2016細(xì)胞毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞遺傳毒性檢測

1、細(xì)胞遺傳毒性檢測 1-小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備 及有絲分裂指數(shù)的測定 2-微核的顯示目的要求掌握小鼠骨髓細(xì)胞染色體的制備方法.了解有絲分裂指數(shù)的計(jì)算。了解微核的顯示方法及其意義。實(shí)驗(yàn)原理骨髓細(xì)胞具有高度的分裂活性，經(jīng)秋水仙素或秋水酰胺處理后，使分裂細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期，再經(jīng)低滲處理、固定、滴片、染色等步驟，可制作較好的骨髓細(xì)胞的染色體標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)用品1器材：解剖器具、注射器、離心機(jī)、離心管、恒溫水浴箱、載玻片、酒精燈等.2試劑 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy固定液（甲醇：冰醋酸3：1;甲醇：冰醋酸1：1 ）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液、0.9%生理鹽水等。 3材

2、料：小鼠實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)將小鼠隨機(jī)分成兩組實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)前1-2小時(shí)大劑量秋水仙素CHR顯示微核顯示對照組實(shí)驗(yàn)前1-2小時(shí)0.5%秋水仙素0.1ml/只CHR顯示微核顯示方法與步驟注射量隨動(dòng)物種類不同而異。秋水仙素的主要作用是使分裂細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期，增加中期分裂相的比例。 引頸處死或斷頭處死小鼠。取出小鼠的前肢骨和后肢骨，注意不要將股骨剪斷，否則容易造成骨髓細(xì)胞的流失。滴加適量生理鹽水進(jìn)行沖洗，并仔細(xì)地將皮膚、肌肉等組織清除干凈。實(shí)驗(yàn)取材CHR顯示將四肢骨剪碎于低滲液中微核顯示將四肢骨剪碎于生理鹽水中加入少量低滲液，用剪刀將骨充分剪碎，并用吸管吹打，使骨髓細(xì)胞全部釋放出來。用濾網(wǎng)將獲得的液體過濾到離

3、心管中，加低滲液至8ml左右室溫下靜置20-30分鐘，進(jìn)行低滲。低滲結(jié)束后，加入1mlCarnoy固定液進(jìn)行預(yù)固定（5分鐘左右），輕輕混勻后，離心。1200轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，棄上清，加入固定液6ml，混勻后，室溫固定30分鐘，再次離心去上清，重復(fù)固定一次，離心后，根據(jù)沉淀的體積向沉淀中加入0.5-1ml預(yù)冷的固定液（甲醇：冰醋酸=1：1），將細(xì)胞重懸。預(yù)冷的玻片滴片后，須將片子晾干，再滴加適量Giemsa染液染色10-15分鐘，棄去染液，水洗，鏡檢。結(jié)果顯示有絲分裂指數(shù)（mitoticindex）：某一分裂組織或細(xì)胞群中，處于有絲分裂M期的細(xì)胞數(shù)占其總細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)。 分裂相細(xì)胞數(shù)有絲分裂指數(shù) = 細(xì)胞總數(shù)實(shí)驗(yàn)組對照組有絲分裂指數(shù)平均值取秋水仙素不同劑量組染色體制片，各隨機(jī)選取3-5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)各視野內(nèi)的有絲分裂指數(shù)，并可對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)），比較兩組數(shù)據(jù)有無顯著性差異。小鼠骨髓細(xì)胞微核顯示實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)小鼠解剖殘?jiān)灰湃胂滤馈?shí)驗(yàn)結(jié)束后，請將實(shí)驗(yàn)用小鼠及垃圾放入