DNA限制性內(nèi)切酶——雙酶切反應(yīng)時通用緩沖液的選用

1、DNA限制性內(nèi)切酶雙酶切反應(yīng)時通用緩沖液的選用當(dāng)酶切位點確定后，最好購買同一家公司生產(chǎn)同一類型的內(nèi)切酶(若酶切Buffer相同，這樣有時候可以省去后期去需找酶切反應(yīng)通用緩沖液)說明使用兩種酶同時進行DNA切斷反應(yīng)(DoubleDigestion)時，為了節(jié)省反應(yīng)時間，通常希望在同一反應(yīng)體系內(nèi)進行。TaKaRa采用UniversalBuffer表示系統(tǒng)，并對每種酶表示了在各UniversalBuffer中的相對活性。盡管如此，在進行DoubleDigestion時，有時還會難以找到合適的UniversalBuffer。本表以在pUC系列載體的多克隆位點處的各限制酶為核心，顯示了在DoubleDi

2、gestion可使用的最佳UniversalBuffer條件。在本表中，各UniversalBuffer之前表示的數(shù)字X是指各UniversalBuffer的反應(yīng)體系中的最終濃度。TaKaRa銷售產(chǎn)品中添附的UniversalBuffer全為10倍濃度的緩沖液。終濃度為0.5X時反應(yīng)體系中的緩沖液則稀釋至20倍，1X時稀釋至10倍，2X時稀釋至5倍進行使用。注意1pgDNA中添加10U的限制酶，在50pl的反應(yīng)體系中，37C下反應(yīng)1小時可以完全降解DNA。為防止Star活性的產(chǎn)生，請將反應(yīng)體系中的甘油含量，盡量控制在10%以下。根據(jù)DNA的種類，各DNA的立體結(jié)構(gòu)的差別，或當(dāng)限制酶識別位點鄰接

3、時，有時會發(fā)生DoubleDigestion不能順利進行的可能。BamHI0.5xK0.5XK0.5kK1xLO.SkBSA-G.5XK1xM1xM0.5xK2xTIxK0.5kKWcoJ*XM+BSAn!H+BSA1XH1KK1XM1xH1XT+BSA1XHIXHixhl1XHvixH+BSA1xH1xK0.5xK1xHOixK+KA1xH1xH2xT1xHHine11炳kK+KA0.5XK1xMUK1xT+ESA2xT1XM1xMHind111a.5xK+BSA1xM1XKIxMt5xK1xIBSAIxKIxM1xMKpn10.5JCK+SSA1XM0.5XK1x.LUxTSA1XT+BS

4、A1XMO.5XK1XM1XMNeoQ馭治協(xié)1x+BSAbK+BSAOixK+BSAISxTtBSA1xT+BSA1xK+BSAIxK+BSAIxM+BSA1xK+BSANdel1KHfSSfl1xH1xK1xT1xH1xT+BSA1xH1xH1xT1XHNot0.5XT+BSA1XH+BSA1XH+BSAD.5XK+BSA1)iH+8SAIxH+BSA+TritonX-100O.ixK+BSA1XH+BSA15XT+BSA1XH+BSA2XK+BSA0.5XT+BSA1xH1xH+BSA1xH1xM1xHIXK+BSAfxK+BSA2xK+ESA1.5XK+BSA0,5xK1xK0.5XK+BSA0.5xKixT+BSA1XM1.5XT+BSAixH+BSA1xH1.5xT1xH0.5XT-BSA0,5xT+BSA1XK+BSA1xT+BSA1.5XT+BSA1xT+BSA1xT+BSAIxH+BSAixH+BSA0.5XK4BSA1.5XK+BSA