期，溫度一般控制在2628OC之間你，光照時間為1216h/d ，光照度在 20003000lx 之間26、無病毒苗培育的意義？（ 1 ）無病毒苗培育可明顯提高作物的產量、品質。（ 2 ）無病毒苗培育增產增收效益顯著。（ 3 ）無病毒苗培育促進農產品出口，增加就業(yè)機會。（ 4 ）排除了使用藥劑，降低生產成本，減少污染，防止公害，對保護環(huán)境有積極意義。27、無病毒原因

22、。（ 1 ）在一個植物體內，病毒易于通過維管束系統(tǒng)而移動，分生組織則不存在維管束系統(tǒng)。（ 2 ）病毒在細胞間移動的另一個途徑是通過胞間連絲移動，速度緩慢，難以趕上莖尖分裂旺盛的分生細胞。（ 3 ）分裂旺盛的分生細胞代謝活性強，使病毒無法進行復制。（ 4 ）植物體內存在病毒鈍化系統(tǒng)，而莖尖分生組織內鈍化系統(tǒng)活性最高，鈍化病毒，使病毒難以復制。（ 5 ）莖尖分生組織的生長素含量高，足以抑制病毒的增殖。28、無病毒苗培育的方法有哪些？（ 1 ）莖尖分生組織（ 2 ）愈傷組織培養(yǎng)脫毒（ 3）珠心胚培養(yǎng)脫毒（ 4 ）熱處理脫毒（ 5 ）微體嫁接脫毒（ 6 ）熱處理結合莖尖培養(yǎng)脫毒29、莖尖培養(yǎng)脫毒的方法

23、和過程。（ 1 ）培育脫毒母株， 獲得外植體 選擇品種 選擇品質好， 產量高， 抗、 耐病毒苗的品種 確保品種純度嚴格鑒定獲取快繁外植體母株的品種純度，可避免無效勞動，提高工作效率獲得外植體選擇生長健壯、無病蟲害的母株，既不受季節(jié)影響，又易消毒。（2）選擇培養(yǎng)基常用的培養(yǎng)基有MS 、 N6、 B5、 Nitsch 培養(yǎng)基等，誘導愈傷組織的培養(yǎng)基以添加 2 ， 4-D 效果最好， 其濃度為 13mg/L ， 分化培養(yǎng)基中可根據(jù)其分化方向添加13mg/L的 BA ，再加少許的 IAA （0.20.5mg/L ） ，生根培養(yǎng)基可單獨添加生長素（0.51mg/L ）。（ 3 ）剝離和接種 將處理好的植

24、物部分，如包含莖尖的莖段或芽等滅菌，置超凈工作臺 40倍顯微鏡下， 剝去外葉和較大的葉原基， 暴露出生長點分生組織， 剝離帶 12 個葉原基的分生組織，接種到試管內的芽分生培養(yǎng)基上。（4）繼代培養(yǎng)生根和快繁將已接種外植體的試管置于（ 23 2 ） OC ，光照度為3000lx ，光周期為 1316h/d 的培養(yǎng)室中培養(yǎng) 23 周成苗， 待苗長至 12cm 高， 轉入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，生長 710d 生根，轉入快繁培養(yǎng)基繼續(xù)繁殖。30、無病毒植物鑒定方法有哪些？（植物病毒鑒定檢測有幾種方法？）（ 1 ）目測癥狀法（ 2 ）指示植物法（ 3 ）血清學鑒定法（ 4 ）電子顯微鏡鑒定法（ 5）酶聯(lián)免疫

25、吸附法（ 6）免疫吸附電鏡法31、花藥培養(yǎng)和花粉培養(yǎng)有何區(qū)別和相同點？（ 1 ）相同點：二者培養(yǎng)目的相同，都是為誘導花粉細胞發(fā)育成為單倍體細胞，形成單倍體植株。(2)區(qū)別：花藥培養(yǎng)為器官培養(yǎng)，花粉培養(yǎng)為細胞培養(yǎng)。32、什么是單倍體育種及單倍體育種優(yōu)勢？以單倍體為材料的育種程序稱為單倍體育種。(1)縮短育種年限(2)單倍體育種的程序較簡便33、花藥培養(yǎng)的大致過程如何？(1)取材 (2)培養(yǎng)基的配制(3)消毒 (4)接種 (5)培養(yǎng)34、花粉植株發(fā)育有哪些途徑？花粉細胞第一次有絲分裂均等分裂一兩個等大子細胞，均勻誘導單倍體不均等分裂一形成大營養(yǎng)細胞、小生殖細胞仔小細胞退化，大細胞均勻誘導單倍體bb

26、大細胞退化，小細胞均勻誘導單倍體1c大小細胞均誘導單倍體35、常用的單倍體植株二倍化有哪些途徑？(1)自發(fā)加倍(自然加倍)(2)人工加倍(3)從愈傷組織再生加倍植株36、單細胞分離方法有哪些？(1)機械法 (2)酶解法37、機械法、酶解法分離單細胞的具體過程如何？(1)機械法 稱取10g新鮮葉片，進行表面消毒后放于研缽中。加入 40ml 研磨介質：20 d mol/L 蔗糖+10 科 mol/LMgCl 2+20 科 mol/LTris-HCl 緩沖液，pH7.8 , 輕輕研磨成勻漿。用兩層細紗布過濾，取濾液。用低速離心法將濾液中細微的碎屑除掉，得到沉淀在底層的游離細胞。(2)酶解法 果膠酶的

27、制備：0.5%果膠酶+0.5%葡聚糖硫酸鉀+0.8%甘露醇，配成20ml, 調節(jié)pH為5.8,用孔徑為0.20.4科m的濾膜過濾滅菌。取剛長成的嫩葉用 70%乙醇漂洗數(shù)秒，用飽和漂白粉上清液浸泡 15min,無菌水沖洗45 次。吸干表面的水分，用消過毒的鐐子撕去葉的下表皮。用消過毒的解剖刀將葉片切成3cm見方的小塊，取2g切好的葉片放入裝有果膠酶液的三角瓶中。用真空泵抽氣12min,使酶液滲入細胞間隙。將三角瓶置于低速轉床上，轉速為120r/min,溫度2528C, 30min后，吸取酶液、碎片。再放入上述果膠酶液 20ml,保溫振蕩30min,吸出酶液，此酶液主要含有海綿組織細胞。再次放入上

28、述果膠酶液20ml,保溫振蕩30min,用紗布或尼龍網過濾除去被消化的葉脈和表皮。在100g條件下離心2min,吸去上清液，底層即得均一的柵欄組織單細胞。38、細胞懸浮培養(yǎng)的方法類型有哪兩種？(1)分批培養(yǎng)(2)連續(xù)培養(yǎng)39、優(yōu)良懸浮細胞培養(yǎng)體系的要求。(1)愈傷化的細胞分散性良好(2)細胞均一性好，細胞有用成分含量高(3)增殖速度迅速40、單細胞培養(yǎng)有哪些方法？各種方法的概念、用途、優(yōu)缺點如何？看護培養(yǎng)法、微室培養(yǎng)法和平板培養(yǎng)法(1)看護培養(yǎng)法概念：是指把單個細胞置于一塊活躍生長的愈傷組織上培養(yǎng)，促使單個細胞持續(xù)分裂和增殖的培養(yǎng)方法。用途：誘導單細胞體系優(yōu)點：最大的優(yōu)點是簡便易行，且效果較好，易于成功。 缺點：不能在顯微鏡下直接觀察細胞生長過程。（ 2 ）微室培養(yǎng)法