生物制藥十五章第一節(jié)151028課件

1、生物制品與生物技術(shù)藥物制造工藝第一節(jié)：概述第二節(jié)：疫苗和菌苗第三節(jié)：主要菌苗和疫苗的制造方法第四節(jié)：重組治療蛋白類藥物第五節(jié)：基因治療與基因藥物第一節(jié)：生物制品概述1 、概念和發(fā)展歷史2 、分類3、生物制品質(zhì)量要求1 概念和發(fā)展歷史Def: 以微生物、細(xì)胞、動(dòng)物或人源組織和體液等為原料，利用傳統(tǒng)技術(shù)或用現(xiàn)代生物技術(shù)制成，用于人類疾病的預(yù)防、治療和診斷。包括: 各種疫苗、抗血清、抗毒素、類毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、診斷試劑等。1.2 從疫苗生產(chǎn)看生物制品的發(fā)展12世紀(jì)，開始使用人痘接種法預(yù)防天花。1796年，琴納從患牛痘擠奶女工的痘皰中，分離皰漿，接種于8歲男孩的手臂上，獲得對(duì)天花免疫力。1.2 從疫苗

2、生產(chǎn)看生物制品的發(fā)展1798年，醫(yī)學(xué)界正式承認(rèn)“接種疫苗確實(shí)是一種行之有效的免疫方法”。1870年，法國科學(xué)家巴斯德發(fā)明了第一個(gè)細(xì)菌減毒活疫苗雞霍亂疫苗。巴斯德將此歸納為對(duì)動(dòng)物接種什么細(xì)菌就可以使其不受該病菌感染的免疫接種原理，從而奠定了疫苗的理論基礎(chǔ)。因此人們把巴斯德稱為疫苗之父。1980年 世界衛(wèi)生組織宣布全球消滅了天花。問題1、生物制品的種類有哪些？每一個(gè)種類包含哪些生物制品？2、生物制品的質(zhì)量要求是什么？3、生物制品標(biāo)準(zhǔn)品的要求有哪些？4、標(biāo)準(zhǔn)品的分類？2 生物制品的分類1. 預(yù)防類：細(xì)菌類疫苗(菌苗）、病毒類疫苗、類毒素和聯(lián)合疫苗。2.治療類： 抗毒素及免疫血清 細(xì)胞因子 重組DNA

3、產(chǎn)品血液制品：3. 診斷類： 體外診斷制品：由特定抗原、抗體或有關(guān)生物物質(zhì)制成的免疫診斷試劑或試劑盒，用于體外免疫診斷。 體內(nèi)診斷制品：由變態(tài)反應(yīng)原或有關(guān)抗原制成的免疫診斷試劑，用于皮內(nèi)接種，診斷個(gè)體對(duì)病原的易感性或免疫狀態(tài)。4、其他制品 3、生物制品質(zhì)量要求 生物制品檢定內(nèi)容：安全性：毒性試驗(yàn)，防腐性試驗(yàn)，熱原質(zhì)試驗(yàn)，安全性試驗(yàn)；有關(guān)安全性的特殊試驗(yàn)；效力：濃度測(cè)定、活菌率或病毒滴定測(cè)定、動(dòng)物保護(hù)率試驗(yàn)、免疫抗體滴度測(cè)定，穩(wěn)定性試驗(yàn)（2）生物制品的質(zhì)量控制：安全性、有效性和可控性 （P469)4、生物制品的檢定標(biāo)準(zhǔn)(1)生物制品的標(biāo)準(zhǔn)品或參考品Def: 用于生物制品效價(jià)、活性或含量測(cè)定的或其

4、特性鑒別、檢查的生物標(biāo)準(zhǔn)品或參考品。有世界衛(wèi)生組織或國家檢定機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)分發(fā)；有世界衛(wèi)生組織審定分發(fā)的，為國際標(biāo)準(zhǔn)；有國家檢定機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)分發(fā)的，則稱為國家標(biāo)準(zhǔn)。（2）生物制品標(biāo)準(zhǔn)品的要求準(zhǔn)確：單位數(shù)準(zhǔn)確凍干：效價(jià)穩(wěn)定溶封：瓶簽、說明書和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 標(biāo)準(zhǔn)品的分級(jí)國際生物標(biāo)準(zhǔn)：有世界衛(wèi)生組織根據(jù)國際協(xié)作研究的結(jié)果標(biāo)明其國際單位。用于標(biāo)定國家的或?qū)嶒?yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)品或參考制品國際參考標(biāo)準(zhǔn)國際生物參考試劑：生物學(xué)診斷試劑、生物材料或用于鑒定微生物或診斷疾病的高度特異血清。（3）國際標(biāo)準(zhǔn)的檢定程序（P470）第二節(jié)：疫苗和菌苗（一 ）傳統(tǒng)疫苗（二）新一代疫苗一、疫苗分類（一 ）傳統(tǒng)病毒疫苗1、死疫苗（dead Vac

5、cine）2、活疫苗（attenuated vaccine）3、亞單位疫苗（subunit vaccine）1、死疫苗（dead Vaccine） 利用物理或化學(xué)方法殺死或滅活培養(yǎng)增殖的標(biāo)準(zhǔn)微生物制成的預(yù)防制劑。2、活疫苗（attenuated vaccine） 用人工定向變異或從自然界篩選出毒力高度減弱或基本無毒的微生物制成的預(yù)防制劑。類別死疫苗活疫苗制劑性狀殺死的病原微生物弱毒或無毒的病原微生物接種量、次數(shù)量大、次數(shù)多（2-3）量小、1次保存、有效期易保存，較穩(wěn)定不易保存，4 數(shù)周失效免疫效果較差、不持久較好，維持1-5年或更長安全性會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、全身或局部反應(yīng)有時(shí)會(huì)感染致病兩種類型疫苗特征

6、比較3、亞單位疫苗（subunit vaccine）利用病原體中有效的免疫原成分制成的疫苗，稱為亞單位疫苗 。（二）新一代疫苗1、基因工程疫苗2、遺傳重組疫苗3、合成肽疫苗4、獨(dú)特型抗體疫苗問題1、基因工程疫苗的種類有哪些？2、每一種疫苗優(yōu)、缺點(diǎn)是什么？1、基因工程疫苗 （gene engineered vaccine) 利用DNA重組技術(shù)克隆并表達(dá)保護(hù)性抗原基因，用表達(dá)的抗原產(chǎn)物或重組體本身制成的疫苗。包括 基因工程亞單位疫苗、 基因工程載體疫苗、 核酸疫苗、 基因缺失活疫苗蛋白工程疫苗等。 Def:基因工程表達(dá)的蛋白抗原純化后制成的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：產(chǎn)量高、純度高、安全性高；用于病原體難培養(yǎng)或有

7、潛在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。缺點(diǎn)：與傳統(tǒng)亞單位疫苗相比，免疫效果較差。增強(qiáng)免疫原性：篩選完整的顆粒性結(jié)構(gòu)；加入有免疫佐劑 基因工程亞單位疫苗基因工程載體疫苗(gene engineering vector vaccine)利用微生物做載體，在微生物中表達(dá)保護(hù)性抗原基因，把微生物制成疫苗。優(yōu)點(diǎn)：1、活疫苗，抗原不需純化;2、不需多次免疫，載體本身可發(fā)揮免疫佐劑效果。缺點(diǎn)：載體為特定的微生物載體，曾感染過腺病毒或者接種卡介苗的人，對(duì)載體微生物已具有免疫力，再次接種后不易繁殖，會(huì)影響免疫效果。核酸疫苗（nucleic acid vaccine）：或稱基因疫苗用能夠表達(dá)抗原的基因制成疫苗。

8、優(yōu)點(diǎn)： 易于制備、便于保存、可多次免疫并且容易制成多聯(lián)多價(jià)疫苗。缺點(diǎn)：是否會(huì)整合到染色體上引起癌變；能否引起免疫病理作用，如自身抗核酸抗體的產(chǎn)生，免疫耐受等?；蛉笔Щ钜呙纾╣ene deleted live vaccine）：去除與毒力有關(guān)的基因獲得的缺失突變毒株制成的疫苗。（缺失毒素A單位的或其他毒力相關(guān)基因的霍亂活菌苗已上市）優(yōu)點(diǎn)：突變性狀明確、穩(wěn)定；不易返祖、毒力恢復(fù)；是研究安全有效的新型疫苗的重要途徑。蛋白工程疫苗（protein engineering vaccine ）：抗原基因加以改造，使之發(fā)生點(diǎn)突變、缺失、甚至進(jìn)行不同基因或結(jié)構(gòu)域的人工組合，達(dá)到增強(qiáng)其免疫原性，去除有害作用或

9、副反應(yīng)的一類疫苗2、遺傳重組疫苗 （genetic recombinant vaccine）：用遺傳重組方法獲得重組微生物制成的疫苗。3、合成肽疫苗(Synthetic peptide vaccine)：用化學(xué)方法合成能夠誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)的多肽制成的疫苗。優(yōu)點(diǎn)： 純度和安全性高；副作用??；可長期在常溫下保存；缺點(diǎn)： 抗原性單一；免疫原性弱。 合成肽抗原聯(lián)合使用提高免疫原性。4、抗獨(dú)特型抗體疫苗 （antiidiotype vaccine）：用與特定抗原的免疫原性相近的抗體（ab2）做抗原制成的疫苗。目前此疫苗尚處于理論性研究階段。 一、滅活菌苗制造二、活菌苗制造三、疫苗的制造疫苗制造的方法

10、滅活菌苗通用制造程序 菌種的選擇 菌液培養(yǎng) 滅活 配苗 濃縮 菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗滅活菌苗，種類、苗型甚多，但制造的基本程序差別不大。 一、滅活菌苗制造基本流程菌液佐劑+乳 化分裝和保存原料配置滅活菌液滅活 滅活菌苗通常根據(jù)細(xì)菌的特性加入最有效的滅活劑，采取最適當(dāng)?shù)臏缁顥l件進(jìn)行。表 幾種滅活菌苗的滅活方法 一、滅活菌苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗流程圖1菌苗制造工藝流程蛋白質(zhì)、肉浸液等原料培養(yǎng)基病原菌分離菌 種弱毒菌種配置、滅菌鑒定減毒檢驗(yàn)配制滅菌檢驗(yàn)配制滅菌原 料佐 劑死菌液配苗、乳化滅活菌苗培 養(yǎng)原液配 苗活菌苗保護(hù)劑菌 液分裝、凍干分 裝殺菌原 料活化種子檢定菌種的選擇

11、產(chǎn)品副作用小、安全性好和效力高；生物學(xué)特性穩(wěn)定1、特定的抗原性2、典型的形態(tài)、培養(yǎng)特性和生化特性，并可長期持保持3、易在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)4、菌種在培養(yǎng)過程中應(yīng)產(chǎn)生較小的毒性（死菌苗）。5、菌種在培養(yǎng)過程中無毒性復(fù)原現(xiàn)象（活菌苗）6、在培養(yǎng)過程中，能產(chǎn)生大量典型毒素（類毒素）3、病毒疫苗制造1、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造2、 細(xì)胞培養(yǎng)制造疫苗3、病毒性動(dòng)物組織疫苗制造 細(xì)胞類型：原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞兩類根據(jù)病毒種類、制備疫苗工藝流程選擇不同的細(xì)胞。（脊髓灰質(zhì)炎活疫苗選擇vero細(xì)胞；狂犬病弱毒細(xì)胞疫苗采取BHK21細(xì)胞增殖病毒等）。接毒與收獲種毒與毒種繼代配苗細(xì)胞制備二、病毒性細(xì)胞培養(yǎng)疫苗制造 病毒接

12、種培養(yǎng)有同步與異步。 同步：在細(xì)胞分裝同時(shí)或不久接種毒種。異步：在細(xì)胞形成單層后接種毒種，如乙型腦炎疫苗，細(xì)胞形成單層后傾去培養(yǎng)液，按1%-2%量接種毒種，經(jīng)吸附后加入維持液繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，待70%-85%以上細(xì)胞病變時(shí)收獲。 收獲收獲時(shí)間和方法依疫苗性質(zhì)而定。 接毒與收獲種毒與毒種繼代配苗細(xì)胞制備二、通過細(xì)胞培養(yǎng)制造疫苗（五）配 苗 1滅活疫苗 不同滅活劑對(duì)不同病毒的作用也不同。向細(xì)胞毒液內(nèi)按規(guī)定加入滅活劑，在一定的溫度下作用一定的時(shí)間，有的滅活劑還需加入阻斷劑中止滅活。滅活疫苗配置通常都需加入佐劑，充分混合、分裝，制成滅活疫苗。2凍干苗 細(xì)胞毒液內(nèi)按比例加入保護(hù)劑或穩(wěn)定劑，充分混合、分裝，進(jìn)

13、行冷凍真空干燥制成凍于疫苗。 接毒與收獲種毒與毒種繼代配苗細(xì)胞制備二、通過細(xì)胞培養(yǎng)制造疫苗流程圖3病毒性細(xì)胞疫苗制造工藝流程動(dòng)物或胚胎組 織毒 株種 毒滅活病毒消化鑒定培育培養(yǎng)檢驗(yàn)檢驗(yàn)配制原 料佐 劑傳代細(xì)胞配 苗（乳化、混勻）死疫苗原代懸液生長細(xì)胞配 苗活疫苗保護(hù)劑原 苗凍干、分裝分 裝滅活原 料原 料細(xì)胞培養(yǎng)液配制剪碎種 子鑒定擴(kuò)增收獲配制滅菌疫苗和菌苗質(zhì)量檢定標(biāo)準(zhǔn)1. 理化性質(zhì)檢定；2. 安全實(shí)驗(yàn)3、效力試驗(yàn)1、字體安裝與設(shè)置如果您對(duì)PPT模板中的字體風(fēng)格不滿意，可進(jìn)行批量替換，一次性更改各頁面字體。在“開始”選項(xiàng)卡中，點(diǎn)擊“替換”按鈕右側(cè)箭頭，選擇“替換字體”。（如下圖）在圖“替換”下拉列表中選擇要更改字體。