養(yǎng)心草及其制劑的化學(xué)成分研究

1、養(yǎng)心草及其制劑的化學(xué)成分研究專 業(yè)：中藥學(xué)研究生：張娜 導(dǎo) 師：郭素華 教授摘 要一、 論文綜述：養(yǎng)心草的藥學(xué)研究進(jìn)展本文從臨床及民間使用、藥理學(xué)研究、生藥學(xué)研究、化學(xué)成分、制劑及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究等方面對(duì)養(yǎng)心草的藥學(xué)研究進(jìn)行綜述，為養(yǎng)心草進(jìn)一步研究的開展提供參考。二、 養(yǎng)心草中槲皮素成分的HPLC-MS/MS分析用HPLC-MS/MS法定性確定養(yǎng)心草中含有黃酮類化合物槲皮素。用柱色譜洗脫養(yǎng)心草提取物，并用HPLC-MS/MS法測(cè)定槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品和洗脫物，洗脫物中主要含有槲皮素，其保留時(shí)間是3.06，M+H峰為m/z303.4，質(zhì)譜特征與標(biāo)準(zhǔn)品具有高相似度，驗(yàn)證了樣品中含有槲皮素。三、 養(yǎng)心草的質(zhì)量標(biāo)

2、準(zhǔn)研究描述了養(yǎng)心草的藥材性狀特征，并對(duì)其根、根莖、莖、葉的組織構(gòu)造、解離組織、粉末進(jìn)行顯微鑒別。采用薄層定性鑒別藥材粉末中槲皮素并用HPLC測(cè)定養(yǎng)心草中槲皮素的含量。選用SHIM-PACK VP C18（250mm*，10um）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸（55：45），流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長為370nm。結(jié)果：槲皮素在1.21612.16ug范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為102.08%，RSD為2.71%。本法簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。制訂養(yǎng)心草藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而有效的控制養(yǎng)心草藥材的質(zhì)量。四、 養(yǎng)心草揮發(fā)油化學(xué)成分氣相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析分析研究養(yǎng)心草揮發(fā)油的

3、主要化學(xué)成分。用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索技術(shù)分離鑒定各化學(xué)成分，用離子流色譜峰面積歸一法計(jì)算各化學(xué)成分的相對(duì)含量。結(jié)果分離了44個(gè)化學(xué)成分峰，并鑒定出其中的17種化學(xué)成分和計(jì)算各組分的相對(duì)含量，其主要成分為2-十一酮、醋酸冰片酯、環(huán)氧石竹烯、十六酸等。五、 養(yǎng)心草膠囊的制備工藝及其研究 以槲皮素為對(duì)照品，用分光光度法測(cè)定養(yǎng)心草中總黃酮含量，檢測(cè)波長430nm。樣品經(jīng)NaOH堿水浸泡提取，65乙醇沉淀，定容、顯色后測(cè)定。槲皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍112ug/ml相關(guān)系數(shù)r為0.9991。并用正交設(shè)計(jì)，研究養(yǎng)心草的最佳工藝條件六、 養(yǎng)心草膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和初步穩(wěn)定性研究 制定養(yǎng)心草膠囊的薄層鑒別

4、，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好;制定了藥品有效成分槲皮素為指標(biāo)成分的含量測(cè)定方法，同時(shí)制訂了養(yǎng)心草中槲皮素成分的含量限定。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能有效地控制藥品的質(zhì)量。 為考察樣品的穩(wěn)定性，初步推測(cè)本品的有效期，并且考察包裝材料對(duì)藥品質(zhì)量及穩(wěn)定性的影響，將瓶裝藥品在室溫六個(gè)月和溫度3740、相對(duì)濕度75%條件下加速試驗(yàn)三個(gè)月，結(jié)果顯示在正常室溫穩(wěn)定性和加速穩(wěn)定性規(guī)定的考察期內(nèi)樣品各項(xiàng)質(zhì)量檢查指標(biāo)均符合規(guī)定;表明樣品穩(wěn)定性良好，包裝材料對(duì)樣品亦無不良影響;推測(cè)本品的有效期為兩年。關(guān)鍵詞養(yǎng)心草；費(fèi)菜；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；揮發(fā)油；氣質(zhì)聯(lián)用；槲皮素；高效液相色譜-質(zhì)譜法；高效液相色譜法；含量測(cè)定；分光光度法；黃酮類；正交實(shí)驗(yàn)；藥學(xué)研究

5、；進(jìn)展The search of chemical component from Sedum aizoon L. and Yang Xin Cao capsuleMajor：chinese medicinePostguaduate：zhang naTutor：Prof.guo su huaABSTRACTPart one： Research on quality standard of Sedum aizoon.L.The histological characters of the root, rhizome, stem and leaf of the plant were reported

6、. The characters of the isolated tissue and powder were also involved. the content of Quercetin were identified by TLC.A HPLC method was established for the determination of quercetin in the Sedum aizoon.L.The SHIM-PACK VP C18(250nm*4.6nm,10um)column was used.The mobile phase was consisted of methan

7、ol-0.4% Phosphoric acid solutions(55:45).The detection wavelength was 370nm.The calibration curve of quercetin was in good linearity over the range of 1.216-12.16ug , and regression equation was Y=40386X-14138(r=0.9991). The average recovery rate was 102.08%,with RSD=2.71%.The results showed that th

8、e method is quick , sensitive,reproduciblel. The quality control is feasible and can be applied to control Sedum aizoon.L.Part two :Studies on Preparation technology of Yang Xin Cao capsuleThe contents of total flavonoids in Sedum aizoon.L.were determined by ultraviolet spectrophotometry, and compar

9、ed with Quercetin as control. The wavelengh was set at 430nm.Samples were extracted with water ,with 65%ethylalcohol, then dissolved and determined after color development .The result showed that the linear range of standard curve was 1-12ug/ml,r=0.9998.The recovery rate was 98.58%.By performing the

10、 orthogonal test,we studied the optimum technology condition.Part three:The Analysis of Volatile Oil from Sedum aizoon.L.by GC-MSOur study was to analyze the chemical constituents of volatile Oil from Sedum aizoon.L. The volatile Oil was extracted from the Sedum aizoon.L.by using the steam distillat

11、ion .The components were identified by gas chromatography-mass spectrometry(GC-MS)and elucidated on the standard mass spectral data.The percentage of relative contents was demonstrated by Area Normalization Method,The resuils showed that forty-four components were separate,seventeen of which were id

12、entified and the percentage of relative components were demonstrated. The main components are undecan-2-one,Bornyl acetate, Caryophyllene oxide ,hexadeccanoic acid and etc.Part four:Analysis of quereetin in Sedum aizoon.L.byusing HPLC-MS/MS determination of quercetin in the Sedum aizoon.L. This pape

13、r described the determination of quercetin in Sedum aizoon.L.by using HPLC-MS/MS technique Comparing with standard sample,quercetin exists in the plant was confirmed.And the fragmentation mechanism was elicited by MS/MS method(daughter ion scan).Part five: Research on quality standard and preliminar

14、y pharmaceutical stability of Yang Xin Cao capsulewere identified by TLC, the content of Quercetin which is the effective element in the preparation and the medicinal material was determined as the index by HPLC. The quality control is feasible and can be applied to control the products from mass pr

15、oduction.It can be ensured the stability of the product's qualitIn order to examine the stability of medicine, and then infer the expiration data and test the effect of packing materials to the quality of the medicine. Put the sample into the plastic bottle in the indoor temperature for 6 months

16、, then do the accelerating experiment under the condition that the temperatureis 37-400C,and the relatively humidityis 75% for 3 months.All the results shows that the stability in the indoor temperature and the accelerating condition are according with the index of quality control in the limited dat

17、a, the packing materials has no reverse effect to the medicine, so it is can be inferred that the expiration data is two yearsPart six：Document review:Progress in Pharmic Studies of Sedum aizoon.L.In this paper ,we also sunarized the progress of the research of Sedum aizoon.L.in clinic and civilian

18、ueing ,pharmacology ,pharmacognosy,chemical consitituents,preparation and quality standard et al.It is a reference to futher study on Sedum aizoon.L.KEY WORDS： yangxincao； Sedum aizoon L.；quality standard； Volatile oil；GC-MS；quercetin； HPLC-MS/MS； HPLC； determination； total flavonoids； spectrophotom

19、etry； orthogonal experiment； Pharmic Research；progress.前言養(yǎng)心草，又名土三七，費(fèi)菜，為景天科多年生草本植物，即是花卉又是藥用植物，為我省藥物志所收載。在福建省連城縣民間有長期用藥習(xí)慣，并已大量人工栽培，其味甘淡微酸，具清熱涼血、平肝寧心的功效，尤其對(duì)心臟病有特效，被群眾稱為“救心草”。養(yǎng)心草在福建省連城縣有零星的分布，但不多見，民間沿習(xí)用于防治心臟病屢見效驗(yàn)，因此有人又稱“心臟病草”、“救心草”。連城縣科學(xué)技術(shù)局的同志在連城縣朋口蘭花開發(fā)有限公司的協(xié)助下，在生態(tài)條件十分優(yōu)越的朋口環(huán)保農(nóng)民城建圃，對(duì)養(yǎng)心草進(jìn)行規(guī)模技術(shù)開發(fā)，目前已建有苗圃基地

20、30畝，且全縣約有300余戶人利用庭院進(jìn)行了小面積的種植，現(xiàn)在他們擬進(jìn)行更大規(guī)模的人工栽培，因此此草藥具有良好的民間用藥基礎(chǔ)及極具潛力的藥用資源，值得大力開發(fā)研究，既是為治療心血管疾病尋找一個(gè)良好的藥物，又將為地方經(jīng)濟(jì)創(chuàng)造新的增長點(diǎn)，具有可觀的社會(huì)與經(jīng)濟(jì)效益。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，該草藥單用對(duì)心臟病、中風(fēng)、咯血、衄血均有良好療效，并可用于復(fù)方治療多種相關(guān)疾病。目前對(duì)該植物的組織培養(yǎng)、野生轉(zhuǎn)家種的栽培多有報(bào)道，對(duì)其化學(xué)成份的研究，國內(nèi)外也有部分報(bào)道。但是對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)的品質(zhì)研究、臨床上以明確指標(biāo)確定其藥用價(jià)值，對(duì)其劑型及工藝的研究，毒理學(xué)、藥效學(xué)研究、有效部位的研究，尚無相關(guān)報(bào)道。本課題針對(duì)養(yǎng)心草具有良好的

21、民間用藥基礎(chǔ)及極具潛力的藥用資源的現(xiàn)狀，對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)的藥用價(jià)值研究及三類新藥的基礎(chǔ)研究。首先從降血脂方面對(duì)其治療心臟病的功能進(jìn)行臨床指標(biāo)確證。并對(duì)其劑型工藝進(jìn)行研究，在毒理學(xué)、藥效學(xué)研究的基礎(chǔ)上，尋找其有效藥用部位或成分。為申報(bào)新藥打下基礎(chǔ)。將為連城縣的地方經(jīng)濟(jì)創(chuàng)造新的增長點(diǎn)，為開發(fā)山區(qū)資源、脫貧致富開發(fā)新路，具有良好的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)效益。血脂異常(dyslipidemia)是血液脂質(zhì)代謝異常的簡稱，指血中膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)超過正常范圍及(或)高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平低下，通常又稱為高脂血癥(hyperlipidemia)。血脂異常在動(dòng)脈

22、粥樣硬化(AS)的發(fā)生發(fā)展及其引起的心血管事件中起非常重要的作用，被認(rèn)為是AS和冠心病（CHD）發(fā)病的重要脂類危險(xiǎn)因素1,2。隨著我國老齡化社會(huì)的到來，人民生活水平的提高，膳食結(jié)構(gòu)的改變及體力勞動(dòng)的減少，人群血脂水平已呈上升趨勢(shì)，其引發(fā)的AS、CHD和腦血管意外等疾病的發(fā)病率和死亡率已進(jìn)入上升階段。從80年代初至90年代末的心血管主要危險(xiǎn)因素變化趨勢(shì)研究表明，我國各類中年人群高TC現(xiàn)患率在男女均顯示有不斷上升趨勢(shì)，且上升幅度明顯；9組可比性資料顯示，男性平均上升了88%，女性平均上升了65%3。而心腦血管疾病死亡占總死因構(gòu)成已從1957年的12.07上升至1997年的404。國際上著名的多危險(xiǎn)

23、因素干預(yù)實(shí)驗(yàn)（MRFIT）的研究結(jié)果表明5，血清TC若>6.48mmol/L，其5年冠心病死亡率比TC<6.48mmol/L者高2倍以上，因此積極調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂，防治高脂血癥對(duì)于維護(hù)人類健康與長壽具有深遠(yuǎn)的意義。自20世紀(jì)60年代起，多個(gè)國家進(jìn)行了一系列旨在降低膽固醇以期降低冠心病發(fā)生率和死亡率的臨床干預(yù)實(shí)驗(yàn)6，研究顯示有效的降脂治療可穩(wěn)定粥樣斑塊，減少斑塊破裂，防止血栓形成，改善內(nèi)皮功能，降低冠心病及其他心腦血管疾病發(fā)病率和死亡率。降脂治療除改善飲食習(xí)慣和生活方式以外，調(diào)脂西藥主要包括：3-羥基3-甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶抑制劑；煙酸及其衍生物；貝特類；膽酸螯合

24、劑；多不飽和脂肪酸類等等7,8。治療高脂血癥的西藥降脂快速、顯效，但多數(shù)藥物存在不同程度的胃腸道反應(yīng)或肝腎功能損害或肌病、橫紋肌溶解癥等其他的毒副作用，有部分藥物尚未得到長期使用安全性的評(píng)價(jià)，仍有待大規(guī)模的臨床驗(yàn)證8,9。截至目前，尚無完全滿意的能夠糾正脂質(zhì)代謝異常的藥物。祖國醫(yī)學(xué)中多數(shù)學(xué)者認(rèn)為高脂血癥是一個(gè)以“肝、脾、腎三臟之虛為本，痰濁、瘀血為標(biāo)”的病證，在中醫(yī)藥治療上以痰瘀學(xué)說為理論依據(jù)，按本虛標(biāo)實(shí)兩大證施治，當(dāng)以滋養(yǎng)肝腎，調(diào)理脾胃治本，祛痰化濁，活血化瘀治標(biāo)的綜合治療為大法1012。中藥成分復(fù)雜，其降脂能調(diào)節(jié)臟腑功能，增強(qiáng)機(jī)體代謝以澄源治本，又療效較穩(wěn)定持久，且藥源豐富，在預(yù)防或減輕疾

25、病上是多途徑多環(huán)節(jié)的，因此在中醫(yī)藥學(xué)這個(gè)寶庫中尋找療效高、穩(wěn)定持久、毒副作用甚小的中草藥顯得具有十分重要的意義。近十幾年來，中醫(yī)藥學(xué)對(duì)降脂藥物研究十分廣泛。目前國家法定標(biāo)準(zhǔn)明確提出降脂作用，且作用較單一的的單味中藥及有效成分如山楂、月見草油、女貞葉乙醇提取物等和復(fù)方制劑如血脂康、脂必妥等具有良好的調(diào)節(jié)脂質(zhì)紊亂13,14。發(fā)現(xiàn)養(yǎng)心草在福建民間用于治療心血管疾病有良好效果?，F(xiàn)代藥理研究表明養(yǎng)心草對(duì)肝臟脂肪的升高、對(duì)肝臟病理有保護(hù)作用，其含有阿魏酸類似結(jié)構(gòu)的羥基桂皮酸，有降血脂增強(qiáng)代謝呈現(xiàn)“適應(yīng)原”的作用。本課題組通過前期實(shí)驗(yàn)研究已初步證實(shí)養(yǎng)心草膠囊可明顯降低高脂血癥小鼠的膽固醇及甘油三酯水平，為探

26、討?zhàn)B心草膠囊的進(jìn)一步調(diào)節(jié)血脂的作用，本實(shí)驗(yàn)采用高脂乳劑復(fù)制高脂血癥大鼠模型，觀察養(yǎng)心草膠囊對(duì)大鼠血脂的影響，初步探討?zhàn)B心草膠囊調(diào)血脂的作用機(jī)理，并觀察養(yǎng)心草膠囊急性毒性與長期毒性反應(yīng)情況，以評(píng)價(jià)該藥的有效性及安全性，為進(jìn)一步開發(fā)成一種安全、有效的調(diào)脂新藥，提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)對(duì)于我省地道藥材的開發(fā)應(yīng)用和尋找防治高脂血癥的有效新藥具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。第一章： 養(yǎng)心草的藥學(xué)研究進(jìn)展養(yǎng)心草，又名費(fèi)菜、土三七、吐血草等，來源主要為景天科植物費(fèi)菜（Sedum aizoon L. ）和橫根費(fèi)菜（Sedum kamtschaticum Fisch.）的根及全草。前者在我國廣為分布，后者主要分布于我國北方

27、的河北、山西、內(nèi)蒙古等地43。品種考證最早出自救荒本草44，植物名實(shí)圖考也將其作為土三七品種之一加以描述43。功類三七，故名景天三七、土三七、見血散43。我國各地藥物書籍還有記其異名為：八仙草、血山草、馬三七、白三七、胡椒七、曬不干、見血散、活血丹、墻頭三七、回生草、七葉草、九頭三七等。各地植物志上，原植物費(fèi)菜（Sedum aizoon L.）還有稱作六月淋、收丹皮、石菜蘭、九蓮花、長生景天、細(xì)葉費(fèi)菜、乳毛土三七，多花景天三七、還陽草、金不換、豆瓣還陽、六月還陽、漢三七等，橫根費(fèi)菜（Sedum kamtschaticum Fisch.）還有稱作堪察加景天，石板菜、黃菜子、金不換、北景天等71。

28、其中費(fèi)菜（Sedum aizoon L.）為景天三七的主流藥材，在全國許多省份都有流通銷售，橫根費(fèi)菜，又名堪察加景天，只在少數(shù)地區(qū)自產(chǎn)自銷，產(chǎn)量較少43。費(fèi)菜作為地方藥物被江蘇省中藥材標(biāo)準(zhǔn)所收載45。近年來，費(fèi)菜作為一種新興的保健蔬菜得到人們的重視和推廣，并有制養(yǎng)心茶和費(fèi)菜汁、釀酒、烤膠46,47等加工利用。據(jù)網(wǎng)上資料顯示，費(fèi)菜及橫根費(fèi)菜在歐洲、俄羅斯及遠(yuǎn)東地區(qū)、日本、韓國都有栽培及分布，主要作為園藝花卉植物，而費(fèi)菜在日本和韓國有一定民間藥用，我國部分粗加工產(chǎn)品外銷日本等地。但景天三七的深加工及藥物開發(fā)尚處起步，其系統(tǒng)的功效及成分研究尚不多見，本文對(duì)景天三七的藥學(xué)研究進(jìn)行綜述，為景天三七進(jìn)一步

29、研究的開展提供參考。1 臨床及民間使用景天三七味甘、微酸、性平，歸心、肝經(jīng)，有散瘀止血，寧心安神、解毒等功效71。臨床常用于治療多種病癥：1.1 止血活血：具有良好的止血效果，主治吐血、衄血、咯血、便血、尿血、崩漏等。尤其對(duì)各類咯血癥狀有顯著療效，并對(duì)紫斑、外傷出血、跌打損傷有一定療效43。1971年報(bào)道三七糖漿、鮮汁與針劑對(duì)白血病、再障、血小板減少性紫癜、支氣管擴(kuò)張咯血、肺結(jié)合咯血、消化道出血等疾患的出血有效，并認(rèn)為它有升血小板作用，可用于各種血小板減少癥狀并可外用止血48。用新鮮葉片濾汁治療肺癌患者大咯血、鼻衄血20例，出血均一次根治，不再復(fù)發(fā)49。1.2 養(yǎng)血安神：臨床上用于治療神經(jīng)衰弱

30、、失眠、煩燥不安等，多與其它藥物配伍使用43。1.3 解毒消腫：用于瘡疔癰腫、蟲蝎咬傷、燙火傷及婦女白帶等。劉云50報(bào)道了他用民間驗(yàn)方“景天三七鮮葉搗爛外敷”治療蜂螫五十例，均獲痊愈，認(rèn)為有良好的解毒消腫、止痛作用。鄭長宏報(bào)道51鮮景天三七搗爛后，用醋或酒精調(diào)敷治療患病不同時(shí)間的急性單純性關(guān)節(jié)扭傷180例，獲得良好效果。1.4 防治心臟病、降血壓：在浙江、福建等地稱其為養(yǎng)心草，長期作為菜蔬及藥物用來防治心血管疾病，林金水報(bào)道了民間使用治療風(fēng)濕性心臟病的病例，并認(rèn)為其除可防治心臟病，對(duì)老年人的血管硬化、高血脂、高血壓等病癥也有緩解作用，并提供了用鮮全草燉豬心治癔病的方子52。陳偉超報(bào)道了幾年來采

31、用景天三七鮮草治療老年性中風(fēng)，中風(fēng)患者服藥后可在24小時(shí)至48小時(shí)內(nèi)恢復(fù)知覺，認(rèn)為本品有明顯的促進(jìn)血液循環(huán)、化瘀壓降作用53。有人解釋為費(fèi)菜味酸，性平，酸能滋陰養(yǎng)血，故能治心血耗損的心悸怔忡（心律失常，陣發(fā)性心動(dòng)過速）；酸還能入肝，養(yǎng)肝陰，性平不燥，所以有平肝潛陽治療高血壓的功效。并舉例蜂蜜水調(diào)服鮮費(fèi)菜治高血壓，心煩面紅者的處方54。1.5 其它用途：民間認(rèn)為可強(qiáng)壯身體，治療虛弱等43。2 藥理學(xué)研究 1974年國外藥理研究翻譯報(bào)道，費(fèi)菜的浸劑在對(duì)家兔和蛙進(jìn)行的試驗(yàn)中，有加速血液凝固，收縮血管和興奮心臟的作用，費(fèi)菜的提取液還有鎮(zhèn)靜和降壓作用，并能減低苯丙胺的毒性和擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈血管的作用55。

32、以費(fèi)菜制得的景天三七注射液（水提醇沉法制得），景天三七白色結(jié)晶注射液（可能為有機(jī)酸）給小鼠（腹腔）、兔（靜脈）注射，可使血凝時(shí)間（毛細(xì)管法）縮短27%和54%，糖漿給兔灌胃也能縮短血凝時(shí)間（60%）及出血時(shí)間（37%）56。3 生藥學(xué)研究31原植物形態(tài)費(fèi)菜在地理分布上從北到南跨幅極大，饒廣遠(yuǎn)指出費(fèi)菜在這屬植物中形態(tài)變異最大，特別是在葉形、葉齒和莖有無分枝上，都是適應(yīng)不同生存環(huán)境的結(jié)果，認(rèn)為植物在喜好的環(huán)境下常能長出腋生枝條，莖的生長點(diǎn)遭破壞也會(huì)分枝所以他將多花景天（Sedum floriferum）和興安景天（Sedum hsinganicum）都作為費(fèi)菜的異名處理57。謝宗萬在論著58中講述

33、土三七的品種時(shí)，包括了費(fèi)菜和橫根費(fèi)菜，并以兩者的原植物作了比較描述，差別主要體現(xiàn)在是否常綠過冬，根莖形態(tài)，葉形，花色及有無花梗，果色及地理分布上。32顯微組織烏克蘭學(xué)者ILYINSKA 對(duì)景天屬的費(fèi)菜（Sedum aizoon L.）、橫根費(fèi)菜（Sedum kamtschaticum Fisch.）及Sedum hybridum L.的莖和葉作了解剖學(xué)的研究報(bào)道59，認(rèn)為解剖學(xué)上的差別和外形上的差別息息相關(guān)，前兩者在解剖學(xué)特征上更相似，第三種更獨(dú)立，這一觀察支持了它們現(xiàn)存的分類學(xué)上的位置，作者還描述了每一種不同于其它的特征，其中費(fèi)菜葉表皮有變型異細(xì)胞（amoebic idioblasts），在

34、葉肉細(xì)胞、莖的基本皮層組織及中柱中央均無含鞣質(zhì)的細(xì)胞；橫根費(fèi)菜的葉中，葉肉細(xì)胞、上皮細(xì)胞珠狀加厚的垂周壁均略有差別，莖表皮所有的細(xì)胞均含鞣質(zhì)。程艷芹等人60對(duì)采自湖北神農(nóng)架林區(qū)的費(fèi)菜進(jìn)行了形態(tài)組織學(xué)研究，描述了藥材性狀特征，并對(duì)根、根莖、葉和花的組織構(gòu)造以及解離組織和粉末特征進(jìn)行了研究。鄭艷61在對(duì)12種安徽產(chǎn)的景天屬植物的花粉作的電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)費(fèi)菜的花粉立體形狀為近球形，赤道觀為寬橢圓形，極面觀為深三裂三解形?；ǚ哿４笮?3.36(13.36-13.70)×12.73(12.06-13.24)um. P/E值為1.05。三孔溝，角萌發(fā)孔，溝中央較兩端寬，溝邊緣粗厚，孔呈云霧狀，內(nèi)

35、孔不規(guī)則。外壁兩層，內(nèi)、外層約等厚，厚度，表面具清晰的條網(wǎng)紋飾。韓國的Kim Jeong Hee62也對(duì)包括費(fèi)菜在內(nèi)的20種景天屬的花粉進(jìn)行了電鏡觀察，認(rèn)為該屬花粉變化很大，在不同種甚至在同一標(biāo)本的同一花序上，萌發(fā)孔的數(shù)目和形態(tài)及表面飾紋都可能有多種類型存在。鄭艷在對(duì)景天屬植物葉表皮進(jìn)行電鏡研究63的過程中，認(rèn)為景天屬的葉表皮氣孔為不等細(xì)胞型，氣孔大小、氣孔器分布特征、氣孔密度、表皮毛等種間差異較大；費(fèi)菜氣孔長25.42m,寬5.42m ,長寬比，分布特征是多個(gè)聚集成群，中脈處幾無氣孔分布，氣孔分布密度為m2,氣孔指數(shù)。 33鑒別研究 丁毅等人64采用薄層聚丙烯酰胺等電聚焦電泳方法，分別測(cè)定了

36、費(fèi)菜和輪葉景天不同營養(yǎng)器官的同工酶譜，并根據(jù)電泳后所顯示的酶帶數(shù)計(jì)算出品種間的相似性系數(shù)，分析同為景天科的兩種植物存在的差異及原因，結(jié)果表明：造成這種差異的根本原因在于兩種植物基因間的差異。藥材上，吳維春報(bào)道費(fèi)菜曾在東北一些地區(qū)作為高山紅景天的混淆品種植使用，并作植物和藥材的形態(tài)比較，認(rèn)為種子從外觀上不易區(qū)別，但植物形態(tài)上差異很大，藥材性狀上主要是粗細(xì)及分枝多少的不同65。鮑鋒海等人在對(duì)內(nèi)蒙古赤峰地產(chǎn)柴胡的原植物的調(diào)查及鑒定過程中，發(fā)現(xiàn)有以費(fèi)菜根系摻偽的現(xiàn)象66。34栽培及組織培養(yǎng)1987年，芮和愷等人67就以MS為基本培養(yǎng)基，加BA 2誘導(dǎo)愈傷組織和芽分化，以費(fèi)菜嫩葉產(chǎn)生愈傷組織，最后形成完

37、整植株。羅林會(huì)等人也以去葉后只帶一個(gè)節(jié)的嫩枝莖段，誘導(dǎo)芽后生成小苗的方法，實(shí)現(xiàn)了離體快速繁殖68。安鐵生報(bào)道,景天三七野生轉(zhuǎn)家種栽培技術(shù)及開發(fā)研究通過鑒定，并通過對(duì)不同部位、不同扦插期、不同基質(zhì)、不同生長激素的處理，后又對(duì)生長密度、肥料、不同采收期和加工方法的試驗(yàn)，得到了4個(gè)高產(chǎn)品種及總結(jié)出整套栽培加工技術(shù)69。4 化學(xué)成分krasnov 1971年發(fā)現(xiàn)費(fèi)菜根含齊墩果酸、-谷甾醇、熊果酸和熊果苷43，1973年用光譜法對(duì)景天屬的一些植物中的熊果苷作了測(cè)定70。費(fèi)菜的地上部分中含有葡萄糖、果糖、蔗糖和2種7碳糖，并且用同位素觀察其中芳香物質(zhì)生成過程中發(fā)現(xiàn)景天庚糖，并認(rèn)為可能含生物堿55。Kras

38、nov于1977年對(duì)景天屬中生物堿作了研究，發(fā)現(xiàn)了費(fèi)菜中有消旋-甲基異石榴皮堿、左旋景天寧和消旋景天胺71。Gnedkov 對(duì)景天科一些種類包括費(fèi)菜的化學(xué)成份比較時(shí)，發(fā)現(xiàn)Sedum屬的10個(gè)種中有檸檬酸、蘋果酸、琥珀酸和酢漿草酸，并有槲皮酮和Kaempferol72。Revina對(duì)生長在托木斯克的景天屬植物生物特性和化學(xué)成份研究發(fā)現(xiàn)包括費(fèi)菜在內(nèi)的三種植物地上和地下部分均含復(fù)雜酚類成分，有機(jī)酸和多元酚的含量在開花時(shí)最高73。1996年波蘭學(xué)者M(jìn)aria W對(duì)費(fèi)菜的地上部分的多元酚成份作了系統(tǒng)研究，從分離出沒食子酸、沒食子酸甲酯、槲皮酮、槲皮苷、楊梅黃酮、楊梅苷和新的?；S酮類成分： 槲皮酮-3-

39、(2-沒食子?；?鼠李糖甙。以化學(xué)和光譜的方法測(cè)定了這些化合物的結(jié)構(gòu)。并對(duì)香豆素和酚酸類成份作了色譜研究74。 橫根費(fèi)菜中，Zapesvchnaya 發(fā)現(xiàn)了楊梅素-3-葡萄糖苷、楊梅素-3-半乳糖苷、楊梅素-3-O-D-（6”-O-沒食子酰基）-葡萄糖苷和楊梅素-3-O-D-（6”-O-沒食子?；?半乳糖苷43。 Gill Stanislaw發(fā)現(xiàn)其中有熊果苷和氫醌75。 KimJeong Hee等人對(duì)亞洲景天屬包括橫根費(fèi)菜在內(nèi)的三個(gè)組植物葉的生物堿進(jìn)行研究，在橫根費(fèi)菜葉中未發(fā)現(xiàn)生物堿76。此外，Shnyakina對(duì)十六種Sedum屬中酚性成分檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)楊梅酮及苷和槲皮苷是包括兩者在內(nèi)的Aiz

40、oon組的優(yōu)勢(shì)成分77。 此外，費(fèi)菜每百克嫩莖葉含水分87g,蛋白質(zhì)，脂肪，碳水化合物8g，熱量千焦耳，粗纖維,灰分，鈣315mg，磷39mg，鐵3.2mg,胡蘿卜素2.54mg,維生素B10.05mg,維生素B2，維生素PP0.9mg,維生素C90mg.尤其含鈣量很高，因此費(fèi)菜嫩莖葉作菜有一定的營養(yǎng)價(jià)值82。5 制劑及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究宋金斌等人通過景天三七栽培品和野生品比較熱空氣殺青后干燥、自然干燥、硫黃熏蒸后干燥以及熱水浸燙后干燥等加工方法，以藥材樣品的水溶性浸出物、醇溶性浸出物、總生物堿及薄層色譜等的分析比較，認(rèn)為相同加工方法的栽培品和野生品藥材質(zhì)量無顯著差，擴(kuò)大了可用藥源，但不同加工方法對(duì)

41、質(zhì)量有一定影響，并認(rèn)為不宜用硫黃熏蒸和熱水浸燙殺青的方法73。 陳華珍等以蘆丁為對(duì)照品，用分光光度法分別測(cè)定了費(fèi)菜中不同器官中的總黃酮含量，結(jié)論是含量高低依次為：老葉、嫩葉、花和莖；并用聚酰胺片對(duì)藥材中槲皮素進(jìn)行了薄層層析的鑒別72。 費(fèi)菜作為藥材收入江蘇省中藥材標(biāo)準(zhǔn)。制劑有景天三七糖漿及養(yǎng)心片。景天三七糖漿曾收載于77版藥典一部，現(xiàn)部頒標(biāo)準(zhǔn)中收載，為單味景天三七帶根全草的糖漿制劑，以沒食子酸為對(duì)照品，氯仿：醋酸乙酯：甲醇：甲酸（2：1：0.6:0.7）為展開劑進(jìn)行薄層鑒別。養(yǎng)心片為景天三七為主，加上枸杞子、珍珠母、蜂皇漿的提取浸膏壓制的片劑，收入浙江省藥品標(biāo)準(zhǔn)。郭素華以槲皮素為對(duì)照品，用分光

42、光度法對(duì)自制養(yǎng)心草膠囊進(jìn)行了總黃酮的含量測(cè)定，檢測(cè)波長430nm,樣品經(jīng)70%乙醇回流提取，正丁醇萃取，定容，顯色后測(cè)定。槲皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍112g，相關(guān)系數(shù)r為0.998，加樣回收率為98.58%,并用正交設(shè)計(jì)，研究養(yǎng)心草的最佳工藝條件31。 景天三七是一個(gè)藥食兩用的藥物，在民間有很廣泛的應(yīng)用基礎(chǔ)，它對(duì)心血管方面的作用近些年在民間被普遍注意，并被認(rèn)為可以降血脂和降血壓，在現(xiàn)在心血管類疾病日趨增加的今天，這個(gè)過去被認(rèn)為是止血良藥的草藥，開發(fā)其成為心血管方面的藥物以及其它保健類產(chǎn)品，具有良好的市場(chǎng)前景。本文綜述為進(jìn)一步研究景天三七提供依據(jù)。希望此文能拋磚引玉，興起更多對(duì)它的觀注和研究，使其能

43、為造福人類作出新的貢獻(xiàn)。第二章：養(yǎng)心草中槲皮素成分的HPLC-MS/MS分析養(yǎng)心草，國內(nèi)研究尚無其有效成分的相關(guān)報(bào)道，國外文獻(xiàn)中，從波蘭產(chǎn)的同種植物中分離出含槲皮素等的黃酮類成分和其它酚酸類成分。槲皮素具有多種生理活性。其中降低血壓、增強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力、減少毛細(xì)血管脆性、降血脂、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流量等活性，對(duì)冠心病及高血壓患者有輔助治療作用。為了進(jìn)一步開發(fā)養(yǎng)心草的藥用價(jià)值，選取控制質(zhì)量的指標(biāo)性成分，為了確定閩產(chǎn)養(yǎng)心草中是否含有槲皮素，我們采用柱色譜分離，高效液相色譜質(zhì)譜法進(jìn)行驗(yàn)證。一、 養(yǎng)心草中槲皮素成分的分析1 儀器與試劑儀器： Waters LC-MS/MS分析儀； 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（R

44、E52-99DLSB5/2型） 上海亞榮生化儀器廠藥品與試劑 槲皮素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)00819304） 養(yǎng)心草（福建連城蘭花公司提供，經(jīng)本院中藥鑒定教研室車蘇容老師鑒定，品種定為Sedum aizoon L.） 甲醇為色譜純；石油醚，乙酸乙酯，乙醇等試劑均是分析純。2 實(shí)驗(yàn)方法液相色譜條件：色譜柱：Symmetry，×150mm，3m；流動(dòng)相：甲酸，乙腈，梯度洗脫。質(zhì)譜條件：儀器：Quattro Premier三重四級(jí)桿串聯(lián)譜儀；電離方式：ESI選項(xiàng)性正離子檢測(cè)；掃描方式：Full Scan，Daughter Scan（全程掃描，子離子掃描）2.3 供試品溶液的制

45、備將養(yǎng)心草藥材剪碎用95乙醇回流次，兩次。合并濃縮，烘干硅膠伴樣裝硅膠柱，石油醚和乙酸乙酯梯度洗脫得到石油醚：乙酸乙酯（5：5）部分過聚酰胺柱，分別用水，40，70乙醇洗脫，70部分即為供試品溶液。3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 在本文所建立的色譜方法中，槲皮素和其他雜質(zhì)成分分離度高，再加上選擇性正離子檢測(cè)的專屬性和靈敏度過，使得分析結(jié)果的準(zhǔn)確度，精密度和檢測(cè)限得以保證。測(cè)得槲皮素對(duì)照品（A）,養(yǎng)心草提取樣品（B）的典型色譜見圖10。槲皮素的保留時(shí)間是3.06min，m/z303.4，相應(yīng)的柱效理論塔板大于5000。A 槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品的總離子流圖（TIC）B:養(yǎng)心草供試品總離子流圖（TIC）圖10 槲皮素標(biāo)

46、準(zhǔn)品和養(yǎng)心草供試品的總離子流圖3.2 測(cè)得槲皮素對(duì)照品（A）在保留時(shí)間為3.05和供試品（B）保留時(shí)間為3.06相對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜圖（見圖11）。圖9 槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品和養(yǎng)心草供試品對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜圖2 結(jié)論AB圖11 槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品和養(yǎng)心草供試品對(duì)應(yīng)峰的質(zhì)譜圖4 結(jié)論標(biāo)準(zhǔn)品（A）中槲皮素和供試品（B）對(duì)應(yīng)峰MS譜圖產(chǎn)生6個(gè)主要的特征性碎片離子m/z285、273、239、229、211（見圖2），m/z303.4為槲皮素的M+H峰。配合離子掃描的數(shù)據(jù)，驗(yàn)證了樣品中含有槲皮素存在。第三章：養(yǎng)心草的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 養(yǎng)心草為我省民間使用藥物，又名土三七。藥用全草，具活血化瘀、止血之功效。臨床用于治療跌打損傷、勞傷、吐

47、血、便血、外傷出血等癥。近年來，該植物在我省民間防治心臟病方面廣泛應(yīng)用，被用于降血脂、降血壓及其它相關(guān)心臟疾病，并被稱為“救心草”或“救心菜”。為進(jìn)一步開發(fā)利用該藥用資源，我們從顯微，鑒別，含量測(cè)定幾個(gè)方面對(duì)其進(jìn)行研究，從而確定養(yǎng)心草的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。1實(shí)驗(yàn)儀器與材料實(shí)驗(yàn)儀器LEICA旋轉(zhuǎn)石蠟切片機(jī)；尼康E200三目顯微鏡；尼康Coolpix5100數(shù)碼相機(jī)。尼康SUMSING顯微描繪器。島津SPD-10A VP高效液相色譜儀SPD-10A VP 紫外檢測(cè)器，CMB-102色譜工作站（島津），微孔濾m）1.2 實(shí)驗(yàn)材料槲皮素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)00819904，純度為99.88）養(yǎng)心

48、草（原植物采自福建連城梅花山栽培品種，移栽本校藥圃，標(biāo)本保存在福建中醫(yī)學(xué)院標(biāo)本室。干燥藥材為帶根全草，由福建連城朋口蘭花有限公司提供）。2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果21藥材性狀描述取養(yǎng)心草全草藥材，對(duì)形狀、大小、色澤、表面特征、質(zhì)地、及氣味等性狀進(jìn)行描述。本品為帶根莖及根的全草，葉極易脫落而不見。根莖粗短膨大不分枝，直徑約2-3cm-1cm,粗細(xì)不一，表面棕有褐色表皮，下部易脫落露出灰黃色內(nèi)表面，莖節(jié)上具有明顯葉片脫落后的痕跡。質(zhì)堅(jiān)脆，易折斷，上半部斷面中空。葉多皺縮成線條狀，灰綠色至褐綠色，易脫落，展開后，葉片長披針，頂端鈍尖，基部楔形，葉上半部邊緣具有鋸齒。氣微味淡，泡水后略帶油香氣。22顯微鑒別22

49、1組織構(gòu)造觀察：取新鮮全草，對(duì)根中部、莖下部木栓化部位及莖中上部未木栓化部位、葉片前端寬闊處中段及楔形基部中段作橫切面的徒手切片及石蠟永久切片，采用顯微攝影后透視描繪墨線圖及用顯微描繪器描繪。2211 根的橫切面木栓層由數(shù)列棕黃色細(xì)胞組成，木栓細(xì)胞切向延長，常有部分脫落。皮層較寬廣，約占橫切面直徑的1/2，由十幾列圓形、類圓形或橢圓形細(xì)胞組成，壁薄，排列疏松。形成層明顯，韌皮部約占直徑的1/4，在于木質(zhì)部的外方排列成環(huán)，篩管群成群散在。木質(zhì)部約占直徑的1/4，全部木化，由導(dǎo)管和木薄壁細(xì)胞組成。圖1 養(yǎng)心草根橫切面簡圖（×20）1木栓層 2側(cè)根跡 3皮層 4韌皮部5 木質(zhì)部2212根莖

50、橫切面木栓層由數(shù)列棕黃色細(xì)胞組成，木栓細(xì)胞切向延長，常有部分脫落。皮層約占橫切面直徑的1/3，由十幾列圓形、類圓形或橢圓形細(xì)胞組成，壁薄，排列疏松。形成層明顯成環(huán)。韌皮部成環(huán)，篩管群散在于形成層外方。木質(zhì)部束約有10-13個(gè)，排列成環(huán)，導(dǎo)管群呈T字型排列成U字型或W字型環(huán)列，髓位于根莖橫切面的最內(nèi)方，約占橫切面直徑的1/3，由類圓形或圓形薄壁細(xì)胞排列而成，細(xì)胞大小不一，排列疏松。圖2養(yǎng)心草根莖橫切面簡圖（×20）1木栓層 2皮層 3韌皮部4形成層 5導(dǎo)管群 6髓2213莖橫切面橫切面略成五邊形。最外層為一層切向延長的橢圓形表皮細(xì)胞，外表面角質(zhì)化增厚。表皮下2-3層細(xì)胞較小，細(xì)胞間角質(zhì)

51、化增厚。皮層寬約占直徑的1/2，內(nèi)皮層明顯可見，形成層成環(huán)，約成五邊形，維管束10至13個(gè)成環(huán)狀排列。中部髓寬廣，多為類圓形的薄壁細(xì)胞，排列疏松。圖3 養(yǎng)心草莖橫切面簡圖（×5）1表皮 2皮層 3內(nèi)皮層 4韌皮部5木質(zhì)部 6髓 7木質(zhì)部2213葉片橫切面觀察上下表皮細(xì)胞各一列，細(xì)胞呈類圓形或圓形，排列緊密，大小不一，細(xì)胞壁角質(zhì)化增厚，上下表皮均具氣孔。葉肉細(xì)胞圓形、橢圓形或不規(guī)則型，排列疏松，無柵欄組織與海綿組織的分化。主脈僅有一個(gè)維管束，維管束外韌型，木質(zhì)部位于上方；韌皮部位于下方，篩管成群分布形成半月形。葉片中部橫切，上表面平坦，下表面主脈處明顯向下凸出；葉片基部橫切，主脈處的上

52、表面略向下凹陷，下表面明顯向下凸出。圖4 養(yǎng)心草葉橫切面簡圖A葉片中部橫切 B葉片基部橫切1上表皮 2葉肉組織 3維管束 4下表皮222 藥材粉末及組織解離觀察莖的粉末中導(dǎo)管多為螺紋導(dǎo)管和環(huán)紋導(dǎo)管, 直徑15.045.0微米，根莖和根的粉末中尚可見少量孔紋導(dǎo)管和具緣紋孔導(dǎo)管。木纖維呈淡黃色，兩端梭形或漸尖，長85.0165.0微米，直徑25.055.0微米，壁厚7.510.0微米，有的纖維表面可見人字形或點(diǎn)狀紋孔。木栓細(xì)胞多角形緊密排列，略成裂瓦狀，細(xì)胞壁木栓化加厚，大小不一，有的內(nèi)含有紅棕色物質(zhì)。尚可見角質(zhì)化加厚的表皮細(xì)胞，垂周壁呈波狀不均勻加厚。圖5養(yǎng)心草粉末圖（×1000）1導(dǎo)

53、管 2木栓細(xì)胞 3表皮厚壁細(xì)胞 4纖維23 養(yǎng)心草藥材粉末中槲皮素的薄層鑒別 供試品溶液的制備：取養(yǎng)心草藥材粉末，放置具塞三角瓶中，加甲醇5ml，密塞，振搖10min，放置10min后過濾，得到樣品液。對(duì)照品溶液的制備：取槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇使成1ml含1mg的對(duì)照品溶液。薄層層析：將上述兩種溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲酸（8：2：1）為展開劑15，展距11cm，取出晾干，噴以三氯化鋁溶液，于105ºC烘10min后置紫外燈365nm處檢視，供試品溶液在對(duì)照品槲皮素相應(yīng)的位置有顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)（有干擾色），見圖6。 圖6 甲醇提取液的薄層色譜圖 圖7 柱層

54、析后的薄層色譜圖 注：1藥材樣品液 3槲皮素對(duì)照品液 注：2藥材樣品液 3槲皮素對(duì)照品液硅膠柱分離后的薄層鑒別精密秤取養(yǎng)心草藥材粉末3g，分別置于索氏提取器中，加100ml乙醚回流至無色，棄去乙醚液，藥渣揮干乙醚，再加70%乙醇100ml，加熱回流至無色，提取液濃縮至干，加70%的乙醇溶解，定量轉(zhuǎn)移至50ml的容量瓶，70%乙醇定容，得到粗提液；精密移取10ml至蒸發(fā)皿中，揮干乙醇，加水溶解，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗，加正丁醇20ml、15ml、15ml依次萃取三次，合并萃取液，揮干正丁醇，加少量甲醇溶解，用1g硅膠吸附，烘干后得到樣品粉末。濕法上柱，先以甲苯50ml洗脫，再以甲苯：乙酸乙酯（8：2

55、）50ml洗脫，洗脫液均棄掉，最后以甲苯：乙酸乙酯：甲酸（體積比為8：2：1）洗脫，先棄去20ml，再收集15ml洗脫液，得樣品液，將樣品液和對(duì)照品溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲酸（體積比為8：2：1）為展開劑15，展距11cm，取出晾干，噴以三氯化鋁溶液，于105ºC烘10min后置紫外燈365nm處檢視，供試品溶液在對(duì)照品槲皮素相應(yīng)的位置有顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)（有干擾色），見圖7。23 含量測(cè)定2. 31實(shí)驗(yàn)條件2. 311色譜條件色譜柱：SHIM-PACK VP C18（250mm×，10m）流動(dòng)相：甲醇0.4磷酸（55：45）；min-1；檢測(cè)波長

56、：370nm；進(jìn)樣量：20L。2. 312用二極管矩陣檢測(cè)器分析了槲皮素對(duì)照品峰及養(yǎng)心草中所測(cè)成分相應(yīng)色譜峰的紫外光譜，結(jié)果紫外光譜基本一致，均在370nm處有一最大吸收。2. 32 對(duì)照品溶液的配制精密稱取對(duì)照品3.04mg，置50ml容量瓶中，加入gmL-1的對(duì)照品溶液。2. 33 供試品溶液的配制精密稱取養(yǎng)心草藥材粉末1g，置索氏提取器中，加100mL甲醇加熱回流至無色，回收甲醇至40mL，將提取液轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，定容，搖勻。精密吸取20mL，加入10mL20的鹽酸溶液，10mL甲醇水解1h，冷卻，轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜過濾（m），即得。2. 34 養(yǎng)心草藥材水解時(shí)間的確定養(yǎng)心草生藥材經(jīng)干燥粉碎后，精密稱取2g，置索氏提取器中，加150mL甲醇加熱回流至無色，回收甲醇至約90mL，將提取液轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，定容，搖勻，作為總樣儲(chǔ)備液。從總樣儲(chǔ)備液中精密吸取20mL樣品液，共3份，加入10mL20的鹽酸溶液，10mL甲醇分別水解，A：0.5h；B1.0h；C1.5h。冷卻，將水解液轉(zhuǎn)移至5