食藥用菌液體菌球生產(chǎn)標準

1、食藥用菌液體菌球消費標準編寫 劉隨記二零一四年六月二十六日 TOC o 1-5 h z 目錄一、封面1二、目錄2三、標準范圍3四、本標準所引用的標準性文件和文獻 3五、關鍵專業(yè)術語和定義3六、液體菌球消費技術要求6七、根本消費設施和設備7八、液體菌球消費工藝流程圖 8九、液體菌球消費技術工藝要求 8食藥用菌液體菌球消費標準一、 范圍本標準規(guī)定了食藥用菌菌球消費廠房、各種設施、設備、品種、工藝流程、技術要求、保藏運輸。本標準適用于食藥用菌液體菌球的消費。二、本標準所引用的標準性文件和文獻GB/T4789.28-2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗一染色法、培養(yǎng)基和試劑GB5749-2006生活飲用水衛(wèi)生

2、標準GB/T 5009.98-2003食品容器及包裝材料用不飽和聚酯樹脂及其玻璃鋼制品衛(wèi)生標準分析方法GB50073-2001干凈廠房設計標準GB/T 29859-2021 生物信息專業(yè)術語GB150-1998 鋼制壓力容器NY/T 883-2004家用微生物菌劑消費技術規(guī)程DB21/T 1693-2021食用菌液體菌種消費技術規(guī)程三、關鍵專業(yè)術語和定義以下專業(yè)術語和定義適用于本標準。胡E 動式液體培養(yǎng)器mobile cultivation apparatus for edible fungus liquidspawn指在液體菌球養(yǎng)器上安裝了可挪動的裝置，培養(yǎng)器工作時能整體挪動，而挪動中又不影

3、響培養(yǎng)器的性能。液體菌球接種器材 edible fungus-liquid interface trap inoculator指能將菌種從培養(yǎng)器中按無菌操作要求轉(zhuǎn)接到液體菌球液體上的設備。接種量 inoculation amount指接入培養(yǎng)器中的菌種的數(shù)量，以菌種體積與培養(yǎng)基體積的百分比標示。液體菌種菌齡 period of liquid spawn running指菌種接入培養(yǎng)基開場計算的液體菌球生長發(fā)育時間。培養(yǎng)器空7肖 empty fermenter cultivation apparatus指對用外源蒸汽滅菌，尚未加水投料的空培養(yǎng)器進展高壓蒸汽滅菌。培養(yǎng)器實消 full fermen

4、ter cultivation apparatus指對投料后的培養(yǎng)器進展高壓蒸汽滅菌。投料 feeding指將配置好的培養(yǎng)液投放到培養(yǎng)器中。定容 constant volume指培養(yǎng)器中參加培養(yǎng)液后，加水至所要求體積。搖瓶液體菌種 liquid spawn in shake pot指裝在玻璃三角瓶內(nèi)在搖床上恒溫振蕩培養(yǎng)的液體菌種。起始 pH initial pH value指液體培養(yǎng)基配置后尚未接種時的pH值。鏡檢 microscopic examination指通過顯微鏡觀察食藥菌液體菌球生長發(fā)育和有無雜菌污染的過程。外源蒸汽滅菌 exogenous steam sterilization指

5、用鍋爐蒸汽給培養(yǎng)器滅菌的方法。固體專用菌種瓶 solid special strain combination指將檢驗合格的固體專用種按無菌操作要求，轉(zhuǎn)移至裝有無菌水的大三角瓶中，充分攪拌呈均勻的液態(tài)菌種的過程。死角 dead angle指培養(yǎng)器蒸汽滅菌時未能到達徹底滅菌的地方。恒溫培養(yǎng)搖床 thermostatic culture cradle指具有不銹鋼萬用夾具、數(shù)顯控溫、無級調(diào)速和良好的熱循環(huán)功能，是一種多用處的生化器，適用于菌種各種液態(tài)菌球振蕩培養(yǎng)。盤旋式振蕩器 cyclotron oscillator指具有外形大方，容量大，噪音低，重量輕，體積小等特點，速度可調(diào)，并帶有定時裝置。生物

6、接種箱 biological inoculation box指有各種形狀和規(guī)格，只要操作方便，能到達無菌狀態(tài)的機器設備。超凈工作臺clean bench指一種智能化控制操作區(qū)高干凈度工作環(huán)境的空氣凈化設備。高壓殺菌器 autoclave指用比常壓高的壓力，把水的沸點升至100c以上的高溫，而進展液體或器具滅菌的一種高壓容器。.21 試管 test tube指用作于少量試劑的反響容器，在常溫或加熱時使用。顯微鏡 microscope指主要用于放大微小物體成為人的肉眼所能看到的儀器。恒溫培養(yǎng)箱 constant incubator指作細菌培養(yǎng)、育種、發(fā)酵及其他恒溫試驗用的機器設備。生物培養(yǎng)箱 bi

7、ology incubator指具有制冷和加熱雙向調(diào)溫系統(tǒng)溫度可控的功能的機器設備。菌種 culture指用于發(fā)酵過程作為活細胞催化劑的微生物。四、液體菌球消費技術要求4.技術人員食藥用液體菌球消費應有與液體菌球消費所需的專業(yè)技術人員。消費操作人員應該保持良好的個人衛(wèi)生，勤洗澡、勤換衣、勤理發(fā)、不保存長 指甲。進入消費車間必須穿戴經(jīng)滅菌的工作服、口罩、鞋、帽。嚴禁在消費車間內(nèi)吸煙，隨地吐痰和亂扔雜物。食藥用菌液體菌球消費車間設計到達 NY/T528-2002標準要求。食藥用菌液體菌車間必須建在交通、水源和電源方便，無有害氣體、煙霧，遠 離垃圾場和畜禽場舍的地方。消費車間地面應具備防水、防腐蝕、

8、防滲漏、防滑、易清洗，有適當?shù)呐潘?度1.0%1.5%和良好的排水設施。4.消費車間墻壁和頂部應能防潮、防霉、防水、易清洗。消費車間門窗應設置有防各種蚊蟲的紗網(wǎng)。4.消費車間入口處應設置洗手、消毒和干手設施。4.消費車間要安裝排風設備。4.消費車間必須設置緩沖間消費車間應設置與職工人數(shù)相適應的更衣室、浴室、廁所。消費車間應設置封閉式廢棄物專用桶。五、根本消費設施和設備培養(yǎng)搖床、盤旋振蕩器、生物接種箱、生物培養(yǎng)箱、電子天平、 、酸度儀、空 氣壓縮機、液體菌種接種器材、高壓蒸汽滅菌鍋、蒸汽鍋爐、凈化工作臺、恒溫 搖床、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、顯微鏡、磅秤、天平、自備電源發(fā)電機 。培養(yǎng)器、 高壓滅菌鍋和

9、蒸汽鍋爐應使用政府有關部門檢驗合格，符合國家壓力容器標準的 產(chǎn)品。消費用具玻璃三角瓶、接種器材、試管、量杯量瓶、玻璃漏斗、菌漿瓶、藥棉、定量定性濾紙、精度pH試紙等。根本操作車間設施配料間、殺菌間、冷卻間、接種間、培養(yǎng)間、化驗室、菌種保藏室的根底設施要配套，布局合理，要有最根本溫控設施。培養(yǎng)原料符合WS/T232-2002商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗規(guī)程?；瘜W試劑類符合NY/Y528-2002食藥用菌菌種消費技術規(guī)程要求。生物制劑和天然材料類符合NY/Y528-2002食藥用菌菌種消費技術規(guī)程要求。消費品種符合NY/Y528-2002食藥用菌菌種消費技術規(guī)程要求和 GB/T12728-2006食

10、用菌術語相關規(guī)定。應使用經(jīng)省和國家級以上農(nóng)作物品種審定委員會登記的食藥用菌品種。六、液體菌球消費工藝流程圖1825 C,5d7d七、液體菌球消費技術工藝要求（一）、菌漿菌種的培養(yǎng)菌漿菌種專用瓶使用玻璃植被瓶和棉塞，植被瓶 250 ml,棉塞要使用梳棉，不應使用脫脂棉。菌漿菌種培養(yǎng)基般使用馬鈴薯葡萄糖瓊脂通用培養(yǎng)基。分裝菌種培養(yǎng)基的分裝量為50 ml。7.1.4滅菌菌漿菌種培養(yǎng)基分裝后應立即滅菌。Mpa, 30min。滅菌完畢后，應自然降壓，不應強迫降壓。滅菌時應防止棉塞被冷凝水打濕。滅菌效果的檢查滅菌后的培養(yǎng)基置于28c恒溫培養(yǎng)48 h后檢查，并經(jīng)顯微鏡鏡檢確定無微生 物長出為滅菌合格。接種在

11、無菌條件下用接種器材將菌種移植在菌漿菌種培養(yǎng)基上。超凈工作臺消毒處理方法先用75%酒精或新潔爾滅溶液進展菌種培養(yǎng)基外部外表擦拭消毒，然后開紫外 燈滅菌30min。無菌接種操作超凈工作臺上要嚴格按無菌操作要求接種。將引進或購置的食藥用菌菌種接種 到培養(yǎng)基上，然后再把培養(yǎng)基和菌種用專用的工具攪拌成 0.3 cm顆粒狀。接種完 畢后及時貼好標簽。超凈工作臺接種后的處理每次使用后，要及時清理清潔，排出廢氣，去除廢物，臺面要用75%酒精或新潔爾滅溶液擦拭消毒，然后開紫外燈滅菌 30min。培養(yǎng)室消毒處理在使用培養(yǎng)室的前兩天，要使用二氧化氯煙霧劑熏蒸消毒處理。培養(yǎng)室條件要求培養(yǎng)溫度18C28C，培養(yǎng)時間2

12、540d,保持空氣相對濕度在 65%75%, 注意避光。培養(yǎng)期間的檢查培養(yǎng)期間應定期檢查，及時挑出不合格菌種。入庫完成培養(yǎng)的菌漿菌種及時登記入庫。記錄消費各環(huán)節(jié)應詳細記錄。留樣留樣的數(shù)量應以每個品種3支5支，于4c下貯存。二液體菌球菌種培養(yǎng)液體菌球培養(yǎng)基配方.1配方1:馬鈴薯、葡萄糖、麥秋、蛋白月東、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素 B1 聚氧丙稀甘油、pH值自然；.2配方2:馬鈴薯、葡萄糖、麥秋、蘋果汁、維生素 B1、pH值自然；.3配方3:甘薯、葡萄糖、磷酸二氫鉀、pH值自然；.3配方4:大米浸出液、葡萄糖、蛋白月東、牛肉膏、 pH值自然原材料符合NY/T528-2002標準要求。詳細配方根據(jù)消

13、費品種的營養(yǎng)需求，用水符合GB5749-2006,生活飲用水衛(wèi)生 標準。起始pH值培養(yǎng)基調(diào)節(jié)起始pH6.56.8。投料與定容將熬制好的液體培養(yǎng)液分別裝入1000ml的三角瓶內(nèi)，裝入量為300ml,塞上特 制的棉塞，用牛皮紙把棉塞包住以免受潮。培養(yǎng)基滅菌滅菌器內(nèi)蒸汽壓力到達 0.105 Mpa 0.125Mpa,培養(yǎng)基溫度到達溫度 121c 124C,保持時間40min,防止滅菌死角。冷卻降溫滅菌完畢使培養(yǎng)基自然降溫至常溫。接種把滅菌后的液體培養(yǎng)基、菌槳菌種、所有的接種用具放入超凈工作臺內(nèi)用臭氧和紫外線分別消毒30分鐘，然后迅速將菌種移入到液體培養(yǎng)基中并塞緊棉塞，接種完畢，液體菌種進入培養(yǎng)階段。

14、培養(yǎng)溫度接種后的液體菌球菌種要放在旋轉(zhuǎn)式振蕩器上進展培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度1825c。培養(yǎng)時間液體菌球菌種的培養(yǎng)時間要以品種而定，擔子菌57天，子囊菌35-45天。留樣與檢測.1留樣將培養(yǎng)的液體菌球菌種2減出放在4c生化培養(yǎng)箱，進展留樣保存。7.3.2無菌檢測對留存的液體菌球菌種樣品應在無菌 PDAF板上劃線培養(yǎng)，在2528c恒溫培養(yǎng)2d5d,假設劃痕上沒有細菌、霉菌、酵母菌菌落生長，那么說明該樣品無雜菌。對留樣樣品應在取樣后及時鏡檢，確定菌球生長發(fā)育狀態(tài)和有無雜菌污染。,3 pH 值采用酸度計測定，應在規(guī)定范圍之內(nèi)。,4菌液濕重采用15cm的定量濾紙，將100ml液體菌液，過濾至無水水滴滴下，稱重后

15、 減去濾紙濕重。,5鏡檢采用顯微鏡，低倍、高倍、油鏡，觀擦菌絲生長狀況和有無雜菌污染。測試液體菌種感官指標表1液體菌種感官指標感官檢測名稱感官指標菌球菌種色澤液體菌球菌種呈白色或乳黃色，濾液呈棕色或乳黃色。菌球菌種形狀菌液菌球稍粘稠，菌粒懸浮、分布均勻、 4c低溫保臧白卜沉 現(xiàn)象，別分開的液體為黃白色或微棕色。在 1825 c放置一 周液體外表會有厚垣菌膜形成。菌球菌種的氣味有獨特的菌體香味，無酸、辛、苦、臭味等異味。液體菌種理化檢測指標表2理化指標液體菌球菌種理化檢測名稱理化指標pH值在品種正常范圍內(nèi)菌粒濕重g/100ml10顯微鏡卜觀察液體菌球菌種和雜菌鑒別菌粒內(nèi)原生質(zhì)分布均勻、染色劑著色

16、深。無霉菌菌絲，酵母和細菌菌體。留存樣品無菌檢查在PDA上劃痕處無霉菌、酵母菌、細菌菌落生長。7記錄與存檔液體菌球菌種消費的每個環(huán)節(jié)都要有詳細的消費記錄，并由主管指導審核，簽 字后歸檔保存。貯存運輸在2 c4 c的冰箱中可保存3 0 do三液體菌球的培養(yǎng)8造粒液體菌球培養(yǎng)液配方配方1:馬鈴薯、玉米粉、葡萄糖、蛋白月東、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素 B1、聚氧丙稀甘油、pH值自然；配方2:麥秋、葡萄糖、麥秋、蘋果汁、維生素 B1、pH值自然；配方3:鮮蘋果、葡萄糖、磷酸二氫鉀、酵母膏、pH值自然；配方4:大米、玉米粉、葡萄糖、蛋白月東、牛肉膏、 pH值自然。原材料符合NY/T528-2002標準要

17、求。詳細配方根據(jù)消費品種的營養(yǎng)需求，用水符合GB5749-2006,生活飲用水衛(wèi)生 標準。起始pH值培養(yǎng)基調(diào)節(jié)起始pH。投料與定容將熬制好的液體培養(yǎng)液分別裝入1000ml的三角瓶內(nèi)，裝入量為6 00ml,塞上特 制的棉塞，用牛皮紙把棉塞包住以免受潮。培養(yǎng)基火菌,培養(yǎng)液溫度到達溫度121C124C,保持時間3 0min,防止滅菌死角。冷卻降溫滅菌完畢后使培養(yǎng)液自然降溫至常溫。接種把滅菌后的培養(yǎng)液及所有的接種用具放入超凈工作臺內(nèi)用臭氧和紫外線分別消毒30分鐘，然后迅速將菌球菌種移入到液體培養(yǎng)液中并塞緊棉塞，接種完畢后，菌球液體進入培養(yǎng)階段。接種量一級造粒每瓶接入量為15ml, 二級造粒每瓶接入量5

18、ml,菌球培養(yǎng)接入量2 5ml。培養(yǎng)溫度接種后的菌球菌液要放在搖床上進展培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度1825c。培養(yǎng)時間液體菌球的培養(yǎng)時間為，一級造粒7天，二級造粒5天，菌球培養(yǎng)8 - 1 0天。留樣與檢測留樣將培養(yǎng)的液體菌球2減出放在2 c生化培養(yǎng)箱，進展留樣保存。無菌檢測對留存的液體菌球樣品應在無菌 PDA平板上劃線培養(yǎng)，在1 8 2 3 C恒溫培 養(yǎng)2d5d,假設劃痕上沒有細菌、霉菌、酵母菌菌落生長，那么說明該樣品無雜 菌。對留樣樣品應在取樣后及時鏡檢，確定菌絲生長發(fā)育狀態(tài)和有無雜菌污染。pH值采用酸度計測定，應在一之內(nèi)。8菌液濕重采用15cm的定量濾紙，將100ml液體菌球，過濾至無水水滴滴下，稱重后 減去濾紙濕重。8鏡檢采用顯微鏡，低倍、高倍、油鏡，觀察菌球生長狀況和有無雜菌污染。8測試液體菌球感官指標表1液體菌球感官指標感官檢測名稱感官指標菌球色澤液體菌球呈白色或乳黃色，濾液呈棕色或乳黃色。菌球形狀菌液菌球呈懸浮狀、分布均勻、2 C低溫保臧白卜沉現(xiàn)象，別離菌球*白色或黃白色。在1825c放