HBV基因分型和耐藥突變基因檢測的臨床應(yīng)用探素課件

1、HBV基因分型和耐藥突變基因檢測的臨床應(yīng)用產(chǎn)品介紹12背景介紹主 要 內(nèi) 容乙型病毒性肝炎 是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的肝臟炎性損害。是我國當(dāng)前流行最廣泛、危害最嚴(yán)重的一種傳染病。 HBV感染呈世界性流行，但不同地區(qū)HBV感染的流行強(qiáng)度差異很大。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球約20億人曾感染過HBV，其中3.5億人為慢性HBV感染者，每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌 (HCC) 1。 1 World Health Organization. Hepatitis B. World Health Organization Fact Sheet 204 dex. (

2、RevisedOctober 2000). WHO Web site .http:/mediacentre/ factsheets/fs204/en/ in html.流行病學(xué)流行病學(xué)Clinical and Epidemiologic Correlations in HBV Infection.Lok AS, McMahon BJ. Chronic hepatitis B. Hepatology 2007;45:507-39. Erratum, Hepatology 2007;45:1347.流行病學(xué)2006年全國乙型肝炎流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明：我國 159歲人群乙肝表面抗原攜帶率為7.18%

3、 ，據(jù)此推算，我國現(xiàn)有的慢性HBV感染者約9300萬人，其中慢性乙型肝炎患者約2000萬例22 慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)會，中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會，2010年12月10日病原學(xué)HBV（hepatitis B virus）乙型肝炎病毒，屬嗜肝病毒科，基因組長約3.2Kb，為部分雙鏈環(huán)狀DNA。HBV已發(fā)現(xiàn)有AI 9個基因型，在我國以C型和B型為主。包膜：HBsAg 糖蛋白細(xì)胞脂肪核心：HBV-DNADNA-PolymeraseHBcAg病原學(xué) HBV侵入肝細(xì)胞后，部分雙鏈環(huán)狀HBV DNA在細(xì)胞核內(nèi)以負(fù)鏈DNA為模板延長正鏈以修補(bǔ)正鏈中的裂隙區(qū)，形成共價(jià)閉合環(huán)狀DNA

4、 (cccDNA)；然后以cccDNA為模板，轉(zhuǎn)錄成幾種不同長度的mRNA，分別作為前基因組RNA和編碼HBV的各種抗原。 cccDNA半壽 (衰) 期較長，很難從體內(nèi)徹底清除。 HBV感染和發(fā)展的結(jié)局圖HBV感染可有不同的發(fā)展和結(jié)局，這是由病毒和宿主雙方因素決定的。病毒方面：感染的數(shù)量和毒株的異質(zhì)性、以及傳播的方式；宿主方面：免疫狀態(tài)、以及決定免疫狀態(tài)的年齡、遺傳素質(zhì)、基礎(chǔ)健康狀況和并存的疾病。自然史診斷 臨床診斷 既往有乙型肝炎病史或HBsAg陽性超過6個月，現(xiàn)HBsAg和（或）HBV DNA仍為陽性者，可診斷為慢性HBV感染?？煞譃椋?慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、攜帶者、隱匿性慢性乙型

5、肝炎 實(shí)驗(yàn)室診斷 生物化學(xué)檢查：ALT、AST、血清白蛋白、PT、膽堿酯酶、AFP 血清學(xué)檢查 HBV DNA、基因型和變異檢測：定量檢測、分型和耐藥突變檢測 影像學(xué)診斷 病理學(xué)診斷治療慢性乙型肝炎治療的總體目標(biāo) 最大限度地長期抑制HBV，減輕肝細(xì)胞炎癥壞死及肝纖維化，延緩和減少肝臟失代償、肝硬化、HCC及其并發(fā)癥的發(fā)生，從而改善生活質(zhì)量和延長存活時間。慢性乙型肝炎治療 抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抗炎和抗氧化、抗纖維化和對癥治療。 抗病毒治療是關(guān)鍵，只要有適應(yīng)證，且條件允許，就應(yīng)進(jìn)行規(guī)范的抗病毒治療。干擾素：直接抗病毒作用和免疫調(diào)節(jié)作用清除病毒。我國已批準(zhǔn)普通IFN （2、2b和1b）和聚乙二醇干擾素

6、（2和2b）用于治療慢性乙型肝炎。HBV基因型與疾病進(jìn)展和干擾素治療效果有關(guān)。與C基因型感染者相比，B基因型感染者較早出現(xiàn)HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換，較少進(jìn)展為慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌。HBeAg陽性患者對干擾素治療的應(yīng)答率，B基因型高于C基因型；A基因型患者高于D基因型 。治療治療核苷（酸）類藥物：競爭性抑制HBV DNA聚合酶；參與新的HBV DNA鏈合成過程中，終止新鏈合成。目前已應(yīng)用于臨床的抗HBV核苷（酸）類藥物有3類，我國已上市4種。核苷（酸）類似物L(fēng)-核苷類似物無環(huán)磷酸酯環(huán)戊烯拉米夫定 LMV阿德福韋酯ADV恩替卡韋ETV恩曲他濱 ETB替諾福韋TDF阿巴卡韋ABV替比夫定 L

7、dT克立夫定 CLV治療耐藥是核苷酸類藥物的共性耐藥檢測的意義 治療前檢測，有助于臨床判斷用藥是否有效； 治療中每36個月檢測，有助于觀察療效，及時調(diào)整用藥。EASL Clinical Practice Guidelines：Management of chronic hepatitis B. European Association for the Study of the Liver. J Hepatol, 2009, 50: 227-242.HBV基因分型和耐藥突變基因檢測產(chǎn)品介紹乙型肝炎病毒分型和耐藥突變基因檢測試劑盒 （PCR-反向點(diǎn)雜交法）國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2011第3401179

8、號樣本處理芯片制備產(chǎn)品用途在抗病毒治療前和治療中對血清/血漿中的HBV進(jìn)行基因分型和耐藥突變基因檢測12區(qū)分中國和其他亞洲國家常見的HBV-B、C、D基因型檢測HBV 3類抗病毒藥物5個熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的6種突變類型HBV耐藥突變基因檢測的臨床意義1. 抗病毒藥物治療前的藥物選擇在慢性乙肝患者抗病毒藥物治療前，進(jìn)行耐藥突變基因檢測，可以指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理選擇抗病毒藥物，真正實(shí)現(xiàn)個體化診治。2.抗病毒藥物治療中的藥效監(jiān)測在慢性乙肝患者抗病毒藥物治療過程中，進(jìn)行耐藥突變基因檢測，可以監(jiān)測抗病毒藥物治療效果并及時調(diào)整治療方案。HBV基因分型的臨床意義1. 預(yù)測疾病進(jìn)展 與C基因型感染者相比，B基因型感染者

9、較早出現(xiàn)HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換，較少進(jìn)展為慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌。2. 治療方案的選擇 HBeAg陽性患者對干擾素治療的應(yīng)答率，B基因型高于C基因型；A基因型患者高于D基因型3. 流行病學(xué)調(diào)查研究1. 準(zhǔn)確性：檢測105例臨床慢性HBV感染陽性樣本，結(jié)果與測序比較顯示為相同的基因型和耐藥突變類型，準(zhǔn)確率為100%。2. 特異性：檢測50例臨床HBV陰性樣本結(jié)果全部為陰性；檢測非HBV感染性病原體DNA，包括C型肝炎病毒（HCV）、乙型腦炎病毒、梅毒螺旋體和HIV，結(jié)果均為陰性。3. 靈敏度：能穩(wěn)定檢測血清HBV的最低檢出限為1.0103IU/mL。4. 精密度：檢測2.0103IU/m

10、L的血清HBV，批內(nèi)和批間的一致性好。5. 穩(wěn)定性：產(chǎn)品有效期為6個月，在有效期內(nèi)產(chǎn)品性能穩(wěn)定。產(chǎn)品性能指標(biāo)產(chǎn)品使用產(chǎn)品操作流程產(chǎn)品使用HBV膜條探針陣列圖rt=reverse transcriptase，逆轉(zhuǎn)錄酶。以逆轉(zhuǎn)錄酶編碼氨基酸的順序命名各檢測位點(diǎn)。如：rt180L表示逆轉(zhuǎn)錄酶編碼氨基酸第180位為亮氨酸。CC為顯色控制點(diǎn)。試驗(yàn)成立的條件顯色控制點(diǎn)CC正常顯色。陽性質(zhì)控品正常顯色同時陰性質(zhì)控品除CC外其他所有陣列位點(diǎn)不顯色。結(jié)果判讀根據(jù)顯色（藍(lán)色斑點(diǎn)）出現(xiàn)的陣列位點(diǎn)直接判讀HBV的基因型和耐藥突變類型。示例：產(chǎn)品使用產(chǎn)品使用結(jié)果判讀示例交叉耐藥突變與核苷類似物藥物的關(guān)系表注釋： 耐藥水

11、平分高、中、低三級，以體外實(shí)驗(yàn)IC50的變化倍數(shù)計(jì)算（變化倍數(shù)是相比較于野生株而言）； IC50指：最大藥物抑制濃度的一半。 低：IC505；中：IC50為520；高：IC5020。LMVLdTADVTDFETVrtL180M中中/低rtM204V/I高高/中rtV/M207I中低/rtA181V中中中低中rtN236T低/中/Marc Chany, T. Jake Liang. Drug targets and molecular mechanisms of drug resistance in chronic hepatitis B. Gastroenterology,2007(132):1574-1585.產(chǎn)品使用適用人群及科室適用人群：慢性乙肝患者的用藥指導(dǎo)及療效監(jiān)測科室：檢驗(yàn)科、感染科、消化內(nèi)科、肝病科等使用原則：慢性乙肝患者抗病毒藥物治療前進(jìn)行檢測，確定HBV基因型和是否發(fā)生耐藥突變，指導(dǎo)選擇敏感的治療藥物；在抗病毒治療過程中建議3-6個月進(jìn)行一次檢測，實(shí)時監(jiān)控耐藥突變的發(fā)生。檢測后的處理-慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）對于接受拉米夫定治療的患者，一旦檢出基因型耐藥或HBV DNA開始升高時就加用阿德福韋酯聯(lián)