酶型- 法醫(yī)學(xué)ppt課件

1、LOGO 酶型酶型 Isoenzyme) 李建金李建金中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院法醫(yī)人證中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院法醫(yī)人證教研室教研室第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 v酶型的定義酶型的定義v 又稱同工酶：又稱同工酶：分子構(gòu)造不同，但催分子構(gòu)造不同，但催化同終身化反響的一化同終身化反響的一組酶。組酶。v 或酶的多態(tài)性定義：或酶的多態(tài)性定義： v 同同DNADNA。第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 酶型的分類酶型的分類多位點(diǎn)基因控制的同工酶：如多位點(diǎn)基因控制的同工酶：如 LDH,PGMLDH,PGM。單位點(diǎn)復(fù)等位基因控制的同工酶：如單位點(diǎn)復(fù)等位基因控制的同工酶：如 EAPEAP，EsDEsD。遺傳變異體同工酶：點(diǎn)突變所致。如遺傳變

2、異體同工酶：點(diǎn)突變所致。如G6PDG6PD。次級同工酶修飾同工酶：脫氨、乙酰化次級同工酶修飾同工酶：脫氨、乙酰化等所致。等所致。第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 酶的一些特點(diǎn)酶的一些特點(diǎn) 酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì) 酶促反響的高度專注性：催化特定的底酶促反響的高度專注性：催化特定的底物。物。 酶反響的最適酶反響的最適PHPH 酶反響的最適溫度酶反響的最適溫度 酶多為水溶性酶多為水溶性 酶多不耐熱酶多不耐熱第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 電泳檢測酶型的根本原理電泳檢測酶型的根本原理傳統(tǒng)電泳：等電點(diǎn)、分子大小。傳統(tǒng)電泳：等電點(diǎn)、分子大小。等電聚焦電泳：等電點(diǎn)。等電聚焦電泳：等電點(diǎn)。影響電泳的要素：電場強(qiáng)度、緩

3、沖液影響電泳的要素：電場強(qiáng)度、緩沖液PH值、值、離子強(qiáng)度、膠濃度、電泳時間、產(chǎn)熱等。離子強(qiáng)度、膠濃度、電泳時間、產(chǎn)熱等。紅細(xì)胞酸性磷酸酶紅細(xì)胞酸性磷酸酶Erythrocyte Acid Erythrocyte Acid Phosphatase.EAP)Phosphatase.EAP) 概略 EAPACP1、PAP、ACP2 EAP是第一個被報道具有多態(tài)的酶。 單亞基構(gòu)造，基因定位于2P25， 等電點(diǎn)為5-7，酶反響的最適PH為5.5。 分型 1963年Hopkinson), Nature雜志上報導(dǎo)EAP可分為A、BA、B、CA、CB五種型。進(jìn)展了家系調(diào)查，有三個共顯性等位基因：P(A、PB、P

4、C。 在東方人群中，常見的基由于：PA、PB；常見的表型為：A、BA、B。 另有多個稀有基因的報導(dǎo)。 EAP表型的檢測 1、1%瓊脂糖凝膠電泳 2、聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳 顯色： 4-甲基傘形酮磷酸鹽EAP4-甲基傘形酮蘭色熒光磷酸葡萄糖變位酶磷酸葡萄糖變位酶Phosphoglucomutase,PGM)Phosphoglucomutase,PGM) PGM1 PGM1其基因在其基因在1 1號染色體：等電點(diǎn)為號染色體：等電點(diǎn)為 5-75-7，最適，最適pH8pH8 PGM2 PGM2其基因在其基因在4 4號染色體號染色體 PGM3PGM3其基因在其基因在6 6號染色體：胎盤號染色體：胎盤

5、PGM4PGM4其基因未詳：乳汁中其基因未詳：乳汁中 紅細(xì)胞中只需紅細(xì)胞中只需PGM1PGM1與與PGM2PGM2，活性各半，活性各半分型分型淀粉凝膠電泳，淀粉凝膠電泳，PGMPGM可分出可分出a,b,c,d,e,f,ga,b,c,d,e,f,g七條帶。七條帶。 e,f,ge,f,g幾乎幾乎每人都一樣。分為三型：每人都一樣。分為三型：PGM1PGM1a,c)a,c)、PGM2PGM2b,d)b,d)，PGM2-PGM2-1(a,b,c,d)1(a,b,c,d)。 19651965年年Hopkinson),Hopkinson),發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)e,f,ge,f,g帶亦存在變異。前者稱為帶亦存在變異。前者

6、稱為 PGM1PGM1，由由PGM1PGM11 1、PGM2PGM22 2二個共顯性等位基因控制，三種常二個共顯性等位基因控制，三種常見表型。后者稱為見表型。后者稱為PGM2PGM2。$ 1976 1976年年Bark)Bark)，用等電聚焦電泳，用等電聚焦電泳，將將PGM1PGM1分出十種常見的表型。分出十種常見的表型。 分別由分別由PGM1PGM11+1+、PGM1PGM11-1-、PGM1PGM12+2+、PGM1PGM12-2-四個共顯性等位基因控制。四個共顯性等位基因控制。PGM1PGM1表型的檢測表型的檢測1、淀粉凝膠電泳2、聚丙稀酰胺凝膠 等電聚焦電泳 G1PPGM、G16PNA

7、DP2+MTTPMS6PG+NADP2G6PG6PD、NADP脂酶脂酶DEsteraseD,EsD脂酶共有二十余種，可分為特異性脂酶和非特異性脂酶。紅細(xì)胞中的脂酶有A、B、C、D四種，只需EsD具有多態(tài)性。等電點(diǎn)為4-6，酶反響的最適PH5.5。分型： 1973年Hopkinson，分為三種常見表型， 由ESD1、ESD2二個共顯性等位基因控制。ESD表型的檢測表型的檢測 1、1%瓊脂糖凝膠電泳 2、等電聚焦電泳4-4-甲基傘形酮醋酸鹽甲基傘形酮醋酸鹽蘭色熒光蘭色熒光4-4-甲基傘形酮甲基傘形酮乙二醛酶IGlyoxalaseI,GLOI)雙亞基構(gòu)造，分布廣泛，紅細(xì)胞中活性最高。等電點(diǎn)為4.3左

8、右；反響 最適PH為6.5?；蛭稽c(diǎn)與HLA基因毗鄰6P213， 1975年Kompf報導(dǎo)，三種常見表型。由GLOI1、GLOI2二個共顯性等位基因控制。分型GLOI表型的檢測l瓊脂糖/可溶性淀粉混和凝膠電泳l顯色：l 甲基乙二醛GLOI、復(fù)原型GSH-氧化型GHS。l 淀粉+碘-蘭色復(fù)原型GSH可使蘭色褪掉。谷丙轉(zhuǎn)氨酶Glutamic Pyruvic Transaminase GPTl催化谷氨酸與丙氨酸互換。l酶反響的最適PH約為8l雙亞基構(gòu)造。三種常見表型，由GPT1、GPT2二個共顯性等位基因控制。l混合淀粉凝膠電泳顯色：l 1、丙氨酸GPT-谷氨酸GLD、NADP-NADPH2MTT、PMS-蘭色。l 2、丙氨酸GPT-谷氨酸+丙酮酸LDH、NADH-乳酸+NAD無熒光。1、酶活性喪失不可逆。2、潮濕環(huán)境下