串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的應(yīng)用綜述

1、II串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的應(yīng)用液相色譜-質(zhì)譜法(LC/MS)將應(yīng)用范圍極廣的分離方法與靈敏、專(zhuān)屬、能提供相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)信息的質(zhì)譜法結(jié)合起來(lái), 因此已成為一種重要的現(xiàn)代分離分析技術(shù)。雖然與LCffi連的單極質(zhì)譜儀也能夠提供相對(duì)分子質(zhì)量的信息，但不足 之處在于基質(zhì)對(duì)待測(cè)組分的干擾難以排除及待測(cè)組分的結(jié)構(gòu)信息不能充分利用。液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用可在一級(jí)質(zhì)譜MSH牛下獲得很強(qiáng)的待測(cè)組分的準(zhǔn)分子離子峰 , 幾乎不產(chǎn)生碎片離子, 并可對(duì)準(zhǔn)分子離子進(jìn)行多級(jí)裂解, 進(jìn)而獲得豐富的化合物碎片信息 , 可用來(lái)推斷化合物結(jié)構(gòu), 確認(rèn)目標(biāo)化合物 , 辨認(rèn)重疊色譜峰以及在高背景或干擾物存在的情況下對(duì)目標(biāo)化合物定量, 因而成

2、為藥物代謝過(guò)程和產(chǎn)物研究, 復(fù)雜組分中某一組分的鑒定和定量測(cè)定, 以及藥用植物成分研究中更為強(qiáng)有力的工具。本文對(duì)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MSn)的原理及其 在藥物代謝方面的應(yīng)用作簡(jiǎn)要介紹。1串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)本原理離子源離子源的種類(lèi)包括: 電子轟擊電離(EI) 、 化學(xué) 電離 (CI) 、 快原子轟擊(FAB) 、場(chǎng)電離 (FI) 和場(chǎng)解吸 (FD) 、大氣壓電離源(API) 、基質(zhì)輔助激光解吸離子化 (MALDI)和電感耦合等離子體離子化 (ICP) 等。 現(xiàn)在主要采用大氣壓離子化技術(shù)(API), 包括電噴霧離子化(ESI)、大氣壓化學(xué)離子化(APCI)和大氣壓光電離化(APPI)。

3、API 是軟電離技術(shù), 通常只產(chǎn)生分子離子峰, 因此可直接測(cè)定混合物。 其中 ,ESI 應(yīng)用十分廣泛 , 適用于極性、 熱不穩(wěn)定、 難氣化的成分分離分析, 小到無(wú)機(jī)離子, 大到蛋白質(zhì)、核酸。ESI-MS可以容易地控制碎片的裂解程度。用串聯(lián)質(zhì)譜可以選 擇特定的離子, 通過(guò)碰撞誘導(dǎo)解離(CID) 使其碎裂成碎片離子; 另一種方法是通過(guò)改變錐孔( 取樣口 ) 電壓 (源內(nèi) CID) 的方式 , 無(wú)選擇地將源內(nèi)所有的離子擊碎。質(zhì)量分析器及其特點(diǎn)質(zhì)量分析器是質(zhì)譜計(jì)的核心, 不同類(lèi)型的質(zhì)量計(jì)其功能、 應(yīng)用范圍、 原理和實(shí)驗(yàn)方法均有所不同。磁質(zhì)譜: 分為單聚焦磁場(chǎng)分析器和雙聚焦分析器。離子源中生成的離子通過(guò)

4、扇形磁場(chǎng)和狹縫聚焦形成離子束。 離子離開(kāi)離子源后 , 進(jìn)入垂直于其前進(jìn)方向的磁場(chǎng)。 不同質(zhì)荷比的離子在磁場(chǎng)的作用下, 前進(jìn)方向產(chǎn)生不同的偏轉(zhuǎn) , 從而使離子束發(fā)散。 由于不同質(zhì)荷比的離子在扇形磁場(chǎng)中有其特有的運(yùn)動(dòng)曲率半徑, 通過(guò)改變磁場(chǎng)強(qiáng)度, 檢測(cè)依次通過(guò)狹縫出口的離子 , 從而實(shí)現(xiàn)離子的空間分離, 形成質(zhì)譜。 高分辨的雙聚焦質(zhì)譜儀可以測(cè)定分子離子的精確質(zhì)量數(shù)（誤差在5 ppm以下），可以確定元素組成。四極桿分析器（簡(jiǎn)寫(xiě)為 Q）: 因其由四根平行的棒狀電極組成而得名。 離子束在與棒狀電極平行的軸上聚焦,一個(gè)直流固定電壓（DC）和一個(gè)射頻電壓（RF）作用 在棒狀電極上, 兩對(duì)電極之間的電位相反。

5、 對(duì)于給定的直流和射頻電壓, 特定質(zhì)荷比的離子在軸向穩(wěn)定運(yùn)動(dòng),其他質(zhì)荷比的離子則與電極碰撞湮滅。將DCRRF以固定的斜率變化 , 可以實(shí)現(xiàn)質(zhì)譜掃描功能。四極桿分析器對(duì)選擇離子分析具有較高的靈敏度。離子阱分析器（TRAP）: 由兩個(gè)端蓋電極和位于它們之間的類(lèi)似四極桿的環(huán)電極構(gòu)成。端蓋電極施加直流電壓或接地, 環(huán)電極施加射頻電壓（RF）, 通過(guò)施加適當(dāng)電壓就可以形成一個(gè)勢(shì)能阱（離子阱）。根據(jù)RF4壓的大小，離子阱就可捕獲某 一質(zhì)量范圍的離子。 離子阱可以?xún)?chǔ)存離子, 待離子累積到一定數(shù)量后 , 升高環(huán)電極上的RRfe壓，離子按質(zhì)量從高到低的次序依次離開(kāi)離子阱,被電子倍增監(jiān)測(cè) 器檢測(cè)。 離子阱分析器現(xiàn)

6、已可以分析質(zhì)荷比高達(dá)數(shù)千的離子。 離子阱在全掃描模 式下仍然具有較高靈敏度, 而且單個(gè)離子阱通過(guò)時(shí)間序列的設(shè)定就可以實(shí)現(xiàn)多級(jí)質(zhì)譜（MSn）的功能。飛行時(shí)間分析器（TOF）: 具有相同動(dòng)能, 不同質(zhì)量的離子, 因其飛行速度不同而分離。 如果固定離子飛行距離, 則不同質(zhì)量離子的飛行時(shí)間不同 , 質(zhì)量小的離子飛行時(shí)間短而首先到達(dá)檢測(cè)器。 各種離子的飛行時(shí)間與質(zhì)荷比的平方根成正比。 離子以離散包的形式引入質(zhì)譜儀, 這樣可以統(tǒng)一飛行的起點(diǎn), 依次測(cè)量飛行時(shí)間。 離子包通過(guò)一個(gè)脈沖或者一個(gè)柵系統(tǒng)連續(xù)產(chǎn)生, 但只在某一特定的時(shí)間引入飛行管。TO具有較大的質(zhì)量分析范圍和較高的質(zhì)量分辨率，尤其適合蛋白等 生物大

7、分子分析,常用MALD為離子源。其分辨率隨著質(zhì)荷比的增大而降低。傅里葉變換-離子回旋共振分析器（FT-ICRMS）:在一定強(qiáng)度磁場(chǎng)中,離子做 圓周運(yùn)動(dòng) , 離子運(yùn)行軌道受共振變換電場(chǎng)限制。 當(dāng)變換電場(chǎng)頻率和回旋頻率相同 時(shí) , 離子穩(wěn)定加速, 運(yùn)動(dòng)軌道半徑越來(lái)越大, 動(dòng)能也越來(lái)越大。當(dāng)電場(chǎng)消失時(shí),沿軌道飛行的離子在電極上產(chǎn)生交變電流。 對(duì)信號(hào)頻率進(jìn)行分析可得出離子質(zhì)量。 將時(shí)間與相應(yīng)的頻率譜利用計(jì)算機(jī)經(jīng)過(guò)傅里葉變換形成質(zhì)譜。 優(yōu)點(diǎn)為分辨率很高 質(zhì)荷比可以精確到千分之一道爾頓, 但價(jià)格十分昂貴。 液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用, 其次是離子阱分析器和飛行時(shí)間分析器。 1.3 串聯(lián)質(zhì)譜的方式兩個(gè)或更多的質(zhì)

8、譜連接在一起, 稱(chēng)為串聯(lián)質(zhì)譜。 串聯(lián)質(zhì)譜根據(jù)連接方式的不同一般分為空間串聯(lián)和時(shí)間串聯(lián)。 空間串聯(lián)型又分磁扇型串聯(lián), 四極桿串聯(lián), 混合串聯(lián)等。如果用B8示扇形磁場(chǎng),E表示扇形電場(chǎng),那么串聯(lián)質(zhì)譜主要方式有： 空間串聯(lián)（如磁扇型串聯(lián)方式：BEB, EBE, BEBE等；四極桿串聯(lián)：Q-Q-Q;混合型用 聯(lián):BE-Q、Q-TO舜口EBE-TOF）時(shí)間串聯(lián)：離子阱質(zhì)譜儀和回旋共振質(zhì)譜儀。另 外，還有Q-TRAP!。串聯(lián)質(zhì)譜的工作無(wú)論是哪種方式的串聯(lián)，都必須有碰撞活化室，從第一級(jí)M分離出來(lái)的特定 離子，經(jīng)過(guò)碰撞活化（碰撞氣常用N2ffiAr等）后，再經(jīng)過(guò)第二級(jí)M必行質(zhì)量分析， 以便取得更多的信息。最常見(jiàn)

9、的串聯(lián)質(zhì)譜為三級(jí)四極桿串聯(lián)質(zhì)譜（QQQ）第一級(jí)和第三級(jí)四極桿分析器分別為MS和MS2,第二級(jí)四極桿分析器所起作用是將從 MS得到的各個(gè)山!進(jìn)行轟擊，實(shí)現(xiàn)母離子碎裂后進(jìn)入MS21行分析。串聯(lián)質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集方式串聯(lián)質(zhì)譜主要有4種數(shù)據(jù)采集方式: 子離子掃描: 選擇一定的母離子經(jīng) CID活化，MS2記錄產(chǎn)生的子離子。該方式特別適合于軟電離（如ESI,CI, FD, FAB）得到的分子離子進(jìn)一步裂解以獲得分子的結(jié)構(gòu)信息。 通常先收集母體藥物的子離 子譜 , 再獲得代謝物的子離子譜, 根據(jù)生物轉(zhuǎn)化 / 代謝的位點(diǎn) , 可以提供豐富的結(jié)構(gòu)信息。 合理化裂解的這些碎片離子通?？商崾舅幬锎x物的可能結(jié)構(gòu)。 母 離

10、子掃描：選擇MS2中的某一子離子，測(cè)定MS仲的所有母離子。該方式能幫助追 溯碎片離子的來(lái)源, 能對(duì)產(chǎn)生某種特征碎片離子的一類(lèi)化合物進(jìn)行快速篩選。 這種掃描功能在藥物代謝中非常重要。 中性丟失掃描：MS1和MS2同時(shí)掃描，但 MS2f MS1始終保持質(zhì)量差（即中性丟失質(zhì)量）Am,最終的譜圖將顯示那些來(lái)自一 級(jí)譜圖中通過(guò)裂解丟失中性碎片（Am）的離子。中性丟失譜最能反映化臺(tái)物的特定 官能團(tuán)，如有中性丟失18D4勺意味著-H2d中性丟失掃描廣泛地用于測(cè)定II相代 謝過(guò)程變化 , 如葡萄糖醛酸苷（-176Da） 和硫酸鹽 （-80Da）, 同樣可以測(cè)定谷胱苷肽（GSH）加合物（-129Da）。 多反應(yīng)

11、檢測(cè)（MRM或選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）:由MS選擇一個(gè)或幾個(gè)特定離子, 經(jīng)碰撞碎裂之后 , 由其子離子中選出一特定離子, 只有同時(shí)滿足MS和MS魁定的一又t離子時(shí),才有信號(hào)產(chǎn)生。用這種掃描方式的好處是增加了選擇性, 即使 2個(gè)質(zhì)量相同的離子同時(shí)通過(guò)了 MS1, 但仍可以依靠其子離子的不同將其分開(kāi)。這種方式非常適合于從很多復(fù)雜的體系中選擇某特定質(zhì)量,經(jīng)常用于微小成分的定量分析?？臻g串聯(lián)質(zhì)譜的3種方式為子離子掃描、母離子掃描和中性丟失掃描, 而時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜只能完成子離子掃描。 目前 , 這4 種掃描方式已越來(lái)越廣泛地應(yīng)用在藥物代謝研究方面。串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物代謝中的應(yīng)用藥物代謝涉及藥物在生物體內(nèi)吸收、

12、 分布、 代謝和排泄的研究。 包括藥物及其在各種復(fù)雜基質(zhì)（ 全血、血漿、尿、膽汁及生物組織 ） 中代謝物的分離、結(jié)構(gòu)鑒定以及痕量分析測(cè)定。藥物及其代謝物的痕量分析測(cè)定藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)以研究藥物的生物利用度和生物等效性為主, 常用 QQQ, 因其具有較高的選擇性、信噪比。生物樣品中有大量的保留時(shí)間相同、相對(duì)分子質(zhì)量也相同的干擾組分存在。 為了消除其干擾, 定量的最好辦法是采用串聯(lián)質(zhì)譜的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM技術(shù)。分析樣品時(shí)，第一級(jí)質(zhì)譜選定ml,經(jīng)第二級(jí) 碰撞活化后,第三級(jí)質(zhì)譜選定m2。只有同時(shí)具有ml和m2特征質(zhì)量的離子才被 記錄。這樣得到的色譜圖就進(jìn)行了 3次選擇:LC選擇了組分的保留時(shí)間，第一

13、級(jí)MS 選擇了 ml,第三級(jí)MS&擇了 m2,這樣得到的色譜峰可以認(rèn)為被干擾的幾率極小。然后 , 根據(jù)色譜峰面積, 采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析。 這是目前應(yīng)用最多的一種測(cè)定方法，如Suryawanshi等1利用MR朧術(shù)測(cè)定大鼠血漿中芒果甘和4種環(huán)烯醴 幫甘的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)；沈凱等2利用MR朧術(shù)定量測(cè)定人血漿中替比夫定的濃度； 徐珊珊等網(wǎng)利用MR朧術(shù)同時(shí)測(cè)定人血漿中西替利嗪和偽麻黃堿的濃度 ，均取 得較好的測(cè)定結(jié)果。藥物代謝物的結(jié)構(gòu)鑒定由于多數(shù)藥物的代謝物保留了母體藥物分子的骨架結(jié)構(gòu)或一些亞結(jié)構(gòu), 因此 , 代謝物可能進(jìn)行與母體藥物相似的裂解, 丟失一些相同的中性碎片或形成一些相同的特征離子, 用串聯(lián)質(zhì)

14、譜分別進(jìn)行中性丟失掃描、 母離子掃描和子離子掃描 , 即可迅速找到可能的代謝物 , 并鑒定出結(jié)構(gòu)。 Yost 等 4 總結(jié)了和用串聯(lián)質(zhì)譜鑒定藥物代謝物的方法, 主要包括以下幾個(gè)步驟 : 測(cè)定母體藥物的質(zhì)譜。 測(cè)定母體藥物的子離子譜，選擇質(zhì)子化分子離子、加合離子和主要的碎 片離子進(jìn)行裂解。 選擇母體藥物的主要中性丟失測(cè)定生物樣品的中性丟失譜 圖譜中的離子即為母體藥物和可能的代謝物的分子離子。 選擇主要的子離子 測(cè)定生物樣品的母離子譜，所得母離子即為各個(gè)代謝物。測(cè)定生物樣品中所 有可能代謝物的子離子譜，解譜得到代謝物的結(jié)構(gòu)。 測(cè)定代謝物的子離子譜. 選擇任一新出現(xiàn)的中性丟失和子離子重復(fù)進(jìn)行步驟，。

15、QQG藥物代謝產(chǎn)物鑒定中的應(yīng)用藥物代謝白研究中，由于母體藥物結(jié)構(gòu)已知，藥物代謝途徑常?？梢灶A(yù)期， 根據(jù)體內(nèi)I相和II相代謝的一般規(guī)律（見(jiàn)表1和表2）,張吉吉等用高效液相-電噴 霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法首次考察了毛果蕓香堿在大鼠尿中的代謝情況,采用MRMT法推測(cè)了毛果蕓香堿在大鼠體內(nèi)的5種代謝產(chǎn)物。表1 I相代謝過(guò)程的質(zhì)量偏移6過(guò)程基團(tuán)生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)跨基化4-16芳香族、由a AUAI脂肪族- R.C1OHN癖基化RMLIIRAI HU kR環(huán)患化RH=lILRm R-CMXH-R磺化氧化RT”R脫烷基一 14X烷基RUL。卜 R-VHj（質(zhì)壓廛（工口,RXHi說(shuō)某R-bU胺氧化酶-30精基R羋脫氫酶2

16、乙酹MT4GHi R-H十15乙裝R-(UU十口乙套R(shí)UgGH. R-tJXII表2 II相代謝過(guò)程的質(zhì)量偏移綴合物基 團(tuán)前葡糖靜酸+ 176黑基RJ江R1乂住按基R_（n.H薩RUJTM；祖磕基 R-SU RSGM氨基R_憶硫蟋根-F80弊矩R4HH芳香胺* AnNH-SCH谷就百聘十則R：H=門(mén)十向RXbU RAH, -(HrSMen?tPnJTic Acict十班環(huán)氧化物AtU.一環(huán)氧化物 &口1力-理，乳共邵口位*1匚誣+ %R-CH-N l a 4 黑基酸-R57甘氨酸47】丙氨酸+ 107牛硝酸RllXHhRXdAA+ 114鳥(niǎo)凝醺十4谷敬酸臟目前利用QQ直藥物代謝產(chǎn)物鑒定中的應(yīng)用

17、較少,張愛(ài)軍等7用QQQt 測(cè)了西維來(lái)司他藥物降解產(chǎn)物的可能結(jié)構(gòu)和裂解途徑，方法是先對(duì)藥物的準(zhǔn)分 子離子峰進(jìn)行子離子掃描，再對(duì)降解產(chǎn)物的質(zhì)譜峰進(jìn)行子離子掃描，通過(guò)母離 子掃描、子離子掃描、中性丟失和調(diào)節(jié)去簇電壓（DP）值等方法對(duì)離子裂解規(guī)律進(jìn) 行分析，推測(cè)了降解產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。這種方法可在藥物代謝產(chǎn)物鑒定中得以借鑒。TRA和Q-TRA荏藥物代謝產(chǎn)物鑒定中的應(yīng)用離子阱質(zhì)譜儀屬于時(shí)間上的串聯(lián)質(zhì)譜。與QQQI比,TRA而MS口MS/MS勺全掃 描功能上更強(qiáng)，而且它的多級(jí)質(zhì)譜測(cè)定（MSn）靈敏度較好，并能解釋分子裂解過(guò) 程。現(xiàn)在常常應(yīng)用此功能進(jìn)行代謝物鑒定。如陳勇等 網(wǎng)禾I用HPLC-ESI-ITMSife

18、 鑒定麻黃堿及其大鼠體內(nèi)主要代謝產(chǎn)物，采用CID對(duì)其母體藥物準(zhǔn)分子離子進(jìn)行 MSrfr析，總結(jié)其電噴霧質(zhì)譜的一級(jí)電離規(guī)律和多級(jí)質(zhì)譜裂解規(guī)律，以此作為麻黃堿大鼠體內(nèi)代謝物分析鑒定的依據(jù)，在尿樣中鑒定出3個(gè)第1相代謝產(chǎn)物，未 發(fā)現(xiàn)第II相代謝產(chǎn)物。陳懷俠等9應(yīng)用HPLC-MSn析水蘇堿及其大鼠體內(nèi)代謝物 依據(jù)藥物生物體內(nèi)代謝規(guī)律，推測(cè)出水蘇堿在大鼠體內(nèi)的可能代謝物，采用CID 對(duì)其母體藥物準(zhǔn)分子離子進(jìn)行MSrfr析，利用MStfc術(shù)對(duì)可能代謝物進(jìn)行鑒定和 結(jié)構(gòu)認(rèn)證。TRAPI有低質(zhì)量截止點(diǎn)（1/3效應(yīng)）、碰撞效率低和定量分析性能較差 等缺憾，而Q-TRA不但可以克服這些缺點(diǎn),而且可以選擇母離子掃描

19、和中性丟 失掃描等。Q-TRA郵于代謝產(chǎn)物是相對(duì)較新的方法,其組成相當(dāng)于QQ白第3 個(gè)訓(xùn)線性離子阱代替，可以得到更豐富的數(shù)據(jù)。如用四極桿-線性離子阱（Q-LIT） 研究大鼠腦中 6- 氨基丁基苯酞代謝物 10 , 用 Q-LIT 同時(shí)測(cè)定母體藥物和可預(yù)測(cè) 的代謝物 11 等。Q-TOFS藥物代謝產(chǎn)物鑒定中的應(yīng)用QTOF以精確測(cè)定母體藥物或代謝產(chǎn)物分子以及由CID產(chǎn)生的碎片離子的質(zhì)量，從而獲得其元素的組成，但在子離子掃描、中性丟失和MR除方面存在局限 性。王英武等利用Q-TO技術(shù)研究3種B 2 -受體激動(dòng)劑的質(zhì)譜裂解特征,為其體 內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化和定量分析研究提供有力的依據(jù)。如利用Q-TOF寸波生坦代

20、謝物的研究 , epothiloneB 體內(nèi)代謝物的研究, 嗎氯貝胺和雷米克林代謝物的性質(zhì) , 酚哌丙酮 I 相和 II 相代謝產(chǎn)物的鑒定,ethoxidine 體內(nèi)代謝物的鑒定12 等。不同串聯(lián)質(zhì)譜方法在藥物代謝產(chǎn)物鑒定中的比較盡管QQ直藥物生物轉(zhuǎn)化與代謝產(chǎn)物鑒定上取得顯著的貢獻(xiàn),但他的局限性 在于四極桿質(zhì)量分析器沒(méi)有足夠的質(zhì)量準(zhǔn)確度, 不能給出母離子和子離子的元素組成 , 因此 , 用于結(jié)構(gòu)鑒定有時(shí)不夠明確 , 因?yàn)橥之悩?gòu)物以及其他代謝物可能產(chǎn)生結(jié)構(gòu)不同但質(zhì)量相同的母離子，導(dǎo)致子離子譜的重疊。Q-TO阿以給出 母離子和子離子的準(zhǔn)確質(zhì)量, 但只有當(dāng)母離子不受元素組成相同的離子的干擾時(shí),才可

21、能用子離子的準(zhǔn)確質(zhì)量測(cè)定去做結(jié)構(gòu)解析。 QQQ及Q-TO還有一個(gè)局限 性是產(chǎn)生的CID圖譜不能將一級(jí)子離子與二級(jí)或三級(jí)分解子離子區(qū)分開(kāi)來(lái) ，使圖 變解析變得困難。而Q-TRAPT以在質(zhì)譜分析的每一階段將母離子隔離并捕獲,從 而可以確定離子的親緣關(guān)系，使代謝物的CID圖譜的解釋變得較為容易。液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在食品中抗菌藥物殘留分析中的應(yīng)用B內(nèi)酰胺類(lèi)B 內(nèi)酰胺類(lèi)（B Lactams）是指分子結(jié)構(gòu)中具有B 內(nèi)酰胺環(huán)的一大 類(lèi)抗生素， 是目前應(yīng)用最為廣泛的治療動(dòng)物細(xì)菌感染的抗菌藥物， 分為青霉素和 頭孢菌素兩大類(lèi)。孫雷等13建立了動(dòng)物源性食品中13 種青霉素和頭孢菌素類(lèi)抗生素殘留檢測(cè)的超高效

22、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（ UPLC ESI MS /MS） 方法。樣品經(jīng)乙月青水溶液提取，正己烷脫脂，C183相萃取柱凈化并濃縮后，經(jīng)C18fe譜柱 分離，正離子模式多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，檢出限1ng /g ,回收率79%-99%陳錦14比較研究了動(dòng)物肌肉組織中青霉素多組分殘留的液相色譜 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)( LC QqQ) 和液相色譜飛行時(shí)間質(zhì)譜( LC ToF) 檢測(cè)方法， 提出 ToF 在精密度、檢出限以及回收率方面均不如QqQ。四環(huán)素類(lèi)四環(huán)素類(lèi) ( Tetracyclines) 是由放線菌產(chǎn)生的具有氫化并四苯環(huán)結(jié)構(gòu)的一類(lèi)廣譜抗生素。 由于其抗菌譜較廣且價(jià)格低廉， 目前仍廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)中疾病的治療以

23、及用作促生長(zhǎng)劑。 四環(huán)素類(lèi)抗生素分子結(jié)構(gòu)中具有兩個(gè)易與金屬離子螯合的酮羰基， 大大影響樣品前處理時(shí)的提取效率。 因此， 在進(jìn)行四環(huán)素類(lèi)藥物殘留分析時(shí)常在提取溶劑中添加螯合劑 ( 如草酸和EDTA 鹽) 。劉蓉蓉等15建立了蜂蜜中 4 種四環(huán)素類(lèi)抗生素 ( 土霉素、 四環(huán)素、 金霉素、 強(qiáng)力霉素 ) 及其 3 種 差向異構(gòu)體(差向四環(huán)素、差向土霉素、差向金霉素)的LC ESI - MS /MS檢 測(cè)方法。 樣品經(jīng)EDTA Mcllvaine 緩沖液提取， HLB 及羧酸弱陽(yáng)離子固相萃取柱凈化后進(jìn)行測(cè)定，在10500 Ng /kg添加范圍內(nèi)線性良好，回收率64.9%91.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD

24、) 小于 10.5%，方法定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)( Macrolides) 是一類(lèi)具有十二元、 十四元或十六元內(nèi)酯環(huán)配糖體的抗生素。這類(lèi)抗生素具有親脂性，因此常用的有機(jī)溶劑 ( 如乙腈、氯仿、二氯甲烷)均可將其從樣品基質(zhì)中提取出來(lái)。Wan第16比較研究了雞蛋、生鮮乳及蜂蜜中 6 種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素殘留的液相色譜 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜( LC QqQ) 和液相色譜 四極桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜( LC QToF) 檢測(cè)方法。 樣品經(jīng)乙月青或者磷酸鹽緩沖液(pH8.0)提取，固相萃取柱凈化后進(jìn)行測(cè)定，QToF勺全掃描模式可以得到這幾種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物的精確質(zhì)量數(shù)， 同時(shí)鑒別其降解產(chǎn)物 ;

25、而 QqQ 的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式在靈敏度和重復(fù)性方面具有更大的優(yōu)勢(shì)。郭春海等17建立了測(cè)定牛奶和奶粉中吡利霉素、 竹桃霉素、 替米卡星、 紅霉素和泰樂(lè)菌素殘留的LC ESIMS/MS方法，采用乙月青提取目標(biāo)物，HLB固相萃取柱凈化，檢出限18 Ng /kg ,回收率81.5%96.1%,該法回收率高，重現(xiàn)性好。氨基糖苷類(lèi)氨基糖苷類(lèi)( Aminoglycosides) 是一類(lèi)由氧橋連接氨基糖與氨基環(huán)醇而成的苷類(lèi)抗生素， 是從鏈霉菌或者小單孢菌中提取， 以天然品為原料合成或半合成制得的，包括鏈霉素、卡那霉素、安普霉素、妥布霉素、慶大霉素和新霉素等。氨基糖甘類(lèi)分子結(jié)構(gòu)中多個(gè)極性基團(tuán)的存在使得這類(lèi)抗生素極

26、性很強(qiáng)，在C18fe譜柱上保留很弱， 因而在進(jìn)行液相色譜分離時(shí)需要在流動(dòng)相中加入離子對(duì)試劑七氟丁酸 ( HFBA) 或五氟丙酸( PFPA) 。 Zhu 等18研究了不同食品基質(zhì)中13 種氨基糖苷類(lèi)抗生素殘留的LC ESI MS/MS 檢測(cè)方法。 樣品經(jīng)5%三氯乙酸溶液提取，HLB固相萃取柱凈化后測(cè)定。由于其中7種氨基糖甘類(lèi)抗生素在pH 1時(shí)保留 較好，而另外6種在pH8.5時(shí)保留較好，凈化時(shí)將兩種不同pH的HLB固相萃取 柱串接可同時(shí)凈化這13 種藥物。龔強(qiáng)等19研究了乳制品中10 種氨基糖苷類(lèi)抗生素殘留的LC ESI-MS /MS僉測(cè)方法，樣品提取液通過(guò)HLB固相萃取柱凈化后 測(cè)定，方法定

27、量限1020/ /kg,回收率71.2%101.7%,該法操作簡(jiǎn)便且靈敏 度較高。酰胺醇類(lèi)酰胺醇類(lèi) ( Amphenicols) 是指一類(lèi)具有酰胺醇結(jié)構(gòu)的抗生素的總稱(chēng)，包括氯霉素、 甲砜霉素等， 是一類(lèi)廣譜抗生素。 酰胺醇類(lèi)抗生素在食品中的殘留會(huì)對(duì)人類(lèi)的健康構(gòu)成直接或潛在的威脅， 特別是氯霉素具有抑制造血機(jī)能的毒副作用，導(dǎo)致人類(lèi)再生障礙性貧血， 許多國(guó)家已嚴(yán)格禁止將氯霉素用于食用動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)中。我國(guó)于 2002 年起禁止在食用動(dòng)物的所有用途中使用氯霉素。陳小霞等20 建立了雞肉組織中氯霉素、甲碉霉素和氟甲碉霉素殘留的LC ESI MS /MS僉測(cè)方法。樣品經(jīng)乙酸乙酯提取，正己烷脫脂，濃縮后定容直

28、接測(cè)定，檢出限為0.010 Ng /kg, 線性范圍0.0501.00 Ng /kg ,加標(biāo)回收率69.0%92.8%,該方法通過(guò)簡(jiǎn)單的液 液萃取過(guò)程提取凈化， 具有操作簡(jiǎn)便、 測(cè)定周期短等優(yōu)點(diǎn)。 鞏軍等研究了乳及乳制品中氯霉素殘留的UPLC- ESI-MS /MS檢測(cè)方法，方法檢出限0.050.1 g /kg ,回收率 75.0%94.6%。參考文獻(xiàn)1 Douglas A Skoog , Donald M West. Principles of Instrumental Analysis (second edition) M.1America :Saunders College,1980.

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