武漢大學(xué)考研歷年真題部分答案_分類介紹

1、第一類：諾貝爾獎(jiǎng)及發(fā)展趨勢(shì)1、2002簡(jiǎn)1#分別以一句話簡(jiǎn)介1999和2001年諾貝爾獎(jiǎng)獲獎(jiǎng)項(xiàng)目中有關(guān)細(xì)胞生物學(xué)的內(nèi)容2、2005簡(jiǎn)1#簡(jiǎn)介2002和2004年諾貝爾獎(jiǎng)獲獎(jiǎng)項(xiàng)目中有關(guān)細(xì)胞生物學(xué)的內(nèi)容主題3、2004簡(jiǎn)6#請(qǐng)談?wù)勅绾卫斫饽壳吧飳W(xué)研究中分子生物學(xué)向細(xì)胞生物學(xué)回歸的現(xiàn)象4、2006簡(jiǎn)3#什么是 HYPERLINK file:/H:細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞考研輔導(dǎo)干細(xì)胞.doc t _parent 干細(xì)胞？概述干細(xì)胞的類型與功能，并簡(jiǎn)要敘述干細(xì)胞研究的意義和前景5、2008簡(jiǎn)6#最近美國(guó)和日本科學(xué)家分別將人體皮膚細(xì)胞改造成類似胚胎干細(xì)胞，這一成果在理論上、實(shí)踐上有何意義？6、2009問(wèn)答4#-

2、綠色熒光蛋白（GFP）的發(fā)現(xiàn)及研究者獲得了2008年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)，他們的具體貢獻(xiàn)是什么？該成果在細(xì)胞生物學(xué)有關(guān)領(lǐng)域研究中有何應(yīng)用？簡(jiǎn)述應(yīng)用的原理與主要步驟。參考答案：諾貝爾獎(jiǎng)獲獎(jiǎng)項(xiàng)目中有關(guān)細(xì)胞生物學(xué)的內(nèi)容主題1、1999年，美國(guó)科學(xué)家甘特布洛貝爾。他發(fā)現(xiàn)了蛋白質(zhì)內(nèi)控制蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)傳輸和定位的信號(hào)。獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)及生理學(xué)獎(jiǎng)。2、2000年瑞典科學(xué)家阿爾維德卡爾松、美國(guó)科學(xué)家保羅格林加德、奧地利科學(xué)家埃里克坎德?tīng)栆蛟谌祟惸X神經(jīng)細(xì)胞間信號(hào)的相互傳遞方面獲得的重要發(fā)現(xiàn)，而共同獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)及生理學(xué)獎(jiǎng)3、2001年美國(guó)科學(xué)家利蘭哈特韋爾、英國(guó)科學(xué)家蒂莫西亨特、保羅納斯因發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞周期的關(guān)鍵分子調(diào)節(jié)機(jī)制

3、，而共同獲得諾貝爾生理學(xué)及醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。4、2002年英國(guó)科學(xué)家悉尼布雷內(nèi)、約翰蘇爾斯頓、美國(guó)科學(xué)家羅伯特霍維茨因選擇線蟲作為新穎的實(shí)驗(yàn)生物模型，找到了對(duì)細(xì)胞每一個(gè)分裂和分化過(guò)程進(jìn)行跟蹤的細(xì)胞圖譜，而共同獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)及生理學(xué)獎(jiǎng)。5、2003年美國(guó)科學(xué)家保羅勞特布爾、英國(guó)科學(xué)家彼得曼斯菲爾德因在核磁共振成像技術(shù)領(lǐng)域的突破性成就，而共同獲得諾貝爾生理學(xué)及醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。6、2004年美國(guó)科學(xué)家理查德阿克塞爾和琳達(dá)巴克，以表彰兩人在氣味受體和嗅覺(jué)系統(tǒng)組織方式研究中作出的貢獻(xiàn)，共同獲得諾貝爾生理學(xué)及醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。7、2005年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予澳大利亞科學(xué)家巴里馬歇爾和羅賓沃倫，以表彰他們發(fā)現(xiàn)了導(dǎo)致胃炎和胃潰瘍的

4、細(xì)菌幽門螺桿菌。8.2006年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予美國(guó)科學(xué)家安德魯菲爾和克雷格梅洛，以表彰他們發(fā)現(xiàn)了控制基因信息流動(dòng)的基本機(jī)制，RNA干擾的發(fā)現(xiàn)。9.2007年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予美國(guó)科學(xué)家馬里奧-卡佩奇和奧利弗-史密西斯、英國(guó)科學(xué)家馬丁-埃文斯，這三位科學(xué)家是因?yàn)椤霸谏婕芭咛ジ杉?xì)胞和哺乳動(dòng)物DNA重組方面的一系列突破性發(fā)現(xiàn)”而獲得這一殊榮的。這些發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致了一種通常被人們稱為“基因打靶”的強(qiáng)大技術(shù)。這一國(guó)際小組通過(guò)使用胚胎干細(xì)胞在老鼠身上實(shí)現(xiàn)了基因變化。基因打靶技術(shù) HYPERLINK /biointeractive/pic/item/2b5415f5f528dd2ebd31093a.

5、jpg t _blank 基因打靶技術(shù)是一種定向改變生物活體遺傳信息的實(shí)驗(yàn)手段，它的產(chǎn)生和發(fā)展建立在胚胎干(ES)細(xì)胞技術(shù)和同源重組技術(shù)成就的基礎(chǔ)之上，并促進(jìn)了相關(guān)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展?；虼虬屑夹g(shù)將廣泛應(yīng)用于基因功能研究、人類疾病動(dòng)物模型的研制以及經(jīng)濟(jì)動(dòng)物遺傳物質(zhì)的改良等方面。1原理首先獲得ES細(xì)胞系，利用同源重組技術(shù)獲得帶有研究者預(yù)先設(shè)計(jì)突變的中靶ES細(xì)胞。通過(guò)顯微注射或者胚胎融合的方法將經(jīng)過(guò)遺傳修飾的ES細(xì)胞引入受體胚胎內(nèi)。經(jīng)過(guò)遺傳修飾的ES細(xì)胞仍然保持分化的全能性，可以發(fā)育為嵌合體動(dòng)物的生殖細(xì)胞，使得經(jīng)過(guò)修飾的遺傳信息經(jīng)生殖系遺傳。獲得的帶有特定修飾的突變動(dòng)物提供研究者一個(gè)特殊的研究體系，

6、使他們可以在生物活體中研究特定基因的功能。目前，在ES細(xì)胞進(jìn)行同源重組己經(jīng)成為一種對(duì)小鼠染色體組上任意位點(diǎn)進(jìn)行遺傳修飾的常規(guī)技術(shù)。通過(guò)基因打靶獲得的突變小鼠己經(jīng)超過(guò)千種(相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)參見(jiàn)文獻(xiàn))，并正以每年數(shù)百種的速度增加。通過(guò)對(duì)這些突變小鼠的表型分析，許多與人類疾病相關(guān)的新基因的功能已得到闡明，并直接導(dǎo)致了現(xiàn)代生物學(xué)研究各個(gè)領(lǐng)域中許多突破性的進(jìn)展。2實(shí)驗(yàn)流程 HYPERLINK /biointeractive/pic/item/2b5415f5f528dd2ebd31093a.jpg t _blank 3特點(diǎn)基因打靶技術(shù)是一種定向改變生物活體遺傳信息的實(shí)驗(yàn)手段。通過(guò)對(duì)生物活體遺傳信息的定向修飾包

7、括基因滅活、點(diǎn)突變引人、缺失突變、外源基因定位引入、染色體組大片段刪除等，并使修飾后的遺傳信息在生物活體內(nèi)遺傳，表達(dá)突變的性狀，從而可以研究基因功能等生命科學(xué)的重大問(wèn)題，以及提供相關(guān)的疾病治療、新藥篩選評(píng)價(jià)模型等?；虼虬屑夹g(shù)的發(fā)展己使得對(duì)特定細(xì)胞、組織或者動(dòng)物個(gè)體的遺傳物質(zhì)進(jìn)行修飾成為可能。4應(yīng)用基因打靶技術(shù)在基因功能研究中的應(yīng)用、應(yīng)用基因打靶技術(shù)研制人類疾病動(dòng)物模型、應(yīng)用基因打靶技術(shù)改良動(dòng)物品系和研制動(dòng)物反應(yīng)器等。干細(xì)胞：4、2006簡(jiǎn)3#什么是 HYPERLINK file:/H:細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞考研輔導(dǎo)干細(xì)胞.doc t _parent 干細(xì)胞？概述干細(xì)胞的類型與功能，并簡(jiǎn)要敘述干細(xì)胞研

8、究的意義和前景答案：干細(xì)胞(Stem Cell)是一種未充分 HYPERLINK /view/640770.htm t _blank 分化，尚不成熟的 HYPERLINK /view/3687.htm t _blank 細(xì)胞，具有再生各種組織 HYPERLINK /view/60813.htm t _blank 器官和 HYPERLINK /view/80463.htm t _blank 人體的潛在功能，醫(yī)學(xué)界稱之為“萬(wàn)用細(xì)胞”。 干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞。干細(xì)胞有兩種分類方法，一是根據(jù)干細(xì)胞所處的發(fā)育階段分為胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell，ES細(xì)胞)和成體

9、干細(xì)胞(somatic stem cell)。第二種分類方法是根據(jù)干細(xì)胞的發(fā)育潛能分為三類：全能干細(xì)胞(totipotent stem cell,TSC)、多能干細(xì)胞（pluripotent stem cell）和單能干細(xì)胞（unipotent stem cell）。胚胎干細(xì)胞的發(fā)育等級(jí)較高，是全能干細(xì)胞，而成體干細(xì)胞的發(fā)育等級(jí)較低，是多能或單能干細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞（Embryonic Stem cell， ES細(xì)胞）：胚胎干細(xì)胞當(dāng)受精卵分裂發(fā)育成囊胚時(shí)，內(nèi)層細(xì)胞團(tuán)（Inner Cell Mass）的細(xì)胞即為胚胎干細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞具有全能性，可以自我更新并具有分化為體內(nèi)所有組織的能力。成體干細(xì)胞

10、：成年動(dòng)物的許多組織和器官，比如表皮和造血系統(tǒng)，具有修復(fù)和再生的能力。成體干細(xì)胞在其中起著關(guān)鍵的作用。在特定條件下，成體干細(xì)胞或者產(chǎn)生新的干細(xì)胞，或者按一定的程序分化，形成新的功能細(xì)胞，從而使組織和器官保持生長(zhǎng)和衰退的動(dòng)態(tài)平衡。過(guò)去認(rèn)為成體干細(xì)胞主要包括上皮干細(xì)胞和造血干細(xì)胞。最近研究表明，以往認(rèn)為不能再生的神經(jīng)組織仍然包含神經(jīng)干細(xì)胞,說(shuō)明成體干細(xì)胞普遍存在，問(wèn)題是如何尋找和分離各種組織特異性干細(xì)胞。成體干細(xì)胞經(jīng)常位于特定的微環(huán)境中。微環(huán)境中的間質(zhì)細(xì)胞能夠產(chǎn)生一系列生長(zhǎng)因子或配體，與干細(xì)胞相互作用，控制干細(xì)胞的更新和分化。造血干細(xì)胞造血干細(xì)胞是體內(nèi)各種血細(xì)胞的唯一來(lái)源，它主要存在于骨髓、外周血

11、、臍帶血中。干細(xì)胞的用途：非常廣泛，涉及到醫(yī)學(xué)的多個(gè)領(lǐng)域。目前，科學(xué)家已經(jīng)能夠在體外鑒別、分離、純化、擴(kuò)增和培養(yǎng)人體胚胎干細(xì)胞，并以這樣的干細(xì)胞為“種子”，培育出一些人的組織器官。干細(xì)胞及其衍生組織器官的廣泛臨床應(yīng)用，將產(chǎn)生一種全新的醫(yī)療技術(shù)，也就是再造人體正常的甚至年輕的組織器官，從而使人能夠用上自己的或他人的干細(xì)胞或由干細(xì)胞所衍生出的新的組織器官，來(lái)替換自身病變的或衰老的組織器官。利用造血干細(xì)胞移植技術(shù)已經(jīng)逐漸成為治療 HYPERLINK /view/939.htm t _blank 白血病、各種 HYPERLINK /view/94487.htm t _blank 惡性腫瘤放化療后引起的

12、造血系統(tǒng)和 HYPERLINK /view/36052.htm t _blank 免疫系統(tǒng)功能障礙等疾病的一種重要手段?？茖W(xué)家預(yù)言，用 HYPERLINK /view/533827.htm t _blank 神經(jīng)干細(xì)胞替代已被破壞的 HYPERLINK /view/656152.htm t _blank 神經(jīng)細(xì)胞，有望使因 HYPERLINK /view/9241.htm t _blank 脊髓損傷而 HYPERLINK /view/559937.htm t _blank 癱瘓的病人重新站立起來(lái)；不久的將來(lái)， HYPERLINK /view/754312.htm t _blank 失明、 HY

13、PERLINK /view/31643.htm t _blank 帕金森氏綜合癥、 HYPERLINK /view/9070.htm t _blank 艾滋病、 HYPERLINK /view/76037.htm t _blank 老年性癡呆、 HYPERLINK /view/99347.htm t _blank 心肌梗塞和 HYPERLINK /view/923.htm t _blank 糖尿病等絕大多數(shù)疾病的患者，都可望借助干細(xì)胞移植手術(shù)獲得康復(fù)。5、2008簡(jiǎn)6#最近美國(guó)和日本科學(xué)家分別將人體皮膚細(xì)胞改造成類似胚胎干細(xì)胞，這一成果在理論上、實(shí)踐上有何意義？答案：美國(guó)和日本科學(xué)家分別將人體

14、皮膚細(xì)胞改造成類似胚胎干細(xì)胞，再一次證明了動(dòng)物細(xì)胞的全能性，同時(shí)可能意味著風(fēng)靡一時(shí)的胚胎干細(xì)胞克隆技術(shù)退出舞臺(tái)。因?yàn)檫@種被稱為“直接改造”的技術(shù)不僅能避免人體胚胎克隆技術(shù)引發(fā)的倫理爭(zhēng)議，其高效、便利也為進(jìn)一步醫(yī)學(xué)應(yīng)用打開(kāi)了大門。英國(guó)科學(xué)家伊恩威爾默特在一份聲明中說(shuō):“我們現(xiàn)在可以設(shè)想這么一個(gè)時(shí)代:能夠以一種簡(jiǎn)單方式制造干細(xì)胞，任何人身上的組織標(biāo)本均能培育出任何組織器官?！?這項(xiàng)技術(shù)尚不能完全取代胚胎細(xì)胞克隆技術(shù)，因?yàn)樗F(xiàn)階段的實(shí)驗(yàn)方式存在潛在副作用。美日研究小組利用逆轉(zhuǎn)錄酶病毒“改造”皮膚細(xì)胞，這種病毒可能使基因產(chǎn)生變異，引發(fā)腫瘤等副作用。因此，在評(píng)估和克服這一潛在風(fēng)險(xiǎn)前，“萬(wàn)能細(xì)胞”還不能用

15、于器官移植等臨床應(yīng)用。6、2009問(wèn)答4#-綠色熒光蛋白（GFP）的發(fā)現(xiàn)及研究者獲得了2008年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)，他們的具體貢獻(xiàn)是什么？該成果在細(xì)胞生物學(xué)有關(guān)領(lǐng)域研究中有何應(yīng)用？簡(jiǎn)述應(yīng)用的原理與主要步驟。答案：2008年10月8日， HYPERLINK /view/1554.htm t _blank 日本科學(xué)家下村修（伍茲霍爾海洋生物學(xué)研究所）、 HYPERLINK /view/2398.htm t _blank 美國(guó)科學(xué)家 HYPERLINK /view/1912279.htm t _blank 馬丁查爾菲（哥倫比亞大學(xué)）和錢永?。永Ｄ醽喆髮W(xué)圣迭戈分校）因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)和改造綠色熒光蛋白而獲得了當(dāng)年

16、（2008）的 HYPERLINK /view/29887.htm t _blank 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。在 HYPERLINK /view/15372.htm t _blank 細(xì)胞生物學(xué)與分子 HYPERLINK /view/7868.htm t _blank 生物學(xué)領(lǐng)域中，綠色螢光蛋白基因常被用作為一個(gè)報(bào)導(dǎo) HYPERLINK /view/8563.htm t _blank 基因(reporter gene)。一些經(jīng)修飾過(guò)的型式可作為生物探針，綠色螢光蛋白基因也可以 HYPERLINK /view/1364.htm t _blank 克隆到脊椎動(dòng)物上進(jìn)行表現(xiàn)，并拿來(lái)映證某種假設(shè)的實(shí)驗(yàn)方法。 G

17、FP熒光極其穩(wěn)定,在激發(fā)光照射下，GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比熒光素(fluorescein)強(qiáng)，特別在450490nm藍(lán)光波長(zhǎng)下更穩(wěn)定。GFP需要在 HYPERLINK /view/52756.htm t _blank 氧化狀態(tài)下產(chǎn)生熒光，強(qiáng)還原劑能使GFP轉(zhuǎn)變?yōu)榉菬晒庑问?，但一旦重新暴露在空氣或氧氣中，GFP熒光便立即得到恢復(fù)。而一些弱還原劑并不影響GFP熒光。中度氧化劑對(duì)GFP熒光影響也不大,如生物材料的固定、脫水劑戊二酸或甲醛等。由于GFP熒光是生物細(xì)胞的自主功能，熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物，因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報(bào)告蛋白，其作用是任何其它酶類報(bào)

18、告蛋白無(wú)法比擬的。綠色熒光蛋白應(yīng)用于骨架和細(xì)胞分裂研究（如RNA剪切因子的核內(nèi)運(yùn)輸、細(xì)胞骨架動(dòng)力和胞內(nèi)運(yùn)輸），細(xì)胞器動(dòng)力學(xué)和泡囊運(yùn)輸?shù)难芯浚ㄓ肎FP顯示小囊運(yùn)輸、用GFP觀察TGN運(yùn)輸），生物發(fā)育研究（用GFP觀察線蟲的神經(jīng)發(fā)育、分析果蠅神經(jīng)發(fā)育的不對(duì)稱性細(xì)胞分裂）等。利用常規(guī)的DNA重組技術(shù)將GFP基因與目的蛋白基因的編碼區(qū)連接形成一個(gè)單一的融合基因表達(dá)載體，然后將這一重組表達(dá)載體導(dǎo)入細(xì)胞，使融合蛋白得到瞬時(shí)或穩(wěn)定表達(dá)，通過(guò)檢測(cè)這些GFP的熒光來(lái)測(cè)定這些蛋白的位置。或者利用GFP的熒光特性對(duì)某一蛋白的N-或C-末端進(jìn)行標(biāo)記，然后借助熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡便可對(duì)標(biāo)記的蛋白進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)活體觀察。

19、第二類：細(xì)胞生物學(xué)常用的研究方法1、2002簡(jiǎn)7# HYPERLINK file:/H:細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞考研輔導(dǎo)3研究方法（重點(diǎn)）.ppt t _parent 掃描隧道顯微鏡是納米生物學(xué)研究的工具，為何能用來(lái)觀察活的生物樣品？答案：掃描式電子顯微鏡的電子束不穿過(guò)樣品，僅在樣品表面掃描激發(fā)出次級(jí)電子。放在樣品旁的閃爍晶體接收這些次級(jí)電子，通過(guò)放大后調(diào)制顯像管的電子束強(qiáng)度，從而改變顯像管熒光屏上的亮度。顯像管的偏轉(zhuǎn)線圈與樣品表面上的電子束保持同步掃描，這樣顯像管的熒光屏就顯示出樣品表面的形貌圖像，掃描式電子顯微鏡的分辨率主要決定于樣品表面上電子束的直徑。掃描式電子顯微鏡不需要很薄的樣品；圖像有很強(qiáng)的

20、立體感；能利用電子束與物質(zhì)相互作用而產(chǎn)生的次級(jí)電子、吸收電子和 X射線等信息分析物質(zhì)成分。 HYPERLINK file:/H:細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞考研輔導(dǎo)3研究方法（重點(diǎn)）.ppt t _parent 掃描隧道顯微鏡可以在真空、大氣、液體（接近于生理環(huán)境的離子強(qiáng)度）等多種條件下工作，因?yàn)閽呙钑r(shí)不接觸樣品，又沒(méi)有高能電子束轟擊，基本上可避免樣品的變形，屬于非破壞性測(cè)量，所以可以用來(lái)觀察活的生物樣品。2、 2003簡(jiǎn)6#以一種熒光染料檢驗(yàn)細(xì)胞活性的實(shí)驗(yàn)方案和原理答案：碘化丙啶熒光染色鑒定細(xì)胞活性原理細(xì)胞活性指標(biāo)通常包括細(xì)胞膜對(duì)核酸染料的通透性，代謝活性，膜電位等。用碘化丙啶(PI)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色,可以

21、區(qū)別壞死及正常細(xì)胞.細(xì)胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過(guò)質(zhì)膜.當(dāng)細(xì)胞壞死時(shí),質(zhì)膜不完整,PI就進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,它可嵌入到DNA或RNA中,使壞死細(xì)胞著色,活細(xì)胞不著色. 熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察方案 PI染色細(xì)胞 & FDA(1)染色:將瓶中的細(xì)胞搖勻,取200l于1.5ml的離心管中,加入PI 20l,染色15分鐘.(2)滴片:取一載玻片,用雙面膠圍成一小室,從離心管中各取以上染色后的細(xì)胞懸液10l,加入小室內(nèi)蓋上蓋玻片,熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察 細(xì)胞內(nèi)有熒光的則為壞死細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)無(wú)熒光的為活細(xì)胞。3、 2004簡(jiǎn)1#細(xì)胞生物學(xué)的鏡檢樣本制備中為什么必須

22、取材新鮮且迅速固定？透射電鏡觀察的樣品為什么必須事前進(jìn)行脫水處理答案：因?yàn)殡x體的細(xì)胞處在很低的大氣壓中，膜結(jié)構(gòu)很不穩(wěn)定，時(shí)間長(zhǎng)了之后會(huì)導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)破壞，整個(gè)細(xì)胞就支離破碎了，所以必須取材新鮮且迅速固定。電鏡標(biāo)本的制作過(guò)程是這樣的：戊二醛固定PBS沖洗鋨酸固定PBS沖洗丙酮逐級(jí)脫水樹(shù)脂（如EPON812）+丙酮滲透純樹(shù)脂滲透包埋聚合修塊超薄切片檸檬酸鉛和醋酸雙氧鈾染色電鏡觀察。因?yàn)榘駝?shù)脂）是脂溶性的，疏水性的，經(jīng)歷了由水相油相水相的過(guò)程，必須事前進(jìn)行脫水處理。4、 2004簡(jiǎn)5#FDA、DAPI、Cochicine（秋水仙素）等試劑在細(xì)胞生物學(xué)研究中的主要用途有哪些？簡(jiǎn)述其原理。答案：FDA

23、是熒光素2乙酯,研究細(xì)胞活性的,活細(xì)胞染成藍(lán)色,作用與DAPI,PI相同DAPI可以和雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出熒光. 當(dāng)DAPI和DNA結(jié)合時(shí), 其熒光信號(hào)增強(qiáng), 主要用于細(xì)胞染色(染細(xì)胞核)秋水仙素能抑制有絲分裂，破壞 HYPERLINK /view/217025.htm t _blank 紡錘體，使 HYPERLINK /view/6633.htm t _blank 染色體停滯在分裂中期 ，被廣泛應(yīng)用于 HYPERLINK /view/71814.htm t _blank 細(xì)胞學(xué)、 HYPERLINK /view/8907.htm t _blank 遺傳學(xué)的研究和植物育種的工作中，秋水仙素是誘變

24、多倍體效果最好的藥劑之一5、 2005簡(jiǎn)5#如何檢驗(yàn)細(xì)胞膜的完整性，簡(jiǎn)述其原理及操作。碘化丙啶熒光染色檢驗(yàn)細(xì)胞膜的完整性原理細(xì)胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過(guò)質(zhì)膜.當(dāng)細(xì)胞壞死時(shí),質(zhì)膜不完整,PI就進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,它可嵌入到DNA或RNA中,使細(xì)胞著色. 熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察方案 PI染色細(xì)胞(1)染色:將瓶中的細(xì)胞搖勻,取200l于1.5ml的離心管中,加入PI 20l,染色15分鐘.(2)滴片:取一載玻片,用雙面膠圍成一小室,從離心管中各取以上染色后的細(xì)胞懸液10l,加入小室內(nèi)蓋上蓋玻片,熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)有熒光的則為細(xì)胞膜不完整，細(xì)胞

25、內(nèi)無(wú)熒光的為細(xì)胞膜完整。6、 2005簡(jiǎn)6#請(qǐng)簡(jiǎn)單談?wù)勏铝袃x器的主要用途和特點(diǎn)（1）干涉差顯微鏡ICM（2）激光共聚焦掃描顯微鏡Confocal（3）電荷偶聯(lián)以CCD（4）流式細(xì)胞儀（Flow cytometry)干涉差顯微鏡（ICM，interference contrast microscope）其優(yōu)點(diǎn)是能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影影像。與相差顯微鏡相比，其標(biāo)本可略厚一點(diǎn)，折射率差別更大，故影像的立體感更強(qiáng)。ICM使細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，特別是一些較大的細(xì)胞器，如核、線粒體等，立體感特別強(qiáng)，適合于顯微操作。目前像基因注入、核移植、轉(zhuǎn)基因等的顯微操作常在這種顯微鏡下進(jìn)行。激光共聚焦掃描顯微鏡（Confoc

26、al) 激光共聚焦顯微鏡有如下優(yōu)越性：1、對(duì)活細(xì)胞和組織或細(xì)胞切片進(jìn)行連續(xù)掃描，可獲得精細(xì)的細(xì)胞骨架、染色體、細(xì)胞器和細(xì)胞膜系統(tǒng)的三維圖像。2、可以得到比普通熒光顯微鏡更高對(duì)比度、高解析度圖象、同時(shí)具有高靈敏度、杰出樣品保護(hù)。3、多維圖象的獲得，如7維圖象(XYZaIt):xyt、xzt和xt掃描,時(shí)間序列掃描旋轉(zhuǎn)掃描、區(qū)域掃描、光譜掃描、同時(shí)方便進(jìn)行圖像處理。4、細(xì)胞內(nèi)離子熒光標(biāo)記，單標(biāo)記或多標(biāo)記，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)如PH和鈉、鈣、鎂等離子濃度的比率測(cè)定及動(dòng)態(tài)變化。5、熒光標(biāo)記探頭標(biāo)記的活細(xì)胞或切片標(biāo)本的活細(xì)胞生物物質(zhì)，膜標(biāo)記、免疫物質(zhì)、免疫反應(yīng)、受體或配體，核酸等觀察；可以在同一張樣品上進(jìn)行同時(shí)多

27、重物質(zhì)標(biāo)記，同時(shí)觀察；6、對(duì)細(xì)胞檢測(cè)無(wú)損傷、精確、準(zhǔn)確、可靠和優(yōu)良重復(fù)性；數(shù)據(jù)圖像可及時(shí)輸出或長(zhǎng)期儲(chǔ)存。（3）電荷偶聯(lián)儀（CCD）（Charge Coupled Device）電荷藕合器件圖像傳感器,它使用一種高感光度的半導(dǎo)體材料制成。CCD的結(jié)構(gòu)為三層，第一層是“微型鏡頭”，第二層是“分色濾色片”以及第三層“感光層”?？捎糜诓蹲角逦鷦?dòng)態(tài)的信號(hào)。流式細(xì)胞儀（Flow CytoMeter, FCM）是一種在功能水平上對(duì)單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測(cè)手段，它可以高速分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù)，與傳統(tǒng)的熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)，成為當(dāng)代最

28、先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)。 7、 2006簡(jiǎn)6#簡(jiǎn)述常用的熒光標(biāo)記與觀察技術(shù)，列出其主要技術(shù)流程答案：（1）細(xì)胞免疫熒光技術(shù)是用于FCM檢測(cè)的標(biāo)本準(zhǔn)備，染色后也能在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察?；罴?xì)胞表面保留有較完整的抗原或受體，先用特異性鼠源性單克隆抗體與細(xì)胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合，再用熒光標(biāo)記的第二抗體結(jié)合，根據(jù)所測(cè)定的熒光強(qiáng)度和陽(yáng)性百分率即可知相應(yīng)抗原的密度和分布。（2）熒光染色鑒定細(xì)胞活性用碘化丙啶(propidium iodide,PI)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色,可以區(qū)別壞死及正常細(xì)胞.細(xì)胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過(guò)質(zhì)膜.當(dāng)細(xì)胞壞死時(shí),質(zhì)膜不完整,PI就進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,它可嵌入到DNA

29、或RNA中,使壞死細(xì)胞著色,活細(xì)胞不著色. 熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察方案： PI染色細(xì)胞(1)染色:將瓶中的細(xì)胞搖勻,取200l于1.5ml的離心管中,加入PI 20l,染色15分鐘.(2)滴片:取一載玻片,用雙面膠圍成一小室,從離心管中各取以上染色后的細(xì)胞懸液10l,加入小室內(nèi)蓋上蓋玻片,熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察 （3）探針的熒光標(biāo)記探針首先與某種介導(dǎo)分子(reporter molecule)結(jié)合,雜交后再通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)過(guò)程連接上熒光染料。再用與熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針?lè)肿犹禺愋越Y(jié)合來(lái)檢測(cè)DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對(duì)定量分析8、 200

30、6簡(jiǎn)7#相差顯微鏡、掃描電子顯微鏡，透射射電子顯微鏡在細(xì)胞生物學(xué)研究中各有何用途及特點(diǎn)答案：（1）相差顯微鏡： 相差顯微鏡是一種將光線通過(guò)透明標(biāo)本細(xì)節(jié)時(shí)所產(chǎn)生的光程差（即相位差）轉(zhuǎn)化為光強(qiáng)差的特種顯微鏡。光線通過(guò)比較透明的標(biāo)本時(shí)，光的波長(zhǎng)（顏色）和振幅（亮度）都沒(méi)有明顯的變化。因此，用普通光學(xué)顯微鏡觀察未經(jīng)染色的標(biāo)本（如活的細(xì)胞）時(shí)，其形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)往往難以分辨。然而，由于細(xì)胞各部分的折射率和厚度的不同，光線通過(guò)這種標(biāo)本時(shí)，直射光和衍射光的光程就會(huì)有差別。隨著光程的增加或減少，加快或落后的光波的相位會(huì)發(fā)生改變（產(chǎn)生相位差）。光的相位差人的肉眼感覺(jué)不到，但相差顯微鏡能通過(guò)其特殊裝置環(huán)狀光闌和相板

31、，利用光的干涉現(xiàn)象，將光的相位差轉(zhuǎn)變?yōu)槿搜劭梢圆煊X(jué)的振幅差（明暗差），從而使原來(lái)透明的物體表現(xiàn)出明顯的明暗差異，對(duì)比度增強(qiáng)，使我們能比較清楚的觀察到普通光學(xué)顯微鏡和暗視野顯微鏡下都看不到或看不清的活細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的某些細(xì)微結(jié)構(gòu)。用途：相差顯微鏡能觀察到透明樣品的細(xì)節(jié)，適用于對(duì)活體細(xì)胞生活狀態(tài)下的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)、增殖情況及細(xì)微結(jié)構(gòu)的觀察。因此，是微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞和組織培養(yǎng)、細(xì)胞工程、雜交瘤技術(shù)等現(xiàn)代生物學(xué)研究的必備工具。（2）掃描電子顯微鏡：特點(diǎn)：電子顯微鏡為電子束為介質(zhì),由于電子束波長(zhǎng)遠(yuǎn)較可見(jiàn)光小,故電子顯微鏡分辨率遠(yuǎn)比光學(xué)顯微鏡高.光學(xué)顯微鏡放大倍率最高只有約1500倍,掃描式顯微鏡可放

32、大到10000倍以上. 掃描電子顯微鏡有一重要特色是具有超大的景深(depth of field),約為光學(xué)顯微鏡的300倍,使得掃描式顯微鏡比光學(xué)顯微鏡更適合觀察表面起伏程度較大的試片. 可進(jìn)行多種功能的分析.與 X 射線譜儀配接,可在觀察形貌的同時(shí) 進(jìn)行微區(qū)成分分析;配有光學(xué)顯微鏡和單色儀等附件時(shí),可觀察陰極熒光圖像和進(jìn)行陰極熒光光譜分析等. 可使用加熱,冷卻和拉伸等樣品臺(tái)進(jìn)行動(dòng)態(tài)試驗(yàn),觀察在不同環(huán)境 條件下的相變及形態(tài)變化等. 大部分電子掃描顯微鏡的抗污染能力低,必須提供真空系統(tǒng)和電源穩(wěn)壓系統(tǒng). 用途： 二次電子象,背散射電子象,圖象處理及分析,能做各種固體材料樣品表面形貌及組織結(jié)構(gòu)的分

33、析.（3）透射子顯微鏡特點(diǎn)：因電子束穿透樣品后，再用電子透鏡成像放大而得名。它的光路與光學(xué)顯微鏡相仿。在這種電子顯微鏡中，圖像細(xì)節(jié)的對(duì)比度是由樣品的原子對(duì)電子束的散射形成的。樣品較薄或密度較低的部分，電子束散射較少，這樣就有較多的電子通過(guò)物鏡光欄，參與成像，在圖像中顯得較亮。反之，樣品中較厚或較密的部分，在圖像中則顯得較暗。如果樣品太厚或過(guò)密，則像的對(duì)比度就會(huì)惡化，甚至?xí)蛭针娮邮哪芰慷粨p傷或破壞。用途：透射式電子顯微鏡常用于觀察那些用普通顯微鏡所不能分辨的細(xì)微物質(zhì)結(jié)構(gòu)9、 2006簡(jiǎn)8#在進(jìn)行組織原位雜交定位分析樣品時(shí)，為什么常用冰凍切片方法，而不用石蠟切片方法組織原位雜交（Tissu

34、e in situ hybridization）簡(jiǎn)稱原位雜交，指組織或細(xì)胞的原位雜交，是經(jīng)適當(dāng)處理后，使細(xì)胞通透性增加，讓探針進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與DNA或RNA雜交，因此原位雜交可以確定探針互補(bǔ)序列在胞內(nèi)的空間位置，用于原位雜交的探針可以是單鏈或雙鏈DNA，也可以是RNA探針。通常探針操作的長(zhǎng)度以100-400nt為宜，過(guò)長(zhǎng)則雜交率減低。最近研究結(jié)果表明，寡核苷酸探針（16-30 nt）能自由出入細(xì)菌和組織細(xì)胞壁，雜交效率明顯高于長(zhǎng)探針，探針的標(biāo)記物可以是放射性同位素，也可以是非放射性生物素和半抗原等，原位雜交中，標(biāo)本的固定條件是影響雜交效率的重要因素。標(biāo)本組織蛋白質(zhì)的消化程度對(duì)探針進(jìn)入細(xì)胞極為重要，

35、去除蛋白質(zhì)的方法是，用0.2mol/L HCl處理載玻片，用蛋白酶K消化，然后用不同濃度的乙醇脫水。冰凍切片是組織在取材后直接置入液氮冷凍，切片后才將其浸入4%多聚甲醛約10 min，不會(huì)與蛋白質(zhì)產(chǎn)生廣泛的交叉連接，不會(huì)影響探針穿透入細(xì)胞或組織，空氣干燥后保存在-70。如冰箱溫度恒定，在-70切片可保存數(shù)月之久不會(huì)影響雜交結(jié)果。石蠟切片是用福爾馬林固定和石蠟包埋，這種標(biāo)本對(duì)檢測(cè)DNA和mRNA有時(shí)也可獲得雜交信號(hào)，但石蠟包埋切片由于與蛋白質(zhì)交聯(lián)的增加，影響核酸探針的穿透，因而雜交信號(hào)常低于冰凍切片。同時(shí)，在包埋的過(guò)程中可減低mRNA的含量。所以常用冰凍切片方法，而不用石蠟切片方法10、2006

36、簡(jiǎn)9#細(xì)胞工程中。哪些方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合，各有何特點(diǎn)細(xì)胞融合(Cell fusion)，即在自然條件下或用人工方法(生物的、物理的、化學(xué)的)使兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多常用的主要有滅活的 HYPERLINK /view/919732.htm t _blank 仙臺(tái)病毒(Sendai virus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和電脈沖。病毒誘導(dǎo)融合病毒是最早采用的融合劑。常用于誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的病毒有仙臺(tái)病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等，其中仙臺(tái)病毒最常用。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或-丙內(nèi)酯滅活，使病毒的感染活性喪失而保留

37、病毒的融合活性。用滅活的仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的優(yōu)點(diǎn)是融合率較高，對(duì)各種動(dòng)物細(xì)胞都適宜，并且仙臺(tái)病毒能在雞胚中大量繁殖，容易培養(yǎng)；缺點(diǎn)是仙臺(tái)病毒不穩(wěn)定，在保存過(guò)程中融合活性會(huì)降低，并且制備過(guò)程比較煩瑣。此外，病毒引進(jìn)細(xì)胞后，可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的生命活動(dòng)產(chǎn)生干擾。聚乙二醇誘導(dǎo)融合聚乙二醇具有強(qiáng)烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質(zhì)的作用，能夠有效地促進(jìn)植物原生質(zhì)體和動(dòng)物細(xì)胞的融合。在不同種類的動(dòng)物細(xì)胞混合液中加入聚乙二醇，就會(huì)發(fā)生細(xì)胞凝集作用；在稀釋和除去聚乙二醇的過(guò)程中，就會(huì)發(fā)生細(xì)胞融合。聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合的機(jī)理，目前還不太清楚。聚乙二醇是化學(xué)試劑，使用起來(lái)很方便，誘導(dǎo)細(xì)胞融合的頻率比較高，但是它有一定毒性

38、，對(duì)有些細(xì)胞(如卵細(xì)胞)不適用。電場(chǎng)誘導(dǎo)融合20世紀(jì)80年代建立起來(lái)的電融合技術(shù)，是將兩種細(xì)胞的混合液置于低壓交流電場(chǎng)中，使細(xì)胞聚集成串珠狀，然后施加高壓電脈沖，以促使細(xì)胞融合。緊密排列的細(xì)胞，在相互接觸的細(xì)胞膜之間會(huì)出現(xiàn)無(wú)蛋白顆粒的脂質(zhì)區(qū)，當(dāng)受到電擊時(shí)，這個(gè)區(qū)域就會(huì)被擊穿，產(chǎn)生脂雙層膜孔，導(dǎo)致細(xì)胞之間的細(xì)胞質(zhì)連通，進(jìn)而發(fā)生細(xì)胞融合。電融合技術(shù)有許多優(yōu)點(diǎn)，如誘導(dǎo)細(xì)胞融合的頻率高，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒害作用，操作簡(jiǎn)便，可重復(fù)性好。11、 2007簡(jiǎn)6#簡(jiǎn)述鑒定下列細(xì)胞結(jié)構(gòu)的方法：細(xì)胞壁、細(xì)胞核、淀粉粒、油脂和蛋白質(zhì)細(xì)胞壁：植物細(xì)胞壁：先在材料上滴上1滴濃鹽酸，然后滴上間苯三酚-酒精液1滴，木質(zhì)化的細(xì)胞壁就

39、染上櫻紅或紫紅色。 細(xì)菌細(xì)胞壁：革蘭氏染液，陽(yáng)性細(xì)菌為紫色，陰性細(xì)菌為紅色。細(xì)胞核：席夫（Schiffs）試劑，堿性品紅是較強(qiáng)的核染色劑，在孚爾根氏（Feulgens）反應(yīng)中作為組織化學(xué)試劑，以檢查DNA。淀粉粒：遇碘變藍(lán)油脂：蘇丹染色后是淡黃色的蛋白質(zhì)：米氏反應(yīng)，其中硝基汞試劑作用于細(xì)胞中蛋白質(zhì)側(cè)鏈上的酪氨酸基，形成紅色沉淀12、 2007簡(jiǎn)7#已知某信號(hào)分子（分泌蛋白）引發(fā)的下游事件可抑制細(xì)胞分裂，我們推測(cè)該信號(hào)分子的受體可能分布在細(xì)胞膜上。請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案證實(shí)（1）該信號(hào)分子的受體確實(shí)存在于細(xì)胞膜上；（2）該信號(hào)分子是通過(guò)與其受體的結(jié)合抑制了細(xì)胞分裂。該實(shí)驗(yàn)應(yīng)特別注意哪些關(guān)鍵環(huán)節(jié)？答

40、案：（1）對(duì)信號(hào)分子（分泌蛋白）進(jìn)行熒光標(biāo)記，加入細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)一段時(shí)間后，在熒光顯微鏡下觀察培養(yǎng)的細(xì)胞，觀察其表面是否有熒光，如果有，則說(shuō)明其信號(hào)分子的受體存在于細(xì)胞膜上，如果沒(méi)有熒光標(biāo)記，則說(shuō)明其信號(hào)分子的受體不存在于細(xì)胞膜上。（2）進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)，設(shè)置三種培養(yǎng)液，1號(hào)是不加入信號(hào)分子的細(xì)胞培養(yǎng)液，2號(hào)是加入信號(hào)分子的細(xì)胞培養(yǎng)液，3號(hào)加入大量與信號(hào)分子結(jié)構(gòu)相似的抑制劑后，再加入信號(hào)分子到細(xì)胞培養(yǎng)液，觀察細(xì)胞分裂的情況，如果1號(hào)和3號(hào)細(xì)胞都正常分裂，只有2號(hào)出現(xiàn)不分裂，則說(shuō)明信號(hào)分子是通過(guò)與其受體的結(jié)合抑制了細(xì)胞的分裂。實(shí)驗(yàn)應(yīng)特別注意的環(huán)節(jié)有：對(duì)信號(hào)分子進(jìn)行熒光標(biāo)記；進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)的3號(hào)培養(yǎng)

41、液一定要加入大量（過(guò)量）的抑制劑。13、 2008簡(jiǎn)3#細(xì)胞顯微操作技術(shù)主要可用于哪些生物工程研究？為什么必須采用倒置顯微鏡？細(xì)胞顯微操作技術(shù)是在顯微鏡下，用顯微操作裝置對(duì)細(xì)胞進(jìn)行解剖和微量注射的技術(shù)，細(xì)胞拆合、顯微注射與現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合用于研究核質(zhì)關(guān)系、細(xì)胞內(nèi)某種mRNA或蛋白質(zhì)功能，還進(jìn)行轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、高等動(dòng)物克隆等方面的研究。因?yàn)橹挥械怪蔑@微鏡有操作平臺(tái)，可放置培養(yǎng)皿，滿足顯微操作的需要，所以必須采用倒置顯微鏡。14、 2008簡(jiǎn)4#請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，用四種方法證實(shí)某種細(xì)胞是生活的。（1）臺(tái)盼藍(lán)染色用0.5%濃度的臺(tái)盼藍(lán)（Trypan blue）,用PBS配制，室溫保存，該染料只對(duì)死細(xì)胞

42、著色，可測(cè)定活細(xì)胞數(shù)和計(jì)算存活百分率。（2）用碘化丙啶(propidium iodide,PI)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色,可以區(qū)別壞死及正常細(xì)胞，細(xì)胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過(guò)質(zhì)膜.當(dāng)細(xì)胞壞死時(shí),質(zhì)膜不完整,PI就進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,它可嵌入到DNA或RNA中,使壞死細(xì)胞著色,活細(xì)胞不著色. 熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察，沒(méi)有熒光的則為活細(xì)胞。（3）用相差顯微鏡觀察活細(xì)胞，并可在鏡下連續(xù)拍攝記錄體外培養(yǎng)細(xì)胞的活動(dòng)，如細(xì)胞分裂、細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)等過(guò)程。（4）光脫色恢復(fù)技術(shù)：用熒光素標(biāo)記膜蛋白，然后用激光照射細(xì)胞表面某一區(qū)域，使被照射區(qū)的熒光淬滅變暗，然后觀察膜上熒光的變化，如果一段時(shí)

43、間后，淬滅區(qū)域的亮度逐漸增加，最后恢復(fù)到與周圍的熒光強(qiáng)度相等，則說(shuō)明細(xì)胞是生活的。第三類：細(xì)胞周期/調(diào)控/分化1、2002論述3#試述cyclin與CDK在 HYPERLINK file:/H:細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞考研輔導(dǎo)11細(xì)胞增殖.ppt t _parent 細(xì)胞周期調(diào)控的作用原理及主要下游事件（P429-436）Cyclin周期蛋白不僅僅起激活CDK的作用，還決定了CDK何時(shí)、何處、將何種底物磷酸化，從而推動(dòng)細(xì)胞周期的前進(jìn)。分為G1型、G1/S型S型和M型4類，各類周期蛋白均含有一段約100個(gè)氨基酸的保守序列，稱為周期蛋白框，介導(dǎo)周期蛋白與CDK結(jié)合。G1期與G1/S期：G1周期蛋白主要包括c

44、yclinD、cyclinE，還有cyclinA，G1期的CDK主要包括CDK2、CDK4和CDK6。cyclinD與CDK4和CDK6結(jié)合，cyclinE與CDK2結(jié)合。E- CDK2為S期啟動(dòng)所必需，E- CDK2與 p107和E2F結(jié)合成復(fù)合物后，CDK2催化p107磷酸化，使p107失去抑制作用，E2F的作用被顯示出來(lái)，促進(jìn)有關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促使細(xì)胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)化；E- CDK2還直接參與了中心體復(fù)制的起始調(diào)控。cyclinA的合成開(kāi)始于G1/S，與CDK2結(jié)合。S期：cyclinA-CDK2是S期主要的CDK激酶，位于DNA復(fù)制中心，使DNA復(fù)制因子RF-A磷酸化并使后者的活性

45、增強(qiáng)。在G2-M期：主要的周期蛋白是cyclinB，也有cyclinA，與CDK1結(jié)合，CDK1使底物蛋白磷酸化：如將組蛋白H1磷酸化導(dǎo)致染色體凝集；核纖層蛋白磷酸化促使核膜解體；核仁蛋白磷酸化，促使核仁解體；p60c-src蛋白磷酸化，促使細(xì)胞骨架重排；C-abl蛋白磷酸化，促使細(xì)胞形態(tài)調(diào)整等下游細(xì)胞周期事件。M期：在中期當(dāng)MPF活性達(dá)到最高時(shí)，通過(guò)一種未知的途徑，激活后期促進(jìn)因子APC，將泛素連接在cyclinB和cyclinA上，導(dǎo)致cyclinB和cyclinA被蛋白酶體（proteasome）降解，CDK1激酶活性喪失，被CDK1磷酸化的蛋白質(zhì)去磷酸化，細(xì)胞周期便從M期中期向后期轉(zhuǎn)化

46、，完成一個(gè)細(xì)胞周期 2、2003簡(jiǎn)7#經(jīng)誘變處理發(fā)現(xiàn)生活受精卵不能啟動(dòng)分裂，試推測(cè)突變基因可能主要涉及哪些生理過(guò)程調(diào)控（檢驗(yàn)點(diǎn)）受精卵要啟動(dòng)分裂必須通過(guò)一系列DNA復(fù)制延擱檢驗(yàn)點(diǎn)：細(xì)胞要分裂，必須正確復(fù)制DNA和達(dá)到一定的體積，在獲得足夠物質(zhì)支持分裂以前，細(xì)胞不可能進(jìn)行分裂。細(xì)胞周期的運(yùn)行，是在一系列稱為檢驗(yàn)點(diǎn)（check point）的嚴(yán)格檢控下進(jìn)行的，當(dāng)DNA發(fā)生損傷，復(fù)制不完全或紡錘體形成不正常，周期將被阻斷。細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)由感受異常事件的感受器、信號(hào)傳導(dǎo)通路和效應(yīng)器構(gòu)成，主要檢驗(yàn)點(diǎn)包括：G1/S檢驗(yàn)點(diǎn):在酵母中稱start點(diǎn)，在哺乳動(dòng)物中稱R點(diǎn)(restriction point)，控

47、制細(xì)胞由靜止?fàn)顟B(tài)的G1進(jìn)入DNA合成期，相關(guān)的事件包括：DNA是否損傷？細(xì)胞外環(huán)境是否適宜？細(xì)胞體積是否足夠大？S期檢驗(yàn)點(diǎn)：DNA復(fù)制是否完成？G2/M檢驗(yàn)點(diǎn)：是決定細(xì)胞一分為二的控制點(diǎn)，相關(guān)的事件包括：DNA是否損傷？細(xì)胞體積是否足夠大？中-后期檢驗(yàn)點(diǎn)（紡錘體組裝檢驗(yàn)點(diǎn)）：任何一個(gè)著絲點(diǎn)沒(méi)有正確連接到紡錘體上，都會(huì)抑制APC的活性，引起細(xì)胞周期中斷。Weel和cdc25c參與了檢驗(yàn)點(diǎn)的調(diào)控，在S期，Cdc25c的活性比較低，而 Weel的活性比較高，Weel可以促使CDK1磷酸化，抑制CDK1激酶的活性，Cdc25c的活性比較低，不能有效促使CDK1去磷酸化，無(wú)法激活CDK1，抑制細(xì)胞進(jìn)入M

48、期，啟動(dòng)細(xì)胞分裂。細(xì)胞能啟動(dòng)分裂有可能是Weel和cdc25c發(fā)生突變，無(wú)法完成檢驗(yàn)點(diǎn)的協(xié)同控制。3、2003論述4#分別舉例說(shuō)明影響 HYPERLINK file:/H:細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞考研輔導(dǎo)12細(xì)胞分化.ppt t _parent 細(xì)胞分化的主要原因細(xì)胞分化(cell differentiation)：在個(gè)體發(fā)育中，由一 種相同的細(xì)胞類型經(jīng)細(xì)胞分裂后逐漸在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上形成穩(wěn)定性差異，產(chǎn)生各不相同的細(xì)胞類群的過(guò)程。細(xì)胞分化是多細(xì)胞生物發(fā)育的基礎(chǔ)與核心；細(xì)胞分化的關(guān)鍵在于特異性蛋白質(zhì)合成；合成特異性蛋白質(zhì)實(shí)質(zhì)在于組織特異性基因在時(shí)間和空間上的差異性表達(dá)；差異性表達(dá)的機(jī)制是由于基因表達(dá)的組

49、合調(diào)控。 影響細(xì)胞分化的因素（1）細(xì)胞的全能性：細(xì)胞經(jīng)分裂和分化后仍具有產(chǎn)生完整有機(jī)體的潛能或特性。如將羊的乳腺細(xì)胞的細(xì)胞核植入去核的羊卵細(xì)胞中，成功克隆了多莉羊，證明即使終末分化的細(xì)胞，其細(xì)胞核也具有全能性。植物的組織培養(yǎng)，用已經(jīng)分化的外植體脫分化后再形成新的植株，也證明了植物細(xì)胞的全能性。（2）胞外信號(hào)分子對(duì)細(xì)胞分化的影響：一部分細(xì)胞會(huì)影響周圍細(xì)胞使其向一定方向分化，稱為近端組織相互作用，也稱為胚胎誘導(dǎo)。如眼的發(fā)生，早期視泡誘導(dǎo)與之接觸的外胚層上皮細(xì)胞發(fā)育成晶狀體，隨后在視泡和晶狀體的共同誘導(dǎo)下外面的表皮細(xì)胞形成角膜。如果把早期的視泡移植在頭部的其他部位，也可誘導(dǎo)與之接觸的外胚層啊與成晶狀

50、體。 （3）細(xì)胞記憶與決定：信號(hào)分子的有效作用時(shí)間是短暫的，然而細(xì)胞可以將這種短暫的作用儲(chǔ)存起來(lái)并形成長(zhǎng)時(shí)間的記憶，逐漸向特定方向分化。如果蠅成蟲盤，是一些初級(jí)分化的細(xì)胞群，在幼蟲變態(tài)過(guò)程中，不同的成蟲盤發(fā)育為成蟲不同的器官，把果蠅幼蟲的成蟲盤植入成蟲體內(nèi)，連續(xù)移植9年，細(xì)胞增殖多達(dá)1800代，然后將這種成蟲盤在移植回幼蟲體內(nèi)依然保留其記憶，照例發(fā)育為相應(yīng)的器官。（4）受精卵細(xì)胞質(zhì)的不均一性對(duì)細(xì)胞分化的影響:卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)除了儲(chǔ)存有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和多種蛋白外，還含有多種mRNA，其中多數(shù)mRNA與蛋白質(zhì)結(jié)合處于非活性狀態(tài)，成為隱蔽mRNA，不能被核糖體識(shí)別，它們?cè)诼鸭?xì)胞質(zhì)中呈不均勻分布，卵裂后細(xì)胞

51、說(shuō)攜帶的信息已經(jīng)開(kāi)始有所不同，這種區(qū)別又通過(guò)信號(hào)分子影響其他細(xì)胞產(chǎn)生級(jí)聯(lián)效應(yīng)，這樣最胡儲(chǔ)存的信息不斷被修飾并逐漸形成更精細(xì)更復(fù)雜的指令，最終產(chǎn)生分化各異的細(xì)胞類型。如海膽受精卵的發(fā)育。（5）細(xì)胞間的相互作用與位置效應(yīng)。改變細(xì)胞所處的位置可導(dǎo)致細(xì)胞分化方向的改變，稱為位置效應(yīng)。如在雞胚發(fā)育的原腸胚期，在由脊索細(xì)胞分泌的由Shh的基因編碼的的信號(hào)蛋白的的作用下，靠近脊索的細(xì)胞分化形成底板，遠(yuǎn)離脊索的細(xì)胞分化為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，如將另一個(gè)脊索植入雞胚中線一側(cè)，則會(huì)以同樣方式誘導(dǎo)底板和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的發(fā)育。（6）環(huán)境對(duì)性別決定的影響：溫度和個(gè)體的空間位置信息可影響性別分化。如蜥蜴在24度以下全發(fā)育為雌性，在32

52、度以上則全發(fā)育為雄性。蝸牛形成上下相互疊壓的群體，位于下方的個(gè)體發(fā)育為雌性，位于上方的個(gè)體發(fā)育為雄性。（7）染色質(zhì)變化與基因重排對(duì)細(xì)胞分化的影響。在馬蛔蟲卵裂過(guò)程中，染色體出現(xiàn)消減或丟失，細(xì)胞朝不同方向分化。B淋巴細(xì)胞中的DNA經(jīng)過(guò)斷裂丟失與重排的復(fù)雜變化，從而利用有限的免疫球蛋白基因，可表達(dá)出多種抗體。4、2004論述2#概述細(xì)胞周期蛋白B分裂后期的降解途徑、機(jī)理和調(diào)控因素cyclinB分裂后期的降解途徑、機(jī)理和調(diào)控因素分裂期周期蛋白N端有一段序列與其降解有關(guān)，稱降解盒(destruction box)。當(dāng)MPF活性達(dá)到最高時(shí)，通過(guò)泛素連接酶催化泛素與cyclinB結(jié)合，cyclinB隨之被

53、26S蛋白酶體水解。在中期當(dāng)MPF活性達(dá)到最高時(shí)，通過(guò)一種未知的途徑，激活后期促進(jìn)因子APC，APC(anaphase promoting complex)負(fù)責(zé)將泛素連接到M期周期蛋白上 cyclinB上，導(dǎo)致cyclinB被蛋白酶體（proteasome）降解，完成一個(gè)細(xì)胞周期。 泛素由76個(gè)氨基酸組成，高度保守，普遍存在于真核細(xì)胞，故名泛素。共價(jià)結(jié)合泛素的蛋白質(zhì)能被蛋白酶體識(shí)別和降解，這是細(xì)胞內(nèi)短壽命蛋白和一些異常蛋白降解的普遍途徑，泛素相當(dāng)于蛋白質(zhì)被摧毀的標(biāo)簽。26S蛋白酶體是一個(gè)大型的蛋白酶，可將泛素化的蛋白質(zhì)分解成短肽。在蛋白質(zhì)的泛素化過(guò)程中，E1（ubiquitin-activat

54、ing enzyme，泛素激活酶）水解ATP獲取能量，通過(guò)其活性位置的半胱氨酸殘基與泛素的羧基末端形成高能硫酯鍵而激活泛素，然后E1將泛素交給E2（ubiquitin-conjugating enzyme，泛素結(jié)合酶），最后在E3（ubiquitin-ligase，泛素連接酶）的作用下將泛素轉(zhuǎn)移到靶蛋白上。當(dāng)?shù)谝粋€(gè)泛素分子在E3的催化下連接到靶蛋白上以后，另外一些泛素分子相繼與前一個(gè)泛素分子的賴氨酸殘基相連，逐漸形成一條多聚泛素鏈。泛素化的靶蛋白被蛋白酶體逐步降解，多聚泛素解聚為單個(gè)泛素分子，重新被利用。5、2004論述4#試述動(dòng)、植物 HYPERLINK file:/H:細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞考研輔

55、導(dǎo)13細(xì)胞凋亡.ppt t _parent 細(xì)胞凋亡的一般過(guò)程、特點(diǎn)、常用檢測(cè)方法及原理 答案：細(xì)胞凋亡的一般過(guò)程： = 1 * GB3 凋亡的起始：細(xì)胞表面的特化結(jié)構(gòu)如微絨毛消失，細(xì)胞間接觸的消失，但細(xì)胞膜依然完整；線粒體大體完整，但核糖體逐漸從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上脫離，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)囊腔膨脹，并逐漸與質(zhì)膜融合；染色質(zhì)固縮，形成新月形帽狀結(jié)構(gòu)等形態(tài)，沿著核膜分布 = 2 * GB3 凋亡小體的形成：核染色質(zhì)斷裂為大小不等的片段，與某 些細(xì)胞器如線粒體一起聚集，為反折的細(xì)胞質(zhì)膜所包圍。細(xì)胞表面產(chǎn)生了許多泡狀或芽狀突起，逐漸形成單個(gè)的凋亡小體 = 3 * GB3 凋亡小體逐漸為鄰近的細(xì)胞吞噬并消化細(xì)胞凋亡的生化特征

56、： = 1 * GB3 細(xì)胞凋亡的主要特征是形成大小為 180200bp特征性的DNA ladders = 2 * GB3 凋亡細(xì)胞組織轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶tTG積累并達(dá)到較高水平細(xì)胞凋亡的檢測(cè) = 1 * GB3 形態(tài)學(xué)觀測(cè)：染色法、透射和掃描電鏡觀察 = 2 * GB3 DNA電泳：DNA片段就呈現(xiàn)出梯狀條帶 = 3 * GB3 TUNEL測(cè)定法，即DNA斷裂的原位末端標(biāo)記法 = 4 * GB3 彗星電泳法（comet assay） = 5 * GB3 流式細(xì)胞分析：根據(jù)凋亡細(xì)胞DNA斷裂和丟失，采用碘化丙啶使DNA產(chǎn)生激發(fā)熒光，用流式細(xì)胞儀檢出凋亡的亞二倍體細(xì)胞，同時(shí)又能觀察細(xì)胞的周期狀態(tài)。6、

57、 2005簡(jiǎn)4#在某些生物發(fā)育的特定時(shí)期，一些細(xì)胞中的染色體形態(tài)會(huì)發(fā)生巨大變化，簡(jiǎn)述這些染色體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及其功能。在某些生物的細(xì)胞中，特別是在發(fā)育的某些階段會(huì)出現(xiàn)一些特殊的體積很大的染色體，包括多線染色體和燈刷染色體，總稱巨大染色體。多線染色體來(lái)源于核內(nèi)有絲分裂，核內(nèi)DNA多次復(fù)制而細(xì)胞不分裂，產(chǎn)生的子染色體并行排列，且體細(xì)胞內(nèi)同源染色體配對(duì)，緊密結(jié)合在一起從而阻止染色質(zhì)纖維的進(jìn)一步聚縮，形成體積很大的多線染色體，多線化細(xì)胞處于永久間期，并且體積也相應(yīng)增大。果蠅的唾腺細(xì)胞是典型的多線染色體細(xì)胞。多線染色體上有一系列交替分布的帶和間帶，帶的數(shù)目，心態(tài)，大小及分布都很穩(wěn)定。在發(fā)育的某個(gè)階段，多線染

58、色體的某些帶區(qū)變得疏松膨大而形成脹泡，脹泡是基因活躍轉(zhuǎn)錄的形態(tài)學(xué)標(biāo)志。燈刷染色體幾乎普遍存在于動(dòng)物界的卵母細(xì)胞中，其中兩棲類卵母細(xì)胞最為典型。燈刷染色體是卵母細(xì)胞進(jìn)行減數(shù)分裂第一次分裂時(shí)停留在雙線期的染色體，它是一個(gè)二價(jià)體，包含4條染色單體，染色體聯(lián)會(huì)還未解除，可見(jiàn)幾處交叉。由染色粒軸絲和兩側(cè)伸出的相似側(cè)環(huán)構(gòu)成。燈刷染色體的形態(tài)與卵子發(fā)生過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的儲(chǔ)備是密切相關(guān)的，大部分DNA以染色粒形式存在，沒(méi)有轉(zhuǎn)錄活性，而側(cè)環(huán)是RNA活躍轉(zhuǎn)錄的區(qū)域，一個(gè)側(cè)環(huán)往往是一個(gè)大的轉(zhuǎn)錄單位或幾個(gè)轉(zhuǎn)錄單位組合而成。轉(zhuǎn)錄RNA副本3端借助RNA聚合酶固定在側(cè)環(huán)染色質(zhì)軸絲上，游離5端捕獲大量大白紙形成核糖核蛋白復(fù)合

59、物，組成環(huán)周圍的基質(zhì)，環(huán)的粗細(xì)變化表示基質(zhì)的厚薄和轉(zhuǎn)錄RNA的長(zhǎng)短。7、 2005論述3# HYPERLINK file:/H:細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞考研輔導(dǎo)11細(xì)胞增殖.ppt t _parent 細(xì)胞周期受到哪些細(xì)胞內(nèi)因子的調(diào)控，調(diào)控機(jī)理如何，哪些環(huán)境因子將對(duì)細(xì)胞周期產(chǎn)生重要影響 Cyclin周期蛋白不僅僅起激活CDK的作用，還決定了CDK何時(shí)、何處、將何種底物磷酸化，從而推動(dòng)細(xì)胞周期的前進(jìn)。分為G1型、G1/S型S型和M型4類，各類周期蛋白均含有一段約100個(gè)氨基酸的保守序列，稱為周期蛋白框，介導(dǎo)周期蛋白與CDK結(jié)合。G1期與G1/S期：G1周期蛋白主要包括cyclinD、cyclinE，還有c

60、yclinA，G1期的CDK主要包括CDK2、CDK4和CDK6。cyclinD與CDK4和CDK6結(jié)合，cyclinE與CDK2結(jié)合。E- CDK2為S期啟動(dòng)所必需，E- CDK2與 p107和E2F結(jié)合成復(fù)合物后，CDK2催化p107磷酸化，使p107失去抑制作用，E2F的作用被顯示出來(lái)，促進(jìn)有關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促使細(xì)胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)化；E- CDK2還直接參與了中心體復(fù)制的起始調(diào)控。cyclinA的合成開(kāi)始于G1/S，與CDK2結(jié)合。S期：cyclinA-CDK2是S期主要的CDK激酶，位于DNA復(fù)制中心，使DNA復(fù)制因子RF-A磷酸化并使后者的活性增強(qiáng)。在G2-M期：主要的周期蛋白是