藥物分析第三講復(fù)習(xí)進(jìn)程

1、藥物分析第三講 藥典中收載的一些含鹵素與金藥典中收載的一些含鹵素與金屬的有機(jī)藥物，隨其在分子結(jié)構(gòu)中屬的有機(jī)藥物，隨其在分子結(jié)構(gòu)中結(jié)合狀態(tài)的不同，分析前要經(jīng)過不結(jié)合狀態(tài)的不同，分析前要經(jīng)過不同的前處理過程，方可測定。同的前處理過程，方可測定。有機(jī)鹵素藥物：有機(jī)鹵素藥物： 含鹵素有機(jī)藥物系指藥物分子結(jié)構(gòu)含鹵素有機(jī)藥物系指藥物分子結(jié)構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪鏈相連者，中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪鏈相連者，而不包括某些有機(jī)藥物的鹵酸鹽或氫鹵而不包括某些有機(jī)藥物的鹵酸鹽或氫鹵酸鹽。酸鹽。結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：CX（一）鹵原子的活潑性（一）鹵原子的活潑性 鹵原子與碳原子直接相連，鹵原子鹵原子與碳原子直接相連

2、，鹵原子 的活潑性和它直接相連的烴基的結(jié)的活潑性和它直接相連的烴基的結(jié)構(gòu)有很大關(guān)系。構(gòu)有很大關(guān)系。 乙烯型鹵和芳鹵乙烯型鹵和芳鹵 不活潑不活潑 烯丙型鹵和芐鹵烯丙型鹵和芐鹵 活潑活潑 鹵代烷型鹵代烷型 介于兩者之間介于兩者之間2. 分子中所含鹵原子的個數(shù)分子中所含鹵原子的個數(shù)3. 鹵素的種類鹵素的種類IBrClF 分子中所含鹵原子的個數(shù)越多，活分子中所含鹵原子的個數(shù)越多，活潑性越強(qiáng)。潑性越強(qiáng)。H3CCCCl3CH3CH31/2H2O三氯叔丁醇三氯叔丁醇CCl3Cl3C六氯對二甲苯六氯對二甲苯COOHINHCOCH3IIH3COCHN泛影酸泛影酸IH2NIICH2CHCOOHC2H5碘番酸碘番酸

3、CCH2 8CH3COOC2H5I碘苯酯碘苯酯BrBrBrBrCCOOHOSO3NaSO3NaOH磺溴酞鈉磺溴酞鈉（二）定量分析前處理方法（二）定量分析前處理方法 直接回流后測定法直接回流后測定法 酸性或堿性還原后測定法酸性或堿性還原后測定法 氧瓶燃燒分解后測定法氧瓶燃燒分解后測定法 XXC適當(dāng)?shù)奶幚磉m當(dāng)?shù)奶幚砗饘儆袡C(jī)藥物：含金屬有機(jī)藥物：含金屬的有機(jī)藥物：含金屬的有機(jī)藥物： 金屬原子不與碳原子直接相連，通常金屬原子不與碳原子直接相連，通常為有機(jī)酸及酚的金屬配位化合物。為有機(jī)酸及酚的金屬配位化合物。如：如：酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸 亞鐵。亞鐵。OCCH

4、OFeHCCOO葡萄糖酸銻鈉葡萄糖酸銻鈉酒石酸銻鉀酒石酸銻鉀OCHCHCCOOOOOSbOCCHCHCOOOOOSb2K 3H2O富馬酸亞鐵富馬酸亞鐵CH2OHCHOHCHOCHOCHOCOOSbOHOSbCOCCCHOHCH2OHCOONa3 9H20 OHOHOH有機(jī)金屬藥物：有機(jī)金屬藥物： 金屬原子直接與金屬原子直接與 碳原子以共價鍵相碳原子以共價鍵相連，結(jié)合比較牢固。連，結(jié)合比較牢固。如：如：卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利NHCONH2AsHOOHO卡巴胂卡巴胂HgOCOCH3醋酸苯汞醋酸苯汞OCH2COONaCONHCH2CHCH2HgOHOCH3汞撒利汞撒利一、直

5、接溶解法一、直接溶解法 當(dāng)藥物結(jié)構(gòu)中具有可檢測官能團(tuán)時，當(dāng)藥物結(jié)構(gòu)中具有可檢測官能團(tuán)時，可直接使用適當(dāng)溶劑溶解后采用合適的可直接使用適當(dāng)溶劑溶解后采用合適的方法測定。如某些藥物難溶于常規(guī)有機(jī)方法測定。如某些藥物難溶于常規(guī)有機(jī)溶劑，可加熱簡單方法釋放官能團(tuán)。溶劑，可加熱簡單方法釋放官能團(tuán)。葡萄糖酸鈣葡萄糖酸鈣 配位滴定法配位滴定法 取本品取本品0.5g，精密稱定，加水，精密稱定，加水100ml，微溫使溶解，加氫氧化鈉試液微溫使溶解，加氫氧化鈉試液15ml與鈣紫與鈣紫紅素指示劑紅素指示劑0.1g，用乙二胺四乙醋酸二鈉，用乙二胺四乙醋酸二鈉滴定液（滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液自紫色轉(zhuǎn)）滴定

6、至溶液自紫色轉(zhuǎn)變?yōu)榧兯{(lán)色。每變?yōu)榧兯{(lán)色。每1ml乙二胺四乙醋酸二鈉乙二胺四乙醋酸二鈉滴定液（滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于）相當(dāng)于22.42mg的的C12H22CaO14H2O。富馬酸亞鐵富馬酸亞鐵 氧化還原滴定法氧化還原滴定法 取本品約取本品約0.3g，精密稱定，精密稱定，加稀硫酸加稀硫酸 15ml，加熱溶解后，加熱溶解后，放冷，加新沸過的，放冷，加新沸過的冷水冷水50ml與鄰二氮菲指示液與鄰二氮菲指示液2 滴，立即用滴，立即用硫酸鈰滴定液（硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴）滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml硫酸鈰硫酸鈰滴定液（滴定液（0.

7、1mol/L）相當(dāng)于）相當(dāng)于16.99mg的的C4H2FeO4。葡萄糖酸銻鈉的測定葡萄糖酸銻鈉的測定 取本品約取本品約0.3g，精密稱定，置具塞錐，精密稱定，置具塞錐形瓶中，形瓶中，加水加水100ml、鹽酸、鹽酸15ml與碘化鉀與碘化鉀試液試液10ml，密塞、振搖后，在暗處靜置密塞、振搖后，在暗處靜置10min，用硫代硫酸鈉滴定液，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴滴定，至近終點(diǎn)時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定，至近終點(diǎn)時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每驗校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L

8、)相當(dāng)于相當(dāng)于6.088mg的的Sb。 二、化學(xué)分解法二、化學(xué)分解法 藥物結(jié)構(gòu)中存在潛在的活性基團(tuán)，藥物結(jié)構(gòu)中存在潛在的活性基團(tuán)，可將藥物結(jié)構(gòu)部分分解后測定?？蓪⑺幬锝Y(jié)構(gòu)部分分解后測定。1. 堿水解法堿水解法 （一）水解法（一）水解法 三氯叔丁醇的測定三氯叔丁醇的測定 Ch.P.（2010） 取本品約取本品約0.1g，精密稱定，加乙醇，精密稱定，加乙醇5mL溶解后，溶解后，加加20%氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液5mL，加熱回流，加熱回流15min，放冷至室溫，加水放冷至室溫，加水20mL與硝酸與硝酸5mL，精密加硝酸銀滴定液精密加硝酸銀滴定液（0.1mol/L） 30mL，再加鄰苯二甲酸，再加鄰苯

9、二甲酸二丁酯二丁酯5mL，密塞，強(qiáng)力振搖后，加，密塞，強(qiáng)力振搖后，加硫酸鐵胺指示液硫酸鐵胺指示液2mL，用硫氰酸胺滴用硫氰酸胺滴定液（定液（0.1mol/L）滴定，）滴定，并將滴定的并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每結(jié)果用空白試驗校正。每1mL硝酸銀硝酸銀滴定液（滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于）相當(dāng)于6.216mg的的C4H7Cl3O1/2H2O。2. 酸水解后測定法酸水解后測定法醋氨苯砜的含量測定：醋氨苯砜的含量測定： 在酸性溶液中水解，芳酰胺基水解在酸性溶液中水解，芳酰胺基水解為芳伯氨基，亞硝酸鈉滴定法測定含量為芳伯氨基，亞硝酸鈉滴定法測定含量（二）堿性還原法（二）堿性還原法 在堿性溶液中

10、加還原劑（如鋅粉）在堿性溶液中加還原劑（如鋅粉）回流，使鹵素與碳結(jié)合鍵斷裂，形成無回流，使鹵素與碳結(jié)合鍵斷裂，形成無機(jī)鹵后測定。機(jī)鹵后測定。 本法適用于測定結(jié)構(gòu)中碘與苯環(huán)直本法適用于測定結(jié)構(gòu)中碘與苯環(huán)直接相連，且一個苯環(huán)上含多個碘原子的接相連，且一個苯環(huán)上含多個碘原子的含鹵素有機(jī)藥物。含鹵素有機(jī)藥物。 泛影酸的測定泛影酸的測定 Ch.P.（2010） 取本品約取本品約0.4g，精密稱定，精密稱定，加氫氧加氫氧化鈉溶液化鈉溶液30mL與鋅粉與鋅粉1.0g，加熱回流，加熱回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗滌，放冷，冷凝管用少量水洗滌，濾過，燒瓶與濾器用水洗滌濾過，燒瓶與濾器用水洗滌3次，每次次

11、，每次15mL，洗液與濾液合并，加冰醋酸，洗液與濾液合并，加冰醋酸5mL與曙紅鈉指示液與曙紅鈉指示液5滴，用硝酸銀滴滴，用硝酸銀滴定液（定液（0.1mol/L）滴定。每）滴定。每1mL硝酸銀硝酸銀滴定液（滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于）相當(dāng)于20.46mg的的 C11H9 I 3N2O4。 Ch.P.（2010）收載的膽影酸、碘）收載的膽影酸、碘番酸、膽影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸番酸、膽影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法測定。等均采用同法測定。 碘番酸的測定碘番酸的測定 JP 取本品的干燥品約取本品的干燥品約0.4g，精密稱定，精密稱定，加鋅粉加鋅粉1g及冰醋酸及冰醋酸10mL，加熱回流

12、，加熱回流30 min ，放冷，冷凝管用水放冷，冷凝管用水30mL洗滌，用洗滌，用脫脂棉過濾，燒瓶與脫脂棉用水洗滌脫脂棉過濾，燒瓶與脫脂棉用水洗滌2次，每次次，每次20mL，洗液與濾液合并，加四，洗液與濾液合并，加四溴酚酞乙酯指示液溴酚酞乙酯指示液1mL ，用硝酸銀滴定，用硝酸銀滴定液（液（0.1mol/L）滴定。終點(diǎn)時黃色沉淀變）滴定。終點(diǎn)時黃色沉淀變?yōu)榫G色。每為綠色。每1mL硝酸銀滴定液硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于19.031mg的的C11H12 I 3NO2。三、有機(jī)破壞法三、有機(jī)破壞法 含金屬、鹵素、氮、硫、磷等有機(jī)含金屬、鹵素、氮、硫、磷等有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)中的待測原子與碳

13、原子結(jié)合牢藥物結(jié)構(gòu)中的待測原子與碳原子結(jié)合牢固者，用水解或氧化還原法也難以將待固者，用水解或氧化還原法也難以將待測原子轉(zhuǎn)為無機(jī)形式，必須用有機(jī)破壞測原子轉(zhuǎn)為無機(jī)形式，必須用有機(jī)破壞的方法將藥物結(jié)構(gòu)破壞完全，方能選用的方法將藥物結(jié)構(gòu)破壞完全，方能選用合適的分析方法進(jìn)行測定。合適的分析方法進(jìn)行測定。（一）（一） 濕法破壞濕法破壞 酸消解法酸消解法 本法適用于含氮有機(jī)合成藥物分析的本法適用于含氮有機(jī)合成藥物分析的前處理，在生物制品分析中用于氮（包括前處理，在生物制品分析中用于氮（包括蛋白質(zhì)）、磷、硫柳汞及氯化鈉測定法的蛋白質(zhì)）、磷、硫柳汞及氯化鈉測定法的前處理。另外，本法亦用于生物樣品中金前處理。另

14、外，本法亦用于生物樣品中金屬元素測定時生物基質(zhì)的去除。屬元素測定時生物基質(zhì)的去除。 本法主要使用硫酸作為分解劑本法主要使用硫酸作為分解劑( (消解消解劑或消化劑劑或消化劑) )，常加入氧化劑，常加入氧化劑( (如硝酸、高如硝酸、高氯酸、過氧化氫等氯酸、過氧化氫等) )作為輔助分解劑。作為輔助分解劑。1. 硝酸硝酸-高氯酸法高氯酸法 本法適用于血、尿、組織等生物樣品本法適用于血、尿、組織等生物樣品的破壞，有機(jī)金屬藥物經(jīng)破壞后，得到的的破壞，有機(jī)金屬藥物經(jīng)破壞后，得到的無機(jī)金屬離子一般呈高價態(tài)。無機(jī)金屬離子一般呈高價態(tài)。本法不能用本法不能用于含氮雜環(huán)藥物的破壞。于含氮雜環(huán)藥物的破壞。 2. 硝酸硝

15、酸-硫酸法硫酸法 本法適用于大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)的破壞，本法適用于大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)的破壞，破壞得到的無機(jī)金屬離子均為高價態(tài)。破壞得到的無機(jī)金屬離子均為高價態(tài)。本本法不能用于含堿土金屬有機(jī)藥物的破壞。法不能用于含堿土金屬有機(jī)藥物的破壞。 3. 硫酸硫酸-硫酸鹽法硫酸鹽法 本法是往樣品中加入濃硫酸作氧化劑，本法是往樣品中加入濃硫酸作氧化劑，加入硫酸鹽提高硫酸的沸點(diǎn)，增強(qiáng)硫酸的加入硫酸鹽提高硫酸的沸點(diǎn)，增強(qiáng)硫酸的氧化破壞能力，且防止硫酸的分解損失。氧化破壞能力，且防止硫酸的分解損失。 本法常用于含砷或銻有機(jī)藥物的破壞，本法常用于含砷或銻有機(jī)藥物的破壞，破壞得到的無機(jī)金屬離子多為低價態(tài)破壞得到的無機(jī)金屬離子多

16、為低價態(tài)。 4. 其它濕法其它濕法 硝酸硝酸硫酸硫酸高氯酸法；高氯酸法； 硫酸硫酸氧氧化劑法（過氧化氫法、高錳酸鉀）?；瘎┓ǎㄟ^氧化氫法、高錳酸鉀）。 破壞后，金屬呈高價態(tài)。破壞后，金屬呈高價態(tài)。5. 凱氏定氮法凱氏定氮法 氮測定法氮測定法 應(yīng)用于測定含有氨基或酰胺結(jié)構(gòu)的應(yīng)用于測定含有氨基或酰胺結(jié)構(gòu)的藥物含量。藥物含量。原理原理: 有機(jī)含氮化合物與硫酸共熱，藥物分子中有有機(jī)含氮化合物與硫酸共熱，藥物分子中有機(jī)結(jié)構(gòu)被氧化分解，有機(jī)結(jié)合的機(jī)結(jié)構(gòu)被氧化分解，有機(jī)結(jié)合的氮轉(zhuǎn)變成氨氮轉(zhuǎn)變成氨，并，并與硫酸結(jié)合成為硫酸氫銨及硫酸銨，用氫氧化鈉與硫酸結(jié)合成為硫酸氫銨及硫酸銨，用氫氧化鈉堿化后，堿化后，釋放出

17、氨氣釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶用硼酸溶液或定量的酸吸收液或定量的酸吸收后，用酸滴定液或堿滴定液后，用酸滴定液或堿滴定液滴滴定定，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。根據(jù)與氨作，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。根據(jù)與氨作用的酸量計算供試品中氮的含量或換算為被測藥用的酸量計算供試品中氮的含量或換算為被測藥物的含量。物的含量。（二）干法破壞（二）干法破壞1. 高溫?zé)胱品ǜ邷責(zé)胱品?本法系將含待測元素的有機(jī)藥物經(jīng)本法系將含待測元素的有機(jī)藥物經(jīng)高溫灼燒灰化，使有機(jī)結(jié)構(gòu)分解而待測高溫灼燒灰化，使有機(jī)結(jié)構(gòu)分解而待測元素轉(zhuǎn)化為無機(jī)元素或可溶性無機(jī)鹽，元素轉(zhuǎn)化為無機(jī)元素或可溶性無機(jī)鹽，以供分析。以供分

18、析。 樣品樣品無水碳酸鈉或輕質(zhì)氧化鎂無水碳酸鈉或輕質(zhì)氧化鎂坩堝坩堝混合均勻混合均勻小火小火加熱加熱炭化炭化高溫灼燒高溫灼燒灰化灰化注意事項：注意事項：（1）加熱或灼燒時，應(yīng)控制溫度在）加熱或灼燒時，應(yīng)控制溫度在420以下；以下；（2）一定要灰化完全；）一定要灰化完全；（3）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，可經(jīng)加熱煮沸使溶解溶解，可經(jīng)加熱煮沸使溶解2. 氧瓶燃燒分解后測定氧瓶燃燒分解后測定氧瓶燃燒法：氧瓶燃燒法： 本法是將分子中本法是將分子中含有鹵素或硫含有鹵素或硫等元等元素素的有機(jī)藥物在的有機(jī)藥物在充滿氧氣的密閉充滿氧氣的密閉燃燒瓶燃燒瓶中進(jìn)行中進(jìn)行燃燒燃燒

19、，并將燃燒產(chǎn)物，并將燃燒產(chǎn)物吸收吸收于適當(dāng)于適當(dāng)?shù)奈找褐?，再采用適宜的分析方法來的吸收液中，再采用適宜的分析方法來檢查或測定檢查或測定鹵素或硫等元素鹵素或硫等元素的的含量。含量。NaClHClOClCNaOH2 溶液溶液點(diǎn)燃點(diǎn)燃 適用于含鹵素、硫、氮、硒等適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分析。有機(jī)藥物的分析。燃燒氧瓶：燃燒氧瓶：由硬質(zhì)玻璃由硬質(zhì)玻璃制成的無色、磨口、厚制成的無色、磨口、厚壁錐形瓶。壁錐形瓶。瓶塞空心，瓶塞空心，底部熔封鉑絲一根，下底部熔封鉑絲一根，下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀。端呈螺旋狀或網(wǎng)狀。 （1） 儀器裝置儀器裝置鉑絲燃燒時起催化作用。鉑絲燃燒時起催化作用。燃燒瓶大小的選擇燃

20、燒瓶大小的選擇 待分解樣品量待分解樣品量 燃燒瓶的體積燃燒瓶的體積 2030mg 500mL 5060mg 1000mL 0.60.7g 2000mL或特殊結(jié)構(gòu)或特殊結(jié)構(gòu)正確選用燃燒瓶的目的在于：正確選用燃燒瓶的目的在于： 樣品能在足夠的氧氣中燃燒分解樣品能在足夠的氧氣中燃燒分解完全；有利于將燃燒分解產(chǎn)物較快地完全；有利于將燃燒分解產(chǎn)物較快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能。吸收到吸收液中；防止爆炸的可能。 測定含氟有機(jī)藥物時，用測定含氟有機(jī)藥物時，用石英石英制制燃燒瓶。燃燒瓶。（2）燃燒分解操作）燃燒分解操作 用洗液洗凈后，按各藥品項下的規(guī)用洗液洗凈后，按各藥品項下的規(guī)定加入定加入吸收液吸收液

21、，并將瓶口用水濕潤小心，并將瓶口用水濕潤小心急速地通入氧氣急速地通入氧氣1min，立即用表面皿覆，立即用表面皿覆蓋瓶口。蓋瓶口。a. 燃燒瓶燃燒前的準(zhǔn)備燃燒瓶燃燒前的準(zhǔn)備吸收液：吸收液： 吸收液的作用是將樣品經(jīng)燃燒分解吸收液的作用是將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價態(tài)的鹵素、硫、氮、硒所產(chǎn)生的各種價態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y定的價態(tài)。定的價態(tài)。吸收液的選擇：吸收液的選擇：氟：氟： 水水 氯：氯： NaOH溶液溶液溴：溴： H2O2-NaOH或或NaOH-硫酸肼飽硫酸肼飽 和溶液和溶液碘：碘： NaOH硫酸肼飽和溶液硫酸肼飽和溶液硫：硫：

22、 NaOH或或H2O2 硒：硒： 硝酸溶液硝酸溶液b. 樣品的準(zhǔn)備樣品的準(zhǔn)備 取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。螺旋處。軟膏類：軟膏類： 包裹在不含被測成分的蠟包裹在不含被測成分的蠟 油紙中，再用無灰濾紙將油紙中，再用無灰濾紙將 蠟油紙包包裹在里邊蠟油紙包包裹在里邊液體樣品：液體樣品：裝于用透明膠紙和無灰濾裝于用透明膠紙和無灰濾 紙做成的紙袋紙做成的紙袋固體樣品：固體樣品：用剪裁成一定形狀的無灰用剪裁成一定形狀的無灰 濾紙包裹濾紙包裹c(diǎn). 樣品的燃燒樣品的燃燒 點(diǎn)燃濾紙包尾部，迅速放入燃燒瓶點(diǎn)燃濾紙包

23、尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，燃中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，燃燒完畢（應(yīng)無黑色碎片），充分振搖，燒完畢（應(yīng)無黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液，放置使生成的煙霧完全吸入吸收液，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗。按洗液及吸收液，同法另做空白試驗。按各藥品項下規(guī)定的方法進(jìn)行檢查或測定。各藥品項下規(guī)定的方法進(jìn)行檢查或測定。（3）注意事項）注意事項v 燃燒瓶要洗凈燃燒瓶要洗凈,不得殘留有機(jī)溶劑；不得殘留有機(jī)溶劑；應(yīng)選擇氣密性好及與樣品量相適宜的應(yīng)選擇氣密性好及與樣品量相適宜的燃燒瓶。燃燒瓶。

24、v 燃燒完全應(yīng)注意：氧氣要充足；樣燃燒完全應(yīng)注意：氧氣要充足；樣品要干燥。品要干燥。v 燃燒煙霧應(yīng)完全吸收。燃燒煙霧應(yīng)完全吸收。v 應(yīng)同時做空白實驗。應(yīng)同時做空白實驗。 取本品約取本品約20mg，精密稱定，精密稱定，照氧瓶燃燒法照氧瓶燃燒法進(jìn)行有進(jìn)行有機(jī)破壞，用機(jī)破壞，用氫氧化鈉試液氫氧化鈉試液2ml與水與水10ml為吸收液為吸收液，待，待吸收完全后，加吸收完全后，加溴醋酸溴醋酸溶液溶液(取醋酸鉀取醋酸鉀10g，加冰醋酸，加冰醋酸適量使溶解，加適量使溶解，加溴溴0.4ml，再加冰醋酸使成，再加冰醋酸使成100m1)l0ml，密塞，振搖，放置數(shù)分鐘，加甲酸約密塞，振搖，放置數(shù)分鐘，加甲酸約l m

25、l，用水洗滌瓶，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約口，并通入空氣流約35min以除去剩余的溴蒸氣，以除去剩余的溴蒸氣，加加碘化鉀碘化鉀2g，密塞，搖勻，用，密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L)滴定滴定，至近終點(diǎn)時，加淀粉指示液，繼續(xù)，至近終點(diǎn)時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每每lml的硫代硫酸鈉滴定液的硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于1.388mg的的C19H29IO2。 碘苯酯的含量測定碘苯酯的含量測定 Ch.P.（2010） 選擇氧瓶燃燒法所必備的實驗物品選擇氧瓶燃

26、燒法所必備的實驗物品A. 磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶B. 鉑絲鉑絲C. 普通濾紙普通濾紙D. 氫氣氫氣 E. 無灰濾紙無灰濾紙 氧瓶燃燒法測定含氯有機(jī)藥物時氧瓶燃燒法測定含氯有機(jī)藥物時所用的吸收液多數(shù)為所用的吸收液多數(shù)為A. H2O2溶液溶液B. H2O2NaOH溶液溶液C. NaOH溶液溶液D硫酸肼飽和液硫酸肼飽和液E. NaOH硫酸肼飽和液硫酸肼飽和液 氧瓶燃燒法可用于氧瓶燃燒法可用于A. 含鹵素有機(jī)藥物的含量測定含鹵素有機(jī)藥物的含量測定B. 醚類藥物的含量測定醚類藥物的含量測定C. 檢查甾體激素類藥物中的氟檢查甾體激素類藥物中的氟D. 檢查甾體激素類藥物中的硒檢查甾體激素類藥物

27、中的硒E. 芳酸類藥物的含量測定芳酸類藥物的含量測定第二節(jié)第二節(jié) 生物分析樣品的制備生物分析樣品的制備 生物樣品分析（體內(nèi)藥物分析）：生物樣品分析（體內(nèi)藥物分析）： 是通過分析的手段研究藥物在體內(nèi)數(shù)量是通過分析的手段研究藥物在體內(nèi)數(shù)量與質(zhì)量的變化，以獲得各種藥物動力學(xué)參數(shù)與質(zhì)量的變化，以獲得各種藥物動力學(xué)參數(shù)及其轉(zhuǎn)化、代謝的方式與途徑等信息。從而及其轉(zhuǎn)化、代謝的方式與途徑等信息。從而有助于藥物的生產(chǎn)、實驗研究、臨床等環(huán)節(jié)有助于藥物的生產(chǎn)、實驗研究、臨床等環(huán)節(jié)對所研究的藥物作出估計與評價，以及對藥對所研究的藥物作出估計與評價，以及對藥物的改進(jìn)與發(fā)展作出貢獻(xiàn)。物的改進(jìn)與發(fā)展作出貢獻(xiàn)。生物樣品分析特

28、點(diǎn)：生物樣品分析特點(diǎn)：1. 樣品成分復(fù)雜，干擾物質(zhì)多，存在形樣品成分復(fù)雜，干擾物質(zhì)多，存在形式多樣，大多需經(jīng)過分離、純化后才能式多樣，大多需經(jīng)過分離、純化后才能進(jìn)行測定進(jìn)行測定 預(yù)處理。預(yù)處理。 生物樣品的介質(zhì)組成比較復(fù)雜，包括生物樣品的介質(zhì)組成比較復(fù)雜，包括有有高分子蛋白質(zhì)和低分子糖、脂肪、尿素高分子蛋白質(zhì)和低分子糖、脂肪、尿素等有機(jī)物，等有機(jī)物，Na+、K+、X-等無機(jī)物等。等無機(jī)物等。 體內(nèi)藥物存在形式：體內(nèi)藥物存在形式：游離型游離型（原型藥原型藥物、代謝物）物、代謝物）;藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合物藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合物；綴合物綴合物（藥物經(jīng)代謝后，極性增強(qiáng)，與內(nèi)藥物經(jīng)代謝后，極性增強(qiáng)，與內(nèi)源性

29、物質(zhì)結(jié)合生成綴合物）。源性物質(zhì)結(jié)合生成綴合物）。2. 樣品量少，且多數(shù)需在特定條件下采樣品量少，且多數(shù)需在特定條件下采 集，不易重新獲得集，不易重新獲得 細(xì)心操作。細(xì)心操作。3. 被測藥物及其代謝物的濃度或活性較被測藥物及其代謝物的濃度或活性較低，對分析方法的靈敏度有較高要求低，對分析方法的靈敏度有較高要求 靈敏度高。靈敏度高。4. 數(shù)據(jù)重現(xiàn)性較差數(shù)據(jù)重現(xiàn)性較差 誤差大。誤差大。5. 方法在不斷發(fā)展與完善中方法在不斷發(fā)展與完善中 創(chuàng)新。創(chuàng)新。一、生物樣品的種類與制備一、生物樣品的種類與制備1. 應(yīng)根據(jù)不同的分析目的與要求進(jìn)行應(yīng)根據(jù)不同的分析目的與要求進(jìn)行選選??；?。?. 所取樣品應(yīng)能夠正確反映

30、藥物濃度與所取樣品應(yīng)能夠正確反映藥物濃度與效應(yīng)之間的關(guān)系；效應(yīng)之間的關(guān)系；3. 樣品應(yīng)易于獲得，便于處理、分析。樣品應(yīng)易于獲得，便于處理、分析。選取樣品的原則：選取樣品的原則：（一）血樣（一）血樣 包括血漿、血清與全血，包括血漿、血清與全血，常用的常用的為血漿和血清。為血漿和血清。1. 取血方式取血方式 分布均勻后取樣分布均勻后取樣動脈血、心臟取血（動物）動脈血、心臟取血（動物）靜脈采血靜脈采血毛細(xì)管采血毛細(xì)管采血離心離心全血全血離心離心上層：上層：血清血清下層：血細(xì)胞（凝塊）下層：血細(xì)胞（凝塊）上層：上層：血漿血漿下層：血細(xì)胞下層：血細(xì)胞血血液液自然凝結(jié)自然凝結(jié)加抗凝劑加抗凝劑2. 血樣的制

31、備血樣的制備3. 血樣的主要成分區(qū)別血樣的主要成分區(qū)別 成分成分血血 漿漿血血 清清全全 血血纖維纖維蛋白原蛋白原有有無無有有血細(xì)胞血細(xì)胞無無無無有有 血漿比血清分離快，制取的量多，血漿比血清分離快，制取的量多，樣品純化較容易；而且大多數(shù)藥物在體樣品純化較容易；而且大多數(shù)藥物在體內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)時，其在血漿中的濃度內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)時，其在血漿中的濃度與作用點(diǎn)的濃度密切相關(guān)，可以作為在與作用點(diǎn)的濃度密切相關(guān)，可以作為在作用部位藥物濃度的可靠指標(biāo)。為最常作用部位藥物濃度的可靠指標(biāo)。為最常用的血樣。用的血樣。 血清成分最接近組織液化學(xué)成分，血清成分最接近組織液化學(xué)成分，最能反應(yīng)機(jī)體的具體情況；但獲取量小

32、。最能反應(yīng)機(jī)體的具體情況；但獲取量小。 全血的凈化較麻煩，尤其是溶血全血的凈化較麻煩，尤其是溶血后，血色素會給測定帶來干擾，只在個后，血色素會給測定帶來干擾，只在個別情況使用。別情況使用。4. 血樣的保存血樣的保存l 血樣采集后應(yīng)及時分離血漿或血清，血樣采集后應(yīng)及時分離血漿或血清， 最好馬上分析；最好馬上分析；l 短期保存時應(yīng)置于冰箱冷藏室（短期保存時應(yīng)置于冰箱冷藏室（4）中中;l 長期保存時應(yīng)置于冰箱冷凍室長期保存時應(yīng)置于冰箱冷凍室 （-20）中。）中。（二）尿液（二）尿液 測定尿中藥物濃度時應(yīng)采用時間測定尿中藥物濃度時應(yīng)采用時間尿，即將一定時間內(nèi)（如尿，即將一定時間內(nèi)（如8h 、12h或或

33、24h等）排泄的尿液全部儲存起來，等）排泄的尿液全部儲存起來，并記錄其體積，取一部分測定藥物濃并記錄其體積，取一部分測定藥物濃度，然后乘以尿量求得排泄總量。度，然后乘以尿量求得排泄總量。 1. 采集采集2. 保存保存l 采集后應(yīng)立即測定采集后應(yīng)立即測定l 不能立即測定時，加入防腐劑（如甲不能立即測定時，加入防腐劑（如甲苯、氯仿、濃鹽酸等）置冰箱中保存苯、氯仿、濃鹽酸等）置冰箱中保存l 保存時間為保存時間為2436h，可置冰箱冷藏室，可置冰箱冷藏室（4）中，長時間保存時，應(yīng)冷凍）中，長時間保存時，應(yīng)冷凍 （-20）3. 特點(diǎn)特點(diǎn) 體內(nèi)藥物的清除主要是通過尿液體內(nèi)藥物的清除主要是通過尿液排出，藥物

34、可以原型（母體藥物）或排出，藥物可以原型（母體藥物）或代謝物及其綴合物等形式排出。代謝物及其綴合物等形式排出。 尿藥測定主要用于藥物劑量回收尿藥測定主要用于藥物劑量回收研究，尿清除率、生物利用度的研究，研究，尿清除率、生物利用度的研究，或藥物代謝類型的確定。或藥物代謝類型的確定。優(yōu)：藥物濃度高，收集方便優(yōu)：藥物濃度高，收集方便缺：濃度隨時間變化大；與血藥濃度缺：濃度隨時間變化大；與血藥濃度 相關(guān)性差；受患者腎功能影響大；相關(guān)性差；受患者腎功能影響大； 尿液不易采集完全且不易保存尿液不易采集完全且不易保存（三）組織樣品（三）組織樣品 測定之前首先進(jìn)行勻漿化，取采集的測定之前首先進(jìn)行勻漿化，取采集

35、的組織樣品，加入一定量的水或緩沖液，于組織樣品，加入一定量的水或緩沖液，于勻漿機(jī)中勻漿化處理，制成一定濃度的水勻漿機(jī)中勻漿化處理，制成一定濃度的水基質(zhì)勻漿液，制備或低溫貯藏?；|(zhì)勻漿液，制備或低溫貯藏。 1. 采集采集 2. 制備制備（四）毛發(fā)樣品（四）毛發(fā)樣品 取枕后部，采集距頭皮取枕后部，采集距頭皮1cm以上以上的頭發(fā)約的頭發(fā)約0.51g。 1. 采集采集 充分洗凈后，有機(jī)破壞。充分洗凈后，有機(jī)破壞。 2. 制備制備二二 、生物樣品分析前處理技術(shù)、生物樣品分析前處理技術(shù) 應(yīng)根據(jù)生物樣品的種類、被測藥物應(yīng)根據(jù)生物樣品的種類、被測藥物理化性質(zhì)、濃度范圍、存在形式、測定理化性質(zhì)、濃度范圍、存在形

36、式、測定方法采取相應(yīng)的分析方法，從而確定合方法采取相應(yīng)的分析方法，從而確定合適的前處理方法。適的前處理方法。（一）蛋白質(zhì)去除（一）蛋白質(zhì)去除1. 目的目的 使結(jié)合型藥物釋放出來使結(jié)合型藥物釋放出來 預(yù)防提取過程中蛋白質(zhì)的干擾預(yù)防提取過程中蛋白質(zhì)的干擾 保護(hù)儀器性能，延長使用期限保護(hù)儀器性能，延長使用期限2. 方法方法（1）加入與水相混溶的有機(jī)溶劑）加入與水相混溶的有機(jī)溶劑 水溶性的有機(jī)溶劑可使蛋白質(zhì)的分水溶性的有機(jī)溶劑可使蛋白質(zhì)的分子內(nèi)及分子間的氫鍵發(fā)生變化而使蛋白子內(nèi)及分子間的氫鍵發(fā)生變化而使蛋白質(zhì)凝聚，釋放出與蛋白結(jié)合的藥物。質(zhì)凝聚，釋放出與蛋白結(jié)合的藥物。常用有機(jī)溶劑：常用有機(jī)溶劑：乙腈

37、、甲醇、乙醇、丙乙腈、甲醇、乙醇、丙 酮、丙醇、四氫呋喃。酮、丙醇、四氫呋喃。（2）加入中性鹽）加入中性鹽 中性鹽的加入將與蛋白質(zhì)水合的中性鹽的加入將與蛋白質(zhì)水合的水置換出來，使蛋白質(zhì)脫水而沉淀。水置換出來，使蛋白質(zhì)脫水而沉淀。常用中性鹽：常用中性鹽： 飽和硫酸銨、硫酸鈉、鎂鹽、磷飽和硫酸銨、硫酸鈉、鎂鹽、磷酸鹽及枸櫞酸鹽。酸鹽及枸櫞酸鹽。 （3）加入強(qiáng)酸）加入強(qiáng)酸 當(dāng)當(dāng)pH低于蛋白質(zhì)的等當(dāng)點(diǎn)時，蛋低于蛋白質(zhì)的等當(dāng)點(diǎn)時，蛋白質(zhì)以陽離子形式存在，加入強(qiáng)酸后，白質(zhì)以陽離子形式存在，加入強(qiáng)酸后，可與蛋白質(zhì)陽離子形成不溶性鹽而沉可與蛋白質(zhì)陽離子形成不溶性鹽而沉淀。淀。常用強(qiáng)酸：常用強(qiáng)酸： 10%三氯醋

38、酸、三氯醋酸、6%高氯酸、硫酸高氯酸、硫酸-鎢酸混合液及鎢酸混合液及5%偏磷酸。偏磷酸。注意：注意：1. 經(jīng)過強(qiáng)酸處理后上清液經(jīng)過強(qiáng)酸處理后上清液pH為為04，不適于在酸性條件下分解的藥物。不適于在酸性條件下分解的藥物。2. 為避免對下一步測定的干擾，過量為避免對下一步測定的干擾，過量的強(qiáng)酸要除去。的強(qiáng)酸要除去。（4）加入含鋅鹽及銅鹽的沉淀劑）加入含鋅鹽及銅鹽的沉淀劑 當(dāng)當(dāng)pH高于蛋白質(zhì)的等當(dāng)點(diǎn)時，高于蛋白質(zhì)的等當(dāng)點(diǎn)時，金屬陽離子與蛋白質(zhì)分子中帶陰電荷金屬陽離子與蛋白質(zhì)分子中帶陰電荷的羧基形成不溶性鹽而沉淀。的羧基形成不溶性鹽而沉淀。 常用的沉淀劑：常用的沉淀劑： CuSO4-NaWO4 、

39、ZnSO4-NaOH 將有機(jī)溶劑（強(qiáng)酸、中性鹽、金將有機(jī)溶劑（強(qiáng)酸、中性鹽、金屬陽離子沉淀劑）與血樣按一定比例屬陽離子沉淀劑）與血樣按一定比例混合后置具塞塑料尖底管中，用超速混合后置具塞塑料尖底管中，用超速離心機(jī)（離心機(jī)（10000rpm）離心）離心12min，取，取上清液即可。上清液即可。操作：操作：（5）酶解法）酶解法 蛋白水解酶在堿性條件下降解蛋蛋白水解酶在堿性條件下降解蛋白質(zhì)的肽鍵，使藥物析出。適用于測白質(zhì)的肽鍵，使藥物析出。適用于測定蛋白結(jié)合牢固的藥物，不適用于在定蛋白結(jié)合牢固的藥物，不適用于在堿性下易水解的藥物。堿性下易水解的藥物。常用蛋白水解酶：常用蛋白水解酶： 枯草菌溶素枯草菌溶素（6）加熱法）加熱法 待測藥物對熱穩(wěn)定時，可采用加待測藥物對熱穩(wěn)定時，可采用加熱的方法使蛋白質(zhì)凝固沉淀，并釋放熱的方法使蛋白質(zhì)凝固沉淀，并釋放出與之結(jié)合的藥物。本法只能除去熱出與之結(jié)合的藥物。本法只能除去熱變性蛋白質(zhì)。變性蛋白質(zhì)。（二）綴合物的水解（二）綴合物的水解 尿中的藥物多為綴合物，極性較尿中的藥物多為綴合物，極性較大，不易被有機(jī)溶劑提取，在測定分大，不易被有機(jī)溶劑提取，在