浮游菌及表面菌檢測(cè)

1、浮游(fyu)菌（Airborne Microbe）共三十九頁(yè)講解(jingji)目錄工作(gngzu)流程備料單 123456 此處添加目錄標(biāo)題7菌落計(jì)數(shù) 潔凈室污染源浮游菌表面菌培養(yǎng)基成分共三十九頁(yè)接受(jishu)指令結(jié)果觀察(gunch)、記錄填寫(xiě)記錄寫(xiě)報(bào)告采樣菌落計(jì)數(shù)恒溫箱培養(yǎng)制作平板滅菌備料制定計(jì)劃查閱依據(jù)工作流程共三十九頁(yè) 備料(bi lio)單平皿 2套消毒劑(75%酒精)采樣儀棉花鑷子大豆(ddu)酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)1520ml/皿X2共三十九頁(yè)污染物種類(lèi)(zhngli)通常所指的空氣污染物主要有以下三類(lèi) 懸浮在空氣中的固態(tài)、液態(tài)微粒 霉菌、致病菌等懸浮在空氣中的微生

2、物；各種對(duì)人體或生產(chǎn)過(guò)程有害的氣體(qt)。由于空氣凈化的目的與對(duì)象不同，凈化的內(nèi)容、方法和衡量標(biāo)準(zhǔn)也不同。以潔凈室為對(duì)象的空氣凈化的目的，就是最大可能地把空氣介質(zhì)中的懸浮微粒除掉，對(duì)于生物潔凈室，還要控制有生命微粒。 共三十九頁(yè)2.2 污染物傳播(chunb)途徑 危害生產(chǎn)工藝的主要污染源主要有： 人員；送風(fēng)；機(jī)器及其他生產(chǎn)設(shè)備；原材料與經(jīng)過(guò)加工的原材料；包裝材料；生產(chǎn)工藝用各種介質(zhì)及潔凈用化學(xué)品；服裝與其他設(shè)備中的紡織物；辦公設(shè)備與辦公材料；參觀人員；維修人員，特別是那些來(lái)自(li z)潔凈區(qū)外部的人員。與產(chǎn)品接觸的污染物有兩種來(lái)源生產(chǎn)工藝之內(nèi)產(chǎn)生；從外部環(huán)境傳入生產(chǎn)環(huán)境之中。共三十九頁(yè)

3、污染源 潔凈室污染源 新風(fēng)帶入的塵粒和微生物；作業(yè)(zuy)人員發(fā)塵和散菌；建筑圍護(hù)結(jié)構(gòu)、設(shè)施的產(chǎn)塵；設(shè)備及產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程的產(chǎn)塵。共三十九頁(yè)室內(nèi)空氣的主要污染(wrn)物質(zhì) 污染發(fā)生源 粒狀污染物 有害氣體 人體粉塵、皮屑、污垢、細(xì)菌、纖維、化妝品 體臭、CO2、氨、水蒸氣吸煙粉塵（焦油、尼古丁等）、二甲硝酸銨等 CO、CO2、NO、NO2、甲醛、丙烯醛、碳?xì)浠衔?辦公設(shè)備 紙張、家具的纖維肌塵粒 臭氧、氨、溶劑類(lèi)（VOC） 機(jī)械運(yùn)轉(zhuǎn)設(shè)備 轉(zhuǎn)動(dòng)設(shè)備磨損的粉塵、纖維、碳化油脂等 潤(rùn)滑油揮發(fā)物 燃燒器具 煙塵 CO、CO2、NO、NO2、SO2、甲醛、碳?xì)浠衔?建筑材料 細(xì)菌、霉菌、璧虱、石棉纖

4、維、玻璃纖維、粉塵等 甲醛、氡氣、溶劑、粘接劑中的有機(jī)溶劑揮發(fā)物 清洗和滅菌噴射劑（氟化碳?xì)浠衔铮⒕鷦?、防霉劑、溶劑、洗滌劑的揮發(fā)物 共三十九頁(yè)人體(rnt)各部位的帶菌數(shù)身體部位細(xì)菌身體部位細(xì)菌手1001000個(gè)/2鼻液107g/ml額104105個(gè)/2尿液約108g/ml頭發(fā)約106個(gè)/2糞便108個(gè)/g液下106107個(gè)/2共三十九頁(yè)著無(wú)菌服時(shí)的人體(rnt)散發(fā)細(xì)菌量動(dòng)作溫度/濕度/%浮游菌數(shù)沉降菌數(shù)附著菌數(shù)人體散發(fā)菌量個(gè)(人min) -1 平均值個(gè)(人min)-1踏步29.827.425.825.426.0708567846515732753177017501376509389

5、40715632918833021223216522703472238921381870239121.420.03029982255616047911830612603341起立坐下26.025.223.421.420.0686365312817978674039313751821348431286141941404471651502101496475216271172抬臂25.225.220.06263285894086096311476705560722577745681共三十九頁(yè)GB/T 162931996 潔凈室（區(qū)）clean room (area) 對(duì)塵粒及微生物污染規(guī)定需進(jìn)行環(huán)境

6、控制的房間或區(qū)域。其建筑結(jié)構(gòu)、裝備及其使用均具有減少對(duì)該區(qū)域內(nèi)污染源的介質(zhì)、產(chǎn)生和滯留的功能。潔凈室的定義潔凈室是指空氣潔凈度達(dá)到規(guī)定級(jí)別的可供工作的空間。其功能是控制各種微粒（主要是塵埃粒子）的污染，來(lái)達(dá)到滿足精密產(chǎn)品的生產(chǎn)與科學(xué)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。潔凈室絕不是僅限于“潔凈”，不同的行業(yè)(hngy)與部門(mén)對(duì)溫度、濕度、照明、噪聲、靜電、微振都有相當(dāng)要求，是集建筑裝飾（與大氣相對(duì)隔斷的密閉裝修）、凈化空調(diào)、動(dòng)力電、照明電、工藝管道等多種專(zhuān)業(yè)技術(shù)于一體的多功能的綜合整體產(chǎn)物.共三十九頁(yè)浮游(fyu)菌（Airborne Microbe）懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過(guò)(tnggu)專(zhuān)門(mén)的培養(yǎng)基，在適宜的生

7、長(zhǎng)條件下繁殖到可見(jiàn)的菌落數(shù)。共三十九頁(yè)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中浮游菌測(cè)試條件、測(cè)試方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用(shyng)于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)，無(wú)菌室或無(wú)菌區(qū)域（包括潔凈工作臺(tái)）的浮游菌的測(cè)定和環(huán)境的驗(yàn)證。參考(cnko)標(biāo)準(zhǔn)：共三十九頁(yè)2.4 潔凈室分類(lèi)(fn li) 2.4.1 按用途分類(lèi) 工業(yè)(gngy)潔凈室；生物潔凈室一般生物潔凈室；生物安全潔凈室。2.4.2 按氣流流型分類(lèi) 單向氣流潔凈室；非單向流潔凈室；混合流潔凈室；輻（矢）流潔凈室。 共三十九頁(yè)共三十九頁(yè)采樣器原理撞擊法 impacting method撞擊式空氣微生物采樣器采樣，通過(guò)抽氣動(dòng)力作用(zuyng)，使空氣通

8、過(guò)狹縫或小孔而產(chǎn)生高速氣流，從而使懸浮在空氣中的帶菌粒子撞擊到瓊脂平板上，經(jīng) 35 ，48 h培養(yǎng)后，計(jì)算每立方米空氣中所含的細(xì)菌菌落數(shù)的采樣測(cè)定方法。共三十九頁(yè)最小采樣(ci yn)量潔凈度級(jí)別采樣量（L/次）100級(jí)100010000級(jí)500100000級(jí)100300000級(jí)100共三十九頁(yè)采樣(ci yn)點(diǎn)的位置采樣點(diǎn)位置可以同懸浮粒子(lz)測(cè)試點(diǎn)。工作區(qū)測(cè)點(diǎn)位置離地0.81.5m左右（略高于工作面）。送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開(kāi)送風(fēng)面30cm左右?？稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。采樣注意事項(xiàng)對(duì)于單向流或送風(fēng)口，采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向；對(duì)于非單向流，采樣管口向上。布置采樣點(diǎn)

9、時(shí)，至少應(yīng)離開(kāi)塵粒較集中的回風(fēng)口1m以上采樣時(shí)，測(cè)試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè),并盡量少走動(dòng)采取一切措施防止采樣過(guò)程的污染和其他可能對(duì)樣本的污染。 共三十九頁(yè)采樣(ci yn)點(diǎn)布置臺(tái)臺(tái)臺(tái)陰性(ynxng)對(duì)照臺(tái)采樣超凈臺(tái)共三十九頁(yè)每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游(fyu)菌平均濃度的計(jì)算浮游菌平均濃度（個(gè)/m）=菌落數(shù)/采樣量示例(shl)1：某測(cè)點(diǎn)采樣量為400L,菌落數(shù)為1，則：浮游菌平局濃度=1/0.4=2.5個(gè)/m示例2：某測(cè)點(diǎn)采樣量為2m，菌落數(shù)為3，則：浮游菌平局濃度=3/2=1.5個(gè)/m共三十九頁(yè)測(cè)試(csh)規(guī)則測(cè)試條件在測(cè)試之前，要對(duì)潔凈室（區(qū)）相關(guān)(xinggun)參數(shù)進(jìn)行預(yù)先測(cè)試，這類(lèi)測(cè)試

10、將會(huì)提供懸浮粒子的環(huán)境條件，例如：這種預(yù)先測(cè)試可包括：溫度和相對(duì)濕度的測(cè)試，潔凈室（區(qū)）的溫度和相對(duì)濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)（無(wú)特殊要求時(shí)），溫度在1826，相對(duì)濕度在45%65%為宜室內(nèi)送風(fēng)量或風(fēng)速的測(cè)試，或壓差的測(cè)試高效過(guò)濾器的泄漏測(cè)試共三十九頁(yè)GB/T 162931996 單向流unidirectional air flow（曾稱(chēng)為層流laminar flow）沿著平行流線，以單一通路以一定流速(li s)向單一方向流動(dòng)的氣流。共三十九頁(yè)GB/T 1629319963.9 非單向流nonunidirectional air flow（曾稱(chēng)為亂流turbulent flow） 具有多

11、個(gè)通路循環(huán)(xnhun)特性或氣流方向不平行的，不滿足單向流定義的氣流。共三十九頁(yè)大豆(ddu)酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）酪蛋白胰酶消化物 15g 提供(tgng)氮源、維生素和生長(zhǎng)因子大豆粉木瓜蛋白酶消化物 5g 提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子氯化鈉 5g 調(diào)節(jié)滲透壓瓊脂 15g 凝固劑純化水 1000mL3035 48h 共三十九頁(yè) 測(cè)試步驟 測(cè)試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。采樣器進(jìn)入被測(cè)房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級(jí)潔凈室的采樣器宜一直放在被測(cè)房間內(nèi)。用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。 采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤(pán)以及罩子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束，再用消毒劑輕輕噴射(pns

12、h)罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤(pán)。 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對(duì)采樣管的外壁及內(nèi)壁進(jìn)行消毒時(shí)，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。采樣者應(yīng)穿戴與被測(cè)潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤(pán)上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。 狹縫式采樣器的采樣程序儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開(kāi)動(dòng)真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min，并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤(pán)轉(zhuǎn)速。 關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度。置采樣口于采樣點(diǎn)后，依次開(kāi)啟采樣器、真空泵，轉(zhuǎn)動(dòng)定時(shí)器，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時(shí)間。共三十九頁(yè)沉降菌和浮游菌的區(qū)別是什么？只是捕捉時(shí)的形態(tài)差異。沉降菌指落在地面或物體表面的灰塵中攜帶的細(xì)菌；浮游菌

13、指在空氣中漂浮的塵埃(chn i)所攜帶的細(xì)菌 。見(jiàn)相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)沉降菌 GB/T 16294-2010浮游菌 GB/T 16293-2010共三十九頁(yè)表面(biomin)菌附在人體表皮或設(shè)備(shbi)表面的微生物共三十九頁(yè)接受(jishu)指令結(jié)果(ji gu)觀察、記錄填寫(xiě)記錄寫(xiě)報(bào)告采樣與制作平板菌落計(jì)數(shù)恒溫箱培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備滅菌備料制定計(jì)劃查閱依據(jù)工作流程共三十九頁(yè)查閱(chyu)依據(jù)：共三十九頁(yè)表面(biomin)微生物微 生 物 在表面附著的程度受表面特性、微生物自身和存在的其他材料(如潤(rùn)滑劑)的影響。污染源也會(huì)影響到附著程度。為獲取微生物，所進(jìn)行的處理包括漂洗(同時(shí)施以物理力)或直接表

14、面取樣。表面活性劑可以用于提高回收，但應(yīng)認(rèn)識(shí)到，較高濃度的表面活性劑可能(knng)會(huì)抑制微生物在 相 當(dāng) 一部分材料中，有些微生物可能以生物膜的形式出現(xiàn)，在生物膜的結(jié)構(gòu)中，微生物在牢固附著于材料表面上的被囊狀包圍。生物膜狀微生物可能會(huì)表現(xiàn)更強(qiáng)的抗滅菌性共三十九頁(yè)采樣方法：袋蠕動(dòng)(rdng)超聲洗脫攪動(dòng)(帶或不帶玻瑯珠)渦旋式混合 沖洗攪切(碎解)擦拭一步到位型接觸板 、 瓊脂覆蓋共三十九頁(yè)擦拭含有可吸收取樣材料的棉拭子通常被固定于桿或把手上。樣品材料是不是可溶性的都行。通常的使用方法是用緩沖液或液體培養(yǎng)基濕潤(rùn)棉拭，用棉拭擦拭界定好的取樣表面。在有些情況下，可以(ky)先濕潤(rùn)樣品表面，然后用干

15、棉拭擦拭，這樣可以(ky)提高回收效率。隨后將棉拭放至緩沖溶液或液體培養(yǎng)基中，并攪動(dòng)以從棉拭上取下微生物。另外，有時(shí)也可用可溶性棉拭，使棉拭溶解于緩沖液或液體培養(yǎng)基中。則用過(guò)濾、平板計(jì)數(shù)或其他方法分析所得到的懸液共三十九頁(yè)擦拭 是 從不規(guī)則形狀產(chǎn)品或相對(duì)難以接近的區(qū)域取樣的有效方法，該方法對(duì)取樣面積必須大時(shí)也有效但 該 方 法因擦拭方式的不同而更易出錯(cuò)。而且，通過(guò)擦拭不太可能(knng)將樣品上所有的微生物都收集到。有些微生物可能(knng)會(huì)被棉拭本身吸附，從而不會(huì)被測(cè)到。棉 拭 中 不應(yīng)有微生物殺滅劑或微生物抑制劑共三十九頁(yè)在 生 物 負(fù)載估計(jì)過(guò)程中，洗脫(x tu)液可用于從產(chǎn)品上取下微

16、生物;傳送培養(yǎng)基可用于將取下的微生物移去計(jì)數(shù);稀釋液可用于獲得含有可計(jì)數(shù)微生物的懸液。洗 脫 液 和稀釋液的特性對(duì)所用方法的效率有顯著影響。在選擇稀釋液或洗提液時(shí)，應(yīng)注意它們的成分(如組成、濃度、滲透性和pH) 這些成分不應(yīng)使微生物增殖或失活當(dāng) 用 液 體從固體表面取下微生物時(shí)，可考慮使用表面活化劑。洗脫液、稀釋液和轉(zhuǎn)送(zhun sn)培養(yǎng)墓共三十九頁(yè)洗脫(x tu)液的稀釋液示例溶液水中的濃度應(yīng)用林格氏溶液1/4強(qiáng)度通用蛋白胨水溶液0.1%1.0%通用緩沖的蛋白胨水溶液0.067mol/L磷酸0.43%氫氧化鈉0.1%蛋白胨通用磷酸鹽緩沖鹽水溶液0.02mol/L磷酸0.9%氫氧化鈉通用氯

17、化鈉溶液0.25%0.9%通用Calgon林格氏溶液1/4強(qiáng)度溶解藻酸鈣棉拭硫代硫酸鹽林格氏溶液1/4強(qiáng)度中和殘留氯水稀釋含水樣品，計(jì)數(shù)前制備可溶材料的等滲壓溶液注：此表并不包括所有。表面活化劑，如聚山梨醇酯（吐溫80）可以加入洗提液和稀釋液中。根據(jù)具體的應(yīng)用，通常使用的濃度在0.01%0.1%之間。應(yīng)使用適當(dāng)濃度的表面活性劑，并加以特殊處理以防止泡沫形成。共三十九頁(yè)陰性(ynxng)對(duì)照生理鹽水(shnglynshu)生理鹽水擦拭采樣25cm21011021033035722小時(shí)用滅過(guò)菌的鑷子沾濕棉球把棉球放入試管內(nèi)，搖勻（洗脫）1ml1ml共三十九頁(yè)備料(bi lio)單鑷子(ni zi) 1個(gè) 平皿 7套棉球 2個(gè) 試管 4支刻度吸管 1ml 2支大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)1520ml/皿X70.9生理鹽水 10ml/支 x4 共三十九頁(yè)Thank You !共三十九頁(yè)內(nèi)容摘要浮游菌（Airborne Microbe）。由于空氣凈化的目的與對(duì)象不同，凈化的內(nèi)容、