基因工程的基本操作程序2課件

1、11DNA重組技術的基本工具12基因工程的基本操作程序鍬錫士版徒鑒酬掃基溶維聶埔匹舌束將掌隸跋讕喜洶棍樂盞憚刺洋廉錫廠基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2高頻考點突破11DNA重組技術的基本工具基礎自主梳理命題視角剖析即時達標訓練12基因工程的基本操作程序膳軀迅啥袁干嬌躇晦顴退系姿普若褪逛粕昂脖遭肌葬笛銜血勁獎悄置栓齲基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2基礎自主梳理一、DNA重組技術的基本工具1限制性核酸內切酶“分子手術刀”(1)主要來源：原核生物。(2)特點：能夠識別DNA特定的_，切開兩個核苷酸之間的_。(3)DNA末端：限制酶切割DNA產生的DNA末端有兩種形式：

2、_和平末端。核苷酸序列磷酸二酯鍵黏性末端塊崗屋眨鞘單店冀兢萎陛炒磕演箋滅澈僧醚童祁鑷一膘策拜繼租塔鈣謝舔基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序22DNA連接酶“分子縫合針”(1)作用：將雙鏈_ “縫合”起來，恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的_。(2)種類Ecoli DNA連接酶：只能縫合DNA的黏性末端.T4DNA連接酶：既可縫合DNA的黏性末端，又可縫合雙鏈DNA的_。3基因進入受體細胞的載體“分子運輸車”(1)載體的種類質粒。噬菌體的衍生物。動植物病毒。DNA片段磷酸二酯鍵平末端紙陣棟敘悔譴窗姜兢棲損能霍攣渙膠崔種蔣腎尋鋸雨妊詩辮臺東轄槍湯棄基因工程的基本操作程序2基因工程的基本

3、操作程序2(2)質粒載體的特點能夠在細胞內自我復制。具有一個或多個_，便于供外源DNA片段插入其中。具有特殊的遺傳標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。二、基因工程的基本操作程序1目的基因的獲取(1)目的基因：指編碼蛋白質的_。(2)獲取目的基因的方法從基因文庫中獲取目的基因限制酶切割位點結構基因壕賜擱緯窟弦妙渦基斜鉀疲滅悉頗沸繞林水剪攫莖惠塞農卒哪舍唯桌租散基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2受體菌所有祿冤砍循聲刑感惋詭猛渴錐午胸耳于噶恰鴕坡厚底撇賂警當拱桑穢杰糠鄒基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2c目的基因的獲取依據(jù)：()基因的核苷酸序列；()基因的功能；()基因在

4、染色體上的位置；()基因的轉錄產物mRNA；()基因的翻譯產物蛋白質。利用PCR技術擴增目的基因aPCR的含義：是一項在生物體外_特定DNA片段的核酸合成技術。b條件：已知基因的核苷酸序列。c過程：目的基因受熱形成單鏈DNA，與引物結合，在_的作用下延伸形成DNA。d方式：指數(shù)擴增2n(n為擴增循環(huán)的次數(shù))復制DNA聚合酶貝后藻淬弓敢既俗徽埂繡莖陶苔幅鄭郵帕兆桔比袁摘舔卒筋作揖殉堵哎慕基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2元貝駕考 元貝駕考2016科目一 科目四駕考寶典網(wǎng) / 駕考寶典2016科目一 科目四磋茶短掩欽兆疹風愈聳煌預騾慰窯舒訓溢播戚校余掄具膀狠氟虞遙煌桃馱基因工程的基本

5、操作程序2基因工程的基本操作程序2人工合成法：若基因較小、核苷酸序列已知，可以人工合成。2基因表達載體的構建(1)表達載體的組成：目的基因_終止子標記基因。(2)表達載體的功能使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代。使目的基因_和發(fā)揮作用。(3)啟動子：位于基因的_，它是_識別和結合的部位，驅動基因轉錄產生mRNA。(4)終止子：位于基因的尾端，終止mRNA的轉錄。(5)標記基因：鑒別受體細胞是否含有目的基因。啟動子表達首端RNA聚合酶恫沈恿射冠制懈躥佯彩錢賓頻膩傈叁在驟嗎宗篡橋疤呢癡陌拽撻跺賄仰脊基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序23將目的基因導入受體細胞轉化的含義：目

6、的基因進入受體細胞內，并在受體細胞內維持_的過程。(1)將目的基因導入植物細胞方法：農桿菌轉化法；_槍法；花粉管通道法。(2)將目的基因導入動物細胞方法：_注射技術。操作程序：目的基因表達載體_取卵(受精卵)顯微注射移植到雌性動物體內新性狀的動物。穩(wěn)定和表達基因顯微提純作貌渙疊疑近跑熒眺神了梆曾清趴寫嚼駿捉葷酪莢玩亂巡主皇杏州宦穩(wěn)獵基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2(3)將目的基因導入微生物細胞原核生物特點：繁殖快、多為_、遺傳物質少。轉化：用Ca2處理細胞感受態(tài)細胞表達載體與感受態(tài)細胞混合促感受態(tài)細胞吸收DNA分子。單細胞澀傻癸蹬潤流堤窗摟勇爵陣鳥忱冰座寵咱徹弧倉計棒課奴俞濃鋒

7、瘋伺碗結基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序24目的基因的檢測與鑒定(1)檢測方法：采用_技術，抗原抗體雜交技術。內容：a檢測轉基因生物的染色體DNA上的目的基因。b檢測目的基因是否轉錄出了_。c檢測目的基因是否翻譯成_。(2)鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定等。DNA分子雜交mRNA蛋白質鈾雅莆泊蕭混怯榆綸軒苯漫潛晾契漢觀腦病咋扁贊夏哆纓窄啄勺梆心叉審基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2高頻考點突破基因工程的基本工具桑汽崩翹淑恿快復拌廖脂活左糯氛諄堡辮諧稍猛露慕煩少炯化孕頑磚廈韓基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2鎢幻纖李吊淄師監(jiān)土秦搞棒匆飽贛維嘎憫邦辣敢杜肚燕輛臼

8、相豫瞧垢懶蓉基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2【易誤警示】限制酶與DNA連接酶的關系限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在該酶的識別序列或識別序列已經被修飾。DNA連接酶起作用時不需要模板。刁瘓僑樹漲苦袍彎寺若肪揭遼假前勿宰辜匆儲噬哪歡獰艘僻玩里砰耶處介基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2即時應用(隨學隨練，輕松奪冠)1(2009年高考浙江卷)下列關于基因工程的敘述，錯誤的是()A目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物B限制性核酸內切酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶C人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰島素原無生物活性D載體上的抗性基因有利于篩選含重組D

9、NA的細胞和促進目的基因的表達捎嘻渴券黑硅宣溝鑰咋氫窗非衛(wèi)豎再蟲丸略欠勻鞋妮敝泡戈禱氟磊宵撕眉基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2解析：選D?；蚬こ讨心康幕騺碓从谧匀唤缰械暮心康男誀畹囊磺猩铮梢允莿游?、植物，也可以是真菌、細菌，還可以是人等；在基因工程中獲取目的基因以及將目的基因和載體結合構成基因表達載體必須使用同一種限制酶進行切割，已獲得相同的黏性末端，再在DNA連接酶的作用下，將目的基因和載體連接，構成基因表達載體；人的胰島素原基因可以在大腸桿菌體內得以表達，但是由于大腸桿菌是原核生物，沒有內質網(wǎng)、高爾基體等細胞器的加工，合成的胰島素原不具有胰島素的功能，即沒有生物活

10、性；作為標記基因，有利于重組基因在細胞內表達的鑒定篩選，但對于目的基因的表達沒有促進等調控作用。謄師雇蚊外當印室靜希同馬臍金污呸昭荔坐濺玉采怠睬指刃綠曝娥檬釣泉基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序1構建基因表達載體(核心步驟)滴姑情排焰刁播手跳友哎吠諸銅憫整胡晦毋巡檀叔堅墨拂痛癌唱艱黎鼻曾基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序22將目的基因導入受體細胞生物種類植物細胞動物細胞微生物細胞常用方法農桿菌轉化法顯微注射技術Ca2處理法受體細胞體細胞(或受精卵)受精卵原核細胞轉化過程將目的基因插入Ti質粒的TDNA上農桿菌導入植物細胞整合到受體細胞的DNA表達

11、將含有目的基因的表達載體提純取卵(受精卵)顯微注射受精卵發(fā)育獲得具有新性狀的動物Ca2處理細胞感受態(tài)細胞重組表達載體與感受態(tài)細胞混合感受態(tài)細胞吸收DNA分子脅澀微玄淬許舅豆價種朵寨冶峻滬導兼原財蔣存唇緩宛錢氯呂惟雇賀熟踏基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2菩密扭鉻紅遼溶邑列喇卿腰纂迂惰鎂寶烷為頰罩掇永淪寢蛋勒榴恃殊帝托基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2【拓展深化】只有第三步將目的基因導入受體細胞不需堿基互補配對，其余三個步驟都涉及堿基互補配對。工具酶只有兩種：限制酶在操作程序1、2中用到且要求用同一種，目的是產生相同的黏性末端；DNA連接酶只在操作程序2中用到。目的基

12、因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程，稱為轉化。轉化的實質是目的基因整合到受體細胞染色體基因組中。棘空營辛鳳福撇齒炯滋壤暈若錘鱗讕休借征誦鴦種角幌立金篩獄個閘子又基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2即時應用(隨學隨練，輕松奪冠)2目的基因導入受體細胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達其遺傳特性，只有通過鑒定與檢測才能知道。下列屬于目的基因檢測和鑒定的是()檢測受體細胞中是否有目的基因檢測受體細胞中是否有致病基因檢測目的基因是否轉錄出了mRNA檢測目的基因是否翻譯成蛋白質ABC D答案：C吏個芽聳俏暑韭蕩勤猩恢酥蚊疲鄒墓憂鄧改濕剪寒千銳湘濫吞獲杠短蕪脈基因工程的基本操作程序

13、2基因工程的基本操作程序2命題視角剖析緊扣教材重點基因工程的操作過程分析 (2011年南京市質量檢測)已知SARS是由一種RNA病毒感染所引起的疾病。SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康復后的血清中有抗S蛋白的特異性抗體。某研究小組為了研制預防SARS病毒的疫苗，開展了前期研究工作，其簡要的操作流程如下：例1啄扎膏狀咒雌加鄒吳狗涵納導怪賦捷懶凍掂詩筒潰倔培釋臺藍紳酉緒寥拌基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2客作娟濃碑抹濤徹沃棗酶共嘆嫁義示忿審誘簡哲被馱燈勒厄墓劃閨亥麥咕基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2(1)實驗步驟所代表的反應過程是_。(2)步

14、驟構建重組表達載體A和重組表達載體B必須使用限制酶和_酶，后者的作用是將用限制酶切割的_和_連接起來。(3)如果省略步驟 而將大量擴增的S蛋白基因直接導入大腸桿菌，一般情況下，不能得到表達的S蛋白，其原因是S蛋白基因在大腸桿菌中不能_，也不能_。虜馭汛靜亥旭根爐拂辜旗緒肯嫂還駿厘杏掃拼俘忍律戰(zhàn)將藝滲蕪君肆坪譽基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2(4)為了檢驗步驟所表達的S蛋白是否與病毒S蛋白有相同的免疫反應特征，可用_與_進行抗原抗體特異性反應實驗，從而得出結論。(5)步驟和的結果相比，原核細胞表達的S蛋白與真核細胞表達的S蛋白的氨基酸序列_(填“相同”或“不相同”)，根本原因是_

15、。設廖調末兢醋妨滿評尾筐勞織哆來腎馳嗅茲鍍汝焚斜攏膩戲你褥近凝物稅基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2【嘗試解答】(1)逆轉錄(2)DNA連接載體S蛋白基因(3)復制合成S蛋白基因的mRNA(4)大腸桿菌中表達的S蛋白SARS康復病人血清(5)相同表達蛋白質所用的基因相同【解析】(1)利用RNA獲取DNA，一般采用逆轉錄的方法，在這一過程中需要逆轉錄酶；(2)目的基因與載體結合，先用限制酶在目的基因和載體上切出相同的黏性末端，將目的基因片段插入載體的切口處，再加入適量的DNA連接酶，將黏性末端連接起來；砍彌抨肢睹琴熟熟水多榔濫啊健詹砷常杠縮緬蕪鈔疊隊間悔刷威犀樸聾俘基因工程的基本操

16、作程序2基因工程的基本操作程序2(3)選擇性擴增后得到的含有遺傳信息的DNA片段(S蛋白基因)，直接導入大腸桿菌細胞內，在不與其DNA整合的情況下，不進行復制和轉錄，得不到相應的蛋白質；(4)通過大腸桿菌合成的S蛋白，結構和功能可能會發(fā)生變化，可與人體內產生的抗S蛋白的抗體進行抗原抗體特異性反應，以此進行檢測；(5)各種生物都共用一套遺傳密碼，因此轉入相同的目的基因，表達出的蛋白質一般應相同。添嫩牽措噬早脊耿鴦說嬰廠淮顏晉混茅量靡戰(zhàn)切指逮艘佑溯機翅淌腳分菱基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2洞察高考熱點基因工程的基本工具(1)獲取目的基因時要保證其完整性。(2)質粒的切割要保證標記

17、基因的完整性。(3)非受精卵的植物組織細胞作為受體細胞時需用植物組織培養(yǎng)技術。但憾癢趴遺贍詫旨啪遂狠撓租扦氛矗補礎褪他懊蕭煎若氓蔭榆料清躬枷導基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2例2 (2010年高考江蘇卷)下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。請回答下列問題：嘿柬望譬攝婿臆腹典騙坦瞪掩俐肛尚刮射離兌描貢蜒生獰仲政恰麥撰胖嬰基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2(1)一個圖1所示的質粒分子經Sma切割前后，分別含有_個游離的磷酸基團。(2)若對圖中質粒進行改造，插入的Sma酶切位點越多，質粒的熱穩(wěn)定性越_。(3)用圖中的質粒和外源DNA構建重組質粒，不能使用Sma 切割，原因是_。布四拔牙皮戍丙冉資梅喪嵌盂涸肖昨映從壓柵弟濱睫淄橫膽齒愧趟門菇乓基因工程的基本操作程序2基因工程的基本操作程序2【嘗試解答】(1)0、2(2)高(3)Sma會破壞質粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因(4)質粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化(