藥物化學(xué)第四章

1、 第四章第四章 藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證 第一節(jié)第一節(jié) 定量分析樣品的前處理方法定量分析樣品的前處理方法 第二節(jié)第二節(jié) 定量分析方法特點(diǎn)定量分析方法特點(diǎn)第三節(jié)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的基本要求生物樣品分析方法的基本要求返回主目錄返回主目錄基本要求基本要求練習(xí)與思考練習(xí)與思考基本要求基本要求 一、掌握定量分析方法驗(yàn)證的效能指標(biāo)。一、掌握定量分析方法驗(yàn)證的效能指標(biāo)。 二、熟悉定量分析樣品的前處理方法。二、熟悉定量分析樣品的前處理方法。 三、了解定量分析樣品的前處理方法的進(jìn)展三、了解定量分析樣品的前處理方法的進(jìn)

2、展 及在藥物分中的應(yīng)用。及在藥物分中的應(yīng)用。返 回 第一節(jié)第一節(jié) 定量分析樣品的前處理方法定量分析樣品的前處理方法 一、概述一、概述 1.1.為什么要對(duì)定量分析的樣品進(jìn)行前處理？為什么要對(duì)定量分析的樣品進(jìn)行前處理？ 含鹵素有機(jī)藥物含鹵素有機(jī)藥物 R-X （F，Cl, Br, I ） 金屬有機(jī)藥物金屬有機(jī)藥物 R-O-Me（有機(jī)酸或酚的有機(jī)酸或酚的 含金屬有機(jī)藥物含金屬有機(jī)藥物 金屬鹽；結(jié)合不牢固）金屬鹽；結(jié)合不牢固） 有機(jī)金屬藥物有機(jī)金屬藥物 R-Me （結(jié)合牢固）結(jié)合牢固） 2. 常用的處理方法常用的處理方法 不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 藥物分析中常用的分析方法藥物分析中常

3、用的分析方法 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（一）直接測(cè)定法（一）直接測(cè)定法 例如：富馬酸亞鐵例如：富馬酸亞鐵 溶于熱稀礦酸，采用鈰量法溶于熱稀礦酸，采用鈰量法 ，鄰二氮菲作指示劑，鄰二氮菲作指示劑 CHCHCCOO0Fe（二）經(jīng)水解后測(cè)定法（二）經(jīng)水解后測(cè)定法 1. 直接回流后測(cè)定法直接回流后測(cè)定法 例如：三氯叔丁醇的含量測(cè)定例如：三氯叔丁醇的含量測(cè)定 CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH (CH3)2CO +3NaCl + HCOONa +2H2O NaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + N

4、H4SCN AgSCN + NH4NO3 2. 用硫酸水解后測(cè)定法用硫酸水解后測(cè)定法 例如：硬脂酸鎂的含量測(cè)定例如：硬脂酸鎂的含量測(cè)定 Mg(C17H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2C17H35COOH H2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2H2O （三（三）經(jīng)氧化還原后測(cè)定法經(jīng)氧化還原后測(cè)定法 1. 堿性還原后堿性還原后測(cè)定測(cè)定 例如：泛影酸的含量測(cè)定例如：泛影酸的含量測(cè)定 2. 酸性還原后酸性還原后測(cè)定測(cè)定 例如：碘番酸的含量測(cè)定例如：碘番酸的含量測(cè)定 Zn還原還原 后銀量法后銀量法 COOHIIINHCOCH3CH3CONHCOOHH2NNH2+ 11NaOH

5、 + 3Zn+ 3NaI + 2CH3COONa + 3NaZnO2 + 3H2O NaI + AgNO3 AgI + NaNO3 3. 利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量 （1）含銻藥物）含銻藥物 例如：葡萄糖酸銻的含量測(cè)定例如：葡萄糖酸銻的含量測(cè)定 Sb5+ + 2KI Sb3+ + 2K+ + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6 （2）含鐵藥物含鐵藥物 2Fe3+ + 2KI 2Fe2+ + 2K+ + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6H+ 三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的

6、分析方法 濕法破壞濕法破壞 藥物分析中常用的有機(jī)破壞的方法有藥物分析中常用的有機(jī)破壞的方法有 干法破壞干法破壞 HNOHNO3 3-HClO-HClO4 4法法 高價(jià)態(tài)高價(jià)態(tài) 氧瓶燃燒氧瓶燃燒法法( (一一) )濕法破壞濕法破壞 HNOHNO3 3-H-H2 2SOSO4 4法高價(jià)態(tài)法高價(jià)態(tài) H H2 2SOSO4 4- -硫酸鹽法低價(jià)態(tài)硫酸鹽法低價(jià)態(tài) HNOHNO3 3- H- H2 2SOSO4 4-HClO-HClO4 4法；法； H H2 2SOSO4 4-H-H2 2O O2 2； H H2 2SOSO4 4-KMnO-KMnO4 4( (二二) )干法破壞干法破壞 加加NaNa2

7、2COCO3 3或或MgOMgO以助灰化；溫度控制在以助灰化；溫度控制在420420 ( (三三) )氧燃瓶燃燒法氧燃瓶燃燒法(oxygen flask combustion method) 1. 儀器裝置儀器裝置 500ml, 1000ml, 2000ml, 磨口、硬質(zhì)玻璃錐形瓶磨口、硬質(zhì)玻璃錐形瓶 2. 稱樣稱樣 固體樣；液體樣要求詳見(jiàn)固體樣；液體樣要求詳見(jiàn)P68 3. 燃燒分解操作法燃燒分解操作法 4. 吸收液的選擇吸收液的選擇 用于用于X、S、Se等的鑒別、檢查、含量測(cè)定時(shí)等的鑒別、檢查、含量測(cè)定時(shí) 多數(shù)是多數(shù)是H2O或或H2O-NaOH；少數(shù)為少數(shù)為H2O-NaOH-H2O2.應(yīng)用示

8、例：碘苯酯的測(cè)定應(yīng)用示例：碘苯酯的測(cè)定ICHCH3(CH2)8-COOC2H5I2O2(I )_I2 + 2NaOH NaIO + NaI + H2O 3NaIO NaIO3 + 2NaI 3Br2 + I +3H2O IO3 + 6HBrBr2(guo) + HCOOH HBr + CO2 IO3 + 5I + 6H 3I2 + 3H2OI2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6CH3COOH-+-返 回第二節(jié)第二節(jié) 定量分析方法特點(diǎn)定量分析方法特點(diǎn) 一、容量分析法一、容量分析法 （一）容量分析法的（一）容量分析法的特點(diǎn)特點(diǎn) 操作簡(jiǎn)單、快速；操作簡(jiǎn)單、快速； 比較準(zhǔn)確（比較準(zhǔn)確

9、（RSDRSD0.2%0.2%）；）； 儀器普通易得。儀器普通易得。（二）容量分析法的（二）容量分析法的計(jì)算計(jì)算問(wèn)題問(wèn)題 1. 1. 滴定度滴定度（T T）的概念的概念 每每1 1mlmolmlmol溶液相當(dāng)于被測(cè)物質(zhì)的量溶液相當(dāng)于被測(cè)物質(zhì)的量( (mg)mg) 2. 2. 滴定度的計(jì)算滴定度的計(jì)算 aAaA + + bBbB cCcC + + dDdD T T = = M Mb/ab/aB B 3. 3. 百分含量的計(jì)算百分含量的計(jì)算 （1 1）直接滴定法）直接滴定法 D% = D% = V V F F T/WT/W 100%100% F F = = 實(shí)際標(biāo)定的濃度實(shí)際標(biāo)定的濃度/ /規(guī)定的

10、濃度規(guī)定的濃度 （2 2）間接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）間接滴定法（回滴定法；剩余滴定法） D% = D% = （V VO O V VB B) ) F F T T/ /W W 100%100% 二、光譜分析法二、光譜分析法 （一）紫外（一）紫外- -可見(jiàn)分光光度法（可見(jiàn)分光光度法（200200nmnm760nm)760nm) 靈敏度高，可達(dá)靈敏度高，可達(dá)10-4g/ml 10-7g/ml 1. 特點(diǎn)特點(diǎn) 準(zhǔn)確度高，準(zhǔn)確度高，SRD（%）為為2% 5%5% 儀器價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)單，易普及，應(yīng)用儀器價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)單，易普及，應(yīng)用 范圍廣。范圍廣。 2. 2. 朗伯朗伯- -比耳定律比耳定律

11、A = ECL EA = ECL E1%1%1 1cmcm = = 10/M10/M 3. 3. 儀器校正和檢定儀器校正和檢定 波長(zhǎng)校正用汞燈中較強(qiáng)譜線波長(zhǎng)校正用汞燈中較強(qiáng)譜線237.38,253.65,275.28,296.73,237.38,253.65,275.28,296.73, 313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07 313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nmnm與與576.96576.96nmnm 或用儀器中氘燈的或用儀器中氘燈的486.02486.02nmnm與與656.10656.10nmn

12、m進(jìn)行校正。進(jìn)行校正。 吸收度的檢定：用吸收度的檢定：用K K2 2CrOCrO7 7(60mg)+0.005mol/LH(60mg)+0.005mol/LH2 2SOSO4 4液至液至10001000mlml 波長(zhǎng)波長(zhǎng)( (nm) 235(nm) 235(最小最小) 257() 257(最大最大) 313() 313(最小最小) 350() 350(最大最大) ) E E1%1%1 1cmcm 124.5 144.0 48.62 106.6 124.5 144.0 48.62 106.6 雜散光檢查：雜散光檢查： 試劑試劑 濃度濃度( (g/ml) g/ml) 測(cè)定波長(zhǎng)測(cè)定波長(zhǎng) 透光率透光率

13、(%)(%) NaINaI 1.00 220nm 1.00 220nm 0.8 0.8 NaNO NaNO2 2 5.00 340nm 5.00 340nm 0.8 0.8 4. 4. 對(duì)溶劑的要求對(duì)溶劑的要求: : 220 220240nm 241240nm 241250nm 251250nm 251300nm 300nm300nm 300nm以上以上 溶劑溶劑+吸收池吸收池A 0.41 0.41 0.20 0.20 0.10 0.10 0.050.05 5. 5. 測(cè)定方法測(cè)定方法 要求供試品溶液的要求供試品溶液的A A應(yīng)在應(yīng)在0.3 0.3 0.70.7 對(duì)照品比較法：對(duì)照品比較法：C

14、Cx x=(=(A Ax x/ /A Ar r) )C Cr r; ; 含量含量%=%=C Cx xD/WD/W100 %100 % 常用方法常用方法 吸收系數(shù)法：吸收系數(shù)法： 含量含量%= (%= (E E1%1%1 1cmcm ) )x x/(/(E E1%1%1 1cmcm ) )r r 100 %100 % 計(jì)算分光光度法：計(jì)算分光光度法：V VA A的三點(diǎn)校正法的三點(diǎn)校正法 （二）熒光分光光度法（二）熒光分光光度法 靈敏度高靈敏度高，可達(dá)，可達(dá)10-10g/ml 10-12g/ml 在在低濃度低濃度進(jìn)行測(cè)定，防止進(jìn)行測(cè)定，防止F與與C不成正比及自熄滅作用不成正比及自熄滅作用 1. 特

15、點(diǎn)特點(diǎn) 用基準(zhǔn)物溶液校正儀器靈敏度，防止樣品液熒光衰減用基準(zhǔn)物溶液校正儀器靈敏度，防止樣品液熒光衰減 靈敏度高，但靈敏度高，但干擾因素多干擾因素多。 制備熒光制備熒光衍生物衍生物，可提高其靈敏度和選擇性。，可提高其靈敏度和選擇性。 用樣品用樣品量少量少，操作，操作簡(jiǎn)單簡(jiǎn)單，方法，方法快速快速，應(yīng)用，應(yīng)用范圍范圍較較廣廣。 2. 熒光分析儀熒光分析儀 有二個(gè)單色光器有二個(gè)單色光器激發(fā)單色光器與發(fā)射單色光激發(fā)單色光器與發(fā)射單色光 器；且激發(fā)光源、樣品池和檢測(cè)器成直角。器；且激發(fā)光源、樣品池和檢測(cè)器成直角。3. 含量測(cè)定含量測(cè)定 常用的方法對(duì)照品比較法常用的方法對(duì)照品比較法:Ci = (Ri-Rib

16、)/(Rr-Rrb) C Cr r Ch.P收載收載地高辛片、利血平片、洋地黃毒苷片。地高辛片、利血平片、洋地黃毒苷片。 三、色譜分析法三、色譜分析法 按分離原理分為：吸附；分配；離子交換；排阻色譜按分離原理分為：吸附；分配；離子交換；排阻色譜 方法分類方法分類 按分離方法分為：按分離方法分為：PC；TLC；柱色譜；柱色譜；GC；HPLC。 （一）（一）HPLC法法 1. 對(duì)對(duì)HPLC儀器一般要求儀器一般要求 色譜柱、流動(dòng)相按品種項(xiàng)下要求。色譜柱、流動(dòng)相按品種項(xiàng)下要求。 色譜柱的理論板數(shù)：色譜柱的理論板數(shù)：n = 5.54(tR /Wh/2)2 2. 系統(tǒng)性試驗(yàn)系統(tǒng)性試驗(yàn) 分離度：分離度：R

17、= 2（tR1 tR2)/(W1 + W2); 要大于要大于1.5 拖尾因子：拖尾因子：T = W0.05h/2d1 應(yīng)在應(yīng)在0.9 1.05 內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量?jī)?nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量3. 測(cè)定方法測(cè)定方法 標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量 外標(biāo)一點(diǎn)法外標(biāo)一點(diǎn)法 應(yīng)用示例：應(yīng)用示例： RP-HPLC法測(cè)定鹽酸黃酮哌酯片含量，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法法測(cè)定鹽酸黃酮哌酯片含量，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法 如頭孢拉??；頭孢羥氨芐；頭孢唑啉鈉用外標(biāo)一點(diǎn)法如頭孢拉?。活^孢羥氨芐；頭孢唑啉鈉用外標(biāo)一點(diǎn)法 （二）（二）GC法法 1. 對(duì)對(duì)GC儀器一般要

18、求儀器一般要求 載氣為載氣為氮?dú)獾獨(dú)?；色譜柱為填充或毛細(xì)管柱；色譜柱為填充或毛細(xì)管柱 色譜柱的理論板數(shù)：色譜柱的理論板數(shù)：n = 5.54(tR /Wh/2)2 2. 系統(tǒng)性試驗(yàn)系統(tǒng)性試驗(yàn) 分離度：分離度：R = 2（tR1 tR2)/(W1 + W2); 要大于要大于1.5 拖尾因子：拖尾因子：T = W0.05h/2d1 應(yīng)在應(yīng)在0.9 1.05 內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量?jī)?nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量 3. 測(cè)定方法測(cè)定方法 標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量 外標(biāo)一點(diǎn)法外標(biāo)一點(diǎn)法 應(yīng)用示例：應(yīng)用示例： Ch.P(2000)

19、收載的月桂卓酮、維生素收載的月桂卓酮、維生素E及其片劑、注及其片劑、注 射劑、甲酚皂溶液等均采用射劑、甲酚皂溶液等均采用GC法中的內(nèi)標(biāo)法加校正法中的內(nèi)標(biāo)法加校正 因子測(cè)定含量。因子測(cè)定含量。返 回 第三節(jié)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 一、準(zhǔn)確度一、準(zhǔn)確度 是指用該方法是指用該方法測(cè)定結(jié)果與真實(shí)值接近的程度測(cè)定結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，用，用回收率回收率表示表示（一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度（一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度 1. 原料藥原料藥 可用已知純度對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定；或與已建準(zhǔn)確可用已知純度對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定；或與已建準(zhǔn)確 度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。度的另一方法

20、測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。 2. 制劑制劑 要考察要考察輔料對(duì)回收率的影響輔料對(duì)回收率的影響。采用在空白輔料中加入原。采用在空白輔料中加入原 料對(duì)照品的方法作回收率試驗(yàn)，然后計(jì)算料對(duì)照品的方法作回收率試驗(yàn)，然后計(jì)算RSD。 具體做法：測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度，具體做法：測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度，n=3, 共共9個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)價(jià)個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)價(jià) 回收率的回收率的RSD2%；用用UV和和HPLC發(fā)時(shí)，一般回發(fā)時(shí)，一般回 收率可達(dá)收率可達(dá)98%102%；容量法可達(dá)；容量法可達(dá)99.7%100.3% （二）數(shù)據(jù)要求（二）數(shù)據(jù)要求 回收率回收率% = （測(cè)定平均值（測(cè)定平均值 空白值）空白值）/加入量加入量100% 要求

21、制備要求制備高高、中中、低低三濃度的樣品，各測(cè)定三濃度的樣品，各測(cè)定3次次。應(yīng)。應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率，或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值報(bào)告已知加入量的回收率，或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限。之差及其可信限。 二、精密度二、精密度 是指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次測(cè)定結(jié)果是指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次測(cè)定結(jié)果 之間的之間的接近程度接近程度。 （一）精密度表示方法（一）精密度表示方法 1. 偏差偏差(deviation , d) d = 測(cè)得值測(cè)得值-平均值平均值=Xi-X 2. 標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差（standard deviation, SD或或S） S =(Xi

22、 X)2/(n-1)1/2 3. 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(relative standard deviation, RSD)也稱變異系數(shù)也稱變異系數(shù) (coefficient of variation, CV) RSD=標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值平均值100%=S/X 100%（二）重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性（二）重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性 1. 重復(fù)性重復(fù)性 在相同條件下在相同條件下,由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度. 2. 中間精密度中間精密度 在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不 同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。同設(shè)

23、備測(cè)定結(jié)果的精密度。 3. 重現(xiàn)性重現(xiàn)性 在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。（三）數(shù)據(jù)要求（三）數(shù)據(jù)要求 應(yīng)報(bào)告應(yīng)報(bào)告S或或SD、RSD和可信限。用統(tǒng)計(jì)學(xué)的可和可信限。用統(tǒng)計(jì)學(xué)的可信性分析信性分析(t或或f）。）。 三、專屬性三、專屬性 是指在其他成分是指在其他成分(如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)可能存在下，可能存在下， 采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢 查、含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專屬性。查、含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專屬性。 （一）鑒別反應(yīng)（一）鑒

24、別反應(yīng) 應(yīng)能與其它共存的物質(zhì)或相似化合物區(qū)分，不含被測(cè)組分應(yīng)能與其它共存的物質(zhì)或相似化合物區(qū)分，不含被測(cè)組分 的樣品均應(yīng)呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。的樣品均應(yīng)呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。 （二）含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定（二）含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定 色譜法和其他分離法，應(yīng)附代表性的圖譜，以說(shuō)明專屬性。色譜法和其他分離法，應(yīng)附代表性的圖譜，以說(shuō)明專屬性。 圖中應(yīng)注明各組分的位置，色譜法中分離度應(yīng)符合要求。在能圖中應(yīng)注明各組分的位置，色譜法中分離度應(yīng)符合要求。在能 獲得雜質(zhì)的情況下，可加到試樣中，考察對(duì)結(jié)果的干擾。在雜獲得雜質(zhì)的情況下，可加到試樣中，考察對(duì)結(jié)果的干擾。在雜 質(zhì)和降解物不能獲得的情況下，可用以驗(yàn)證方法和藥典方法進(jìn)質(zhì)和降解物不能

25、獲得的情況下，可用以驗(yàn)證方法和藥典方法進(jìn) 行對(duì)照；也可用對(duì)試樣加速破壞的方法，比較兩種方法。行對(duì)照；也可用對(duì)試樣加速破壞的方法，比較兩種方法。 四、檢測(cè)限（四、檢測(cè)限（limit of detection, LOD) 是指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的是指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量最低濃度或量，是限度檢驗(yàn)，是限度檢驗(yàn) 指標(biāo)。它無(wú)需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。指標(biāo)。它無(wú)需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。 （一）（一）常用的方法常用的方法 1.1.非儀器分析目視法非儀器分析目視法 用已知濃度被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地用已知濃度被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地 檢測(cè)出的最低

26、濃度或量。檢測(cè)出的最低濃度或量。 2. 2.儀器分析方法儀器分析方法 UVUV法：法：LODLOD = = f f.3.3S S空空 = = C C樣樣/ /A A樣樣 3 3S S空空 FluFlu法：法：LODLOD = = f f.3.3S S空空 = = C C樣樣/(/(F F樣樣- -F F空空) ) 3 3S S空空 GCGC和和HPLCHPLC法：法： LODLOD = = S S/ /N N = 2 = 2或或3 3 （二）數(shù)據(jù)要求（二）數(shù)據(jù)要求 應(yīng)附測(cè)試圖，說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和檢測(cè)限結(jié)果。應(yīng)附測(cè)試圖，說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和檢測(cè)限結(jié)果。 五、定量限（五、定量限（limit of quant

27、itation, LOQ) 是指樣品中是指樣品中被測(cè)物能被被測(cè)物能被定量測(cè)定定量測(cè)定的最低量的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)，其測(cè)定結(jié)果應(yīng) 具一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，要求具一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，要求 LOQLOQ. .常用信噪比法確定定量限，一般以常用信噪比法確定定量限，一般以S/N=10S/N=10時(shí)相應(yīng)的濃度進(jìn)行時(shí)相應(yīng)的濃度進(jìn)行 測(cè)定。測(cè)定。 六、線性六、線性 是指在設(shè)定的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接是指在設(shè)定的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接 呈呈正比正比關(guān)系的關(guān)系的程度程度。 UVUV法：首先制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)法：首先制

28、備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)n =5; A = 0.3n =5; A = 0.3.0.7.0.7 建立回歸方程建立回歸方程C = C = aAaA + b ; + b ;r r 0.9999 0.9999。 HPLC HPLC法：制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)法：制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)n =5 n =5 7; 7; 以以C C對(duì)對(duì)h h或或A A或與或與 內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比，建立回歸方程內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比，建立回歸方程r r 0.9999 0.9999。七、范圍七、范圍 是指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性、測(cè)試方法是指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性、測(cè)試方法適用的高低限度或量的區(qū)間適用的高低限度或量的區(qū)間。

29、 原料藥和制劑含量測(cè)定原料藥和制劑含量測(cè)定：范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的：范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80%- 120%。 制劑含量均勻度檢查制劑含量均勻度檢查：范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的：范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的70%- 130%。 溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定：范圍應(yīng)為限度的：范圍應(yīng)為限度的20%20%。 八、耐用性八、耐用性 是指在測(cè)定條件下有效的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的是指在測(cè)定條件下有效的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受承受 程度程度。典型的變動(dòng)因素有：被溶液的穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時(shí)。典型的變動(dòng)因素有：被溶液的穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時(shí) 間等。間等。 HPLC法變動(dòng)因素有：流動(dòng)相組成與法變

30、動(dòng)因素有：流動(dòng)相組成與pH，色譜柱，柱溫，流速等。色譜柱，柱溫，流速等。 GC法變動(dòng)因素有：色譜柱，固定相，擔(dān)體、柱溫、進(jìn)樣口和檢法變動(dòng)因素有：色譜柱，固定相，擔(dān)體、柱溫、進(jìn)樣口和檢 測(cè)器溫度等。測(cè)器溫度等。 分析方法效能指標(biāo)的具體應(yīng)用分析方法效能指標(biāo)的具體應(yīng)用： 1. 用于鑒別試驗(yàn)的方法：只要求專屬性、耐用性，其余不要求。用于鑒別試驗(yàn)的方法：只要求專屬性、耐用性，其余不要求。 2. 用于原料藥中雜質(zhì)測(cè)定和制劑中降解產(chǎn)物測(cè)定的方法：用于原料藥中雜質(zhì)測(cè)定和制劑中降解產(chǎn)物測(cè)定的方法： 用于定量：除了檢測(cè)限不要求外，其余七項(xiàng)指標(biāo)均要求。用于定量：除了檢測(cè)限不要求外，其余七項(xiàng)指標(biāo)均要求。 限度檢查：除

31、檢測(cè)限、專屬性、耐用性要求外，其余不要求。限度檢查：除檢測(cè)限、專屬性、耐用性要求外，其余不要求。 3. 原料、制劑及溶出度測(cè)定：不要求檢測(cè)和定量限，其余均要求。原料、制劑及溶出度測(cè)定：不要求檢測(cè)和定量限，其余均要求。返 回 第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的基本要求生物樣品分析方法的基本要求 一、常用樣品的種類、采集和貯張一、常用樣品的種類、采集和貯張 二、生物樣品分析前處理技術(shù)二、生物樣品分析前處理技術(shù) 三、定量分析方法驗(yàn)證三、定量分析方法驗(yàn)證 返 回練習(xí)與思考練習(xí)與思考 A A型題型題 1 1 藥品的鑒別是證明藥品的鑒別是證明 A A未知藥物的真?zhèn)挝粗幬锏恼鎮(zhèn)?B B已知藥物的真?zhèn)我阎幬?/p>

32、的真?zhèn)?C C已知藥物的療效已知藥物的療效 D D藥物的純度藥物的純度 E E藥物的穩(wěn)定性藥物的穩(wěn)定性2 2相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差表示的應(yīng)是相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差表示的應(yīng)是A A準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 B B回收率回收率 C C精密度精密度 D D純凈度純凈度 E E限度限度3 3用移液管量取的用移液管量取的2525mlml溶液，應(yīng)記成溶液，應(yīng)記成A A25ml B25ml B25.0ml C25.0ml C25.00ml 25.00ml D D25.000ml E25.000ml E25251ml1ml4 4以下三個(gè)數(shù)字以下三個(gè)數(shù)字0.53620.5362、0.00140.0014、0.250.25之和之和應(yīng)為應(yīng)為A A0.

33、79 B0.79 B0.788 C0.788 C0.787 0.787 D D0.7876 E0.7876 E0.80.85 5表示兩變量指標(biāo)表示兩變量指標(biāo)A A與與C C之間線性相關(guān)程度常用之間線性相關(guān)程度常用A A相關(guān)規(guī)律相關(guān)規(guī)律 B B比例常數(shù)比例常數(shù) C C相關(guān)常數(shù)相關(guān)常數(shù) D D相關(guān)系數(shù)相關(guān)系數(shù) E E精密度精密度6 6減小偶然誤差的方法是減小偶然誤差的方法是A A做空白試驗(yàn)做空白試驗(yàn) B B做對(duì)照實(shí)驗(yàn)做對(duì)照實(shí)驗(yàn) C C做回收試驗(yàn)做回收試驗(yàn) D D增加平行測(cè)定次數(shù)增加平行測(cè)定次數(shù) E E選用多種測(cè)定方法選用多種測(cè)定方法 B B型題型題 1 14 4A A1.23 B1.23 B1.22 C1.22 C2.54 2.54 D D2.53 E2.53 E2.512.511 11.22521.22522 22.53512.53513 32.53482.53484 42.50682.5068ACDE 5 58 8A A空白試驗(yàn)空白試驗(yàn) B B對(duì)照試驗(yàn)對(duì)照試驗(yàn) C C回收試驗(yàn)回收試驗(yàn) D D鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn) E E檢測(cè)試驗(yàn)檢測(cè)試驗(yàn)5 5以同量的溶劑替代供試品同法進(jìn)行測(cè)定試驗(yàn)