破壞實(shí)驗(yàn)基本原則和方案

1、破壞實(shí)驗(yàn)基本原則和方案明騷易躲，暗賤難防。佛祖曰：你倆就是大傻！當(dāng)白天又一次把黑夜按翻在床上的時(shí)候，太陽就出生了酸破壞、堿破壞、高溫破壞、高濕破壞、光照破壞、氧化破壞酸破壞樣品中酸的濃度一般為，量一般，具體多少量以樣品能分解就行，產(chǎn)生降解產(chǎn)物本來酸破壞試驗(yàn)就是檢驗(yàn)該色譜條件能否使雜質(zhì)峰與主峰分開，是否能達(dá)到控制產(chǎn)品質(zhì)量的目的。破壞后加入適量的堿使值基本為中性，加入適量的磷酸二氫鉀使溶液的為，這樣可以延長色譜柱的使用壽命。破壞試驗(yàn)的具體做法與要求破壞試驗(yàn)，也稱為強(qiáng)制降解試驗(yàn)（），在人為設(shè)定的特殊條件下，如酸、堿、氧化、高溫、光照等，引起藥物的降解，通過對(duì)降解產(chǎn)物的測(cè)定，驗(yàn)證檢測(cè)方法的可行性，同時(shí)

2、分析藥物可能的降解途徑和降解機(jī)制。破壞性試驗(yàn)的設(shè)計(jì)常結(jié)合具體藥物的特點(diǎn)，選擇合適的條件，使藥物在每種環(huán)境下盡可能都有一定量的降解，并根據(jù)劑型的特點(diǎn)充分分析藥物的降解途徑和降解機(jī)制，保證試驗(yàn)的意義。對(duì)于相對(duì)穩(wěn)定的藥物，可增強(qiáng)破壞的強(qiáng)度，至少在1種條件下的降解達(dá)到10，%很少有藥物對(duì)所有條件都穩(wěn)定。酸破壞試驗(yàn)一般選擇的鹽酸，在室溫或加熱條件下進(jìn)行考察。一般配制倍濃度溶液，測(cè)定時(shí)以方便用等濃度的堿溶液調(diào)節(jié)值至中性。堿破壞試驗(yàn)一般選擇的氫氧化鈉溶液，在室溫或加熱條件下進(jìn)行考察。一般配制倍濃度溶液，測(cè)定時(shí)以方便用等濃度的酸溶液調(diào)節(jié)值至中性。高溫破壞試驗(yàn)（熱破壞）分別在固體和溶液狀態(tài)下進(jìn)行考察。固體一般C

3、或者C下1530天，溶液可水浴或者130烘箱下放置數(shù)小時(shí)。光破壞試驗(yàn)分別在固體和溶液狀態(tài)下進(jìn)行考察（考察天）。5.氧化破壞試驗(yàn)主要在溶液狀態(tài)下進(jìn)行考察，氧化劑可采用飽和的氧氣或不同濃度的過氧化氫（雙氧水），分別在室溫或加熱條件下進(jìn)行考察。需要同法進(jìn)行空白試驗(yàn)，如為原料破壞可僅進(jìn)行氧化破壞空白。試驗(yàn)結(jié)束后需要報(bào)告得出明確的結(jié)論：藥品在各種條件下的穩(wěn)定特性、降解途徑與降解產(chǎn)物，有關(guān)物質(zhì)分析方法是否可用于檢查降解產(chǎn)物等。破壞試驗(yàn)常規(guī)要求：對(duì)于采用法測(cè)定降解產(chǎn)物時(shí)，以主成分計(jì)算一般降解即可。并需要采用有效的方法對(duì)降解產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，需要報(bào)告測(cè)定的回收量，通常應(yīng)達(dá)到左右，以證明檢測(cè)方法的有效性。2對(duì)對(duì)于破

4、壞性試驗(yàn)時(shí)降解量較大的降解產(chǎn)物，建議結(jié)合穩(wěn)定性研究中加速試驗(yàn)和長期試驗(yàn)的具體雜質(zhì)數(shù)據(jù)，參考對(duì)新原料藥中雜質(zhì)的規(guī)定（每日服用最大劑量不超過克時(shí)，鑒定閾值為;每日服用最大劑量超過克時(shí)，鑒定閾值為）,必要時(shí)進(jìn)行定性分析,并作為已知雜質(zhì)，根據(jù)安全性數(shù)據(jù)，采用已知雜質(zhì)對(duì)照，確定合理的限度，訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。不能采用已知雜質(zhì)進(jìn)行對(duì)照時(shí)，可通過測(cè)定降解產(chǎn)物、主成分在測(cè)定波長處的吸收系數(shù)，分析兩者的差異。若兩者吸收系數(shù)相差較大時(shí)，建議采用響應(yīng)因子校正后進(jìn)行有效控制;如果兩者吸收系數(shù)相差較小，建議采用自身對(duì)照法或峰面積歸一化法進(jìn)行有效控制。破壞性試驗(yàn)產(chǎn)生的降解產(chǎn)物的個(gè)數(shù)比較多，采用法測(cè)定時(shí)，需考慮主成分與降解產(chǎn)物之

5、間、降解產(chǎn)物相互之間的分離度，保證降解產(chǎn)物峰與主峰、降解產(chǎn)物峰之間有良好的分離度。另外，對(duì)于原料藥，分離度符合要求也應(yīng)考慮到主藥與起始原料、各合成中間體是否有良好的分離度;對(duì)于制劑，應(yīng)注意輔料、輔料降解產(chǎn)物的干擾。需要值得一提的是色譜條件的確定通常以最難分離的兩個(gè)降解產(chǎn)物或降解產(chǎn)物與主成分之間的分離度符合要求作為依據(jù)之一。4對(duì).于創(chuàng)新藥物的破壞性試驗(yàn)來說，峰純度分析非常重要，一是可以了解降解產(chǎn)物的特性；二是可以有效地檢出和控制雜質(zhì)。檢測(cè)峰純度通常采用二級(jí)管陣列檢測(cè)器或者液質(zhì)連用技術(shù)分析測(cè)定各色譜峰的純度，說明在主峰中、各降解產(chǎn)物峰中有沒有包含其它峰。簡單地通過觀察峰形判斷峰的純度沒有說服力。5

6、.如輔料破壞出峰，不能從樣品破壞峰中扣除，溶劑峰除外（譬如雙氧水的峰）。參考案例：破壞試驗(yàn)對(duì)本品進(jìn)行酸破壞、堿破壞、氧化破壞、高溫破壞及光破壞試驗(yàn)，了解本品的降解途徑，同時(shí)考察破壞產(chǎn)物峰與主峰的分離情況，以驗(yàn)證方法的專屬性。取本品10片，研細(xì)，備用；取按處方比例混合的輔料適量，備用。酸破壞：精密稱取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于），置刻度試管中，加入鹽酸溶液，置水浴中加熱小時(shí)，調(diào)節(jié)值至中性，加流動(dòng)相稀釋至，濾過，取續(xù)濾液作為酸破壞溶液。堿破壞：精密稱取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于），置刻度試管中，加入氫氧化鈉溶液，置水浴中加熱小時(shí)，調(diào)節(jié)值至中性，加流動(dòng)相稀釋至，濾過，取續(xù)濾液作為堿破壞溶液。氧化破壞：精密稱

7、取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于），置刻度試管中，加入雙氧水溶液，置水浴中加熱小時(shí)，加流動(dòng)相稀釋至，濾過，取續(xù)濾液作為氧化破壞溶液。高溫破壞：精密稱取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于），置刻度試管中，加水，置水浴中加熱小時(shí)，加水稀釋至，濾過，取續(xù)濾液作為溶液高溫破壞溶液；取本品細(xì)粉適量，于C下放置天，精密稱取適量，加流動(dòng)相制成每約含的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為固體高溫破壞溶液。光破壞：精密稱取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于），置刻度試管中，加水，置照度下照射天，加流動(dòng)相稀釋至，濾過，取續(xù)濾液作為溶液光破壞溶液；取本品細(xì)粉適量，置照度下照射天，精密稱取約，置刻度試管中，加流動(dòng)相，超聲處理分鐘，濾過，取續(xù)濾液作為固體光破壞溶液。同法進(jìn)行輔料空白破壞試驗(yàn)，分別精密量取各破壞后溶液各m1注入色譜儀，記錄色譜圖。色譜圖見圖，結(jié)果見表。表破壞試驗(yàn)結(jié)果破壞條件主峰保留時(shí)間（分）面積歸一化法含量（雙）降解產(chǎn)物峰保留時(shí)間（分）回收量（雙）與主峰相鄰峰分離度酸破壞堿破壞氧化破壞溶液熱破壞固