石蠟包埋技術(shù)要點(diǎn)總結(jié)

1、組織石蠟包埋和切片技術(shù)在制作切片或超薄切片時(shí)，由于組織是柔軟的，或局部的軟硬不均，這樣制作厚薄均勻的切片是困難的。所以有必要用一定物質(zhì)浸透組織內(nèi)部，整個(gè)組織一樣硬化，以利于切成薄片，這種物質(zhì)叫做包埋劑。一股用光學(xué)顯微鏡觀察的切片，用、火棉膠、炭蠟、明膠等作；電子顯微鏡則用環(huán)氧樹脂、聚苯乙烯樹脂、異丁烯樹脂及水溶性樹脂。 1程序（一）材料的采集與分割 采集材料應(yīng)根據(jù)制片的目的和要求而定，材料要有代表性，無病蟲害或其它損傷，如要觀察病理解剖，則要取病斑、病癥部位。采下的材料應(yīng)立即放在標(biāo)本箱或濕布包起來帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分割固定（如有條件也可在試驗(yàn)地采集后進(jìn)行分割固定）。為使固定液能迅速的滲透材料，材料

2、要進(jìn)行分割。分割時(shí)動(dòng)作要迅速，以防材料萎蔫。分割塊的大小，宜小不宜大，一般不超過1cm3，分割后立即殺死固定。2（二）殺死與固定 利用藥劑迅速把細(xì)胞殺死，以保持材料本來的狀態(tài)和結(jié)構(gòu)。（三）脫水 脫水的目的是除去組織中的水分，便于透明、浸蠟、包埋等步驟的進(jìn)行，因?yàn)檫@些程序中所用的藥品都不能與水混合，所以必須脫水。常用的脫水劑為酒精。脫水過程應(yīng)緩慢進(jìn)行，不能操之過急或時(shí)間過長(zhǎng)，以免組織變硬變脆或發(fā)生收縮現(xiàn)象。脫水采用等級(jí)脫水（系列脫水），即從較低濃度酒精開始，逐漸替換到高濃度酒精。3（四）透明 透明的目的是將脫水劑從材料中除去，使材料透明，增記折光系數(shù)；同時(shí)便于下步的浸蠟和包埋等程序（因?yàn)榫烤共荒?/p>

3、溶解石蠟）。透明劑是一種既能與脫水劑混合，又能與包埋劑混合的藥劑。常用的透明劑為二甲苯。4（五）浸蠟 浸蠟的目的是逐漸除去透明劑,并為包埋劑所代替。常用的包埋劑是石蠟。浸蠟過程是使石蠟慢慢溶于浸有材料的透明劑中，溶解在透明劑中的石蠟漸漸深入到材料的細(xì)胞中去，最后使透明劑完全被石蠟取代，以便切片。 5（六）包埋（埋蠟、沉床） 材料浸蠟后再換兩次已熔融的純蠟，然后將材料和石蠟一起倒入提前疊好的包埋模具中，用加熱的鑷子迅速將材料按一定的間隔和所需的切面擺放整齊，同時(shí)用加熱的鑷子趕走材料周圍的氣泡，待模具表面的石蠟?zāi)毯髮⒓埡衅椒湃肜渌?，使石蠟迅速凝固。最后從模具中取出蠟塊，以便保存。注意將樣品編號(hào)

4、封于蠟塊上，以免樣品混淆。6（八）切片 用切片機(jī)（如旋轉(zhuǎn)切片機(jī)）將蠟塊切成連續(xù)的蠟帶。切片時(shí)先把切片刀夾在刀架上，再把載蠟器夾在固定裝置上（注意安裝切刀的角度，刀口運(yùn)行方向與材料切面平行），然后調(diào)整好所需厚度，一般可在714微米，視材料和所需觀察對(duì)象而定，轉(zhuǎn)動(dòng)切片機(jī)切片。7具體流程1 脫水：多聚甲醛中取出組織，流水沖洗數(shù)分鐘70% 乙醇（2h,可延長(zhǎng)過夜）85%乙醇(2h) 95%乙醇 (1h)95%乙醇(1h) 無水乙醇 (30min)無水乙醇 (30min)。注：1若組織數(shù)量過多時(shí)，應(yīng)分開脫水（20個(gè)組織左右） 2脫水的體積至少為組織體積的5倍 3乙醇純度越高時(shí)，脫水的時(shí)間減少，否則引起組織過硬 4 最好能攪拌，使脫水充分。82 透明：二甲苯 二甲苯 ，每步15min.注：在二甲苯的時(shí)間不宜過短或過長(zhǎng)。時(shí)間過短引起透明不充分，影響后面滲透包埋；時(shí)間過長(zhǎng)則引起組織變脆。3 滲透：石蠟 (15-20min)石蠟 (20-30min)石蠟(包埋),62。94 包埋：將組織放入盛有石蠟