實驗二顯微鏡油鏡的使用、細(xì)菌形態(tài)觀察及大小測定

1、實驗二實驗二 油鏡的使用、細(xì)菌形態(tài)油鏡的使用、細(xì)菌形態(tài)的觀察及微生物大小測定的觀察及微生物大小測定1 目的要求目的要求1.1 1.1 學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法1.2 1.2 學(xué)習(xí)觀察細(xì)菌學(xué)習(xí)觀察細(xì)菌( (大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、炭疽桿菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、炭疽桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、霍亂弧菌葡萄球菌、鏈球菌、霍亂弧菌) )的形態(tài)特征。的形態(tài)特征。1.3 1.3 掌握微生物大小的測定方法。掌握微生物大小的測定方法。2 2 實驗原理實驗原理2.1 2.1 油鏡的工作原理油鏡的工作原理2.1.12.1.1增加照明亮度增加照明亮度2.1.2 2.1.2 增加顯

2、微鏡的分辯率增加顯微鏡的分辯率2.2 2.2 微生物大小測定原理微生物大小測定原理3 3 實驗器材實驗器材顯微鏡、擦鏡紙、細(xì)菌教學(xué)片、目鏡測微尺、鏡臺測微尺顯微鏡、擦鏡紙、細(xì)菌教學(xué)片、目鏡測微尺、鏡臺測微尺4、操作步驟操作步驟4.1 4.1 細(xì)菌的形態(tài)觀察細(xì)菌的形態(tài)觀察4.1.1 4.1.1 觀察前的準(zhǔn)備觀察前的準(zhǔn)備 （1 1）顯微鏡的安置）顯微鏡的安置 （2 2）光源的調(diào)節(jié)）光源的調(diào)節(jié) （3 3）調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡）調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡 （4 4）聚光器數(shù)值孔徑值的調(diào)節(jié)）聚光器數(shù)值孔徑值的調(diào)節(jié)4.1.2 4.1.2 顯微觀察顯微觀察 （1 1）低倍鏡觀察）低倍鏡觀察 （2 2）高倍鏡觀察）

3、高倍鏡觀察 （3 3）油鏡觀察）油鏡觀察4.2 微生物大小的測定微生物大小的測定4.2.1 裝目鏡測微尺裝目鏡測微尺 把目鏡的上透鏡旋下，將目鏡測微尺的把目鏡的上透鏡旋下，將目鏡測微尺的刻度朝下刻度朝下輕輕地裝入目鏡的隔板輕輕地裝入目鏡的隔板上，旋上目鏡透鏡。上，旋上目鏡透鏡。4.2.2 目鏡測微尺的校正目鏡測微尺的校正 把鏡臺測微尺置于載物臺上，把鏡臺測微尺置于載物臺上，刻度朝上刻度朝上。先用低倍鏡觀察，對準(zhǔn)焦距，。先用低倍鏡觀察，對準(zhǔn)焦距，視野中看清鏡臺測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡，使目鏡測微尺與鏡臺測微尺視野中看清鏡臺測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡，使目鏡測微尺與鏡臺測微尺的刻度平行，移動推動器，

4、使兩尺重疊，再使兩尺的的刻度平行，移動推動器，使兩尺重疊，再使兩尺的“0”刻度完全重合，刻度完全重合，定位后，仔細(xì)尋找兩尺第二個完全重合的刻度，計數(shù)兩重合刻度之間目鏡定位后，仔細(xì)尋找兩尺第二個完全重合的刻度，計數(shù)兩重合刻度之間目鏡測微尺的格數(shù)和鏡臺測微尺的格數(shù)。因為鏡臺測微尺的刻度每格長測微尺的格數(shù)和鏡臺測微尺的格數(shù)。因為鏡臺測微尺的刻度每格長l0m，所以由下列公式可以算出目鏡測微尺每格所代表的長度。所以由下列公式可以算出目鏡測微尺每格所代表的長度。 例如目鏡測微尺例如目鏡測微尺5小格正好與鏡臺測微尺小格正好與鏡臺測微尺5小格重疊，已知鏡臺測微尺每小格重疊，已知鏡臺測微尺每小格為小格為l0m，

5、則目鏡測微尺上每小格長度為，則目鏡測微尺上每小格長度為=510m/510m用同法分別校正在高倍鏡下和油鏡下目鏡測微尺每小格所代表的長度。用同法分別校正在高倍鏡下和油鏡下目鏡測微尺每小格所代表的長度。4.2.3 4.2.3 細(xì)胞大小的測定細(xì)胞大小的測定 移去鏡臺測微尺，換上細(xì)菌教學(xué)片，先在低倍鏡下找到目的物，然移去鏡臺測微尺，換上細(xì)菌教學(xué)片，先在低倍鏡下找到目的物，然后在油鏡下用目鏡測微尺來測量細(xì)菌菌體的長，寬各占幾格（不足一格的后在油鏡下用目鏡測微尺來測量細(xì)菌菌體的長，寬各占幾格（不足一格的部分估計到小數(shù)點后一位數(shù)）。測出的格數(shù)乘上目鏡測微尺每格的校正值，部分估計到小數(shù)點后一位數(shù)）。測出的格數(shù)

6、乘上目鏡測微尺每格的校正值，即等于該菌的長和寬。一般測量菌體的大小要在同一個標(biāo)本片上測定即等于該菌的長和寬。一般測量菌體的大小要在同一個標(biāo)本片上測定10201020個菌體，求出平均值，才能代表該菌的大小。而且一般是用對數(shù)個菌體，求出平均值，才能代表該菌的大小。而且一般是用對數(shù)生長期的菌體進(jìn)行測定。生長期的菌體進(jìn)行測定。注意事項注意事項：觀察時光線不宜過強(qiáng),否則難以找到鏡臺測微尺的刻度;換高倍鏡和油鏡校正時,務(wù)必十分小心,防止接物鏡壓壞鏡臺測微尺和損壞鏡頭。1.1.測微尺的校正（標(biāo)定）：測微尺的校正（標(biāo)定）： 兩重合線間鏡臺測微尺格數(shù)10目鏡測微尺每格長度(m)= 兩重合線間目鏡測微尺格數(shù)2 2

7、細(xì)菌菌大小的測定：細(xì)菌菌大小的測定： 取細(xì)菌裝片，用高倍鏡測出寬和長各占目鏡測微尺的格數(shù)，再將測到的格數(shù)乘以目鏡測微尺（用高倍鏡時標(biāo)定的）每格所代表的長度，即為細(xì)菌的實際大小。大腸桿菌：大腸桿菌大腸桿菌：大腸桿菌（Escherichia coliEscherichia coli，E.coliE.coli） 革蘭氏陰性短桿菌，大小革蘭氏陰性短桿菌，大小0.50.51 13 3微米。周身鞭毛，能運動，無芽微米。周身鞭毛，能運動，無芽孢。孢。 大腸桿菌（大腸桿菌（E. coliE. coli）為埃希氏菌）為埃希氏菌屬屬(Escherichia)(Escherichia)代表菌。一般多代表菌。一般多不

8、致病，為人和動物腸道中的常居不致病，為人和動物腸道中的常居菌，在一定條件下可引起腸道外感菌，在一定條件下可引起腸道外感染。某些血清型菌株的致病性強(qiáng)，染。某些血清型菌株的致病性強(qiáng)，引起腹瀉，統(tǒng)稱致病性大腸桿菌。引起腹瀉，統(tǒng)稱致病性大腸桿菌。 破傷風(fēng)梭菌破傷風(fēng)梭菌枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌芽孢芽孢枯草芽孢桿菌，是芽孢桿菌屬的一種。單個細(xì)胞枯草芽孢桿菌，是芽孢桿菌屬的一種。單個細(xì)胞 0.70.70.80.82 23 3微米，微米，著色均勻。無莢膜，周生鞭毛，能運動。革蘭氏陽性，芽孢著色均勻。無莢膜，周生鞭毛，能運動。革蘭氏陽性，芽孢0.60.60.90.91.01.01.51.5微米，橢圓到柱狀，位于

9、菌體中央或稍偏，芽孢形成后微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。廣泛分布在土壤及腐敗的有機(jī)物中，易在枯草浸汁中繁殖，菌體不膨大。廣泛分布在土壤及腐敗的有機(jī)物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。故名。炭疽桿菌菌體粗大，兩端平截炭疽桿菌菌體粗大，兩端平截或凹陷，是致病菌中最大的細(xì)或凹陷，是致病菌中最大的細(xì)菌。排列似竹節(jié)狀，無鞭毛，菌。排列似竹節(jié)狀，無鞭毛，無動力，革蘭氏染色無動力，革蘭氏染色陽性陽性，本，本菌在氧氣充足，溫度適宜菌在氧氣充足，溫度適宜（25253030）的條件下易形成）的條件下易形成芽胞芽胞。 在活體或未經(jīng)解剖的尸體內(nèi)，在活體或未經(jīng)解剖的尸體內(nèi)，則則不能形成芽胞不能

10、形成芽胞。芽胞呈橢圓芽胞呈橢圓形，位于菌體中央，其寬度小形，位于菌體中央，其寬度小于菌體的寬度。于菌體的寬度。在人和動物體在人和動物體內(nèi)能形成莢膜，在含血清和碳內(nèi)能形成莢膜，在含血清和碳酸氫鈉的培養(yǎng)基中，孵育于酸氫鈉的培養(yǎng)基中，孵育于CO2CO2環(huán)境下，也能形成莢膜。形成環(huán)境下，也能形成莢膜。形成莢膜是毒性特征。莢膜是毒性特征。 炭疽桿菌（普通平板）炭疽桿菌（普通平板）葡萄葡萄球菌（球菌（StaphylococcusStaphylococcus）是一群革蘭氏是一群革蘭氏陽性陽性球菌，因常球菌，因常堆聚成葡萄串狀，故名。多數(shù)堆聚成葡萄串狀，故名。多數(shù)為非致病菌，少數(shù)可導(dǎo)致疾病。為非致病菌，少數(shù)可

11、導(dǎo)致疾病。葡萄球菌是最常見的化膿性球葡萄球菌是最常見的化膿性球菌，是醫(yī)院交叉感染的重要來菌，是醫(yī)院交叉感染的重要來源，菌體直徑約源，菌體直徑約0.8m0.8m，小球，小球形，但在液體培養(yǎng)基的幼期培形，但在液體培養(yǎng)基的幼期培養(yǎng)中，常常分散，細(xì)菌養(yǎng)中，常常分散，細(xì)菌細(xì)胞細(xì)胞單單獨存在。獨存在。金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌 鏈鏈球菌球菌(Streptococcus)(Streptococcus)是化是化膿性球菌的另一類常見的細(xì)菌，膿性球菌的另一類常見的細(xì)菌，廣泛存在于廣泛存在于自然界自然界和人及動物和人及動物糞糞便便和健康人鼻咽部，引起各種化和健康人鼻咽部，引起各種化膿性炎癥，膿性炎癥，猩紅熱猩紅熱

12、，丹毒，新生，丹毒，新生兒敗血癥，兒敗血癥，腦膜炎腦膜炎，產(chǎn)褥熱以及，產(chǎn)褥熱以及鏈球菌變態(tài)反應(yīng)性疾病等。鏈球菌變態(tài)反應(yīng)性疾病等。 球形或卵圓形，直徑球形或卵圓形，直徑0.60.61.0um1.0um，呈鏈狀排列，短者，呈鏈狀排列，短者4 48 8個細(xì)菌組成，長者有個細(xì)菌組成，長者有20203030個細(xì)個細(xì)菌組成。幼齡培養(yǎng)物大多可見到菌組成。幼齡培養(yǎng)物大多可見到透明質(zhì)酸形成的莢膜。無芽胞，透明質(zhì)酸形成的莢膜。無芽胞，無無鞭毛鞭毛，革蘭氏染色陽性。，革蘭氏染色陽性。 霍亂弧菌為霍亂弧菌為革蘭氏陰性菌革蘭氏陰性菌，菌體彎曲呈弧狀或逗點狀，菌體一端有單根，菌體彎曲呈弧狀或逗點狀，菌體一端有單根鞭毛鞭毛和菌毛，無莢膜與和菌毛，無莢膜與芽胞芽胞。經(jīng)人工培養(yǎng)后，易失去弧形而呈桿狀。經(jīng)人工培養(yǎng)后，易失去弧形而呈桿狀。 霍亂弧菌（霍亂弧菌（V.choleraV.cholera）是人類霍亂的）是人類霍亂的病原體病原體, ,霍亂是一種古老且流行廣霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳染病之一。曾