四川農(nóng)業(yè)大學(xué)歷年生物化學(xué)博士考題解答

1、生物化學(xué)歷屆博士考題1 名詞解釋：（1） Rnase /ribozyme：Rnase：核糖核酸酶，即水解核糖核酸的酶，是一種蛋白質(zhì)； ribozyme：核糖酶，某些RNA分子具有酶活性，1982年Cech等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)四膜蟲的rRNA分子在沒有任何蛋白質(zhì)酶的存在下，能切除自身的內(nèi)含子，使兩個(gè)外顯子拼接起來變成成熟的rRNA分子，證明RNA分子具有酶活性。為區(qū)別傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)酶，對(duì)這種具有催化活性的RNA成為ribozyme。（2） 別構(gòu)酶：酶分子的非催化部位與某些化合物可逆地非共價(jià)結(jié)合后發(fā)生構(gòu)象改變，進(jìn)而改變酶的活性狀態(tài)，稱為酶的別構(gòu)調(diào)節(jié)。具有這種調(diào)節(jié)作用的酶稱為別構(gòu)酶。（3） 抗體酶：抗體是專一于

2、抗原分子，有催化活性的一類具有特殊生物學(xué)功能的蛋白質(zhì)，它由抗原分子促進(jìn)而大量產(chǎn)生，并與抗原分子間有結(jié)合專一性，這種專一性和酶與底物間結(jié)合的專一性非常相似。因而，人們?cè)O(shè)想是否可以認(rèn)為抗原分子能促使機(jī)體產(chǎn)生大量的新酶，并模擬酶與底物的過渡態(tài)結(jié)構(gòu)合成一些類似物（稱半抗原，hapten）對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫，誘導(dǎo)出具有相應(yīng)酶活性的“抗體酶”。（4） 拓?fù)洚悩?gòu)酶：可以改變DNA拓?fù)洚悩?gòu)體的L值（連環(huán)數(shù)）的酶，稱拓?fù)洚悩?gòu)酶。拓?fù)洚悩?gòu)酶有兩類，拓?fù)洚悩?gòu)酶使雙超螺旋DNA轉(zhuǎn)變成松弛形環(huán)狀DNA，每一次催化作用可使L值增加1，反應(yīng)不需能量；拓?fù)洚悩?gòu)酶相反，可使松弛形環(huán)狀DNA轉(zhuǎn)變成超螺旋DNA，每一次催化作用使L值減

3、少2，由ATP供應(yīng)能量。（5） 同工酶：指催化相同的化學(xué)反應(yīng)，但其蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和免疫性能等方面都存在明顯差異的一組酶。（6） 原級(jí)同工酶：多基因座或復(fù)等位基因編碼的一組酶。（7） 寡聚酶：兩個(gè)或兩個(gè)以上亞基組成的酶，稱為寡聚酶。這些亞基可以是相同的，也可以是不同的。（8） Km：酶反應(yīng)速率達(dá)到最大反應(yīng)速率一半時(shí)的底物濃度。單位：mol/L。（9） Tm：加熱變性使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)失去一半時(shí)的溫度稱為該DNA的熔點(diǎn)或熔解溫度，用Tm表示。（10） Na+，K+-ATPase：存在于脂膜上，由一個(gè)跨膜的催化亞單位亞基和與其結(jié)合的一個(gè)糖蛋白亞基組成。在膜上形成22四聚體。起著Na+、K+

4、交換泵的作用。（11） 生物酶工程：生物酶工程是酶學(xué)和以DNA重組技術(shù)為主的現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物，因此，亦可稱為高級(jí)酶工程。主要包括3個(gè)方面內(nèi)容：用基因工程技術(shù)大量生產(chǎn)酶（克隆酶）；對(duì)酶基因進(jìn)行修飾，產(chǎn)生遺傳修飾酶（突變酶）；設(shè)計(jì)新酶基因，合成自然界不曾有的新酶。（12） 化學(xué)酶工程：稱初級(jí)酶工程，指天然酶、化學(xué)修飾酶、固定化酶以及人工模擬酶的研究應(yīng)用。（13） 親和標(biāo)記法：根據(jù)酶與底物特異結(jié)合的性質(zhì)，設(shè)計(jì)或合成一種含有反應(yīng)基團(tuán)的底物類似物作為活性部位基團(tuán)的標(biāo)記試劑。這種試劑象底物一樣進(jìn)入活性部位，接近結(jié)合位點(diǎn)，并以其活潑的化學(xué)基團(tuán)與活性部位的某一基團(tuán)共價(jià)結(jié)合，而指示出酶活性部位的特

5、征。（14） 定位誘變法：針對(duì)一些結(jié)構(gòu)資料比較齊全的酶，進(jìn)一步通過單誘變（改變一個(gè)氨基酸殘基）、雙誘變（改變兩個(gè)氨基酸殘基）或多誘變（系統(tǒng)地改變幾個(gè)相關(guān)的氨基酸殘基）。對(duì)所得到的誘變酶進(jìn)行系統(tǒng)的動(dòng)力學(xué)分析、x-射線衍射分析，并與野生型酶對(duì)比，來判斷被誘變氨基酸殘基在結(jié)合底物、催化底物反應(yīng)中所起的作用及機(jī)理。（15） 透析、超過濾、鹽析：透析指蛋白質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，使蛋白質(zhì)和其它小分子物質(zhì)如無機(jī)鹽、單糖等分開；超過濾指利用壓力或離心力，強(qiáng)行使水和其它小分子物質(zhì)通過半透膜，蛋白質(zhì)被留在膜上，以達(dá)到脫鹽和濃縮的目的；鹽析指在蛋白質(zhì)溶液中加入大量中性鹽，使蛋白質(zhì)脫去水層而聚集沉淀。（16） 專一

6、性不可逆抑制劑：分Ks型和Kcat型。Ks型又稱親和標(biāo)記型抑制劑。（17） Kcat型不可逆抑制劑：與底物結(jié)構(gòu)類似，但分子中還有潛伏的反應(yīng)基團(tuán)。當(dāng)它與酶結(jié)合后，其潛伏的反應(yīng)基團(tuán)被酶催化而活化，并立即與酶活性中心某基團(tuán)呈不可逆結(jié)合，使酶遭受抑制。此類抑制劑亦稱酶的自殺性底物。（18） 非專一性不可逆抑制劑：抑制劑作用于酶的一類或幾類基團(tuán)，這些基團(tuán)中包含了必需基團(tuán)，引起酶失活。（19） 酶標(biāo)免疫分析：酶標(biāo)免疫分析（enzyme immunoassly EIA）是將酶作為標(biāo)記物質(zhì)，使之和抗原（或抗體）結(jié)合形成酶與抗原（或抗體）復(fù)合物，然后再根據(jù)待測(cè)抗體（或抗原）與復(fù)合物專一且定量的結(jié)合關(guān)系，通過測(cè)定

7、待測(cè)抗體（或抗原）結(jié)合的標(biāo)記酶活力，從而計(jì)算出抗原或抗體的量。（20） 酶偶聯(lián)分析法：某些酶反應(yīng)的產(chǎn)物不易測(cè)定時(shí)，可用過量、高度專一的偶聯(lián)工具酶使被測(cè)酶反應(yīng)能繼續(xù)進(jìn)行到某一可直接、連續(xù)、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確測(cè)定階段。該方法的關(guān)鍵是偶聯(lián)工具酶應(yīng)高純度、專一且過量，以保證被測(cè)反應(yīng)速度是總反應(yīng)系統(tǒng)中速度限制因子，且和酶濃度間是線性關(guān)系。（21） 生物傳感器：生物傳感器由兩部分組成，一是作為信息供體的生物學(xué)識(shí)別體系（利用酶，微生物，抗原或抗體，經(jīng)載體固定化編制成的單個(gè)或一組識(shí)別單元），二是由電、光或熱的信息轉(zhuǎn)換器（電極、分光光度計(jì)、熒光光度計(jì)、熱敏電阻或光學(xué)纖維等）構(gòu)成的生物識(shí)別體系。前者專一地識(shí)別基質(zhì)并給出特

8、定信息（生成新的化學(xué)物質(zhì)，或光、電、熱等物理量的改變），后者感覺到上述變化并測(cè)出其大小，再換算成原來物質(zhì)的量或濃度。 （22） 競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用：是最常見的一種抑制作用。抑制劑和底物競(jìng)爭(zhēng)酶的結(jié)合部位，從而影響了底物與酶的正常結(jié)合。因?yàn)槊傅幕钚圆课徊荒芡瑫r(shí)既與底物結(jié)合又與抑制劑結(jié)合，因而在底物和抑制劑之間產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)，形成一定的平衡關(guān)系。大多數(shù)競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的結(jié)構(gòu)與底物結(jié)構(gòu)類似，因此能與酶的活性部位結(jié)合，與酶形成可逆的EI復(fù)合物，但EI不能分解成產(chǎn)物P，酶反應(yīng)速率下降。其抑制程度取決于底物及抑制劑的相對(duì)濃度，這種抑制作用可以通過增加底物濃度而解除。（23） 反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用：酶只有與底物結(jié)合后，才能與抑

9、制劑結(jié)合。反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用常見于多底物反應(yīng)中，而在單底物反應(yīng)中比較少見。（24） 非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用：這類抑制作用的特點(diǎn)是底物和抑制劑同時(shí)和酶結(jié)合，兩者沒有競(jìng)爭(zhēng)作用。酶與抑制劑結(jié)合后，還可以與底物結(jié)合；酶與底物結(jié)合后，還可以與抑制劑結(jié)合。但是中間的三元復(fù)合物不能進(jìn)一步分解為產(chǎn)物，因此酶活力降低。（25） 沉降系數(shù)：?jiǎn)挝浑x心場(chǎng)的沉降速度是個(gè)定值，稱沉降系數(shù)，或沉降常數(shù)，用s表示。（26） 生糖氨基酸/生酮氨基酸：凡能形成丙酮酸、-酮戊二酸、琥珀酸和草酰乙酸的氨基酸都稱為生糖氨基酸；有些氨基酸（Phe、Tyr、Lys、Leu、Trp）在分解過程中轉(zhuǎn)變?yōu)橐阴Ｒ宜?CoA，而乙酰乙酸-CoA在動(dòng)物肝臟中

10、可以轉(zhuǎn)變?yōu)閮?nèi)乙酰乙酸和-羥丁酸，這5種氨基酸稱為生酮氨基酸。（27） EAA：必需氨基酸，凡是機(jī)體不能自己合成，必需由外界獲取的氨基酸，稱為必需氨基酸。（28） HGP：該計(jì)劃是美國科學(xué)家在1985年率先提出，旨在闡明人類基因組DNA所具有的3×109個(gè)核苷酸的序列，發(fā)現(xiàn)所有的人類基因并闡明其在染色體上的位置，破譯人類的全部遺傳信息，使得人類第一次在分子水平上全面地認(rèn)識(shí)自我。（29） PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。模仿體內(nèi)DNA的復(fù)制過程，首先使DNA變性，兩條鏈解開；然后使引物模板退火，二者堿基配對(duì)；DNA聚合酶隨即以4種dNTP為底物，在引物的引導(dǎo)下合成與模板互補(bǔ)的DNA新鏈。重復(fù)此過

11、程，DNA以指數(shù)方式擴(kuò)增。該技術(shù)可用于擴(kuò)增任意DNA片段，只要設(shè)計(jì)出片段的兩端引物。（30） 超二級(jí)結(jié)構(gòu)：在蛋白質(zhì)分子中，特別是球狀蛋白質(zhì)中，由若干相鄰的二級(jí)結(jié)構(gòu)單元（即螺旋、折疊片和轉(zhuǎn)角等）彼此相互作用組合在一起，形成有規(guī)則、在空間上能辨認(rèn)的二級(jí)結(jié)構(gòu)組合體，充當(dāng)三級(jí)結(jié)構(gòu)的構(gòu)件單元，稱超二級(jí)結(jié)構(gòu)。類型：卷曲-螺旋；單元；X單元；-迂回；回形拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。（31） 結(jié)構(gòu)域：對(duì)于較大的蛋白質(zhì)分子或亞基，多肽鏈往往由兩個(gè)或兩個(gè)以上相對(duì)獨(dú)立的三維實(shí)體締合而成三級(jí)結(jié)構(gòu)，這種相對(duì)獨(dú)立的三維實(shí)體稱結(jié)構(gòu)域。類型：-螺旋結(jié)構(gòu)域；-折疊結(jié)構(gòu)域；+結(jié)構(gòu)域；無規(guī)則卷曲和-回折結(jié)構(gòu)域。（32） 抗原和抗體：當(dāng)外源性物質(zhì)，如

12、蛋白質(zhì)、毒素、糖蛋白、脂蛋白、核酸、多糖、顆粒（細(xì)菌、細(xì)胞、病毒）進(jìn)入人或動(dòng)物體內(nèi)時(shí)，機(jī)體的免疫系統(tǒng)便產(chǎn)生相應(yīng)的免疫球蛋白（immune globin），并與之結(jié)合，以消除異物的毒害。此反應(yīng)稱為免疫反應(yīng)，此異物便是抗原，此球蛋白便是抗體。（33） 多克隆抗體/單克隆抗體：多克隆抗體是由多個(gè)不同的B淋巴細(xì)胞應(yīng)答一個(gè)抗原，因此，多克隆抗體是識(shí)別一個(gè)蛋白質(zhì)（抗原）的不同部分（表位）的多種抗體的混合物；單克隆抗體是由生長在細(xì)胞培養(yǎng)物中的同一B細(xì)胞的群體（一個(gè)克隆）合成并分泌的。這些抗體是均一的，所有的抗體識(shí)別同一的表位。（34） 朊病毒：是一種不含核酸的傳染性蛋白質(zhì)分子，能通過自身的構(gòu)象變化，并傳遞到

13、其它分子引起同樣的變化而致病。（35） 主動(dòng)運(yùn)輸：物質(zhì)從低濃度一側(cè)通過膜運(yùn)送到高濃度一側(cè)，即逆濃度梯度的方向跨膜運(yùn)送的過程稱主動(dòng)運(yùn)輸 。在該過程中G0。（36） 被動(dòng)運(yùn)送：物質(zhì)從高濃度一側(cè)通過膜運(yùn)送到低濃度一側(cè)，即順濃度梯度的方向跨膜運(yùn)送的過程稱被動(dòng)運(yùn)輸。在該過程中G0。（37） 分子伴侶：Lasky于1978年首先提出分子伴侶（mulecular chaperone）的概念，這是一類可以介導(dǎo)蛋白質(zhì)正確折疊與裝配，但其本身并不構(gòu)成被介導(dǎo)的蛋白質(zhì)組成部分的一類蛋白因子，在原核生物和真核生物中廣泛存在。（38） 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)：生物細(xì)胞中進(jìn)行著復(fù)雜的新陳代謝過程，其中包括物質(zhì)代謝和能量代謝。隨著生命

14、科學(xué)的發(fā)展，揭示出生物細(xì)胞還存在著另一種特殊的代謝過程，它傳遞著環(huán)境變化的信息，調(diào)節(jié)和控制著物質(zhì)與能量代謝以及生理反應(yīng)與生長發(fā)育，這一體系稱為細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)。（39） 受體：是細(xì)胞表面或在細(xì)胞組分中的一種天然分子，可以識(shí)別并特異地與有生物活性的化學(xué)信號(hào)分子（配體）結(jié)合，從而激活或啟動(dòng)一系列生物化學(xué)反應(yīng)，最后導(dǎo)致該信號(hào)物質(zhì)特定的生物效應(yīng)。受體的特點(diǎn)：受體與配體結(jié)合具有特異性、親和性、飽和性。受體的類別：胞內(nèi)受體、胞外受體。（40） 標(biāo)記配體法檢測(cè)受體：用化學(xué)或酶學(xué)方法合成一種標(biāo)記配體，將其加入含有受體的樣品（細(xì)胞或細(xì)胞膜）中，使標(biāo)記配體和受體結(jié)合平衡后再測(cè)定結(jié)合或游離的標(biāo)記配體數(shù)量，由此得出受

15、體的濃度和解離常數(shù)。（41） G蛋白：是一種與膜受體偶聯(lián)的異三聚體結(jié)合蛋白，由、三個(gè)亞基組成，充當(dāng)細(xì)胞膜上受體和靶酶之間的信號(hào)傳遞體。（42） 分子克隆技術(shù)獲得微量受體：從細(xì)胞中提取所有mRNA（其中含有能正常表達(dá)所需受體蛋白的mRNA），逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，將其重組入載體質(zhì)粒，繼而讓其轉(zhuǎn)染缺乏受體的培養(yǎng)細(xì)胞群，其中少數(shù)細(xì)胞可能含有能編碼受體所需的cDNA，并表達(dá)成表面受體。（43） 限制性內(nèi)切酶：原核生物中存在著一類能認(rèn)識(shí)外源DNA雙螺旋中4-6個(gè)堿基對(duì)所組成的特異序列（這些特異序列都具有回文結(jié)構(gòu)），并在此序列的某位點(diǎn)水解DNA雙螺旋鏈，這類酶稱作限制性內(nèi)切酶。（44） 限制性內(nèi)切酶譜：將染色

16、體或染色體片段用選定的限制性內(nèi)切酶處理，通過電泳將酶切片段分離，并根據(jù)泳動(dòng)距離推算其分子量（泳動(dòng)距離與分子量的對(duì)數(shù)成反比），再依次排列即構(gòu)成染色體片段的限制性內(nèi)切酶譜。（45） 后基因組計(jì)劃的提出：功能基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、環(huán)境基因組學(xué)、癌腫基因組解剖學(xué)計(jì)劃。（46） HGP作圖：人類基因組的DNA序列分布于22條常染色體的2條性染色體上，染色體不能直接測(cè)序。必須將整個(gè)基因組一步步由粗到細(xì)地進(jìn)行有序的劃分，最終得到可以用于測(cè)序的重疊度最小的連續(xù)克隆體系，該過程稱之為作圖。（47） 遺傳圖：通過計(jì)算連鎖的遺傳標(biāo)志之間的重組頻率，確定它們的相對(duì)距離，一般用厘摩（cM，即再次減數(shù)分裂的重組頻率為1%

17、）來表示。（48） 全基因鳥槍法：Dr.Venter提出一個(gè)大膽的設(shè)想：將人類基因組的DNA用機(jī)械方法隨機(jī)打斷后測(cè)序，然后再進(jìn)行組裝。其戰(zhàn)略構(gòu)想正好和人類基因組計(jì)劃的戰(zhàn)略相反，即首先測(cè)序，然后才是在測(cè)序的基礎(chǔ)上作圖。（49） 基因文庫和cDNA文庫：應(yīng)用DNA重組技術(shù)，可以很容易地將各種生物體從比較簡(jiǎn)單的生物（病毒、細(xì)菌）到十分復(fù)雜的真核生物的全部基因組的遺傳信息，貯存在可以長期保存的穩(wěn)定重組體中，以備需要時(shí)應(yīng)用。好象將文獻(xiàn)資料貯存于圖書館一樣，所以稱其為genomic library。RNA病毒的基因組是RNA，必須將RNA先轉(zhuǎn)錄成cDNA（complemental DNA），再按基因文庫的

18、方法建立cDNA文庫；真核細(xì)胞基因組結(jié)構(gòu)大多數(shù)是不連續(xù)的，也需要分離出的mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再建立文庫，稱其為cDNA文庫。（50） RFLP：限制性片段長度多態(tài)性，由限制性內(nèi)切酶把很大的DNA分子降解成許多長短不同的較小片段，其數(shù)目和長度反映了限制性內(nèi)切酶的切點(diǎn)在DNA分子上的分布，它能作為某DNA或含這種DNA生物所特有的“指紋”，不同個(gè)體的等位基因之間堿基代換、重排、插入、缺失等都會(huì)引起這種“指紋”的多態(tài)性。對(duì)于復(fù)雜的真核基因，要檢測(cè)限制性片段長度多態(tài)性必須借助于DNA分子雜交。（51） RAPD：隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA，在PCR技術(shù)基礎(chǔ)上采用隨機(jī)核苷酸序列為引物（9-10bp）擴(kuò)增基

19、因組的隨機(jī)片段，用凝膠電泳來觀察擴(kuò)增片段的多態(tài)性，獲得特異分子標(biāo)記。（52） AFLP：擴(kuò)增片段長度多態(tài)性，用特定引物選擇性地?cái)U(kuò)增基因組限制性酶切片段，再用凝膠電泳分離來觀察多態(tài)性，可看作是PCR和RFLP技術(shù)相結(jié)合產(chǎn)生的一種新技術(shù)，多態(tài)性強(qiáng)、穩(wěn)定性能好。（53） MS和SNP：微衛(wèi)星和單個(gè)核苷酸的多態(tài)性，MS是一類由幾個(gè)重復(fù)單位組成，長度小于100bp的DNA序列，該重復(fù)單位有很高的變異性，因而顯示出高度的長度多態(tài)性。SNP是由一個(gè)核苷酸組成的重復(fù)單位，亦可顯出高度的多態(tài)性，被稱為第三代的多態(tài)性標(biāo)志，其意義已超出了遺傳作圖的范圍，而成為研究基因組多樣性和識(shí)別、定位疾病相關(guān)基因的一種新手段。（

20、54） 信號(hào)肽：一段氨基酸序列，一般由10-40個(gè)氨基酸殘基組成，中部為長約10-15個(gè)氨基酸殘基組成的疏水片段，前端為帶正電荷的堿性氨基酸殘基，后端則為富含丙氨酸的片段，也是信號(hào)肽酶的水解部位。疏水片段很容易形成-螺旋結(jié)構(gòu)，后端片段較易形成-折疊。信號(hào)肽與蛋白質(zhì)的跨膜（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜）運(yùn)輸密切相關(guān)。（55） 導(dǎo)肽：蛋白質(zhì)N-末端的一段氨基酸序列，對(duì)線粒體蛋白質(zhì)的跨膜運(yùn)送具有導(dǎo)向和識(shí)別功能。帶正電荷的氨基酸較豐富，不含或基本不含帶負(fù)電荷的酸性氨基酸，羥基氨基酸含量比較高，含有兩親（既有親水又有疏水部分）的-螺旋結(jié)構(gòu)傾向。（56） 單順反子/多順反子：一條鏈上只有一個(gè)編碼區(qū)的mRNA稱為單順反子mRN

21、A，含有兩個(gè)以上編碼區(qū)的mRNA稱為多順反子，真核生物mRNA都是單順反子。（57） 解偶聯(lián)劑：這類試劑使電子傳遞和ATP形成兩個(gè)過程分離，失掉它們的緊密聯(lián)系，它只抑制ATP的形成過程，不抑制電子傳遞過程，使電子傳遞所產(chǎn)生的自由能都變?yōu)闊崮?。解偶?lián)試劑的作用只抑制氧化磷酸化的ATP形成，對(duì)底物水平的磷酸化沒有影響。（58） 氧化磷酸化抑制劑：這類試劑的作用是既抑制氧的利用又抑制ATP的形成，但不直接抑制電子傳遞鏈上載體的作用。（59） 肽平面：氨基酸的肽鍵是一個(gè)共振雜化體，共振的后果是肽鍵具有部分雙鍵性質(zhì)，不能繞鍵自由旋轉(zhuǎn)；主鏈肽基成為剛性平面，稱酰胺平面或肽平面，平面內(nèi)CO與N-H呈反式排列

22、；各原子間有固定的鍵角和鍵長。肽鏈主鏈上只有碳原子連接的兩個(gè)鍵，C一N和C一C是純的單鍵，能自由旋轉(zhuǎn)；-碳是兩個(gè)相鄰酰胺平面的連接點(diǎn)，酰胺平面雖然是剛性的，但酰胺平面之間的位置可以任意取向。（60） 第一信使/第二信使：蛋白質(zhì)、多肽類激素以及前列腺素首先與靶細(xì)胞質(zhì)膜上的特異受體結(jié)合，從而改變質(zhì)膜內(nèi)側(cè)腺苷酸環(huán)化酶的活性。腺苷酸環(huán)化酶催化ATP轉(zhuǎn)變?yōu)閏AMP，cAMP攜帶著激素的信息完成激素所產(chǎn)生的各種生理效應(yīng)，起著信息的傳遞和放大作用。激素稱為第一信息，cAMP稱為第二信使。第二信使成員逐漸增多，如：cGMP，肌醇三磷酸，二酰甘油，鈣離子。（61） SOS修復(fù)：SOS反應(yīng)是細(xì)胞DNA受到損傷或復(fù)

23、制系統(tǒng)受到抑制的緊急情況下，為求得生存而出現(xiàn)的應(yīng)急效應(yīng)。SOS反應(yīng)誘導(dǎo)的修復(fù)系統(tǒng)包括避免差錯(cuò)的修復(fù)和易產(chǎn)生差錯(cuò)的修復(fù)即錯(cuò)配修復(fù)。直接修復(fù)、切除修復(fù)和重組修復(fù)能夠識(shí)別DNA的損傷或錯(cuò)配堿基而加以消除，在它們的修復(fù)過程中并不明顯引入錯(cuò)配堿基，因此屬于避免差錯(cuò)的修復(fù)。SOS反應(yīng)能誘導(dǎo)切除修復(fù)和重組修復(fù)中某關(guān)鍵酶和蛋白質(zhì)的產(chǎn)生，使這些酶和蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的含量升高，從而加強(qiáng)切除修復(fù)和重組修復(fù)的能力。此外，SOS反應(yīng)還能誘導(dǎo)產(chǎn)生缺乏校對(duì)功能的DNA聚合酶，它能在DNA損傷部位進(jìn)行復(fù)制而避免了死亡，可是卻帶來了高的變異率。（62） 核酸的分子雜交：將不同來源的DNA放在試管里，經(jīng)熱變性后，慢慢冷卻，讓其復(fù)性

24、。若這些異源DNA之間在某些區(qū)域有相同的序列，則在復(fù)性時(shí)，會(huì)產(chǎn)生雜交DNA分子。DNA與互補(bǔ)的RNA之間也可能發(fā)生雜交。（63） 化學(xué)滲透學(xué)說：該假說由英國生物化學(xué)家Peber提出的。他認(rèn)為電子傳遞的結(jié)果將H+離子從線粒體內(nèi)膜基質(zhì)“泵”到膜外液體中，于是形成了一個(gè)跨內(nèi)膜的H+離子梯度，這梯度中所含有的滲透能正是促使ATP生成所需的能，已經(jīng)有越來越多的事實(shí)支持這一假說，例如，（1）直至現(xiàn)在并沒有發(fā)現(xiàn)任何一種介于電子傳遞和ATP形成的高能中間物；（2）氧化磷酸化作用的進(jìn)行需有完整的線粒體內(nèi)膜存在；（3）線粒體內(nèi)膜對(duì)H+、OH-、K+、CL-等離子都是不通透的；（4）破壞H+濃度梯度的形成都必然破壞

25、氧化磷酸化作用的進(jìn)行；（5）線粒體電子傳遞所形成的電子流能夠從線粒體內(nèi)膜逐出H+離子。所有這些事實(shí)都能從化學(xué)滲透假說得到解釋。電子傳遞鏈?zhǔn)且籋+離子泵，使H+離子從基質(zhì)排到內(nèi)膜外液體中，于是在膜內(nèi)外液相之間產(chǎn)生了H+離子梯度。在內(nèi)膜外面的H+離子濃度比膜內(nèi)部高，也就是說包含一種勢(shì)能，由電子傳遞“泵”出的H+離子，為H+濃度梯度所驅(qū)使，通過在FoFlATP酶分子上的特殊通道又流回線粒體基質(zhì)。當(dāng)H+離子通過FoFlATP酶流回線粒體內(nèi)膜基質(zhì)時(shí)，釋放出自由能的反應(yīng)和ATP的合成反應(yīng)相偶聯(lián)。在這里不需要有任何高能中間體存在，起作用的正是跨膜的H+離子梯度?；瘜W(xué)滲透假說需要線粒體膜或亞線粒體囊泡的完整性

26、，膜不完整則不能形成跨膜H+梯度。（64） 內(nèi)含子/外顯子：將斷裂基因中經(jīng)轉(zhuǎn)錄被除去的序列稱為內(nèi)含子；在成熟RNA產(chǎn)物中出現(xiàn)的序列稱為外顯子。（65） 同源蛋白質(zhì)：一個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在不同發(fā)育階段、分化細(xì)胞和生理狀態(tài)下，通過不同的拼接方式，可以得到不同的mRNA和翻譯產(chǎn)物，稱為選擇性拼接，所產(chǎn)生的多個(gè)蛋白質(zhì)即為同源蛋白質(zhì)。（66） 轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)化：轉(zhuǎn)導(dǎo)是通過噬菌體將細(xì)菌基因從供體轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞的過程。轉(zhuǎn)化指細(xì)菌品系由于吸收了外源DNA而發(fā)生遺傳性狀的改變現(xiàn)象。（67） 轉(zhuǎn)座子：是一種可以由染色體的一個(gè)位置轉(zhuǎn)移到另外位置的遺傳因子，也就是一段可以發(fā)生轉(zhuǎn)座的 DNA。（68） 反義RNA：轉(zhuǎn)座酶的啟動(dòng)

27、部位有兩個(gè)啟動(dòng)子，其一轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座酶mRNA，另一反方向轉(zhuǎn)錄的RNA，稱反義RNA。而者5末端重疊40個(gè)堿基，可以形成堿基配對(duì)。2、簡(jiǎn)答題（1）米氏方程的局限性 a其動(dòng)力學(xué)只適合于單底物反應(yīng)過程，對(duì)多底物多產(chǎn)物反應(yīng)不適用。b對(duì)多酶體系催化的過程不能作很好的解釋。c不適合于變構(gòu)酶催化的反應(yīng)。d不能直接用來求Vmax。（2）Km的意義及應(yīng)用 a計(jì)算反應(yīng)速度v達(dá)到Vmax的百分率，確定v達(dá)到Vmax的S；b判斷酶和底物親和力的大小，尋找天然底物，判斷在細(xì)胞中酶催化反應(yīng)的主要方向；c尋找連鎖反應(yīng)的限速步驟；d作為判斷同工酶的依據(jù)。（3）Ks型不可逆抑制劑特點(diǎn)： 具有與底物相似的可以與酶結(jié)合的基團(tuán)，同時(shí)還具

28、有一個(gè)能與活性部位的其它功能基團(tuán)反應(yīng)的活性基團(tuán)。（4）不同類型可逆抑制作用的米氏方程常數(shù)類型方程式VmaxKm無抑制劑VmaxKm競(jìng)爭(zhēng)性抑制不變?cè)黾臃歉?jìng)爭(zhēng)性抑制減小不變反競(jìng)爭(zhēng)性抑制減小減?。?）朊病毒研究的意義 朊病毒的發(fā)病和傳播機(jī)制發(fā)現(xiàn)的巨大理論意義在于表明翻譯后水平蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象變化可在蛋白質(zhì)致病中起關(guān)鍵作用，使人們對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系的認(rèn)識(shí)進(jìn)入一個(gè)新的階段。從更深遠(yuǎn)的意義上看，這也許暗示著分子生物學(xué)的視線將從核酸轉(zhuǎn)回到蛋白質(zhì)，因?yàn)檫@種新的理論顯然是對(duì)分子生物學(xué)中關(guān)于核酸是唯一的遺傳信息載體傳統(tǒng)觀念的一種挑戰(zhàn)。（6）分子伴侶的功能a可穩(wěn)定未折疊或部分折疊的多肽，并防止不適當(dāng)?shù)亩嚯逆渻?nèi)

29、或鏈間相互作用； b.可與天然構(gòu)象的蛋白質(zhì)相互作用以促使寡聚肽蛋白質(zhì)發(fā)生結(jié)構(gòu)重排；c.能識(shí)別并調(diào)節(jié)胞內(nèi)多肽的折疊，因此還具有介導(dǎo)線粒體蛋白質(zhì)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、調(diào)節(jié)信息傳導(dǎo)通路和轉(zhuǎn)錄、復(fù)制，以及微管形成與修復(fù)等功能。（7）Boyer和Walker的工作 美國科學(xué)家Boyer提出旋轉(zhuǎn)催化假說，認(rèn)為ATP合成酶亞基有三種不同的構(gòu)象，一種構(gòu)象有利于ADP和Pi結(jié)合，一種構(gòu)象可使結(jié)合的ADP和Pi合成ATP，第三種構(gòu)象使合成的ATP容易被釋放出來。在ATP合成過程中，三個(gè)亞基通過轉(zhuǎn)動(dòng)，依次進(jìn)行上述三種構(gòu)象的交替變化，所需能量由跨膜H+提供。英國科學(xué)家Walker通過x光衍射獲得高分辯率的牛心線粒體ATP酶晶體的

30、三維結(jié)構(gòu)，證明在ATP酶合成ATP的催化循環(huán)中三個(gè)亞基的確有不同構(gòu)象，從而有力地支持了Boyer的假說。Boyer和Walker共同獲得1997年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。（8）DNA重組的技術(shù)路線 （1）目的基因的獲取；（2）選擇載體；（3）外源DNA與載體連接；（4）重組DNA引入受體；（5）篩選含有重組引的克隆。（9）生物膜主要有哪些生物學(xué)功能？任舉一例闡述膜結(jié)構(gòu)和功能的相互關(guān)系 生物膜的主要功能有能量轉(zhuǎn)換、物質(zhì)運(yùn)輸、信息識(shí)別和傳遞。例如Na+和K+的運(yùn)輸。（10）闡明酶的活性中心的概念。指出可用哪些主要的方法研究酶的活性中心？新技術(shù)“定點(diǎn)突變”是怎樣用于此類研究的？ 通過各種研究證明，酶的特殊催化

31、能力只局限在大分子的一定區(qū)域，也就是說，只有少數(shù)特異的氨基酸殘基參與底物結(jié)合及催化作用。這些特異的氨基酸殘基比較集中的區(qū)域，即與酶活力直接相關(guān)的區(qū)域稱為酶的活性部位或活性中心。主要的研究方法有：X射線衍射法、差示標(biāo)記法、親和標(biāo)記法和定位誘變法。 針對(duì)一些結(jié)構(gòu)資料比較齊全的酶，進(jìn)一步通過單誘變（改變一個(gè)氨基酸殘基）、雙誘變（改變兩個(gè)氨基酸殘基）或多誘變（系統(tǒng)地改變幾個(gè)相關(guān)的氨基酸殘基）。對(duì)所得到的誘變酶進(jìn)行系統(tǒng)的動(dòng)力學(xué)分析、x-射線衍射分析，并與野生型酶對(duì)比，來判斷被誘變氨基酸殘基在結(jié)合底物、催化底物反應(yīng)中所起的作用及機(jī)理。（11）大腸桿菌DNA聚合酶是一種多功能酶，其5/-3/外切酶功能在DN

32、A復(fù)制中的作用是什么 大腸桿菌DNA聚合酶具有5/-3/外切酶活性，它只作用于DNA堿基配對(duì)部分，從5/末端水解下核苷酸或寡核苷酸，因此該酶被認(rèn)為在切除由紫外照射而形成的嘧啶二聚體中起著重要作用。DNA半不連續(xù)合成中岡崎片段5/端RNA引物的切除也有賴于這個(gè)外切酶。（12）PCR技術(shù)與RAPD技術(shù)的區(qū)別和聯(lián)系是什么 PCR技術(shù)：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。模仿體內(nèi)DNA的復(fù)制過程，首先使DNA變性，兩條鏈解開；然后使引物模板退火，二者堿基配對(duì)；DNA聚合酶隨即以4種dNTP為底物，在引物的引導(dǎo)下合成與模板互補(bǔ)的DNA新鏈。重復(fù)此過程，DNA以指數(shù)方式擴(kuò)增。該技術(shù)可用于擴(kuò)增任意DNA 片段，只要設(shè)計(jì)出片段的

33、兩端引物。RAPD技術(shù)：隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA，在PCR技術(shù)基礎(chǔ)上采用隨機(jī)核苷酸序列為引物（9-10bp）擴(kuò)增基因組的隨機(jī)片段，用凝膠電泳來觀察擴(kuò)增片段的多態(tài)性，獲得特異分子標(biāo)記。 區(qū)別是PCR技術(shù)引物是根據(jù)需要設(shè)計(jì)的，RAPD技術(shù)引物是隨機(jī)核苷酸序列。（13）現(xiàn)今所發(fā)現(xiàn)的所有生物催化劑的本質(zhì)都是蛋白質(zhì)。這句話對(duì)否？為什么？不對(duì)，因?yàn)?982年Cech等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)四膜蟲的rRNA分子在沒有任何蛋白質(zhì)酶的存在下，能切除自身的內(nèi)含子，使兩個(gè)外顯子拼接起來變成成熟的rRNA分子，證明RNA分子具有酶活性。為區(qū)別傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)酶，對(duì)這種具有催化活性的RNA成為核糖酶（ribozyme）。（14）據(jù)TM值高低，

34、可以比較DNA分子GC含量高低，為什么？ Tm指加熱變性使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)失去一半時(shí)的溫度稱為該DNA的熔點(diǎn)或熔解溫度。在DNA 分子中，GC形成3個(gè)氫鍵，A與T形成兩個(gè)氫鍵，GC密度大，含GC含量高的DNA分子，其TM值較高，因此據(jù)TM值高低，可以比較DNA分子GC含量高低。（15）從生物能學(xué)觀點(diǎn)，簡(jiǎn)述主動(dòng)運(yùn)輸和被動(dòng)運(yùn)輸?shù)闹饕獏^(qū)別？主動(dòng)運(yùn)輸：物質(zhì)從低濃度一側(cè)通過膜運(yùn)送到高濃度一側(cè)，即逆濃度梯度的方向跨膜運(yùn)送的過程稱主動(dòng)運(yùn)輸。根據(jù)熱力學(xué)第二定律，此過程自由能增加（G0），此過程不能自發(fā)進(jìn)行，必須由外界提供能量，這一過程才能發(fā)生。 被動(dòng)運(yùn)送：物質(zhì)從高濃度一側(cè)通過膜運(yùn)送到低濃度一側(cè)，即順濃度梯度的

35、方向跨膜運(yùn)送的過程稱被動(dòng)運(yùn)輸。根據(jù)熱力學(xué)第二定律，此過程自由能減少（G0，它是一個(gè)不需要提供能量的自發(fā)過程。（16）同工酶產(chǎn)生的原因是什么？用同工酶作遺傳標(biāo)記有什么優(yōu)點(diǎn)？有什么局限性？ 同工酶有多種形式，其產(chǎn)生的原因有多基因決定的酶蛋白由兩條或兩條以上多肽鏈 以非共價(jià)結(jié)合的雜聚體遺傳變遺體（等位基因酶）結(jié)合的或衍生的酶蛋白（與其它基團(tuán)結(jié)合的；由單一多肽鏈衍生的）由單一亞單位組成的多聚體構(gòu)象改變。 用同工酶作遺傳標(biāo)記有的優(yōu)點(diǎn)：同工酶是分子水平的指標(biāo)，按照一個(gè)基因編碼一個(gè)同工酶的理論，可從同工酶的表現(xiàn)型變異直接推測(cè)其基因型的變異，顯然優(yōu)于某些形態(tài)學(xué)的指標(biāo)，后者往往是多個(gè)基因型的綜合表現(xiàn)型；同工酶可

36、用測(cè)定酶活力的方法鑒定，較非酶蛋白質(zhì)分析方便；同工酶比其它指標(biāo)靈敏，可以反映DNA上一個(gè)堿基的微小變異。局限性？（17）什么是遺傳密碼？有何特點(diǎn)？試述一種遺傳密碼破譯的方法。 確定遺傳信息的三聯(lián)體（堿基）密碼，稱遺傳密碼。特點(diǎn)：無標(biāo)點(diǎn)符號(hào)，即兩個(gè)密碼子之間無任何標(biāo)點(diǎn)符號(hào)加以隔開；不重疊性；簡(jiǎn)并性，大多數(shù)氨基酸都具有劑組不同的密碼子。密碼子中第三位堿基的搖擺性，密碼子的專一性由前兩位堿基決定，第三位堿基的重要性不大；有三組密碼子不編碼氨基酸，是多肽鏈的終止密碼子；密碼子是近乎完全通用的。用大腸桿菌無細(xì)胞體系，外加 20種標(biāo)記氨基酸混合物及polyU，經(jīng)保溫反應(yīng)后，發(fā)現(xiàn)在酸不溶性部分中（即多肽中）

37、只有苯丙氨酸的多聚體。顯然polyU起了信使RNA的作用。 所以UUU是編碼丙氨酸的密碼。（18）（21）什么叫受體?有何特征和類別?簡(jiǎn)述一種分離提純的方法原理。 受體：是細(xì)胞表面或在細(xì)胞組分中的一種天然分子，可以識(shí)別并特異地與有生物活性的化學(xué)信號(hào)分子（配體）結(jié)合，從而激活或啟動(dòng)一系列生物化學(xué)反應(yīng)，最后導(dǎo)致該信號(hào)物質(zhì)特定的生物效應(yīng)。受體的特點(diǎn)：受體與配體結(jié)合具有特異性、親和性、飽和性。受體的類別：胞內(nèi)受體、胞外受體。親和技術(shù)提純受體：在含有配體的洗脫柱中，用去垢劑溶解膜蛋白 加洗脫液，從柱中洗去結(jié)合的蛋白，去掉非特異性蛋白 加過量的配體，將受體從固定化的配體上洗下來 洗脫下來的是受體-配體復(fù)（

38、19）簡(jiǎn)述人類基因組計(jì)劃（HGP）概況，結(jié)合自己的專業(yè)，闡述HGP對(duì)生命科學(xué)發(fā)展的重大意義。HGP計(jì)劃是美國科學(xué)家在1985年率先提出，旨在闡明人類基因組DNA所具有的3×109核苷酸的序列，發(fā)現(xiàn)所有的人類基因并闡明其在染色體上的位置，破譯人類的全部遺傳信息，使得人類第一次在分子水平上全面地認(rèn)識(shí)自我。完成人類基因組DNA全序列測(cè)定的意義是十分明顯的，人類對(duì)自己遺傳信息的認(rèn)識(shí)將有益于人類健康、醫(yī)療、制藥、人口、環(huán)境等諸多方面，并且對(duì)生命科學(xué)也將有極大貢獻(xiàn)。中國是在1999年加入的，承擔(dān)了1的測(cè)序任務(wù)。全序列的測(cè)定現(xiàn)已基本完成。一些低等生物的DNA全序列也已陸續(xù)被測(cè)定。生命科學(xué)已經(jīng)進(jìn)入了

39、后小基因組時(shí)代。 在后基因組時(shí)代，科學(xué)家們的研究重心已從揭示基因組DNA的序列轉(zhuǎn)移到在整體水平上對(duì)基因組功能的研究。這種轉(zhuǎn)向的第一個(gè)標(biāo)志就是產(chǎn)生了一門稱為功能基因組學(xué)的新學(xué)科；但是，生物功能是通過蛋白質(zhì)來體現(xiàn)的，蛋白質(zhì)有其自身活動(dòng)規(guī)律，顯然僅僅從基因角度來研究是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。因此，在功能基因組學(xué)的基礎(chǔ)上產(chǎn)生了蛋白質(zhì)組學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)是在整體水平上研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組分及其活動(dòng)規(guī)律的新學(xué)科。“蛋白質(zhì)組”這一概念是于1994年澳大利亞的學(xué)者M(jìn)Wilkins和KWilliams首先提出來的，是指細(xì)胞內(nèi)基因組表達(dá)的所有蛋白質(zhì)。這兩位學(xué)者認(rèn)為，生命科學(xué)的研究重點(diǎn)將轉(zhuǎn)移到在蛋白質(zhì)組水平上揭示細(xì)胞的生命活動(dòng)規(guī)律。

40、人類基因組中編碼蛋白質(zhì)的基因總數(shù)超過3萬，能夠產(chǎn)生蛋白質(zhì)的數(shù)目是基因數(shù)的10倍，通常細(xì)胞內(nèi)只有部分基因表達(dá)，合成的肽鏈需經(jīng)加工修飾才成為有活性的蛋白。所以細(xì)胞基因組的轉(zhuǎn)錄譜，mRNA或cDNA譜并不代表蛋白質(zhì)組。另一方面蛋白質(zhì)的許多性質(zhì)和功能，不僅要在蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)和表達(dá)水平的差異上來認(rèn)識(shí)，而且還必須從蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)、動(dòng)態(tài)變化以及分子間相互作用來加以闡明。自從1997年舉行第一次國際“蛋白質(zhì)組學(xué)”會(huì)議以來，在這個(gè)研究領(lǐng)域內(nèi)基礎(chǔ)研究和實(shí)際應(yīng)用都得到了迅速發(fā)展。 由于生物功能是由結(jié)構(gòu)決定的，功能基因組學(xué)需要從測(cè)定基因產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)人手進(jìn)行研究，因此產(chǎn)生了結(jié)構(gòu)基因組學(xué)這一新的研究領(lǐng)域。結(jié)構(gòu)基因組學(xué)的任

41、務(wù)是系統(tǒng)測(cè)定基因組所代表全部大分子的結(jié)構(gòu)，目前它僅關(guān)注于蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。然而RNA也是基因組產(chǎn)生的重要功能分子。近年來不斷發(fā)現(xiàn)新的RNA功能和新的RNA基因，RNA結(jié)構(gòu)與功能的研究是功能基因組學(xué)的一個(gè)重要方面。與蛋白質(zhì)組學(xué)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)基因組學(xué)相對(duì)應(yīng)，形成了RNA組學(xué)（RNomics）或核糖核酸組學(xué)，以研究細(xì)胞全部功能RNA的結(jié)構(gòu)和作用。RNA結(jié)構(gòu)基因組學(xué)的任務(wù)是研究所有編碼RNA以及與其作用的分子和形成復(fù)合物的結(jié)構(gòu)特征。隨著人類基因組研究的迅速進(jìn)展，生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)也獲得了空前規(guī)模的發(fā)展。據(jù)統(tǒng)計(jì)，信息技術(shù)對(duì)世界經(jīng)濟(jì)的貢獻(xiàn)比率達(dá)到18%，而生物技術(shù)對(duì)世界經(jīng)濟(jì)的推動(dòng)作用將不亞于信息技術(shù)。（20）什么是雙

42、信使信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，試述胞外信息通過該系統(tǒng)在胞內(nèi)得以傳遞的機(jī)制。 激素通過二?；食椋―AG）和肌醇三磷酸（IP3）傳遞信號(hào)的系統(tǒng)，稱雙信使信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)。激素通過結(jié)合到細(xì)胞表面的激素受體上，激活G蛋白，G蛋白開啟磷酸肌醇酶的催化活性，通過導(dǎo)致磷酸肌醇的級(jí)聯(lián)放大而起作用，從而在許多種細(xì)胞種引起廣泛的不同反應(yīng)。在磷酸肌醇酶催化下先產(chǎn)生二酰基甘抽（DAG）和肌醇三磷酸（IP3），例如，蛋白激酶c被磷酸化后，停止合成糖原。DAG進(jìn)一步活化蛋白激酶c，促使靶蛋白質(zhì)中的蘇氨酸殘基與絲氨酸殘基磷酸化，最終改變一系列酶的活性；IP3則打開Ca2+通道，升高細(xì)胞質(zhì)內(nèi)Ca2+濃度，改變鈣調(diào)蛋白和其他的鈣傳感器的構(gòu)象

43、，使之變得更易于與其靶蛋白質(zhì)結(jié)合改變，引起平滑肌收縮等。 （21）1953年Sanger完成了胰島素A和 B鏈的A序列的分析，奠定了蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定的方法基礎(chǔ)，1975年Sanger又建立了DNA序列測(cè)定的快速方法，他前后提出的方法在戰(zhàn)略上有什么不同蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定的戰(zhàn)略原則是將大化小，逐段分析，片段重迭，確定全序。DNA序列測(cè)定的戰(zhàn)略原則是設(shè)法產(chǎn)生帶標(biāo)記的不同長度的成套DNA片段，各帶有標(biāo)記的片段起點(diǎn)相同、終點(diǎn)不同，使DNA鏈中的每個(gè)核苷酸處都有DNA的斷裂或終止，通過PAGE電泳，能夠?qū)⑾嗖钜粋€(gè)核苷酸的DNA片段分開，放射自顯影后，根據(jù)長短排列，根據(jù)特定末端堿基的DNA片段就可讀出待測(cè)

44、DNA的堿基序列。（22）磺胺藥物作為一種抗菌素可抑制微生物生長，對(duì)人體副作用比較小，有機(jī)磷農(nóng)藥不僅可殺死害蟲，對(duì)人也有很大的毒性，為什么？磺胺藥物是可逆抑制劑，在體內(nèi)與對(duì)氨基苯甲酸競(jìng)爭(zhēng)，抑制二氫葉酸合成酶的活性，導(dǎo)致細(xì)菌的生長受到抑制，對(duì)人體副作用比較小。有機(jī)磷農(nóng)藥是不可逆抑制劑。有機(jī)磷化合物能抑制某些蛋白酶及酯酶活力，與酶分子活性部位的絲氨酸羥基共價(jià)結(jié)合，從而使酶失活。這類化合物強(qiáng)烈地抑制對(duì)神經(jīng)傳導(dǎo)有關(guān)的膽堿酯酶活力，使乙酰膽堿不能分解為乙酸和膽堿，引起乙酰膽堿的積累，使一些以乙酰膽堿為傳導(dǎo)介質(zhì)的神經(jīng)系統(tǒng)處于過渡興奮狀態(tài)，引起神經(jīng)中毒癥狀，因此這類有機(jī)磷化合物又稱為神經(jīng)毒劑。（23） 酶裂

45、解蛋白質(zhì)的特點(diǎn)胰蛋白酶裂解Lys和Arg殘基的羧基參與形成的肽健，馬來酸酐（順丁烯二酸酐）保護(hù)Lys不裂解，1，2-環(huán)己二酮保護(hù)Arg不裂解；木瓜蛋白酶裂解Lys和Arg殘基的羧基參與形成的肽健；糜蛋白酶斷裂Phe、Trp、Tyr的羧基端肽??；胃蛋白酶裂解兩端都是疏水氨基酸的肽健，如Phe-Phe； 葡萄球菌蛋白酶裂解Glu和Asp殘基的的羧基的肽??；梭菌蛋白酶裂解Arg殘基的羧基端肽健。（24）（34）穩(wěn)定蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的作用力 氫健、范德華、疏水作用、鹽健、二硫健。（25）蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)形式 螺旋、折疊、轉(zhuǎn)角和凸起、無規(guī)卷曲。（26）蛋白質(zhì)分子構(gòu)象的研究方法 X射線衍射法、紫外差光譜法、熒

46、光光譜法、園二色性法（CD光譜法）、核磁共振光譜法（27）蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定方法 化學(xué)組成測(cè)定最低分子量、滲透壓法、擴(kuò)散系數(shù)法、沉降分析法、凝膠過濾法、SDS聚丙烯胺凝膠電泳法、蛋白質(zhì)的分子形狀。（28）蛋白質(zhì)的分離純化方法 根據(jù)分子大?。ㄍ肝龊纬^濾、密度梯度離心、凝膠過濾）、溶解度差異（等電點(diǎn)沉淀、鹽溶和鹽析、有機(jī)溶劑分離、溫度）、電荷不同（電泳、聚丙烯胺凝膠電泳、毛細(xì)管凝膠電泳、等電聚焦、層析聚焦離子交換層析）、選擇性吸附、親和層析、高效液相層析。（29）可逆抑制劑和不可逆抑制劑的判斷（1 - 無抑制劑 2 -有不可逆抑制劑 3 - 有可逆抑制劑）（同時(shí)加底物、抑制劑和酶） （抑制劑與酶

47、先保溫后再加底物）（30）酶反應(yīng)級(jí)數(shù)的確定 （31）假說 酶和底物：鎖和鑰匙；生物膜運(yùn)輸?shù)臋C(jī)制：構(gòu)像變換學(xué)說；電子傳遞：化學(xué)滲透學(xué)說；（32）酶活性部位的研究方法 酶分子側(cè)鏈的化學(xué)修飾、動(dòng)力學(xué)參數(shù)、X射線晶體結(jié)構(gòu)分析。（33）影響酶催化效率的因素 底物和酶的鄰近效應(yīng)、底物的形變和誘導(dǎo)楔合、酸堿催化、共價(jià)催化、金屬離子催化、多元催化和協(xié)同效應(yīng)、活性部位微環(huán)境的影響。（34）光合磷酸化和氧化磷酸化比較（35）試述誘變育種的分子基礎(chǔ)（36）試述遺傳的分子基礎(chǔ)（37）試述動(dòng)物體內(nèi)糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝的相互聯(lián)系（38）穩(wěn)定同位素示蹤法和放射性同位素示蹤法有什么異同？舉例說明它們?cè)诖x研究中的作用（39）

48、為什么大多數(shù)核苷酸受一些螯合劑如EDTA的抑制（40）已知蛋白質(zhì)有TrpMetAspTrpGlg序列，為了合成一個(gè)12核苷酸長度的探針，用于檢測(cè)該蛋白質(zhì)的gene，因此由上述序列推測(cè)： 該pr的mRNA序列： 該pr的DNA中有義鏈序列： 該pr的DNA中反義鏈序列 12核苷酸長度的探針序列：（51） 葡萄糖為唯一碳源培養(yǎng)大腸桿菌，加入羧基碳原子同位素標(biāo)記的丙酮酸脈沖標(biāo)記10分鐘，然后將收獲細(xì)胞的蛋白質(zhì)用鹽酸水解，通過柱層析分離得到17種AA，寫出這17種AA的三字符號(hào)；有哪三種AA未能分離到？為什么？用茚三酮顯色法定量測(cè)定分離得到的AA含量并測(cè)定其放射性，請(qǐng)指出哪幾種AA放射活性較高，為什么

49、？（52） 試以生物體能量轉(zhuǎn)化機(jī)制來論述生物膜結(jié)構(gòu)與功能的統(tǒng)一性？（53） 今有一蛋白質(zhì)混合物，各組基本性質(zhì)如下：A M=12，000 PI=10 B M=62，000 PI=4C M=28，000 PI=7 D M=9，000 PI=5若不考慮其它因素影響，當(dāng)它們（A）流經(jīng)象DEAE-纖維素這樣的陰離子交換劑，用線性梯度洗脫時(shí)；（B）流經(jīng)Saphadex G-50排阻層析時(shí)，這些蛋白質(zhì)的洗脫順序如何？（54） 原核生手核糖體由30S小亞基50S大亞基組成，但核糖體本身為70S而不是80S，說明理由。（55） 穩(wěn)定性同位素示綜法和放射性同位素示綜法有什么異同？舉例說明它們?cè)诖x研究中的應(yīng)用。（

50、56） 研究核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)有何意義？ （57） 有一種七肽具有神經(jīng)傳導(dǎo)抑制劑的作用，其氨基酸組成為Ala5.Phe1.Lys1。七肽與FDNB反應(yīng)后經(jīng)酸水解，釋放出DNP-Ala。用胰蛋白酶處理產(chǎn)生組成為Ala5.Phe1的四肽和組成為Ala2. Lys1的三肽。與胰凝乳蛋白酶作用則生成游離的Ala和一個(gè)六肽。試推導(dǎo)出該七肽的氨基酸序列。（58） 試述核酸分離純化的基本原理和方法。假如你從一新發(fā)現(xiàn)的病毒中提取了核酸，請(qǐng)用最簡(jiǎn)單的方法確定：（1）它是DNA還是RNA；（2）它是單鏈還是雙鏈？3、問答題（1）試舉例比較蛋白質(zhì)、核酸各自結(jié)構(gòu)與其功能的相互關(guān)系。血紅蛋白由4個(gè)亞基（多肽鏈）組成，每個(gè)亞

51、基都有一個(gè)血紅素基。血紅蛋白以兩種可以相互轉(zhuǎn)化的構(gòu)象態(tài)存在，稱T（緊張態(tài)）和（R松弛）態(tài)。T態(tài)是通過幾個(gè)鹽橋穩(wěn)定的，無氧結(jié)合時(shí)達(dá)到最穩(wěn)定。氧的結(jié)合促進(jìn)T態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)镽態(tài)。 氧與血紅蛋白的結(jié)合是別構(gòu)結(jié)合行為的一個(gè)典型例證。T態(tài)和R態(tài)之間的構(gòu)象變化是由亞基亞基相互作用所介導(dǎo)的，它導(dǎo)致血紅蛋白出現(xiàn)別構(gòu)現(xiàn)象。Hb呈現(xiàn)出3種別構(gòu)效應(yīng)。第一，血紅蛋白的氧結(jié)合曲線是S形的，這意味著氧的結(jié)合是協(xié)同性的。氧與一個(gè)血紅素結(jié)合有助于氧與同一分子中的其他血紅素結(jié)合。第二，H+和CO2促進(jìn)O2從血紅蛋白中釋放，這是生理上的一個(gè)重要效應(yīng)，它提高O2在代謝活躍的組織如肌肉中的釋放。相反地，O2促進(jìn)H+和CO2在肺泡毛細(xì)血管中的

52、釋放。H+、CO2和O2的結(jié)合之間的別構(gòu)聯(lián)系稱為Bohr效應(yīng)。第三，血紅蛋白對(duì)O2的親和力還受2、3一二磷酸甘油酸（BPG）調(diào)節(jié)，BPG是一個(gè)負(fù)電荷密度很高的小分子。BPG能與去氧血紅蛋白結(jié)合，但不能與氧合血紅蛋白結(jié)合。因此，BPG是降低血紅蛋白對(duì)氧的親和力的。 氧的S形曲線結(jié)合，波爾效應(yīng)以及DPG效應(yīng)物的調(diào)節(jié)使得血紅蛋白的輸氧能力達(dá)到最高效應(yīng)。同時(shí)由于能在較窄的氧分壓范圍內(nèi)完成輸氧功能，因此使肌體的氧水平不致有很大的起伏。此外血紅蛋白使肌體內(nèi)的pH也維持在一個(gè)較穩(wěn)定的水平。血紅蛋白的別構(gòu)效應(yīng)充分地反映了它的生物學(xué)適應(yīng)性、結(jié)構(gòu)與功能的高度統(tǒng)一性。tRNA是核酸的一種，其一級(jí)結(jié)構(gòu)為3-5走向的四

53、種核糖核苷酸組成；二級(jí)結(jié)構(gòu)呈三草葉形，由氨基酸臂、二氫尿嘧啶環(huán)、反密碼環(huán)、額外環(huán)和TC 環(huán)組成；三級(jí)結(jié)構(gòu)為倒L形。tRNA的結(jié)構(gòu)決定了其主要功能在蛋白質(zhì)的合成中轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸。氨基酸臂結(jié)合氨基酸，反密碼環(huán)有三個(gè)密碼子，與模板mRNA配對(duì)。氨酰tRNA合成酶被認(rèn)為是結(jié)合在倒L形側(cè)背上。（2）試述G激素蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的作用機(jī)理 G 蛋白是一種與膜受體偶聯(lián)的異三聚體結(jié)合蛋白，由、三個(gè)亞基組成，充當(dāng)細(xì)胞膜上受體和靶酶之間的信號(hào)傳遞體。G激素蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的作用機(jī)理有兩種：一使各種含氮激素作為第一信使與靶細(xì)胞膜中的特異受體結(jié)合，使G蛋白活化，進(jìn)而再使cAMP酶活化，催化ATP形成cAMP，作為第二信使的

54、cAMP經(jīng)一系列的相關(guān)反應(yīng)級(jí)聯(lián)放大，即先激活細(xì)胞內(nèi)的蛋白激酶，再進(jìn)一步誘發(fā)各種功能單位產(chǎn)生相應(yīng)的反應(yīng)，cAMP起著信息的傳遞和放大作用。二是激素通過結(jié)合到細(xì)胞表面的激素受體上，激活G蛋白，G蛋白開啟磷酸肌醇酶的催化活性，通過導(dǎo)致磷酸肌醇的級(jí)聯(lián)放大而起作用，從而在許多種細(xì)胞種引起廣泛的不同反應(yīng)。在磷酸肌醇酶催化下先產(chǎn)生二?；食椋―AG）和肌醇三磷酸（IP3）。DAG進(jìn)一步活化蛋白激酶c，促使靶蛋白質(zhì)中的蘇氨酸殘基與絲氨酸殘基磷酸化，最終改變一系列酶的活性；IP3則打開Ca2+通道，升高細(xì)胞質(zhì)內(nèi)Ca2+濃度，改變鈣調(diào)蛋白和其他的鈣傳感器的構(gòu)象，使之變得更易于與其靶蛋白質(zhì)結(jié)合改變。（3）DNA半保

55、留復(fù)制的機(jī)理是通過哪些重要的實(shí)驗(yàn)證明的？該復(fù)制方式的揭示有何重要意義 1958年Meselson和Stahl利用氮的同位素15N標(biāo)記大腸桿菌DNA，首先證明了DNA的半保留復(fù)制，1963年，Cairns用放射自顯影的方法第一次觀察到完整的正在復(fù)制的大腸桿菌染色體DNA。 DNA的半保留復(fù)制機(jī)制可以說明DNA在代謝上的穩(wěn)定性。經(jīng)過許多代的復(fù)制，DNA的多核苷酸鏈仍可保持完整，并存在于后代而不被分解掉。DNA與細(xì)胞其他成分相比要穩(wěn)定得多，這和它的遺傳功能是相符合的。但是這種穩(wěn)定性是相對(duì)的，DNA在代謝上并不是完全惰性的物質(zhì)。在細(xì)胞內(nèi)外各種物理、化學(xué)和生物因子的作用下，DNA會(huì)發(fā)生損傷，需要修復(fù)；在

56、復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程中DNA也會(huì)有損耗，而必須更新。（4）為什么分子篩層析和SDS-PAGE都可用蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定，其原理有何不同 因?yàn)椴煌牡鞍踪|(zhì)，由于分子量不同，其分子大小、形狀和所帶電荷也不同，因此可以用分子篩層析和SDS-PAGE法測(cè)定其分子量。分子篩層析也稱凝膠過濾法， 其原理是：當(dāng)不同分子大小的蛋白質(zhì)流經(jīng)凝膠層析柱時(shí)，比凝膠孔徑大的分子不能進(jìn)入珠內(nèi)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，而被排阻在凝膠珠之外隨著溶劑在凝膠珠之間的孔隙向下移動(dòng)并最先流出柱外；比網(wǎng)孔小的分子能不同程度地自由出入凝膠珠的內(nèi)外。這樣由于不同大小的分子所經(jīng)的路徑不同而得到分離，大分子物質(zhì)先被洗脫出來，小分子物質(zhì)后被洗脫出來。從凝膠過濾的原理可

57、知，蛋白質(zhì)分子通過凝膠柱的速度并不直接取決于分子的質(zhì)量，而是它的斯托克半徑。如果某種蛋白質(zhì)與一理想的非水化球體具有相同的過柱速度，則認(rèn)為這種蛋白質(zhì)具有與此球體相同的半徑，稱蛋白質(zhì)分子的斯托克半徑。因此利用凝膠過濾法測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)和待測(cè)蛋白質(zhì)必須具有相同的分子形狀（接近球體），否則不能得到比較準(zhǔn)確的結(jié)果，分子形狀為線形的或與凝膠能發(fā)生吸附作用的蛋白質(zhì)，則不能用此方法測(cè)定分子量。SDS-PAGE也稱SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，其原理是：以聚丙烯酰胺為支持物，用SDS將蛋白質(zhì)變性，由于蛋白質(zhì)所帶電荷、形狀和大小不同，在電場(chǎng)作用下其遷移速率也不同，可以根據(jù)這些性質(zhì)測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量。如果在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中加入陰離子去污劑十二烷基硫酸鈉和少量巰基乙醇，則蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率主要取決于它的相對(duì)分子質(zhì)量，而與原來所帶的電荷和分子形狀無