乙肝五項(xiàng)操作規(guī)程

1、乙肝五項(xiàng)操作規(guī)程(總4頁(yè)) ? CAL? FENGHAL ? (YlCA) ? Company One 1 CAL本頁(yè)僅作為文檔封面，使用請(qǐng)直接刪除 乙肝五項(xiàng)（乳膠法）操作規(guī)程 1 ? ? 檢測(cè)目的 乙型肝炎病毒標(biāo)志物 （ HBsAg 、HBsAb 、HBeAg 、HBeAb 、 HBcAb ）檢測(cè)。 2.測(cè)定原理 HBsAg檢測(cè)采用雙抗體夾心法原理，試劑含有被事先固定于膜上測(cè)試區(qū)（T區(qū)）的抗體。 檢測(cè)時(shí)，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的乳膠顆粒（即標(biāo)記物）結(jié)合的 HBsAb （即標(biāo)記抗體）反應(yīng)，該結(jié)合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽(yáng)性，乳膠抗體（標(biāo)記抗 體）在層析過(guò)程中先與標(biāo)本中的HBs

2、Ag結(jié)合，隨后結(jié)合物會(huì)被固定在T區(qū)膜上的HBsAb捕獲， 形成 HBsAb 標(biāo)記抗體 -HBsAg-HBsAb 復(fù)合物，從而在 T 區(qū)形成一條紅杠。如為陰性，則 T 區(qū)沒(méi) 有紅杠。 HBsAb檢測(cè)采用雙抗原夾心法原理，試劑含有事先固定于膜上測(cè)試區(qū) （T區(qū)）的 HBsAgo 檢測(cè)時(shí)，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的乳膠顆粒結(jié)合的 HBsAg 反應(yīng)（即標(biāo) 記 抗原）反應(yīng)，該結(jié)合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽(yáng)性，乳膠抗原（標(biāo)記抗原）在 層 析過(guò)程中先與標(biāo)本中的HBsAb結(jié)合，隨后結(jié)合物會(huì)被固定在T區(qū)膜上的HBsAg捕獲，形成 HBsAg標(biāo)記抗原-HBsAb-HBsAg復(fù)合物，從而在T區(qū)形成一條

3、紅杠。如為陰性，則T區(qū)沒(méi)有紅 杠。 HBeAg檢測(cè)采用雙抗體夾心法原理。試劑含有事先固定于膜上測(cè)試區(qū) （T區(qū)）的 HBeAbo 檢測(cè)時(shí)， 標(biāo)本滴入試劑加樣處， 標(biāo)本與預(yù)包被的乳膠顆粒結(jié)合的 HBeAb 反應(yīng)（即標(biāo) 記 抗體）反應(yīng)，該結(jié)合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽(yáng)性，乳膠抗體（標(biāo)記抗體）在 層 析過(guò)程中先與標(biāo)本中的HBeAg結(jié)合，隨后結(jié)合物會(huì)被固定在 T區(qū)膜上的HBeAb捕獲，形成 HBeAb標(biāo)記抗原-HBeAg-HBeAb復(fù)合物，從而在T區(qū)形成一條紅杠。如為陰性，則T區(qū)沒(méi)有紅杠。 HBeAg、HBeAb采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法原理，試劑含有事先固定于膜上測(cè)試區(qū)（T區(qū)）的抗體。 檢測(cè)時(shí)，標(biāo)本滴入試

4、劑加樣處， 隨之標(biāo)本在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。 如標(biāo)本中含有相應(yīng)的 抗體， 則同膜上測(cè)試區(qū)（T）的單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)，與預(yù)包被在乳膠顆粒上的相應(yīng)抗原反應(yīng)。如 標(biāo)本中 沒(méi)有相應(yīng)的抗體，則預(yù)包被在乳膠顆粒上的相應(yīng)抗原與膜上測(cè)試區(qū) （T）的單克隆抗體 全部結(jié) 陽(yáng)性標(biāo)本，測(cè)試區(qū)（T）將沒(méi)有紅色條帶；陰性標(biāo)本，測(cè)試區(qū) （T）會(huì)出現(xiàn)明顯的紅色條帶3. 標(biāo)本采集 樣本采集后應(yīng)盡快分離血清或血漿以避免溶血。檢測(cè)進(jìn)應(yīng)盡量使用新鮮的樣本。樣本若 不能及時(shí)送檢，可在2-8C冷藏3天。長(zhǎng)期保存需冷凍于- -20 “C忌反復(fù)凍融。發(fā)臭、溶血 等異 常樣本請(qǐng)勿使用。 4. 試劑 艾博生物醫(yī)藥有限公司 5. 操作步驟 使用前將試劑

5、板和血清 / / 血漿標(biāo)本恢復(fù)至室溫 (20? 30%) 。從原包裝鋁箔袋中取出試劑盒 ( ( 注 意：在扣開(kāi)鋁箔前應(yīng)先恢復(fù)至室溫 ) )，在 1 小時(shí)內(nèi)應(yīng)盡快地使用。 將試劑盒置于干凈平坦的臺(tái)面上，用吸管吸取血清 / / 血漿標(biāo)本，逐滴垂直加入于試劑板的 五 個(gè)加樣子 L 中( (每孔 2-3 滴) )。 加樣后立刻開(kāi)始計(jì)時(shí)，等待紅色條帶的出現(xiàn)，在 15 分鐘時(shí)讀取測(cè)試結(jié)果。在 20 分鐘后讀 取 的結(jié)果無(wú)效。 6. 結(jié)果判定 由于前三個(gè)項(xiàng)目 HBsAg 、 HBsAbx HBeAg 使用雙抗體 ( (原) ) 夾心法原理， 后兩個(gè)項(xiàng)日 HBeAb 、 HbcAb 使用競(jìng)爭(zhēng)法原理。 因此前一

6、： 個(gè)項(xiàng)日與后兩個(gè)項(xiàng)目判讀方法是不同的， 請(qǐng)注 意區(qū)別。 .HBsAg 、 HBsAb 、 HbeAg 陽(yáng)性(+):兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測(cè)試區(qū)(T)內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)(0。陽(yáng)性結(jié)果表 明：標(biāo) 本中含有待測(cè)物質(zhì)。 陰性(-):質(zhì)控區(qū)(c)出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)(T)內(nèi)無(wú)紅色條帶出現(xiàn)。 陰性結(jié)果表明：標(biāo)本中檢測(cè)不出待測(cè)物質(zhì)。無(wú)效：質(zhì)控區(qū) (c)未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確 的 操作過(guò)程或試劑盒已經(jīng)變質(zhì)損壞。在 此情況下，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)， 并用新的試劑盒重新測(cè)試。 如果問(wèn)題仍然存在， 應(yīng)立即 停 止使用此批號(hào)產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。 注意：在進(jìn)行HBsAg、HBsAb、HbeAg測(cè)試

7、時(shí)，測(cè)試區(qū)(T)內(nèi)的紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺 的 現(xiàn)象。只要在規(guī)定的觀察時(shí)間內(nèi)，不論該條帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng) 該判為 陽(yáng)性結(jié)果。、HBcAb 陽(yáng)性(+):僅質(zhì)控區(qū)(C)出現(xiàn)一條紅色條帶在測(cè)試區(qū)(T)內(nèi)無(wú)紅色條帶出現(xiàn)。陽(yáng)性結(jié)果表 明：標(biāo) 本中含有待測(cè)物質(zhì)。 弱陽(yáng)性(+):質(zhì)控區(qū)(C)出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)(T)內(nèi)有非常弱的紅色條帶出現(xiàn)。陽(yáng)性 結(jié)果 表明：標(biāo)本中含有待測(cè)物質(zhì)。 陰性( (- -) ):兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測(cè)試區(qū)(T)內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)(0。陰性結(jié)果表 明： 標(biāo)本中檢測(cè)不出待測(cè)物質(zhì)。 無(wú)效：質(zhì)控區(qū)(C)未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過(guò)程或試劑盒已經(jīng)變質(zhì)損壞

8、。在此情 況 下，應(yīng)重新測(cè)試。如果問(wèn)題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號(hào)產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián) 系。 7. 質(zhì)控制 請(qǐng)控制判讀時(shí)間，測(cè)試結(jié)果應(yīng)在測(cè)定開(kāi)始后 20 分鐘左右讀取， 30 分鐘后讀判定無(wú)效。 質(zhì)控區(qū)內(nèi) (C 區(qū)) ) 一條紅色條帶的出現(xiàn)是試驗(yàn)結(jié)果可靠的前提。質(zhì)控內(nèi) (0 所顯現(xiàn)的紅色條帶 是判定標(biāo)本是否足夠，層析過(guò)程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。 8. 注意事項(xiàng) 乳膠法乙肝五項(xiàng)檢測(cè)試劑板 ( ( 血清/ / 血漿) ) 只是定性的篩選乙肝病毒血清標(biāo)志物的存在，不 能 確定血樣中病毒的含量。 由于在技術(shù)上和操作上可能出現(xiàn)的失誤， 同時(shí)也由于標(biāo)本中存在的干擾物質(zhì)， 檢測(cè)結(jié)果可

9、能 有錯(cuò)誤。對(duì)可疑結(jié)果應(yīng)作相應(yīng)的進(jìn)一步檢測(cè)。 8. . 生物安全防護(hù) 在檢測(cè)前，所有標(biāo)本均應(yīng)視為“陽(yáng)性”標(biāo)本即生物危險(xiǎn)品。 如操作中不慎灑落血液，要及時(shí)對(duì)污染臺(tái)面消毒處理。 操作前一定要做好自身防護(hù) ( ( 穿白大衣、帶口罩、白帽、膠皮手套 ) ) 。 HBV 對(duì)低溫、干燥、紫外線、 70% 乙醇均有耐受性。煮沸 100C10 分鐘、高壓蒸汽滅菌 12仁C15分鐘或加熱160 C2小時(shí)均可滅活HBV。5? 10g/L次氯酸鈉30分鐘，1: 4000福爾馬林 37 C72/小時(shí)，過(guò)氧乙酸15分鐘均可破壞其傳染性。9. 臨床意義 HBsAg 陽(yáng)性：血清 HBsAg 陽(yáng)性，表示受檢者處于 HBV 的

10、感染狀態(tài)。 HBsAg 也可從許多乙 肝 檢驗(yàn)對(duì)象體液和分泌物中測(cè)出，如唾液、精液、乳汁、陰道分泌物等。 HBsAb陽(yáng)性：多見(jiàn)于乙型肝炎處于恢復(fù)期或既往曾感染過(guò) HBV,現(xiàn)在已恢復(fù)，而且對(duì)HBV有一 定的免疫力；同時(shí)， HBsAb 陽(yáng)性是對(duì)接種乙肝疫苗后產(chǎn)生效果，即接種免疫成功的指標(biāo)。 HBeAg 陽(yáng)性：見(jiàn)于 HBV 感染的早期， 表示血液中含有較多的病毒顆粒， 提示肝細(xì)胞有進(jìn)行 性 損害和高度傳染性； 乙型肝炎加重之前， HBeAg 即有升高， 有助于預(yù)測(cè)肝炎病情， HBeAg 持續(xù) 陽(yáng)性，易轉(zhuǎn)為慢性乙型肝炎； HBeAg 和 HBsAg 均為陽(yáng)性的孕婦，可以將乙型肝炎傳播 病毒給 新生兒，

11、其感染的陽(yáng)性率為 70%? 90%o HBeAb 陽(yáng)性：多見(jiàn)于 HBeAg 轉(zhuǎn)陰的檢驗(yàn)對(duì)象，意味著 HBV 部分被清除或抑制， 病毒復(fù)制減 少， 傳染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌檢驗(yàn)對(duì)象可檢出 HBeAb ；在 HBsAg 和 HBsAb 陰性時(shí)，如能檢出 HBeAh 和 HBeAb, 也能確診為乙型肝炎近期感染。 HBeAb 陽(yáng)性：說(shuō)明既往感染過(guò)乙肝病毒。它是感染病毒后最早呈陽(yáng)性，也是最晚轉(zhuǎn)陰性的一 項(xiàng)，而且有些人一輩子都是陽(yáng)性。 附：HBcAb-IgG陽(yáng)性：高滴度表示正在感染HBV,低滴度則是既往感染過(guò)HBV的指標(biāo)，具 有流行病學(xué)的意義。 HBeAb-IgM 陽(yáng)性：抗 -HBc I