消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗證方案

1、l制藥有限公司 GMP 文件文件編碼： ZL YF 005 05Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗證方案起草： 日期： 審核： 批準(zhǔn)： 日 期 ： 實施日期： 頒發(fā)部門：質(zhì)量部分發(fā)部門：質(zhì)量部、工程部驗證小組名單組長姓名職務(wù)職稱部門成員姓名職務(wù)職稱部門文件編碼： RVP-CV-006a-00立項申請審批表立項題目消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)I立項編號VP- CV- 006-a- OO立項部門生產(chǎn)部申請日期年月日確認(rèn)對象1消毒劑l、先決條件確認(rèn)

2、2、人員資質(zhì)確認(rèn)3、文件確認(rèn)4、檢測儀器儀表確認(rèn)5、菌種確認(rèn)6、培養(yǎng)基和稀釋液的配制確認(rèn)7、中和劑鑒定試驗確認(rèn)內(nèi)容9、75乙醇 溶 液 、 0. 2新潔 爾滅 溶 液 消 毒 效 力的確認(rèn)10、消毒效力現(xiàn)場考察試驗l l、消毒劑儲存有效期確認(rèn)120.2新潔爾滅溶液和 75乙醇溶液消毒效力周期的確認(rèn)審核意見方案編制要求：簽名：年月日方案編制及實施要求， 消 毒 劑 消 毒 效 果 及 有 效 期 確 認(rèn) 方 案由生產(chǎn)部起草。1實施要求：消 毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案實施的時間為 2012 年月確認(rèn)總負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)簽名：年月日方案審核和批準(zhǔn)文件名稱： 消 毒 劑 消 毒 效 果 及有效期確認(rèn)文件編碼

3、： VP- CV- 006 a - 00編 寫 人日期 ：年月日審核人姓名職 務(wù)簽名日期批準(zhǔn)人：日期：年月日執(zhí)行日期：年月日年月日驗證小組人員名單：小組職務(wù)姓名所在部門職務(wù)組長生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員質(zhì)量部成員質(zhì)量部成員質(zhì)量部成員質(zhì)蜇部成員質(zhì)噩部成員質(zhì)噩部成員質(zhì)量部成員質(zhì)噩部成員工程部Tablet of Content目錄1. 目的和范圍.錯誤！ 未定義書簽。2. .錯.誤！ 未定義書簽。3. . . . . . .錯誤！ 未定義書簽。4. 定義與縮寫 錯誤！ 未定義書簽。5. 參考文件.錯.誤！.未.定.義.書.簽。.6. 概述 .錯.誤！ 未定

4、義書簽。7. 確認(rèn)前準(zhǔn)備.8.8.消毒劑消毒效力試驗."錯誤！ 未定義書簽。9. 消毒劑有效期確認(rèn)試驗. 1.3.10.驗證偏差和變更.··錯誤！ 未定義書簽。11. 附錄列表.·.錯誤！ 未定義書簽。l目的通過消霉劑消毒效果及有效期的確認(rèn)， 科學(xué)制訂消霉程序， 以保證各潔凈級別的操作間及設(shè)備外表面按照規(guī)定的消毒程序消毒能夠達(dá)到消毒防止污染的效果，2 適用范圍本方案適用千潔凈區(qū)的墻面、天花板、門窗、機器設(shè)備、儀器、操作臺、地漏、推 車、記錄臺、凳子等表面以及操作人員雙手（手套）的消毒等。3 職責(zé)3. 1消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)小組組長職責(zé)3. 1. 1

5、負(fù)責(zé)組織編寫消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案， 組織消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案的培訓(xùn)和實施。3. 1. 2負(fù)責(zé)消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案實施過程的監(jiān)控。3. 1. 3負(fù)責(zé)組織收集各項確認(rèn)數(shù)據(jù)， 并對實驗結(jié)果進(jìn)行分析， 制 訂消毒操作程序。3. 2生產(chǎn)部3. 2. 1負(fù)責(zé)消毒劑的配制， 及消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項試驗的實施。3. 2. 2負(fù)責(zé)消毒劑配制相關(guān)記錄的填寫， 及消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項試驗實施過程關(guān)鍵項目參數(shù)的記錄。3. 2. 3負(fù)責(zé)配合質(zhì)量部進(jìn)行消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項試驗的實施。3. 3質(zhì)量部3. 3. 1負(fù)責(zé)消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案的審核、實施、實施

6、過程的監(jiān)控、歸檔； 確 認(rèn)報告的發(fā)放、文件資料的保存。3. 3. 2負(fù)責(zé)消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項試驗實施過程中的取樣送檢， 檢驗結(jié)果的跟蹤。3. 3. 3負(fù)責(zé)消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項試驗實施過程中樣品的檢驗，并 出檢驗報告。3. 3. 4負(fù)責(zé)組織對確認(rèn)過程中的偏差進(jìn)行調(diào)查、處理、評估。3. 4工程部3.4. 1負(fù)責(zé)保證提供消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項試驗的條件。4 描述4. 1本公司的潔凈區(qū)分為十萬級、萬級和百級， 擬 定 用 千潔凈區(qū)表面消毒的有 2 種消毒劑： 7 5乙 醇、0. 2新潔爾滅溶液。本次驗證方案將選用以上 2 種消毒劑分別進(jìn)行驗證試驗。實驗分為兩部分： 一是實驗

7、室考察部分； 二是現(xiàn)場考察部分。4. 2 消毒劑的種類、消毒對象、消毒方法和有效期如下表：消 毒劑的種類、消毒對象、消毒方法和有效期序虧仁刁名稱消毒對象消毒方法有效期175%乙醇用于地面、墻面、器具、工作服、清潔布、拖布、潔凈鞋水池、地漏和手的消毒。采用擦拭、噴灑、浸泡和液封方式密閉保存試驗 6 天20.2%新潔爾滅溶液用于地面、墻面、器具、工作服、清潔布、拖布、潔凈鞋水池、地漏和手的消毒。采用擦拭、噴灑、浸泡和液封方式密閉保存試驗 6 天4. 3 作用對象一樣的消毒劑每月輪換使用， 避免表面微生物產(chǎn)生耐藥菌株。在利用消毒劑進(jìn)行表面擦拭消毒過程中消毒劑的作用時間應(yīng)不少于 10 分鐘， 利用消毒

8、劑進(jìn)行浸泡消毒的不少千 10 分鐘。4.4 實驗室考察部分， 定 量 懸 浮 試 驗法適用于浸泡或液封方式的消毒方法；表 面實驗法適用于擦拭或噴灑方式的消毒方法。潔凈區(qū)設(shè)施表面材質(zhì)有不銹鋼、鍛鋅板及玻璃三 種， 故 表 面 試 驗法 選用 不銹鋼載片、鎖鋅板及玻璃裁片模擬潔凈區(qū)設(shè)施表面進(jìn)行驗證試驗。兩種試驗方法作用的消毒劑序號試驗方法消毒劑1表面實驗法定量懸浮試驗法75乙 醇0. 1新潔爾滅溶液75乙 醇0. 1新潔爾滅溶液2344. 5現(xiàn)場考察試驗部分選擇 10 萬級潔凈區(qū)、萬級的微生物限度室、超凈工作臺設(shè)備表面消毒前和消毒后分別進(jìn)行取樣， 測 定 其 微 生 物 數(shù) 量 。5 確認(rèn)程序5.

9、 1 菌種序號名稱序列號1金黃色葡萄球菌CMCC(B)260032大腸埃希菌CMCC(B)441023I白色念珠菌CMCC(F) 98001 5 .2培養(yǎng)基備注（ 編 號： BZW15129 )玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)接觸碟號： BZW12085 )6規(guī)格：的5 mm,取樣面積為 25m2大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編5改良馬丁液體培養(yǎng)基4改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基3營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基2培養(yǎng)基經(jīng) 121·c,20min 滅菌備用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基I名稱序號5.3 消毒液擬定選用的中和劑序號消毒劑名稱中和劑備注175乙醇l卵磷脂 0 .1聚 山梨酷 80中和劑經(jīng) 121·c,20min 滅菌備用。2

10、0.1新潔爾滅溶液5.4 器具及設(shè)備序號名稱l無菌移液管2錐形瓶3無菌試管4璇渦混合器5恒溫水浴鍋6恒溫恒濕培養(yǎng)箱7恒溫恒濕培養(yǎng)箱5. 5稀釋液0. 9無菌 氯 化 鈉 溶 液 、 PH7. 0 氯化鈉蛋白脈緩沖液6 中和劑鑒定試驗6.1 試驗?zāi)康耐ㄟ^該試驗， 確 認(rèn)所 用 的 中 和 劑 對 對 應(yīng) 的 消 毒劑有良好的中和作用， 對 試 驗 用 菌 劑及其恢復(fù)期培養(yǎng)示范有害或不良影響。6.2 菌液的制備及計數(shù)6.2.1 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌工作菌液的制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中， 30 35 °C 培養(yǎng) l 8 2 4 小 時 。 取上述

11、培養(yǎng)物用 0.9 無菌氯化鈉溶液做 10 倍系列稀釋成l x l08 5x l08 C FU / ml 的工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為 l x108 5x l08 C FU / ml, 可不再用 0.9無菌氯化鈉溶液稀釋）。計數(shù)時， 將 l x l08 5x108 C FU /ml 的 工作菌液 10 倍系列稀釋成含 so 1OOC FU /m l 菌 液 ，并同時采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 30 35°C 培養(yǎng) 2 天計數(shù)。計算該稀釋級的平均菌落數(shù)， 將計數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。6.2.2 白色念珠菌工作菌液的制備接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，23 ,._,2

12、 8 °C 培 養(yǎng) 2 4 48 小 時。取上述培養(yǎng)物用 0.9無菌氯化鈉溶液做 10 倍系列稀釋成 lx l08 5x l08 C FU /ml 的 工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為 1x 1085x10 8 C FU/ml ，可 不 再用 0.9無菌氯化鈉溶液稀釋）。計數(shù)時， 將 l x l085x108 C F U/ml 的工作菌液 10 倍系列稀釋成含 SO1OOCF U/ml 菌液， 并同時采用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 23 28°C 培養(yǎng) 3 天計數(shù)。計算該稀釋級的平均菌落數(shù)， 將計數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。6.3 鑒定試驗操作6.3.1 配制 75乙醇、0.

13、2新潔爾滅溶液，具 體 操作 執(zhí) 行 清 潔 劑和消毒劑管理。將配置好的消毒劑置 20 °C 士l °C恒 溫 水 浴 鍋 中 備 用 。6 .3 .2分 組操作試驗分組及稀釋操作方法簡表組號 I 混合液A混勻作用 I 混合液B混勻作用 1 取混合液B 或混合液取 0.5ml工作菌液加入下列溶液中l(wèi)Omin取混合液 A 0.5ml加入下列溶液IOminB的稀釋級溶液0.5ml平板計數(shù) ( 2 皿組）1消毒劑4.5ml稀釋液4.5ml混合液B、10-l2消哥劑4.5ml中和劑4.5ml混合液B、10-l3中和劑4.5ml稀釋液4.5mll. O 2、10-34中和產(chǎn)物4.5m

14、l（消毒液與中和劑比例為 1:1 )稀釋液4.5ml10·2、o·35稀釋液4.5ml稀釋液4.5ml10-2、 10-36稀釋液和中和劑各1.0ml 注入無菌平皿中，各 制備2 皿。具體操作· 第 1 組目的： 觀察消毒液對試驗菌有無殺滅或抑制能力。操作：取消毒劑 4.5ml工作菌液 0.5ml,混勻作用 l Omin 后， 取混合液 0.5ml稀釋 液 4.5ml, 混勻作用 lOmin,取 0.5ml 注皿， 平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽玸菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒 置 30 35°C培養(yǎng) 3 天計數(shù)； 白 色念珠菌用玫瑰紅

15、鈉瓊脂培養(yǎng)基， 倒置 23 28°C培養(yǎng)5 天計數(shù)計數(shù)。· 第 2 組目的： 觀察殘留消毒劑被中和后受到消毒劑作用后的試驗菌是否恢復(fù)生長。操作：取消毒劑 4.5ml工作菌液 0.5ml,混勻作用 lOmi n 后， 取混合液0.5ml 中和劑 4.5ml,混勻作用 lOmin, 用稀釋液稀釋成 10-L 分別取未稀釋溶液（混合液 0.5mll中和劑4.5ml 的混合液）及10-1 0.5ml 注皿， 各平行制備2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽玸菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒 置千 30 35°C培養(yǎng) 3 天計數(shù)；白色 念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基， 倒 置千

16、23 28°C培養(yǎng)5 天計數(shù)。· 第 3 組目的： 觀察中和劑是否有抑菌性操作：取中和劑4.5ml工作菌液 0.5ml,混勻作用 lOmin,取混合液0.5ml 1稀釋 液 4.5ml,混勻作用 lOmin 后，用 稀釋液進(jìn)行 10 倍系列稀釋成 102- 、 103- 。 取相應(yīng)稀釋級 0.5ml 注皿，各 稀釋 級 平 行 制 備 2 皿 。金 黃 色 葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽袍菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒 置 30 35 °C 培養(yǎng) 3 天計數(shù)；白色 念 珠 菌 用 玫 瑰 紅 鈉 瓊脂 培 養(yǎng) 基 ，倒置 30 35°C 培養(yǎng) 3 天計數(shù)計數(shù)。

17、· 第 4 組目的： 觀 察 中 和 產(chǎn) 物 ， 或未被完全中和殘留消毒劑對試驗菌的生長繁殖是否有影響。操作：取 消 毒 劑 和 中 和 劑 1:1 的 混 合 液 4 .5ml 工作菌液 0.5ml，混 勻 作 用 l Omi n，取 混合液 0.5ml l稀 釋 液 4 .5 ml , 混勻作用 l Omi n 后， 用 稀 釋 液 進(jìn)行 10 倍系列稀釋成 l-O2 、 10· 3 。 取相應(yīng)稀釋級 0.5ml 注皿， 各 稀 釋 級 平行 制 備 2 J。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽袍菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置 30 35°C培養(yǎng) 3 天計數(shù)；白

18、色 念 珠 菌 用 玫 瑰 紅鈉瓊脂培養(yǎng)基， 倒置 30 35 °C 培養(yǎng) 3 天計。· 第 5 組目的： 作 菌 落 數(shù) 對 照 用操 作 ：取稀釋液 4.5ml工作菌液 0.5ml, 混勻作用 IOrnin, 取混合液 0.5ml 1稀 釋 液 4 .5 ml, 混勻作用 IOmin 后，用稀釋 液進(jìn)行 10 倍系列稀釋成 1·02、 10主 取相應(yīng)稀釋級 0.5ml 注皿， 各 稀 釋 級平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽玸菌用營養(yǎng)瓊脂培 養(yǎng)基，倒置 30 35 °C培養(yǎng) 3 天計數(shù)； 白 色 念 珠 菌 用 玫 瑰 紅 鈉

19、瓊脂培 養(yǎng) 基 ，倒 置 30 35°C 培養(yǎng) 3 天計數(shù)。· 第 6 組目的： 作 為陰性對照用操作： 分 別 取稀釋液和中和劑各 1.0ml 注入無菌平皿中， 各制備 2 皿。結(jié)果判斷試驗結(jié)果應(yīng)符合下列全部條件， 判斷所選中和劑合格。 第 1 組無菌生長， 或僅有少數(shù)試驗菌菌落生長。 第 2 組菌落數(shù)比第 l 組菌落數(shù)多， 但比第 3、4、5 組菌落數(shù)少， 且符合下表要求第 1 組平板平均菌落數(shù)。第 2 組平板平均菌落數(shù) 5X(x+5)y(y+0.5y) 第 3、4、5 組有相似菌落數(shù)生長， 其每組間菌落數(shù)誤差率不超過 15%。計算公式如下：( 3組間菌落平均數(shù)-各 組

20、菌落平均數(shù)）的絕對值之和誤差率x100 %3x3 組間菌落平均數(shù)第 6 組無菌生長。否則， 說明試劑有污染， 應(yīng) 重 新 進(jìn)行試驗。7 定量懸浮試驗0.2新潔爾滅溶液、75乙醇溶液消毒效力的確認(rèn)（定量懸浮試驗法）目的： 由 千 0.2新潔爾滅溶液、75乙醇溶液要通過浸泡或液封消毒，采用將消毒劑置千無菌具塞試管中通過定量懸浮試驗法， 確 定 其 消 毒效力是否符合要求。程序：（ 1)菌 種 的 選 擇由 千 0.2新潔爾滅溶液、75乙醇溶液中低效消毒劑， 且 不 能殺 滅 芽 玸， 故定量懸浮試驗用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌；( 2 ) 菌 液 制備： 取 金 黃色葡萄球菌、大腸

21、埃希菌接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于 30 35 °C 培養(yǎng) l 8 24h 即得，培養(yǎng)后微生物濃度應(yīng)不少千 106 c fu/rnl。取白色念珠菌接種千改良馬丁液體培養(yǎng)基中，于 2328 °C 培養(yǎng) 24 48h 即得，培養(yǎng)后微生物濃度應(yīng)不少于 106 c fu/ml。 (3 )消毒劑的配制： 按 照 清 潔 劑、消毒劑配制使用程序進(jìn)行配制 0.2新潔爾滅溶液、75乙醇溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。( 4 )試驗方法：（ a )在 室 溫 條 件 下 將 配 制 好 的0 .2 新潔 爾 滅 溶 液 （ 或 7 5 乙 醇 溶液）按 9ml/支分注千 27 支無菌具塞試管中，按 照 “5分

22、鐘組”、" 10分 鐘 組” 和 “ 15分鐘組“共 3組每組 9 支， 進(jìn)行分組編號。( b )取供試菌液 ( 106 c fu /ml 的金黃色葡萄球菌菌液， 106 c fu /ml 的大腸埃希菌菌液，10 6c fu/ml 的白色念珠菌菌液）1ml 按照下表， 分 別 接 入 到 盛 有 9ml0.2 新 潔爾 滅 溶液5 分鐘組10 分鐘組15 分鐘組金黃色葡萄球菌m1l支， 共 3 支1ml支， 共 3 支m1l支 ， 共 3 支（ 或 7 5 乙 醇溶液）的試管中（已進(jìn)行 10 倍稀釋），輕輕搖動， 混 合 均勻，并立即開始計時。大腸埃希菌1ml支， 共3支1ml 支

23、， 共3 支1ml支， 共3 支白色念珠菌1ml支， 共3支1ml支 ， 共3 支1ml支， 共3 支（c ) 消毒劑的稀釋分別在 5 分鐘、10 分鐘和 15 分鐘時迅速吸取 1ml 菌藥混合液，加入到 9ml ( l卵磷脂 0 .1聚 山梨 酷 80) 中和劑中，迅速混勻中和 10 分鐘， 分 別 取 上 述經(jīng)中和的 '5 分鐘組”、' 10 分鐘組”和 ' 15 分 鐘 組 ”的 接 種 細(xì)菌的消毒液，傾入過濾杯濾過，然后各用 0.9% 無菌生理鹽水 50ml 清洗濾膜，濾過，重復(fù)用 50ml0.9無 菌生理鹽水 的洗滌共 3 次。取下濾膜， 含 細(xì)菌的膜放入營養(yǎng)

24、瓊脂平板內(nèi)，含真菌的膜放入玫瑰紅鈉瓊脂平板內(nèi)，含 菌膜 面 向上。細(xì)菌千 30-35°C的生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 3d,真菌千 23-2·s c 的霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 5d。培養(yǎng)后在明亮處， 對 平 板 上 的 菌 落 數(shù) 進(jìn) 行 計 數(shù) ， 記 錄 計 數(shù) 結(jié)果 。d陽性對照分別將 106 c fu/ml 金黃色葡萄球菌菌液、106 c fu/ml 大腸埃希菌菌液、106 c fu/ml 的白色念珠菌菌液用無菌注射用水進(jìn)行梯度稀釋至濃度為 1o l OOc fu/ml, 取稀釋液體 lml 千平皿中，傾注冷卻至 45°C營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基混勻，待 凝 固

25、 后 于 細(xì)菌千 30-35°C的生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 3d,真菌于 23-2·s束后對平板上的菌落數(shù)進(jìn)行計數(shù)，記錄計數(shù)結(jié)果。c 的霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 5d。培養(yǎng)結(jié)0.2新潔爾滅溶液消毒效力的確認(rèn)與消毒劑作用時間菌種名稱試驗組菌落數(shù) ( cfu/ml)l 04平均菌落數(shù)( cfu/ml)殺菌率l235 分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌10 分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌15 分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌陽性對照菌種三名稱10-310 -4l O-5平 均 菌 落數(shù) ( cfu/ml)金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌確認(rèn)結(jié)果評價：操作人：日 期 ：年月日復(fù)

26、核人：日 期：年月日75乙醇溶液消毒效力的確認(rèn)與消毒劑作 用 時 間菌種名稱試驗組菌落數(shù) ( cf um/l )l O4平 均 菌 落數(shù) ( cfu/ml)殺 菌 率l235 分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌10 分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌15 分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌陽性對照菌種名稱l O-310-4l O-5平 均 菌 落數(shù) ( cfu/ml )金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌確認(rèn)結(jié)果評價：操 作 人 ：日 期：年月日復(fù)核人：日 期 ：年月日8 表面試驗75乙醇溶液、0.2新潔爾滅溶液消毒效力的確認(rèn)（表面試驗法）目的 由千 75乙醇溶液、0.2新潔爾滅溶液

27、要通過擦拭消毒， 故選用不銹鋼載片、鎖鋅片及玻璃裁片進(jìn)行表面試驗法， 確 定 其 消 毒 效 力 是 否 符 合 要 求 。程 序 ：（ l)菌 種 選 擇 ： 由 于 75 乙醇、0.2新潔爾滅溶液中低效消毒劑， 且不 能 殺滅 芽袍 ， 故 表 面 試 驗 用 菌 為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌。( 2 ) 工作菌液制備 取金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌分別接種千營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中， 千 30 35°C培 養(yǎng) l 8 24 h 即得， 培養(yǎng)后微生物濃度應(yīng)不少千 l 06 c fu/ml。取白色念珠菌接種千改良馬丁液體培養(yǎng)基中，于 23 28 °C培養(yǎng) 24 48h

28、即得，培 養(yǎng) 后 微 生 物 濃度 應(yīng) 不少 千 106 c fu / ml。(3 )染菌不銹鋼載片制備： 將 經(jīng) 滅 菌 的 不 銹 鋼 載 片 平鋪于 無 菌 平 皿 內(nèi) ， 滴加金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌含菌量為 l x l085x108 C FU/ml的 菌 液0 .1ml,并均勻涂布千整個載體表面。滴染菌液后， 載 片 置超凈工作臺晚干后備用。每種菌平行制備兩個染菌不銹鋼載片； 染 菌 鎖 鋅 載 片 制 備： 將 經(jīng) 滅菌的鎖鋅載片平鋪千無菌平皿內(nèi)， 滴 加金 黃 色 葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌含菌量為 l x l085x108 C FU/ml 的菌液 0.1ml

29、,并均勻涂布千整個載體表面。滴染菌液后，載片置超凈工作臺晚干后備用。每種菌平行 制備兩個染菌鎖鋅載片；染菌 玻 璃 載 片 制 備 ： 因 培養(yǎng)皿 的材質(zhì) 為玻璃，故用培養(yǎng)皿代替玻璃載片進(jìn)行染菌試驗。進(jìn)行菌液滴染前，用記號筆在培養(yǎng)皿菌液滴染面的背面畫出染菌面積 ( 50mmx50mm)，標(biāo)注清晰。菌液滴染操作同染菌不銹鋼載片制備。(4) )取樣試驗組：將 消 毒 劑 擦 拭 在 制 備 好 的 染 菌 載 片 上 ，消 毒 劑 作 用 時 間 分 別 為 5min、 l Omin、15min,不銹鋼載片、鎖鋅載片及玻璃載片每個作用時間分別制備 2 個。作用結(jié)束后， 用 接 觸 碟 取 樣 （接

30、 觸 碟 規(guī) 格 ： 小55 mm,取樣面積為 25m2)。取金黃色葡萄球菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號： BZW12085)；取大 腸 埃希菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號： BZW12085 )；取樣白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號： BZW15129)。接觸碟取樣方法： 打 開 接 觸 碟 蓋 ， 使 無 菌 培 養(yǎng) 基 表 面 與 取 樣 面 直 接 接觸 ， 均 勻 按 壓 接 觸 碟 底 板 ， 確 保 全 部 瓊 脂 表 面 與 取 樣 面 表 面 均 勻 接 觸 1 0 秒 左 右 ， 蓋上碟蓋。對照組： 對 照 組 的 活 菌 濃 度 同 工 作 菌 液

31、的 制 備 。陰性 對 照 ： 用 接 觸 碟 在 已 滅 菌 的 載 片 上 （ 未 染 菌 片 的 載 片 ）按壓 取 樣 ，操作同上。每種載片及每種接觸碟平行制備兩份。(5) )培養(yǎng)： 將 取 樣 金 黃 色 葡 萄 球 菌 和 大 腸 埃 希 菌 的 接 觸 碟 倒 置千 30, ,3 5 °C 培養(yǎng) 3 天計數(shù)； 取 樣 白 色 念 珠 菌 的 接 觸 碟 倒 置于 23,-.,28°C培養(yǎng) 5 天計數(shù)計數(shù)。( 6 )結(jié)果計算： 計 算 試 驗 組和對照組的活菌濃度( CFU/ml )， 并換算為對數(shù)值 ( N) ,并按下式計算殺滅對數(shù)值殺滅對數(shù)值 (KL)對照組

32、平均活菌濃度的對數(shù)值 ( NO) 試驗組活菌濃度對數(shù)值 ( NX )可接受標(biāo)準(zhǔn)： 殺 滅 對 數(shù) 值(KL) 應(yīng) 不 低 于3 個對數(shù)單位。75乙醇溶液、0.2新潔爾滅溶液消毒效力的確認(rèn)序號消毒劑名稱工作菌液殺滅對數(shù)平均值( K L )不銹鋼載片 ( min )玻璃載片 ( min )鎖鋅 載 片( min )510155101551015175乙醇金萄黃球色菌節(jié)大腸菌埃希念l=珠I菌巴20.2新潔爾滅溶液金萄黃球色菌葡大腸菌埃念l 習(xí)珠匕菌立可標(biāo)準(zhǔn)接受 陰性對照無菌生長；殺滅對數(shù)們(KL)應(yīng)不低千 3 個對數(shù)單位確認(rèn)結(jié)果評價：操 作 人 ：日 期 ：年月日9 消 毒 效 力 現(xiàn) 場 考 察

33、試 驗復(fù)核人：日 期 ：年月日目 的 ： 確 認(rèn) 消 毒劑對相應(yīng)設(shè)施的實際消毒效力。操 作 ：（ l ）生 產(chǎn) 車 間 崗 位 操作人 員 按 照 潔 凈 區(qū) 衛(wèi) 生 清 潔 程 序 、地漏的 清 潔 消 毒程序、10 萬級潔凈區(qū)潔具清潔消毒程序、萬級潔凈區(qū)潔具清潔消毒程序、地漏清潔程序進(jìn)行清潔。( 2 )生產(chǎn)車間崗位操作人員， 使用放冷的注射用水， 按照清潔劑、消霉劑配制使用程序進(jìn)行 75乙醇溶液、0.2的新潔爾滅溶液配制， 現(xiàn) 配 現(xiàn) 用 。 按照潔凈區(qū)衛(wèi)生清潔程序進(jìn)行清潔消毒， 分 別 清 潔 消 毒 10 萬級潔凈區(qū)各房間的頂棚、墻面、工作臺面和墻面、地漏、水池下水； 10萬 級 潔

34、凈 區(qū) 的 工作鞋、清潔布、拖布；萬級 區(qū)微生物限度室等房間頂棚、墻面、工作臺面和墻面、地漏、水池下水，萬 級 潔凈 區(qū) 的 工 作 鞋 、清潔 布 、 拖 布 等 區(qū) 域 。(3 ) 消 毒 15 分鐘后， 由 Q A 人員到車間按照接觸碟法取樣程序進(jìn)行潔凈區(qū)表面微生物的采樣； 用 浸 泡 或液 封 方 式 的 采 用無 菌 吸 管 取 浸 泡液 或液 封 液 1 ml，連續(xù)逐日測定， 共 測 定 3 次。記錄測定結(jié)果?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)： 所 監(jiān) 測 的 潔 凈 區(qū) 的 微 生 物 均 在 公 司 環(huán) 境質(zhì) 量 控 制 范 圍 內(nèi) ，各潔凈區(qū)符合各自的潔凈級別要求。75乙醇溶液消毒后環(huán)境監(jiān)測表面微

35、生物測定結(jié)果單位： c fu皿監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格第一次第二次第三次裁剪間10 萬級<50CFU/25cm2口是口否包裝間口是口否潔具間口是口否無菌檢查室萬級<25CFU/25cni2口是口否微生物限度室操作臺百級<l CFU/25c m2口是口否確認(rèn)結(jié)果評價：操 作 人 ：日 期 ：年月日復(fù) 核 人 ：日 期 ：年月日0.2新潔 爾 面 溶 液 消 毒 后 環(huán) 境 監(jiān) 測 表 面微生 物 測 定 結(jié)果單 位 ： c fu/ 皿監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格第一次第二次第三次裁剪間10 萬級<50CFU/25cm2口是口否包裝間口是

36、口否潔具間口是口否無菌檢查室萬級<25CFU/25cm2口 是 口 否微生物限度室操作臺百級<l CFU/25cm2口 是 口 否確 認(rèn) 結(jié) 果 評 價 ：操 作 人 ：日 期 ：年月日復(fù) 核 人 ：日 期 ：年月日0.2新潔 爾 滅 溶 液 消 毒 后 微 生 物 監(jiān) 測 測 定 結(jié) 果單 位 ： c fu/ 皿監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格第一次第二次第三次裁剪間地漏lO 萬級<50CFU/25cm2口是口否包裝間地漏口是口否潔具間水池下水口是口否微生物限度室地漏萬級<25CFU/25cm2口是口否微生物限度室水池下水口是口否確認(rèn)結(jié)果評價：操 作 人

37、：日 期 ：年月日復(fù) 核 人 ：日 期 ：年月日7 5 溶液 消 毒 后 微 生 物 監(jiān) 測 測 定 結(jié)果單 位 ： c fu 皿監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格第一次第二次第三次裁剪間地漏lO 萬級<50CFU/25cm2口是口否包裝間地漏口是口否潔具間水池下水口是口否微生物限度室地漏萬級<25CFU/25cm2口是口否微生物限度室水池下水口 是 口 否確 認(rèn) 結(jié)果評 價 ：操 作 人 ：日 期 ：年月日復(fù) 核人：日 期 ：年月日7 5 乙醇 溶 液 消 毒 后 微 生 物 監(jiān) 測 測 定 結(jié)果單 位 ： cfu皿監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)第一次第二次第三次可接受標(biāo)準(zhǔn)

38、是否合格工作鞋10 萬級<50CFU/25cm2口 是 口 否口是口否清潔布拖布口是口否工作鞋萬級<25CFU/25cm2口是口否清潔布口 是 口 否拖布口是口否確認(rèn)結(jié)果評價：操 作 人：日 期 ：年月日復(fù)核人：日 期 ：年月0.2新潔爾滅溶液消毒后微生物監(jiān)測測定結(jié)果單位： cfu皿監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)第一次第二次第三次可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格工作鞋10 萬級<50CFU/25cm2口是口否清潔布口是口否拖布口是口否工作鞋萬級<25CFU/25cm2口是口否清潔布口 是 口 否拖布口是口否確認(rèn)結(jié)果評價：操作人：日 期 ：年月日復(fù)核人：日 期 ：年月1 0消 毒 劑儲存

39、有 效 期 確 認(rèn) 試 驗?zāi)?的 ： 通過該試驗， 確 定消毒劑在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的， 并 且消毒效力不會發(fā)生變化， 符合要求。程序：（ 1 )在進(jìn)行消霉劑有效期確認(rèn)時，每天開啟裝消毒劑的容器不少千 5 次，其每次開啟時間在1 2 分鐘， 以模擬實際操作的最差條件。( 2)按照清潔劑、消毒劑管理規(guī)程和清潔劑、消毒劑配制使用程序配制 75%乙 醇、0. 2新潔爾滅溶液。( 3)分別在消毒劑儲存的第 3 天、第 4 天、第 5 天、第 6 天進(jìn)行取樣做消毒劑消毒效力的確認(rèn)。分別按照上述 7 或 8 做 0. 2新潔爾滅溶液、75乙 醇溶液消毒效力的確認(rèn)。( 4 )結(jié)果計算： 計算 試 驗組和對照組的

40、活菌濃度( CFU/ m ），并換算為對數(shù)伯 ( N) , 并按下式計算殺滅對數(shù)值： 殺滅對數(shù)值 (KL) 對 照組平均活菌濃度的對數(shù)值 ( NO) 試 驗組活菌濃度對數(shù)值 ( NX)可接受標(biāo)準(zhǔn)： 在消毒液有效期末， 殺滅對數(shù)值 (KL) 應(yīng)不低千 3 個對數(shù)單位。消毒劑儲存有效期確認(rèn)序I，了方法消毒劑名稱工作菌液殺滅對數(shù)平均值K（L 天）可接受標(biāo)準(zhǔn)34561定量，倉、浮試驗75乙醇金黃色葡萄球菌陰性對照無菌生長； 殺滅對數(shù)值(KL ) 應(yīng)不低千3 個對數(shù)單位大腸埃希菌白色念珠菌20.2新潔爾滅浴液金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌3表面試驗75乙醇金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌40.2新

41、潔爾滅溶液金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌確認(rèn)結(jié)果評價：操作人：日期：年月日 復(fù)核人：日期：年月日11 0.2新潔爾滅溶液和75乙醇溶液消毒效力周期的確認(rèn)11.1 0.2新潔爾滅溶液和75乙醇溶液消毒效力周期的確認(rèn) 目的： 確認(rèn)消毒劑在實際應(yīng)用中， 其消毒效力能夠保待的期限。程序：（ l ) 在 萬 級 實 驗室的墻面和百級級層流下設(shè)備表面作為驗證對象。實驗室墻面編號為 1 號、百級層流下設(shè)備表面 2 號， 分 別使用 0.2新潔爾滅溶液、75乙醇溶液進(jìn)行擦拭消毒 ( l 號為 0.2新潔爾滅溶液消毒劑、2 號為 75乙醇溶液）。( 2 )采用接觸碟法在消毒過的實驗室墻面和百級層流下設(shè)備表面取樣。(3 )取樣完畢完畢后第24、48、72 小時取樣