第十章 分枝桿菌屬、諾卡菌屬、放線菌屬鑒定

1、微生物學(xué)檢驗(yàn)微生物學(xué)檢驗(yàn)微生物學(xué)檢驗(yàn)微生物學(xué)檢驗(yàn)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)規(guī)劃教材國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)規(guī)劃教材 第十章分枝桿菌屬、諾卡菌屬、放線菌屬鑒定返回總目錄返回總目錄本 章 內(nèi) 容第一節(jié) 分枝桿菌屬12第三節(jié) 放線菌屬3第二節(jié) 諾卡菌屬學(xué)習(xí)目標(biāo)及重點(diǎn)學(xué)習(xí)目標(biāo)：1.掌握結(jié)核分枝桿菌生物學(xué)特征，痰涂片抗酸染色及報(bào)告。2.熟悉結(jié)核菌素試驗(yàn)的臨床意義；結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌；星形諾卡菌的鑒別要點(diǎn)，諾卡菌與分枝桿菌、棒狀桿菌的鑒別。3.了解結(jié)核分枝桿菌的致病物質(zhì)；麻風(fēng)分枝桿菌致病性；放線菌屬的生物學(xué)特性、致病及免疫性本章重點(diǎn)： 結(jié)核分枝菌的生物學(xué)特性、培養(yǎng)特性 結(jié)核分枝菌的微生物學(xué)檢驗(yàn) 結(jié)核

2、分枝菌與其他分枝菌的鑒別第一節(jié) 分枝桿菌屬分枝桿菌屬（Mycobacterium）概述是一類細(xì)長(zhǎng)彎曲的桿菌，因有分枝生長(zhǎng)的趨勢(shì)而得名主要特點(diǎn)細(xì)長(zhǎng)彎曲，分枝狀生長(zhǎng)細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì)（分枝菌酸）常用抗酸染色鑒定，呈抗酸染色陽(yáng)性（紅色）引起疾病多呈慢性，且伴肉芽腫一、結(jié)核分枝菌(一)生物學(xué)性狀1.形態(tài)與染色：G+（不易著色），細(xì)長(zhǎng)略彎，分枝狀，有莢膜，抗酸染色陽(yáng)性。菌體外有莢膜2.培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求較高，最適pH6.56.8，在羅氏（Lowenstein-Jensen，L-J）培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好生長(zhǎng)緩慢，1418h分裂1次，在固體培養(yǎng)基上25w才出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的菌落典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透

3、明，乳白色或淡黃色，如菜花樣第一節(jié) 分枝桿菌屬結(jié)核菌抗酸染色結(jié)果結(jié)核菌菌落第一節(jié) 分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌.生化反應(yīng)不發(fā)酵糖類，觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，而熱觸酶試驗(yàn)陰性加熱68散失活性（區(qū)別非結(jié)核菌）煙酸合成試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、吡嗪酰胺試驗(yàn)均陽(yáng)性，可與牛型結(jié)核分枝菌鑒別.抵抗力對(duì)乙醇、濕熱、紫外線、抗結(jié)核藥物（鏈霉素、異煙肼、利福平等）敏感對(duì)干燥、酸（3% HCl或6% H2SO4) 或堿（4% NaOH)、堿性染料（孔雀綠、結(jié)晶紫）、青霉素等抗生素等有抵抗力第一節(jié) 分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌.變異性（）形態(tài)結(jié)構(gòu)變異：結(jié)核桿菌的L型：顆粒狀（Much顆粒病灶中革蘭陽(yáng)性非抗酸性）、絲狀（）毒力變異：卡介苗

4、(BCG)：Calmette和Gurin將牛型分枝桿菌經(jīng)13年230次傳代而獲得的減毒菌株活疫苗（）耐藥性變異：耐異煙肼及其他抗結(jié)核藥物的結(jié)核菌株日益增多第一節(jié) 分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌（二）微生物檢驗(yàn)1.標(biāo)本：根據(jù)感染部位的不同來(lái)采集不同的標(biāo)本，最常用痰液標(biāo)本2. 標(biāo)本前處理目前有酸（4%HCl）處理和堿（4%NaOH）處理兩種方法3.檢驗(yàn)程序第一節(jié) 分枝桿菌屬標(biāo)本核酸檢測(cè)接種固體培養(yǎng)基可疑菌落涂片抗酸染色鏡檢抗體檢測(cè)慢性生長(zhǎng)菌快速生長(zhǎng)菌菌種鑒定 標(biāo)本前處理接種液體 培養(yǎng)基接種小白鼠豚鼠臟器涂片鏡檢抗酸染色鑒定試驗(yàn)檢驗(yàn)程序第一節(jié) 分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌4.形態(tài)學(xué)檢查 （高壓滅菌后進(jìn)行） （

5、1）直接涂片染色鏡檢 （2）濃縮集菌涂片檢查法 （3）熒光染色：觀察形態(tài) 黃綠色、橙色熒光 （4）初步報(bào)告：檢出抗酸分枝桿菌（結(jié)核桿菌？）第一節(jié) 分枝桿菌屬報(bào)告方式抗酸染色鏡檢結(jié)果-仔細(xì)檢查300個(gè)視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌300個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)12條抗酸菌100個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)19條抗酸菌210個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)19條抗酸菌3每個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)19條抗酸菌4每個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)9條以上抗酸菌一、結(jié)核分枝菌（5）報(bào)告方式第一節(jié) 分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌5.分離培養(yǎng) L-J斜面或平板：生長(zhǎng)緩慢，涂片抗酸染色 快速培養(yǎng)系統(tǒng)：自動(dòng)報(bào)告6.核酸檢測(cè)：PCR法第一節(jié) 分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌(三)臨床意義1.致病物質(zhì)：主要與菌體成份有

6、關(guān)。（1）脂質(zhì) 分枝菌酸：與抗酸性有關(guān)蠟質(zhì)D:具有佐劑作用硫酸腦苷脂:阻礙吞噬磷脂:促類上皮細(xì)胞形成索狀因子:與該菌毒力有密切關(guān)系第一節(jié) 分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌（2）蛋白質(zhì) 誘發(fā)超敏反應(yīng)（3）糖類 抵抗吞噬作用2.所致疾?。?）經(jīng)多途徑感染，引起全身各組織結(jié)核病，以肺結(jié)核最多見(jiàn)（2）類型 原發(fā)感染和繼發(fā)感染3.免疫性 抗結(jié)核免疫以細(xì)胞免疫為主 抗結(jié)核免疫屬帶菌免疫或稱傳染性免疫 抗結(jié)核免疫與型超敏反應(yīng)同時(shí)出現(xiàn)第一節(jié) 分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌4.結(jié)核菌素試驗(yàn)（1）原理 用結(jié)核菌素進(jìn)行皮膚試驗(yàn)，以檢測(cè)受試者對(duì)結(jié)核桿菌是否有細(xì)胞免疫及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的試驗(yàn)。（2）結(jié)核菌素試劑 （PPD 5單位）舊結(jié)

7、核菌素（old tuberculin，OT)，純蛋白衍化物(purified protein derivative，PPD)（3）結(jié)果 48h-72h ,根據(jù)注射部位是否出現(xiàn)紅腫判斷結(jié)果 5mm為陰性 5mm為陽(yáng)性 15mm為強(qiáng)陽(yáng)性 第一節(jié) 分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌（4）結(jié)核菌素試驗(yàn)意義u選擇卡介苗接種對(duì)象、測(cè)定卡介苗接種后的免疫效果u了解人群結(jié)核菌的自然感染率u作為嬰幼兒結(jié)核病的輔助診斷u測(cè)定腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能第一節(jié) 分枝桿菌屬二、麻風(fēng)分枝菌1.生物學(xué)特性1873年挪威學(xué)者Armauer Hansen從麻風(fēng)患者皮膚結(jié)節(jié)中發(fā)現(xiàn)，又名Hansen桿菌，具抗酸性細(xì)胞內(nèi)寄生，有麻風(fēng)桿菌寄生的細(xì)胞

8、呈泡沫狀，稱為麻風(fēng)細(xì)胞體外人工培養(yǎng)尚未成功犰狳是動(dòng)物感染模型第一節(jié) 分枝桿菌屬麻風(fēng)分枝菌犰狳第一節(jié) 分枝桿菌屬二、麻風(fēng)分枝菌2.所致疾病:傳播途徑：主要是密切接觸麻風(fēng)：侵害皮膚、粘膜和神經(jīng)系統(tǒng)臨床分型：（臨床表現(xiàn)、病理特征和菌檢結(jié)果）瘤型麻風(fēng)（占20%30%，傳染性強(qiáng)）結(jié)核樣型麻風(fēng)（占60%70%，傳染性弱）界線類綜合癥（占5%，可轉(zhuǎn)化為以上兩型）3.防治原則：早發(fā)現(xiàn)（檢驗(yàn)時(shí)，標(biāo)本通常采用刮片），早隔離、早治療，治療藥物主要有砜類（氨苯砜、苯丙砜、醋氨苯砜）、利福平、氯苯吩嗪及丙硫異煙胺第一節(jié) 分枝桿菌屬麻風(fēng)“獅面”第一節(jié) 分枝桿菌屬三、非典型分枝菌1.非典型分枝桿菌：除人型結(jié)核分枝桿菌、牛型

9、結(jié)核分枝桿菌與麻風(fēng)分枝桿菌以外的分枝桿菌菌群，也稱為非結(jié)核分枝桿菌2.致病性：多存在于自然界，為條件致病菌3.分類：根據(jù)菌落色素和生長(zhǎng)速度分為4組第組（Runyon群）：光產(chǎn)色菌第組（Runyon 群）：暗產(chǎn)色菌第組（Runyon 群）：不產(chǎn)色菌第組（Runyon 群）：迅速生長(zhǎng)菌光產(chǎn)色菌第一節(jié) 分枝桿菌屬4.代表菌種第組（Runyon群）：光產(chǎn)色菌：堪薩斯分枝桿菌、猿猴分枝桿菌第組（Runyon 群）：暗產(chǎn)色菌：蟾蜍分枝桿菌、蘇加分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌第組（Runyon 群）：不產(chǎn)色菌：鳥(niǎo)分枝桿菌復(fù)合群(Mlvium complex ,MAC) 、瑪爾摩分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌第組（Runyo

10、n 群）：迅速生長(zhǎng)菌：龜分枝桿菌、膿腫分枝桿菌、偶發(fā)分枝桿菌返回章內(nèi)容返回章內(nèi)容第一節(jié) 分枝桿菌屬第二節(jié) 諾卡菌屬一、諾卡菌屬（一）種類：諾卡菌屬（Nocordio ）中有22個(gè)種，廣泛分布于土壤，與醫(yī)學(xué)有關(guān)的13個(gè)菌種：膿腫諾卡菌 星形諾卡菌新星諾卡菌 非洲諾卡菌豚鼠耳炎諾卡菌 少食諾卡菌巴西諾卡菌 假巴西諾卡菌短鏈諾卡菌 南非諾卡菌肉色諾卡菌 老兵諾卡菌皮瘟諾卡菌 諾卡菌屬主要形成基內(nèi)菌絲，菌絲纖細(xì)，一般無(wú)氣生菌絲。少數(shù)菌產(chǎn)生一薄層氣生菌絲，成為孢子絲?；鶅?nèi)菌絲和孢子絲均有橫隔，斷裂后形成不同長(zhǎng)度的桿形一、諾卡菌屬（二）生物學(xué)特性1.專性需氧2.菌體內(nèi)含分枝菌酸3.分布：土壤中，多數(shù)為非致

11、病菌4.常見(jiàn)致病菌： 星形諾卡菌（N. asteroides） 巴西諾卡菌（N. brasiliensis） 豚鼠諾卡菌（N. caviae）5.培養(yǎng)：菌落表面多皺、致密、干燥或濕潤(rùn)，呈黃、黃綠、橙紅等色。用接種環(huán)一觸即碎第二節(jié) 諾卡菌屬（三）星形諾卡菌1.形態(tài)：球形、絲狀（與以色列放線菌相似，但末端不膨大）革蘭染色：陽(yáng)性抗酸染色：陽(yáng)性脫色時(shí)間延長(zhǎng)陰性(與TB區(qū)別)2. 類似“硫磺樣顆?！保ǚQ色素顆粒） 滲出液、痰或膿汁中有時(shí)可見(jiàn)淡黃、紅色或黑色小顆粒美藍(lán)染色G+絲狀，弱抗酸性第二節(jié) 諾卡菌屬（三）星形諾卡菌3.培養(yǎng)：營(yíng)養(yǎng)要求：不高（沙氏或普通瓊脂培養(yǎng)基）氣體環(huán)境：需氧，有氣生菌絲培養(yǎng)溫度：室

12、溫或37生長(zhǎng)速度：緩慢生長(zhǎng)，約1w色素：星形諾卡菌：黃色或深橙色，無(wú)白色菌絲 巴西諾卡菌：有白色菌絲菌絲斷裂： 5d后鏈球狀或鏈桿狀（放線菌屬：24h開(kāi)始)培養(yǎng)特征：菌落：有皺褶、顆粒狀 液體：菌膜第二節(jié) 諾卡菌屬（三）星形諾卡菌4.鑒定：（1）“硫磺樣顆粒”壓片（2）取痰、腦脊液、膿汁 涂片革蘭染色及抗酸染色（3）分離培養(yǎng) 沙保弱或普通瓊脂培養(yǎng)基（4）生化試驗(yàn)第二節(jié) 諾卡菌屬（四）巴西諾卡菌 巴西諾卡菌及星形諾卡菌因侵入皮下組織，引起慢性化膿性肉芽腫，表現(xiàn)為皮下腫脹、膿腫及多發(fā)性瘺管，如發(fā)生于足部或腿部，稱足分枝菌病（Mycotoma）。 本病也可能由馬杜拉放線菌及某些真菌引起 該菌七葉苷、

13、黃嘌呤、肌醇、甘露醇均陽(yáng)性，可與星形諾卡菌區(qū)別返回章內(nèi)容返回章內(nèi)容第二節(jié) 諾卡菌屬第三節(jié) 放線菌屬一、放線菌屬1.致?。悍啪€菌能引起牛和人的放線菌病（Actinomycosis）的病原菌，屬于內(nèi)源性感染。因菌落生長(zhǎng)呈放射狀而得名。2.常見(jiàn)種類： 衣氏放線菌(A.israelii) (最多見(jiàn))牛放線菌(A.bouis)內(nèi)氏放線菌（A.naeslundii)黏液放線菌(A.viscous)齲齒放線菌（A.adontolyticus)3.培養(yǎng)：厭氧或微需氧 氣體環(huán)境：5 CO2 培養(yǎng)基：腦心浸液瓊脂平板 溫度與時(shí)間：37，24h48h 菌落:灰白色蜘蛛狀、不規(guī)則結(jié)節(jié)狀或臼齒狀菌落, 初次分離時(shí)(粗糙)4.生化特性：葡萄糖() 甘露醇()吲哚() 溶血() 觸酶試驗(yàn)()(黏液放線菌除外)第三節(jié) 放線菌屬放線