220513-50 DNA溶液內(nèi)毒素清除劑使用手冊v1.0

1、天凈沙系列CAT#:220513-50常溫運輸和保存DNA溶液內(nèi)毒素清除劑Endotoxin Removal Reagent for DNA Solution使用手冊V1.0江蘇天凈沙基因診斷技術(shù)有限公司網(wǎng)址： HYPERLINK ；電話：400-6005850；電郵：order產(chǎn)品及特點革蘭氏陰性細菌（如大腸桿菌）的細胞表面的結(jié)構(gòu)成分LPS（lipopolysaccharides，脂多糖）就是內(nèi)毒素，因此純化的革蘭氏陰性細菌基因組DNA和質(zhì)粒DNA中幾乎都有內(nèi)毒素污染。內(nèi)毒素對原代細胞、傳代細胞和整體動物均具有顯著的毒性作用，這也是為何被叫做內(nèi)毒素的原因。因此去除DNA樣本中的內(nèi)毒素具有重要

2、的意義，本產(chǎn)品就是專門用于高效去除DNA樣品中的內(nèi)毒素污染的試劑，它具有下列特點：簡單快速，一次處理只需要30分鐘左右，不需要復(fù)雜儀器設(shè)備。高效，一次處理可以去除90%以上的內(nèi)毒素，經(jīng)過三次重復(fù)抽提可將內(nèi)毒素的水平降低到0.2 EU (endotoxin unit，約0.1 ng LPS)/mL以下。不影響DNA的活性和完整性，處理過的DNA可以直接用于活體細胞科研或活體生物科研，也可以用于常規(guī)的分子生物學研究。適用范圍廣，可用于處理各種來源的DNA（基因組DNA和質(zhì)粒DNA）和各種形狀的DNA（單鏈和雙鏈，線狀和環(huán)狀）。既可小規(guī)模使用(在1.5 mL離心管內(nèi))，也可放量使用。本產(chǎn)品提供的試劑

3、足夠進行50次處理（每次處理300uL樣本，每個樣本處理三次）。本產(chǎn)品只能用于科研。規(guī)格及成分本產(chǎn)品使用塑料袋包裝成 份編 號規(guī)格包裝材料DNA溶液內(nèi)毒素清除溶液A220513a1.5mL1.5mL藍蓋管DNA溶液內(nèi)毒素清除溶液B220513b1.5mL1.5mL本色蓋使用手冊220513sc1份無運輸及保存常溫運輸和保存，有效期兩年。自備試劑TE、無水乙醇、75%乙醇。使用方法一：微量處理（用于體積小于300 uL樣品）在一干凈的1.5mL的塑料離心管中加入濃度在0.1-1ug/uL的300 uL的待處理DNA樣品（來于基因組DNA提取和質(zhì)粒DNA提?。?。如果體積不足300 uL，可以用自備

4、的TE補足到300uL。如果濃度不到此范圍，可以用本公司的核酸濃縮劑濃縮或乙醇沉淀后再用小體積TE溶解。加入30 uL DNA溶液內(nèi)毒素清除溶液A。再加入10 uL DNA溶液內(nèi)毒素清除溶液B，在渦旋振蕩器上充分震蕩1分鐘混勻。臺式搖床上室溫搖晃20分鐘。再放置到金屬浴上50保溫10分鐘。臺式離心機室溫13000-15000g 離心3分鐘，離心后上層為無色透明，下層為淡藍色。注意：此步不能低溫離心。小心將上清（含DNA）轉(zhuǎn)移到新的離心管中，注意不要吸取下層（含內(nèi)毒素）的液體。此上清液就是去除內(nèi)毒素后的DNA溶液，留樣少許，剩下的樣品可以重復(fù)3-7步兩次，最后比較三次處理得到的DNA溶液的殘留內(nèi)

5、毒素含量，并據(jù)此確定今后處理此類DNA溶液所需要的抽提次數(shù)。一般對內(nèi)毒素污染嚴重的DNA溶液（含1000 EU左右的），需要抽提三次。如果起始含量低的，可能只需要一次。加入自備的兩倍體積的無水乙醇，混勻后13000-15000g 離心5分鐘。小心吸棄上清。加入1mL自備的75%乙醇，顛倒3次。13000-15000g 離心2分鐘。小心吸棄上清。13000-15000g 離心10秒。小心吸棄殘留上清（約50uL）。加入適量的TE溶解DNA沉淀。測試殘留內(nèi)毒素的含量。如果內(nèi)毒素含量已經(jīng)減低到可以接收的水平，則可將DNA溶液用于各種后續(xù)實驗，包括酶切電泳，活性檢測，處理培養(yǎng)細胞，打入活體實驗動物等。注意：本產(chǎn)品只能用于科研，故不能將得到的DNA打入人體。二：用于體積大于50