實(shí)驗(yàn)三細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀(guān)察

1、實(shí)驗(yàn)三細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀(guān)察、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆罩参锛?xì)胞骨架的光鏡標(biāo)本制作方法。細(xì)胞骨架是指細(xì)胞質(zhì)中縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，按組成成分和形態(tài)結(jié)構(gòu)的不同可分為微管、微絲和中間纖維。它們對(duì)細(xì)胞形態(tài)的維持、細(xì)胞的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)、分裂、分化和物質(zhì)運(yùn)輸?shù)绕鹬匾饔?。光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞骨架的形態(tài)學(xué)觀(guān)察多用1%TritonX-100處理細(xì)胞，可使細(xì)胞膜溶解，而細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)被保存，再用考馬斯亮蘭R250染色，使得胞質(zhì)中細(xì)胞骨架得以清晰顯現(xiàn)。二、材料、試劑和儀器1材料新鮮洋蔥鱗莖、人口腔上皮細(xì)胞2試劑M緩沖液(pH7.2)各成分終濃度為：50mmol/L咪唑(MW:68.08),50mmol/LKCl(MW:74

2、.55),0.5mmol/LMgCl2?6H2O(MW:203.30),1mmol/LEGTA(MW:380.36),0.1mmol/LEDTA-Na2(MW:372.24),1mmol/LDTT(MW:154.3)6mmol/LPBS磷酸緩沖液(pH6.5):KH2PO4:Na2HPO4?2H2O=7:3(見(jiàn)附錄3查磷酸緩沖液的配置)0.7%NaCl生理鹽水1%TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)溶于M-緩沖液3%戊二醛100mL:25%戊二醛取12mL,PBS88mL0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染液200mL:考馬斯亮藍(lán)R2500.2g,甲醇46.5mL,冰乙酸7mL,蒸餾水46.5

3、mL3儀器光學(xué)顯微鏡，鑷子，剪刀，試管，表面皿，滴管，載玻片，蓋玻片滅菌牙簽，1.5mL離心管，1mL吸頭，1mL取液器，酒精燈，染色缸細(xì)胞骨架動(dòng)畫(huà)三、實(shí)驗(yàn)程序撕取洋蔥近中軸鱗片內(nèi)表皮O5-1CJH2和靠近攵卜層鱗片內(nèi)表皮0：5-lcin：作對(duì)照加1%-Tii-tonXlOOi室：溫laOmin用干猜牙簽刮取人口腔上皮細(xì)胞，置于1.5inL離心管中，加lml生理鹽水，混勻后3000rpm.離心lOntin,剩0.5inL上清液，用吸管吹打均勻、涂片*；晾干I肚緩沖液漂洗女次；lTiiton.:-X100處理30m.inM緩沖液漂洗3：3%.戊二醛固定152011-1磷睨緩沖液洗$詼，應(yīng)紙喙干電-弊肴馬斯亮濫染隹5m.in水洗制成臨時(shí)片喙去Triton藍(lán)TO0川-緩沖液洗二次鑄次3nnin3%戊二醒固左加min隣酸緩沖液洗三漁，每lOmm0.2%-馬斯亮藍(lán)染倍慫二30hlii蒸筒茨洗1-2-壓片彊檢四、結(jié)果與分析洋蔥鱗莖外層與內(nèi)層的表皮細(xì)胞比較（放大倍數(shù)10 x20）