實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)筆記-2

1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是指經(jīng)人工培育的、遺傳背景清楚、對(duì)其攜帶微生物和寄生蟲(chóng)實(shí)行控制、用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)、教學(xué)、檢定及藥品、生物制品生產(chǎn)的動(dòng)物。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物五項(xiàng)基本福利一，提供適當(dāng)?shù)那鍧嶏嬎褪澄?，使?dòng)物不受饑渴之苦二，提供適當(dāng)?shù)臈?chǎng)所，能舒適地休息和睡眠，使動(dòng)物不受困頓不適之苦三，預(yù)防疾病和給患病動(dòng)物及時(shí)診治，使動(dòng)物不受疼痛、傷病之苦四，保證擁有良好的條件和處置（包括安樂(lè)死），使動(dòng)物不受恐懼和精神上的痛苦五，提供足夠的空間、適當(dāng)?shù)脑O(shè)施以及與同類動(dòng)物伙伴在一起，使動(dòng)物能夠自由表達(dá)正常的習(xí)性 “3 Rs”概念Reduction(減少)Replacement(替代)Refinement(優(yōu)化)人源化的小鼠模型：即對(duì)免

2、疫缺陷小鼠品系進(jìn)行人源細(xì)胞移植，在小鼠體內(nèi)重建人的細(xì)胞和組織生物體從外界攝取維持自身生命所必需的物質(zhì)及其消化、吸收和排泄過(guò)程稱為營(yíng)養(yǎng);動(dòng)物自發(fā)地從外界尋求到的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)稱為食物;人類飼喂給動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)稱為飼料;食物或飼料中所包含的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)統(tǒng)稱為營(yíng)養(yǎng)素。動(dòng)物機(jī)體需要的營(yíng)養(yǎng)素50余種，可以概括為七大類：蛋白質(zhì) 脂肪 碳水化合物 礦物質(zhì) 維生素 纖維素和水小鼠營(yíng)養(yǎng)需要的特點(diǎn)： 18-20%的蛋白質(zhì)可滿足需要； 喜食含糖量高的飼料,糖的比重可適當(dāng)大些； 泌乳期喜食含脂類高的飼料； 對(duì)維生素A的過(guò)量很敏感,特別是妊娠小鼠,過(guò)量會(huì)造成胚胎畸形； 對(duì)維生素A和D的需要量較高，應(yīng)注意補(bǔ)充。影響動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)需要

3、的主要因素遺傳和環(huán)境因素不同品種動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)需要明顯不同；各品系間營(yíng)養(yǎng)需要有明顯差異；在隔離或屏障環(huán)境中飼養(yǎng)動(dòng)物其營(yíng)養(yǎng)需要和同品系在普通環(huán)境中飼養(yǎng)動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需要差別明顯大鼠營(yíng)養(yǎng)需要的特點(diǎn)l 18-20%的蛋白質(zhì)即可；l 生長(zhǎng)期的大鼠易發(fā)生脂肪酸缺乏，飼料中必需脂肪酸的需要量應(yīng)占熱能物質(zhì)的1.3；l 對(duì)鎂的需要量較高，應(yīng)注意補(bǔ)充；l 對(duì)營(yíng)養(yǎng)缺乏敏感，易產(chǎn)生營(yíng)養(yǎng)缺乏癥 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料質(zhì)量的一般要求l 各種原料和添加劑的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)應(yīng)采用實(shí)測(cè)值l 營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)均以90%干物質(zhì)為基礎(chǔ)  l 配合飼料應(yīng)混合均勻，新鮮、無(wú)雜質(zhì)、無(wú)異味、無(wú)霉變、無(wú)發(fā)酵、無(wú)蟲(chóng)蛀及鼠咬l 各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料營(yíng)養(yǎng)成分指標(biāo)

4、應(yīng)符合國(guó)標(biāo)要求l 需消毒滅菌飼料，應(yīng)根據(jù)不同消毒滅菌方法，適當(dāng)?shù)靥岣呦鄳?yīng)營(yíng)養(yǎng)成分的含量l 不得摻入抗生素、驅(qū)蟲(chóng)劑、防腐劑、色素、促生長(zhǎng)劑以及激素等藥物及添加劑飼料的消毒：干熱 濕熱 輻照 藥物熏蒸近交系定義: 經(jīng)連續(xù)20代以上的全同胞兄妹交配或親子交配，近交系數(shù)(inbreeding coefficient)達(dá)到99%，品系內(nèi)所有個(gè)體都可追溯到第20代或以后代數(shù)的一對(duì)共同祖先。 近交系數(shù)：群體中某個(gè)體通過(guò)遺傳攜帶兩個(gè)同源等位基因的概率。亞系定義: 由同一個(gè)近交系分離出來(lái)的有不同特性的分支，這些分支間有遺傳差異，稱為該品系的亞系。亞系（Substrain）的形成 在兄妹交配20-40代時(shí)形成的分

5、支；主要原因是殘留雜合（Residual heterozygosity）；某分支與其它分支分開(kāi)繁殖超過(guò)100代。主要原因是突變；發(fā)現(xiàn)一個(gè)分支與其它分支的差異。原因?yàn)闅埩綦s合、突變或遺傳污染（Genetic contamination近交系的主要特點(diǎn)：1基因位點(diǎn)的純合性：近交系動(dòng)物中任何一個(gè)基因位點(diǎn)上純合子的概率高達(dá)99，因而能繁殖出完全一致的純合子，品系內(nèi)個(gè)體相互交配不會(huì)出現(xiàn)性狀分離。采用近交系動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，不會(huì)因?yàn)殡[性基因的暴露而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2、遺傳組成的同源性 品系內(nèi)所有動(dòng)物個(gè)體都可追溯到一對(duì)共同祖先，也就是說(shuō)同一個(gè)品系內(nèi)每只動(dòng)物的個(gè)體在遺傳上都是同源的，基因型完全一致。在同一品系內(nèi)的

6、動(dòng)物個(gè)體間進(jìn)行皮膚或其他組織移植，植入物不會(huì)被當(dāng)作異已而排斥。是組織細(xì)胞和腫瘤移植試驗(yàn)中最為理想的材料。 3、表型的一致性 由于遺傳上的同源性，近交品系內(nèi)個(gè)體在表型上極為相同。近交系表型上的一致性使得使用較少量的動(dòng)物即可達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)的精確程度。4、長(zhǎng)期遺傳的穩(wěn)定性 近交系動(dòng)物雖然在遺傳上并不是絕對(duì)穩(wěn)定不變，但是人為選擇不會(huì)改變其基因型，個(gè)體遺傳變異僅發(fā)生在少量殘留雜合基因作用、基因突變和遺傳污染三種情況下。 5、遺傳特征的可分辨性 近交系一旦培育成功，動(dòng)物群體內(nèi)幾乎不再存在遺傳多態(tài)性，即每個(gè)位點(diǎn)只有一種基因類型，而不會(huì)存在其它的等位基因。6、背景資料的完整性 由于近交系動(dòng)物在培育和保種的過(guò)程中都

7、有詳細(xì)記錄，加之這些動(dòng)物分布廣泛，經(jīng)常使用，已有相當(dāng)數(shù)量的文獻(xiàn)記載著各個(gè)品系的生物學(xué)特征。這些基本數(shù)據(jù)為設(shè)計(jì)新的實(shí)驗(yàn)和解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果提供了便利條件。重組近交系定義：由兩個(gè)近交系雜交后，經(jīng)連續(xù)20代以上兄妹交配育成的近交系.命名：由兩個(gè)親代近交系的縮寫名稱中間加大寫英文字母X命名。重組同類系定義 ：由兩個(gè)近交系雜交后，子代與兩個(gè)親代中的一個(gè)進(jìn)行數(shù)次回交（通常回交2次）而育成的近交系。命名：兩個(gè)親代近交系的縮寫名稱中間加小寫英文字母c同源突變系定義：兩個(gè)近交系，除了一個(gè)指明位點(diǎn)等位基因不同外，其它遺傳基因全部相同的品系。命名：由發(fā)生突變的近交系名稱后加突變基因符號(hào)（用英文斜體印刷體），二者之間以連接

8、號(hào)分開(kāi)，如：DBA/Ha-D。同源導(dǎo)入系定義：通過(guò)雜交、互交（Cross-intercross）或回交等方式將一個(gè)基因?qū)氲浇幌抵?，由此形成的一個(gè)新的近交系與原來(lái)的近交系只在一個(gè)很小的染色體片段上的基因不同，也稱同類系。 命名：由以下三部分組成： a.接受導(dǎo)入近交系縮寫名稱； b.提供導(dǎo)入基因的近交系縮寫名 稱并與a之間用英文句號(hào)分開(kāi)； c.導(dǎo)入基因符號(hào)（英文斜體），與 b之間用連字符分開(kāi)。如：B10.129-H-12b, 表示該同類系背景為C57BL/10,導(dǎo)入基因?yàn)镠-12b,基因提供者為129。封閉群定義： 以非近親交配方式進(jìn)行繁殖生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群,在不從外部引入新個(gè)體的條件下,至少

9、連續(xù)繁殖4代以上,稱為一個(gè)封閉群,或叫遠(yuǎn)交群。命名方法： 封閉群由2-4個(gè)大寫英文字母命名,種群名稱前標(biāo)明保持者的英文縮寫名稱,第一個(gè)字母須大寫,后面字母小寫,一般不超過(guò)4個(gè)字母。保持者名稱與種群名稱之間用冒號(hào)分開(kāi)。封閉群特點(diǎn)：遺傳組成具有很高的雜合性 具有類似于人類群體遺傳異質(zhì)性的遺傳組成具有較強(qiáng)的繁殖力、生活力和抵抗力雜交群定義： 雜交群：由不同品系或種群之間雜交產(chǎn)生的后代。 *雜交一代動(dòng)物（F1代)：兩個(gè)不同近交系雜交所生的第一代動(dòng)物。選擇近交系動(dòng)物繁殖方法的原則是保持近交系動(dòng)物的同基因性及其基因純合性。 近交系動(dòng)物的繁殖可分為基礎(chǔ)群（foundation stock）、血緣擴(kuò)大群（pe

10、digree expansion stock）生產(chǎn)群選擇封閉群動(dòng)物繁殖方法的原則是盡量保持封閉群的動(dòng)物的基因異質(zhì)性及多態(tài)性遺傳監(jiān)測(cè)的目的是為了證實(shí)各品系應(yīng)具有的遺傳特性，以及是否發(fā)生遺傳突變和遺傳污染等，以確保被監(jiān)測(cè)的樣品符合該品系的要求。毛色基因測(cè)試法 生化標(biāo)記基因檢測(cè)法 下頜骨測(cè)定法 皮膚移植法按微生物控制程度分級(jí)n 1.普通級(jí)動(dòng)物 (Conventional Animal, C.V)n 2.清潔級(jí)動(dòng)物 除普通級(jí)動(dòng)物應(yīng)排除的病原體外，不攜帶對(duì)動(dòng)物危害大和對(duì)科學(xué)研究干擾大的病原體。 (Clean Animal,C.L)n 3.無(wú)特殊病原體動(dòng)物簡(jiǎn)稱SPF級(jí)動(dòng)物，除清潔動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶

11、主要潛在感染或條件致病和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原的動(dòng)物。在放射、燒傷等研究中具有特殊的價(jià)值。國(guó)際上公認(rèn)SPF動(dòng)物適用于所有科研實(shí)驗(yàn)，是目前國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。各種疫苗生產(chǎn)所采用的動(dòng)物應(yīng)為SPF級(jí)動(dòng)物。 (Specific Pathogen Free, SPF)n 4.無(wú)菌動(dòng)物 (Germfree Animal, G.F)體內(nèi)不存在任何可檢測(cè)到的微生物及寄生蟲(chóng)。包括悉生動(dòng)物(gnotobiotes animals ，GN)，也稱為已知菌動(dòng)物(Animal with known bacterial flora)，是指動(dòng)物攜帶或人工植入的確定生物體的一類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。這類動(dòng)物一般用于特殊科研性實(shí)驗(yàn)。1

12、形態(tài)學(xué)改變 (1) 消化系統(tǒng)： 無(wú)菌動(dòng)物和普通動(dòng)物外觀和活動(dòng)之間看不出有特別的差異，有時(shí)僅見(jiàn)有體重增加的差別。據(jù)報(bào)道，無(wú)菌動(dòng)物的盲腸(包括內(nèi)容物)的總重量有的可達(dá)到體重的25， (2) 血液循環(huán)系統(tǒng)：心臟相對(duì)變小，白細(xì)胞數(shù)少，且數(shù)量波動(dòng)范圍小，與無(wú)病原體入侵有關(guān)。(3)免疫系統(tǒng)：胸腺網(wǎng)狀上皮細(xì)胞體積較大，胞漿內(nèi)泡狀結(jié)構(gòu)和溶酶體少。無(wú)菌兔胸腺以小淋巴細(xì)胞為主，胸腺和淋巴結(jié)處于功能較不活躍狀態(tài)，脾臟縮小，無(wú)二級(jí)濾泡，網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞功能下降。2. 生理學(xué)改變(1)免疫功能：由于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)、淋巴組織發(fā)育不良，淋巴小結(jié)內(nèi)缺乏生發(fā)中心，產(chǎn)生丙種球蛋白的能力很弱，血清中IgM、IgG水平低，免疫功能處于原始

13、狀態(tài).(2)生長(zhǎng)率：無(wú)菌條件下對(duì)不同種屬影響不同。無(wú)菌禽類生長(zhǎng)率高于同種的普通禽類；無(wú)菌大小鼠與普通鼠差不多；無(wú)菌豚鼠和無(wú)菌兔生長(zhǎng)率比普通者慢，可能因腸內(nèi)無(wú)菌，不能幫助消化纖維素以提供機(jī)體所需要的營(yíng)養(yǎng)所致。(3)生殖： 無(wú)菌條件對(duì)動(dòng)物生殖影響不大。大鼠和小鼠因出生后無(wú)感染，身體較好。其繁殖力高于普通大小鼠；無(wú)菌豚鼠及兔比普通者繁殖力低，可能因盲腸膨大之故。 (4)代謝：血中含氮量少，腸管對(duì)水的吸收率低，代謝周期比普通動(dòng)物長(zhǎng)。(5)營(yíng)養(yǎng)：無(wú)菌動(dòng)物體內(nèi)不能合成維生素B和K，故易產(chǎn)生這兩種維生素的缺乏癥。(6)抗輻射能力：抗輻射能力強(qiáng)，X射線照射無(wú)菌小鼠的存活時(shí)間較長(zhǎng)，普通小鼠常因敗血癥而致死。這是

14、由于受損細(xì)胞的壽命在無(wú)菌小鼠與普通小鼠之間存在差別的緣故。(7)壽命：無(wú)菌動(dòng)物壽命普遍長(zhǎng)于普通動(dòng)物。 檢測(cè)頻率 普通動(dòng)物：每三個(gè)月至少檢測(cè)動(dòng)物一次；清潔動(dòng)物：每三個(gè)月至少檢測(cè)動(dòng)物一次；無(wú)特定病原體動(dòng)物：每三個(gè)月至少檢測(cè)動(dòng)物一次；無(wú)菌動(dòng)物：每年至少檢測(cè)動(dòng)物一次。每24周檢測(cè)一次動(dòng)物糞便標(biāo)本?；虼虬?gene targeting)是根據(jù)DNA同源重組的原理而設(shè)計(jì)的一項(xiàng)技術(shù)。在這一技術(shù)中，體內(nèi)細(xì)胞基因組的某一段DNA序列被視為“靶子”，經(jīng)精巧構(gòu)建的欲導(dǎo)入的外源基因DNA序列被視為“彈頭”，這樣導(dǎo)入的外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞后就不再是隨機(jī)整合而是“彈頭”錨準(zhǔn)“靶子”進(jìn)行準(zhǔn)確的定點(diǎn)整合。通過(guò)DNA定點(diǎn)同源

15、重組，改變基因組中的某一特定基因，從而在生物活體內(nèi)研究此基因的功能。如何使外源基因能定點(diǎn)整合于靶基因上呢?根據(jù)DNA同源重組的原理，導(dǎo)入的外源基因必須和靶基因有一定的同源序列。因此，外源基因?qū)肭氨仨毥?jīng)過(guò)精巧的構(gòu)建，經(jīng)構(gòu)建的外源基因稱為打靶載體(targeting vector)?；虼虬械慕Y(jié)局有如下可能： (1)基因擊入(gene knock-in)在受體細(xì)胞基因組中定點(diǎn)引入一個(gè)完全新的基因。 (2)基因敲除(gene knock-out) 受體細(xì)胞內(nèi)源靶基因被滅活,。 (3)基因替代(gene replacement) 靶基因被導(dǎo)入的外源基因替代，可以是以正?；蛱娲蛔兊膬?nèi)源基因。(二)

16、基因打靶的方法： 進(jìn)行基因打靶要經(jīng)歷以下步驟： （1）構(gòu)建打靶載體?；虼虬械年P(guān)鍵在于構(gòu)建打靶載體。在打靶載體中需要一個(gè)與靶基因同源的DNA片段，這一片段稱為同源重組指導(dǎo)序(homologous recombination directing sequences, HRDS)。外源基因插入這一同源序列之中。長(zhǎng)度可從3kb至15kb。 （2）打靶載體導(dǎo)入受體細(xì)胞(常用胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell，即ES細(xì)胞)?；虼虬兴褂玫氖荏w細(xì)胞一般用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)，ES細(xì)胞是一種多潛能的干細(xì)胞，能在體外傳代而不改變其多潛能性。小鼠胚胎干細(xì)胞是從著床前胚胎(孕3 5天)內(nèi)細(xì)胞群

17、分離的細(xì)胞。1981年由英國(guó)劍橋大學(xué)的Evans和Kaufman首先分離培養(yǎng)成功。1.電穿孔法 2.逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 3.脂質(zhì)體包裝法 4.磷酸鈣沉淀法 正負(fù)選擇法的原理在構(gòu)建打靶載體時(shí)，打靶載體含有一段與靶基因同源的序列，將新霉素抗性基因(neor)插入到該同源序列的第一個(gè)外顯子中作為正選擇標(biāo)（或者是靶基因最關(guān)鍵的外顯子中）； neor可以抵抗G418.在同源序列之外的末端接上單純皰疹病毒胸腺嘧啶激酶(HSVtk)基因序列作為負(fù)選擇標(biāo)志。HSV-tK可以利用GANC而導(dǎo)致細(xì)胞死亡 （3）打靶ES細(xì)胞導(dǎo)入囊胚。 （4）囊胚植入假孕母鼠子宮發(fā)育。同源重組：如果導(dǎo)入的外源基因與靶基因發(fā)生同源重組，外

18、源基因以及neor基因?qū)⒄嫌诎屑?xì)胞基因組的同源序列位點(diǎn)上，而位于同源序列末端外的HSV - tk基因則在重組后丟失，此種情況下標(biāo)志基因只有neor基因表達(dá)，則靶細(xì)胞同時(shí)具有G418和GANC雙重抗性可在選擇性培養(yǎng)基中存活下來(lái)。打靶ES細(xì)胞的鑒定與擴(kuò)增 篩選出G418R/GANCR的細(xì)胞克隆后再用PCR方法進(jìn)一步鑒定，鑒定后的ES細(xì)胞克隆與囊胚體外共孵育或用顯微注射的方法注入囊胚的胚泡中，再將囊胚植入假孕母鼠的子宮中發(fā)育。用基因打靶的方法產(chǎn)生的第一代子鼠為嵌合體(chimera)小鼠，即小鼠由囊胚的細(xì)胞及經(jīng)基因打靶的ES細(xì)胞共同發(fā)育而來(lái)。因此并非小鼠的全部細(xì)胞中都整合有導(dǎo)入的外源基因。為獲得純

19、合子的轉(zhuǎn)基因小鼠，還需要用打靶后出生的雄性小鼠與提供囊胚的正常雌鼠交配，即回交(backcross)?；亟缓蟪錾淖哟笾杏幸吧偷男∈?-/-),即完全不攜帶有外源基因。也有雜合子的小鼠(-/+)。再用雜合子小鼠互交（intercross），從出生的子代鼠中可鑒定、篩選出純合子的基因打靶小鼠。再經(jīng)繁育可建立轉(zhuǎn)基因小鼠品系，其實(shí)驗(yàn)流程見(jiàn)下圖 。(三) 組織特異性基因打靶 應(yīng)用ES細(xì)胞和同源重組原理而發(fā)展起來(lái)的基因打靶技術(shù)使轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究又向前邁進(jìn)了一步，但仍有其局限性。主要問(wèn)題是雖然通過(guò)基因打靶實(shí)現(xiàn)了外源基因在受體細(xì)胞基因組中的定點(diǎn)整合，但這種整合是沒(méi)有組織特異性的，因此尚不能使外源基因僅在

20、特定的組織中表達(dá)。Cre/loxP系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)及應(yīng)用實(shí)現(xiàn)了外源基因的組織特異性表達(dá)。(四)外源基因的時(shí)間可控性表達(dá)： 實(shí)現(xiàn)了組織特異性基因打靶后，導(dǎo)入的外源基因表達(dá)時(shí)間仍是無(wú)法控制的，因而仍無(wú)法確定外源基因的表達(dá)在動(dòng)物發(fā)育不同階段中的作用。另外，由于外源基因表達(dá)的時(shí)間不能控制，有時(shí)可造成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在胚胎期死亡。為了解決這一問(wèn)題，Mentzger等人(1995)用編碼Cre重組酶與人雌激素受體(estrogen receptor,ER)融合蛋白的基因制備了Cre ER轉(zhuǎn)基因小鼠，給這種轉(zhuǎn)基因小鼠注射人雌激素，可誘導(dǎo)Cre ER的大量表達(dá)。再用插入兩個(gè)反向loxP序列之間的基因制備另一種基因打靶小鼠

21、，并使該基因DNA序列與其上游的啟動(dòng)子方向相反，則該基因必須依賴Cre重組酶調(diào)轉(zhuǎn)方向后方能表達(dá)。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是指用實(shí)驗(yàn)的方法將外源基因?qū)朐缙谂咛ゼ?xì)胞，使之整合于細(xì)胞基因組中而建立的動(dòng)物品系。整合的外源基因稱為轉(zhuǎn)基因（transgene) 最早建立成功的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是轉(zhuǎn)基因小鼠(transgenic mouse)。由于制備轉(zhuǎn)基因小鼠比制備大的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物要省時(shí)、省力得多,因此轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)作為生命科學(xué)研究的一個(gè)新的技術(shù)體系已經(jīng)得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用，特別是基因功能的研究。 外源基因?qū)敕椒ǎ?. 顯微注射法2. 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法。3. 電脈沖法。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用1. 基因功能的研究 2. 建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)

22、物生物反應(yīng)器 3. 異種器官移植轉(zhuǎn)基因小鼠制備的基本程序：1.選擇小鼠品系，可以用遠(yuǎn)交系也 可以用近交系。一般采用兩種近交系的雜交一代。2準(zhǔn)備不育雄鼠和假孕母鼠。用輸精管結(jié)扎的方法制備不育雄鼠，不育雄鼠與雌鼠交配可獲得假孕母鼠。3. 收獲受精卵-超排卵 顯微注射需要的受精卵可以通過(guò)小鼠自然交配得到，但數(shù)量常不能得到保證。因而需對(duì)雌鼠施以激素以獲得足夠數(shù)量的受精卵即誘導(dǎo)超排卵。4-6周齡雌鼠在明暗循環(huán)的動(dòng)物房?jī)?nèi)飼養(yǎng)3-5天，即可作超排卵。一般以孕馬血清（PMS）模擬卵泡刺激素（FSH），人絨毛膜促性腺激素（hCG）模擬黃體生成素（LH）。PMS和hCG注射間隔42-48小時(shí)，排卵發(fā)生于注射hCG后10-13小時(shí)。4. 將導(dǎo)入外源基因的受精卵植入假孕母鼠的輸卵管或子宮內(nèi)發(fā)育。5 首建轉(zhuǎn)基因鼠 (founder)中轉(zhuǎn)基因的檢測(cè)。6. 通過(guò)繁育建立轉(zhuǎn)基因小鼠品系。 （1）.互交得到轉(zhuǎn)基因純合子小鼠 （2）.回交至少10代建立純系轉(zhuǎn)基因小鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施(Laboratory animal facility) 是從事飼養(yǎng)、育種、保種、生產(chǎn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等的建筑物、設(shè)備以及運(yùn)營(yíng)管理在內(nèi)的總和。它是由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育、生產(chǎn)設(shè)施和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施兩部分組成。2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育、生產(chǎn)設(shè)施(Production An