基因工程制藥

1、基因工程藥物 舉例 藥物特點(diǎn)1簡介及發(fā)展2過程34基因工程藥物2-1 簡 介定義： 用現(xiàn)代基因重組高科技對(duì)基因進(jìn)行克隆，通過重組DNA導(dǎo)入大腸桿菌、酵母或動(dòng)物細(xì)胞成功構(gòu)建工程菌株或細(xì)胞株，在工程菌株、細(xì)胞中所表達(dá)生產(chǎn)的新型藥物包括細(xì)胞因子、多肽類激素、溶血栓藥物、疫苗、抗體、反RNA及基因治療藥物等等多種難治疾病的基因工程藥物.3發(fā)展我國基因工程藥物的研究和開發(fā)起步較晚，直至20世紀(jì)70年代初才開始將DNA重組技術(shù)應(yīng)用到醫(yī)學(xué)上，但在國家產(chǎn)業(yè)政策的大力支持下，這一領(lǐng)域發(fā)展迅速，逐步縮短了與先進(jìn)國家的差距。1989年我國批準(zhǔn)了第一個(gè)在我國生產(chǎn)的基因工程藥物重組人干擾素1b，標(biāo)志著我國生產(chǎn)的基因工程

2、藥物實(shí)現(xiàn)了零的突破。從此以后，我國基因工程制藥產(chǎn)業(yè)從無到有， 不斷發(fā)展壯大。截止1998年底，我國已批準(zhǔn)上市的基因工程藥物和疫苗產(chǎn)品共計(jì)15種。至2000年，我國已有200多家生物技術(shù)公司，有20多家生產(chǎn)銷售人干擾素、白細(xì)胞介素、乙肝疫苗等12種基因工程藥物。4基因工程的操作流程上游下游5目的基因的獲得獲取目的基因是實(shí)施基因工程的第一步。兩條途徑：一條是從供體細(xì)胞的DNA中直接分離基因；直接分離基因最常用的方法是“鳥槍法”，又叫“散彈射擊法”。6另一條是人工合成基因。兩種方法： （1）以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模版，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需要的

3、基因。 （2）根據(jù)已知的蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測(cè)出相應(yīng)的信使RNA序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則，推測(cè)出它的基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。7目的基因與運(yùn)載體結(jié)合基因表達(dá)載體的構(gòu)建（即目的基因與運(yùn)載體結(jié)合）是實(shí)施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。一般以質(zhì)粒作為運(yùn)載體，首先要用一定的限制酶切割質(zhì)粒，使質(zhì)粒出現(xiàn)一個(gè)缺口，露出黏性末端。然后用同一種限制酶切斷目的基因，使其產(chǎn)生相同的黏性末端（部分限制性內(nèi)切酶可切割出平末端，擁有相同效果）。將切下的目的基因的片段插入質(zhì)粒的切口處，首先堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，兩個(gè)黏性末端吻合在一起，堿基之間形成氫鍵，再加入適量DNA連接酶

4、，催化兩條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脫氧核糖核酸連接起來，形成一個(gè)重組DNA分子。8目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞是實(shí)施基因工程的第三步?；蚬こ讨谐Ｓ玫氖荏w細(xì)胞有大腸桿菌，枯草桿菌，土壤農(nóng)桿菌，酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。用人工方法使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，主要是借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，就可以隨著受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制，由于細(xì)菌的繁殖速度非?？?，在很短的時(shí)間內(nèi)就能夠獲得大量的目的基因。9目的基因的篩選和表達(dá)在全部的受體細(xì)胞中，真正能夠攝入重組DNA分子的受體細(xì)胞是很少的。因此，必須通過一定的手段對(duì)受體細(xì)胞中是否導(dǎo)入了目的基因進(jìn)行檢測(cè)

5、。重組DNA分子進(jìn)入受體細(xì)胞后，受體細(xì)胞必須表現(xiàn)出特定的性狀，才能說明目的基因完成了表達(dá)過程。方法： 抗生素抗性基因插入失活法 直接法 -半乳糖苷酶基因插入失活法 分子雜交法 非直接法 免疫化學(xué)法 酶聯(lián)免疫檢測(cè)法10產(chǎn)物分離純化基因工程藥物的分離純化一般不應(yīng)超過4-5個(gè)步驟，包括細(xì)胞破碎、固液分離、濃縮與初步純化、高度純化直至得到純品以及成品加工。11基因工程藥物的特點(diǎn)目的產(chǎn)物在初始物料中含量低含目的產(chǎn)物的初始物料組成復(fù)雜目的產(chǎn)物的穩(wěn)定性差種類繁多應(yīng)用面廣，對(duì)其質(zhì)量、純度要求高，甚至要求無菌、無熱源等12基因工程技術(shù)可生產(chǎn)的藥物和制劑（1）免疫性蛋白，如各種抗原和單克隆抗體；（2）細(xì)胞因子，如各種干擾素、白細(xì)胞介素、集落刺激生長因子、表皮生長因子、凝血因子；（3）激素，如胰島素、生長激素、心素納；（4）酶類，如尿激酶、鏈激酶、葡激酶、組織型纖維蛋白溶酶原激活劑、超氧化物歧化酶。13 2003年抗非典期間，江南大學(xué)與麗珠集團(tuán)蘇州新寶制藥廠合作攻關(guān)，通過發(fā)酵工程和生物制藥工程研制成功了重組人-2b干擾