殼寡糖對荷瘤鼠IL-2、TGF-β的影響

1、殼寡糖對荷瘤鼠IL-2、TGF-的影響夏美玲 許惠玉 羅曉慶 王慧 錢麗麗 陳紹仁 官杰*(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院,黑龍江 齊齊哈爾 161006 )【 摘要】 目的 觀察殼寡糖對荷瘤鼠免疫功能的影響。方法 分組給藥10d 后,處死小鼠測定胸腺指數(shù)、脾指數(shù)及抑瘤率;采用ELISA法測定IL- 2、TGF-。結(jié)果 殼寡糖使荷瘤鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)都增加, 能提高IL-2和降低TGF-分泌。結(jié)論 殼寡糖可以通過調(diào)節(jié)IL- 2、TGF-細(xì)胞因子分泌的作用調(diào)節(jié)荷瘤鼠的免疫功能。【關(guān)鍵詞】 殼寡糖 腫瘤免疫 細(xì)胞因子Chitosan oligosaccharide on immune functio

2、n of tumor-bearing ratsXia Mei-Ling Xu Hui-Yu Luo Xiao-Qing Wang Hui Qian Li-Li Chen Shao-Ren Guan JieQiqihar Medical College, Qiqihar, Heilongjiang Province, CN-161006Abstract Objective: Observation of chitosan oligosaccharide on immune function of tumor-bearing rats. Methods: Packet after administ

3、ration of 10d, killed the mice thymus index, spleen index and determination of tumor inhibition rate; using ELISA method for the determination of IL - 2, TGF B. Results: Chitosan oligosaccharide to tumor-bearing rat thymus index and spleen index increased, can increase IL-2 and decrease of TGF beta

4、secretion. Conclusion: Chitosan oligosaccharide can be regulated by IL - 2, TGF - cell factor secretion role in regulating the immune function of tumor-bearing rats.Key words Chitosan oligosaccharide;Tumor immune; Cell factor殼聚糖(Chitosan)是甲殼素脫乙酰化的產(chǎn)物，又名甲殼胺，殼寡糖水溶性好，容易被吸收利用，且生物活性比殼聚糖更強(qiáng);同時具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抑菌等

5、多種生理功能1。殼寡糖具有提高免疫，抑制癌腫細(xì)胞生長，促進(jìn)肝脾抗體形成，促進(jìn)鈣及礦物質(zhì)的吸收，增殖雙歧桿菌、乳酸菌等人體有益菌群，降血脂、降血壓、降血糖、調(diào)節(jié) HYPERLINK /view/24827.htm t _blank 膽固醇，減肥，預(yù)防成人疾病等功能，特別是較高聚合度的甲殼低聚糖具有阻礙病原菌生長繁殖的功能，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，活化植物細(xì)胞，從而促進(jìn)植物快速生長等。殼寡糖在動物生產(chǎn)領(lǐng)域的深入研究表明，殼寡糖無毒、無副作用，可被人體快速吸收2。本實(shí)驗(yàn)研究殼寡糖對荷瘤小鼠IL- 2、TGF-的影響,以期獲得殼寡糖對免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用的認(rèn)識,為殼寡糖的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1 材料與方法1.1

6、 實(shí)驗(yàn)動物與試劑 昆明(KM)小鼠,體重20-22g,6-8 周齡,雌雄兼用(由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第三臨床醫(yī)院提供);小鼠實(shí)體肉瘤S180由哈爾濱腫瘤醫(yī)院提供;殼寡糖和環(huán)磷酰胺由哈爾濱工業(yè)大學(xué)提供。小鼠IL- 2、TGF- ELISA 試劑盒:上海森雄生物工程有限公司產(chǎn)品。1.2實(shí)驗(yàn)動物分組及給藥方法 取腹腔接種S180瘤株10 d的荷瘤小鼠，在無菌條件下抽取腹水，放入無菌容器內(nèi)，置冰塊保存。用0.4%臺盼藍(lán)生理鹽水液計(jì)數(shù)（其活細(xì)胞大于95%）。用生理鹽水調(diào)細(xì)胞濃度至1108/ml,備用。取小鼠30只，每只鼠右腋下皮下注射0.2ml瘤細(xì)胞懸液制備動物模型。將其隨機(jī)分為模型組、殼寡糖組（15mg/m

7、l）、環(huán)磷酰胺（CY）組，共3組，每組10只。另取10只做為正常對照。模型組用生理鹽水腹腔注射，每天0.02 ml/ g；殼寡糖組用殼寡糖給小鼠腹腔注射，每天 0.02 ml/ g；環(huán)磷酰胺組于小鼠腹腔注射CY，每天20 mg/kg。各組小鼠均于接種后次日給藥,每天給藥一次，連續(xù)10 d。 1.3 細(xì)胞因子檢測 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后次日,小鼠眼球取血，置于離心管中，3000rpm離心5min，分離血清，按每只凍存管1ml分裝血清，20oC保存?zhèn)溆谩yIL-2、TGF-時，具體操作按上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司提供的細(xì)胞因子試劑盒說明書操作。1.4 胸腺、脾指數(shù)及抑瘤率計(jì)算 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后次日采用頸椎脫臼法處死荷

8、瘤小鼠，完整取出脾臟和胸腺后在電子天平上精確稱取脾臟和胸腺重量，計(jì)算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)和抑瘤率。胸腺指數(shù)=胸腺重量( mg ) / 每10 g 體重；脾臟指數(shù)= 脾臟重量( g ) / 每10 g 體重；抑瘤率=（對照組瘤重實(shí)驗(yàn)組瘤重）/對照組瘤重100%1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有計(jì)量數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2 結(jié)果2.1 測定S180荷瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和抑瘤率2.1.1 各組對S180荷瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響 各組小鼠給藥處置10d,第11d 處死,剝離小鼠的胸腺和脾,稱重計(jì)算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。見表1。表1 各組對S180荷瘤小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)比較 （s，n

9、=10）組別 n 脾指數(shù)( g/ 10g) 胸腺指數(shù)( mg/ 10g)對照組 10 54.3786.325 32.4522.786模型組 10 40.5244.414 23.3825.261殼寡糖組 10 56.3481.647* 31.2492.375*CY組 10 55.7562.572* 32.6481.672*注:與模型組比較* P0.05、* P0.01從表1 中可以看出,殼寡糖組和CY組導(dǎo)致S180小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)升高非常明顯，有顯著性差異，P0.01有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。殼寡糖對免疫器官影響有較大的影響。2.1.2 抑瘤率 抑瘤率=（對照組瘤重實(shí)驗(yàn)組瘤重）/對照組瘤重100%。殼

10、寡糖組、CY 組瘤重低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 1g,說明造模成功,腫瘤的生長良好。同時還可以觀察到殼寡糖組小鼠活動自如，皮毛光滑，食量較正常。殼寡糖組、CY 組腫瘤細(xì)胞凋亡率與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.01）。結(jié)果見表2。表2 各組抑瘤率和腫瘤細(xì)胞凋亡率情況(s,n=10)組別 腫瘤質(zhì)量 (g)抑瘤率(%)模型組1.380.5521 -殼寡糖組0.800.3515*42.09CY組0.620.160955.122. 2 殼寡糖 對S180 小鼠血清IL- 2、TGF-含量的影響 各組小鼠在給藥處置10d 后,眼球采血測定IL- 2、TGF- 血清含量，見表3、4.表3 各組

11、對S180 荷瘤鼠產(chǎn)生IL- 2 的影響 （s，n=10）組別 n OD值 IL- 2 ( pg/ ml )對照組 10 0.3540.018 113.6423.347模型組 10 0.3220.015 104.0742.976殼寡糖組 10 0.3620.021* 115.1413.106*CY組 10 0.3520.031* 110.3487.336*注: 與模型組比較* P0.05、* P0.01結(jié)果可見：與模型組比較殼寡糖組和CY組水平有非常顯著性差異(P0.01);表明殼寡糖具有較強(qiáng)的抑制作用. 表4 各組對S180 荷瘤鼠產(chǎn)生TGF- 的影響 （s，n=10）組別 n OD值 TG

12、F- ( pg/ ml )對照組 10 0.5880.023 155.06411.314模型組 10 0.7080.124 186.64715.257殼寡糖組 10 0.5910.031* 159.3418.281*CY組 10 0.5940.011* 168.4429.736*注: 與模型組比較* P0.05、* P0.01從表中可以看出: 與模型組比較CY組和殼寡糖組TGF-分泌顯著低于模型組（P0.01），有顯著性差異; 表明殼寡糖具有抑制TGF-分泌的作用。3 討論機(jī)體的免疫應(yīng)答能力低下與腫瘤發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系，殼寡糖通過免疫調(diào)節(jié)發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。殼寡糖能抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生成，減少腫瘤

13、組織血管生成，限制腫瘤生長。本實(shí)驗(yàn)通過測定殼寡糖對荷瘤小鼠免疫器官脾臟、胸腺指數(shù)的影響，結(jié)果表明殼寡糖能大幅度地增加荷瘤小鼠脾臟、胸腺重量，能夠提高機(jī)體的免疫功能。由此可見，通過增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能是殼寡糖抗腫瘤作用的重要機(jī)制之一。細(xì)胞因子是由多種細(xì)胞分泌的具有生物活性的小分子多肽,是免疫細(xì)胞間的信使分子,它們形成細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò),在非特異性免疫與特異性免疫應(yīng)答中具有重要的調(diào)節(jié)作用。IL-2即白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2），又名T細(xì)胞生長因子(T cell growth factor，TCRF) 。IL-2是一種具有多種生物活性的細(xì)胞因子，現(xiàn)代免疫學(xué)研究表明，IL-2是T細(xì)胞

14、在體外長期生長所必需的因子，也是TC細(xì)胞成熟因子，它可促進(jìn)已活化的T細(xì)胞增殖并分化成熟為效應(yīng)的TD細(xì)胞和TC細(xì)胞，誘導(dǎo)T 細(xì)胞表面 IL-2R的表達(dá)增加，還可刺激其它細(xì)胞因子（TNF、IFNR）的分泌。IL-2是一種廣譜的免疫增強(qiáng)劑,具有抗腫瘤、抗微生物感染、引起移植排斥和自身免疫以及免疫調(diào)節(jié)等作用3。轉(zhuǎn)化生長因子-（transforming growth factor-,TGF-)是屬于一組新近發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化的TGF-超家族。TGF-是一種多功能的多肽類生長因子,具有組織特異性4，可由多種細(xì)胞產(chǎn)生，包括T淋巴細(xì)胞。TGF-對細(xì)胞的生長、分化和免疫功能都有重要的調(diào)節(jié)作用。 它還可阻斷

15、細(xì)胞因子激發(fā)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑, 從而有利于腫瘤細(xì)胞生長, 促進(jìn)腫瘤的發(fā)展5。本研究結(jié)果表明, 殼寡糖組與模型組相比血清IL- 2 顯著升高，TGF-水平顯著降低, 提示殼寡糖可以通過調(diào)控細(xì)胞因子的分泌來調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能，使細(xì)胞免疫功能增強(qiáng)，從而增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤作用。參考文獻(xiàn)1 竺國芳.趙魯杭.幾丁寡糖與殼寡糖的研究進(jìn)展J.中國海洋藥物雜志,2000;12胡志鵬.殼寡糖的研究進(jìn)展J.中國生化藥物雜志.2003.243何維.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005：1084 魏海明, 張笑人, 田志剛. 腫瘤免疫逃逸的分子機(jī)制研究 J .國外醫(yī)學(xué).免疫學(xué)分冊, 2000, 23( 6) : 324- 3285 李洪燕. 轉(zhuǎn)化生長