發(fā)熱患者血檢瘧原蟲(chóng)血片制作及染色過(guò)程回顧性分析

1、2011年發(fā)熱患者血檢瘧原蟲(chóng)血片制作及染色過(guò)程回顧性分析瘧疾是由瘧原蟲(chóng)寄生于人體、經(jīng)蚊傳播的寄生蟲(chóng)病，臨床表現(xiàn)以周期性發(fā)冷、發(fā)熱、出汗和脾大、貧血為特征。為按期實(shí)現(xiàn)本縣消除瘧疾任務(wù)目標(biāo)，落實(shí)好各項(xiàng)防治措施，根據(jù)山東省全球基金瘧疾項(xiàng)目?jī)赡旯ぷ饔?jì)劃和山東省消除瘧疾實(shí)施方案的要求，結(jié)合本縣實(shí)際防控，制定了具體的技術(shù)方案，對(duì)全縣各醫(yī)療衛(wèi)生單位的檢驗(yàn)人員進(jìn)行了全員培訓(xùn)，現(xiàn)將血片制作及染色過(guò)程中的注意事項(xiàng)總結(jié)如下。血片制作之前，一定要將玻片清洗干凈，玻片的清潔與否影響血片的質(zhì)量。新載玻片常有游離堿質(zhì)，應(yīng)用清洗液或10%鹽酸或鉻酸洗液浸泡24h，然后再?gòu)氐浊逑矗栏?，最后用干凈柔軟的棉巾將玻片擦凈晾干。已?/p>

2、過(guò)的載玻片應(yīng)先浸泡于洗滌劑溶液中12d,或浸泡于煮沸的5%巴皂水1h左右，再移到新配置的洗滌劑溶液中12h,再用熱水將肥皂和血膜洗去，用清水反復(fù)沖洗，然后擦干或烤干備用。將血片分為6等份，第1、2格貼標(biāo)簽及編號(hào)備用，厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前緣至第6格中部。用推片的左下角，從取血部位刮取45以血量，使血滴與平置的載玻片接觸，用推片的一角將血由內(nèi)向外旋轉(zhuǎn)24圈，涂成厚薄均勻，直徑為0.81.0cm左右的圓形厚血膜，過(guò)厚易于脫落，過(guò)薄達(dá)不到檢出率的要求。制薄血膜時(shí)，用推片一端邊緣的中點(diǎn)，從取血部位取11.5以血量，使血滴與平置的載玻片接觸，待血液沿推片邊緣展開(kāi)約2cm長(zhǎng)度時(shí)（玻片寬度

3、為2.5cm，即兩邊稍留一點(diǎn)），使推片與載玻片呈3045,均勻而迅速的輕輕從右向左推成舌狀薄膜，制成的薄血膜應(yīng)在玻片上形成平鋪的血細(xì)胞，細(xì)胞之間互相接觸而不相互重疊，每張載玻片上分別做1個(gè)薄血膜和1個(gè)厚血膜。至此，1份完整的血檢瘧原蟲(chóng)的血片制作完成。薄血膜中瘧原蟲(chóng)形態(tài)完整，被感染紅細(xì)胞未被破壞，容易識(shí)別和鑒別蟲(chóng)種，但原蟲(chóng)密度低時(shí)容易漏檢。厚血膜由于原蟲(chóng)集中易檢獲，檢出率是薄血膜的1525倍，但制片過(guò)程中紅細(xì)胞溶解，原蟲(chóng)形態(tài)有所改變，蟲(chóng)種鑒別較困難。將制作好的血片放在陰涼干燥處自然晾干，室溫大約在2530c左右，干燥4h左右后，用甲醇固定薄血膜，厚血膜端稍高于薄血膜端，讓甲醇從薄血膜流下，讓薄血

4、膜自然晾干。甲醇固定完薄血膜后，再對(duì)厚血膜進(jìn)行溶血。用蒸儲(chǔ)水23滴，均勻覆蓋在厚血膜上12min,滴蒸儲(chǔ)水時(shí)要輕輕的滴，待厚血膜中央的紅色隨水晃動(dòng)時(shí)，輕輕沖洗去厚血膜上的蒸餾水，待厚血膜自然干燥后染色。夏天標(biāo)本盡可能在2448h內(nèi)固定染色，冬天也不能超過(guò)72h。放置時(shí)間越久，血膜越不易溶血脫色，染色效果也差。吉氏染液的配置取吉氏粉10g，甘油500ml，將吉姆薩粉10g置于研缽中，加入少量甘油小心充分研磨，溶解緩慢，應(yīng)邊加邊磨，至500ml甘油加完研磨均勻?yàn)橹?。然后倒?000ml的容量瓶（或有塞玻璃瓶中）中。每次加入少量甲醇至研缽中，多次洗滌研缽中的殘留液，至洗凈為止，洗液均并入容量瓶中。最

5、后加全部剩余甲醇正好稀釋至1000ml刻度，塞緊瓶塞，充分搖勻，置于5560c水浴中或溫箱內(nèi)24h,或室溫內(nèi)35d。期間經(jīng)常用力搖動(dòng)此溶液幾分鐘。然后可儲(chǔ)存至玻璃瓶中塞緊備用。伊紅在水溶液中遇到美蘭或天青即可互相化合而產(chǎn)生沉淀，從而失去染色能力，因此，吉氏母液絕對(duì)不能進(jìn)水。5將染色儲(chǔ)備液（母液）加入蒸儲(chǔ)水作1:201:15稀釋?zhuān)ㄈ〖夏敢?2滴，加中性蒸儲(chǔ)水1030滴）混合均勻后，將適量染液覆蓋厚薄血膜，染色2030min,輕輕漂洗掉染液即可。然后將染色后的玻片用清水沖洗干凈后，將它放在陰涼干燥處晾干即可。至此，一張完整的合格的血片制作完成。6血片染色好壞除了玻片是否清潔，血片制作質(zhì)量和染色技術(shù)等有關(guān)外，還受到以下幾個(gè)因素的影響。6.1染料和溶劑的質(zhì)量以及染液的新舊。必須用分析純的甲醇和中性甘油，而且配置時(shí)所用的器具必須干凈而無(wú)水分。如果試劑不純，常使配置的染液偏酸或偏堿而影響染色效果。新配置的染液染色效果較差，染液存放時(shí)間越長(zhǎng)，染色力越強(qiáng)。盛放染液的瓶子應(yīng)加塞密閉，以防吸潮而影響染液質(zhì)量。6.2染液的稀釋濃度及稀釋后使用時(shí)間。染液的濃度高，則著色快而深，顏色常偏堿。染液濃度低，則著色慢而淺，顏色偏酸。稀釋后的溶液必須當(dāng)時(shí)使用，一般在30min內(nèi)染色力最強(qiáng)。經(jīng)過(guò)對(duì)發(fā)熱患者進(jìn)行涂片鏡檢，也得出了很多，對(duì)血片制作染色過(guò)程中的溫度、染液濃度、染色時(shí)間的長(zhǎng)短、及染液濃度的配制和時(shí)間的相