微生物檢驗相關(guān)知識

1、微生物檢驗相關(guān)知識微生物檢驗相關(guān)知識微生物定義及特點微生物定義及特點 微生物：是一群形體細小、結(jié)構(gòu)簡單、人肉眼微生物：是一群形體細小、結(jié)構(gòu)簡單、人肉眼看不見，必須借助于光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡看不見，必須借助于光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡放大幾百倍、幾千倍甚至幾萬倍才能看到的生放大幾百倍、幾千倍甚至幾萬倍才能看到的生物物微生物分布廣、種類多適應(yīng)強、易變異體積小、面積大代謝強、繁殖快微生物分類微生物分類微生物非細胞形態(tài)細胞形態(tài)病毒原核生物真核生物細菌、支原體、衣原體藍細菌藻類原生動物霉菌、酵母菌細菌分類細菌分類細菌呼吸類型分代謝類型分細胞結(jié)構(gòu)（染色）分形態(tài)分球狀、桿狀、螺旋狀自養(yǎng)型 、異養(yǎng)型需氧、厭氧、

2、兼性厭氧G+、G-球狀桿狀 弧形或螺旋形細菌結(jié)構(gòu)（染色）細菌結(jié)構(gòu)（染色）G-G+細菌結(jié)構(gòu)細菌結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)、核質(zhì)特殊結(jié)構(gòu)：莢膜、鞭毛、菌毛、芽孢v1 1、所有標本的采集、運送和處理應(yīng)在無菌操作，、所有標本的采集、運送和處理應(yīng)在無菌操作，防止污染原則下認真進行。防止污染原則下認真進行。v2 2、已采集標本都應(yīng)置于防漏、密閉的容器中運、已采集標本都應(yīng)置于防漏、密閉的容器中運送。已采集標本，常規(guī)性細菌學(xué)檢驗，不超過送。已采集標本，常規(guī)性細菌學(xué)檢驗，不超過1h1h送實驗室。保存在送實驗室。保存在44也不能超過也不能超過24h24h。v3 3、每份標本都應(yīng)標記患者姓名、化驗單聯(lián)號、

3、每份標本都應(yīng)標記患者姓名、化驗單聯(lián)號、標本來源、檢驗?zāi)康摹⑷掌诩跋嚓P(guān)臨床信息。標本來源、檢驗?zāi)康摹⑷掌诩跋嚓P(guān)臨床信息。 收到標本認真查對，看標本留取是否合格。收到標本認真查對，看標本留取是否合格。v4 4、避免來自寄生菌的污染，應(yīng)當保證每份標本、避免來自寄生菌的污染，應(yīng)當保證每份標本代表感染過程。如來自皮膚、呼吸道的正常菌代表感染過程。如來自皮膚、呼吸道的正常菌群過早、過度生長，會干擾培養(yǎng)結(jié)果。分離時群過早、過度生長，會干擾培養(yǎng)結(jié)果。分離時應(yīng)區(qū)別標本中是常居菌群的污染還是致病菌。應(yīng)區(qū)別標本中是常居菌群的污染還是致病菌。v5 5、分離細菌的目的：查找與疾病相關(guān)的微生物、分離細菌的目的：查找與疾病

4、相關(guān)的微生物及其對抗生素的敏感性，幫助臨床診斷、治療、及其對抗生素的敏感性，幫助臨床診斷、治療、預(yù)后和流行病學(xué)的調(diào)查。預(yù)后和流行病學(xué)的調(diào)查。v6 6、如疑似對低溫敏感的淋病奈瑟菌、腦膜炎奈、如疑似對低溫敏感的淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌感染標本應(yīng)立即處理。腦瑟菌、流感嗜血桿菌感染標本應(yīng)立即處理。腦脊液、生殖道、眼睛、內(nèi)耳標本決不可冷藏。脊液、生殖道、眼睛、內(nèi)耳標本決不可冷藏。v血培養(yǎng)儀所用培養(yǎng)基的種類：血培養(yǎng)儀所用培養(yǎng)基的種類： 需氧（成人、兒童）、厭氧、真菌培養(yǎng)基。需氧（成人、兒童）、厭氧、真菌培養(yǎng)基。標本用量：標本用量：l 采血量：成人采血量：成人8-10ml8-10ml，兒童，

5、兒童1-3ml1-3ml；l 骨髓用量：骨髓用量：1-3ml1-3ml；l 真菌：真菌：1-5ml1-5ml； l 厭氧菌：厭氧菌：3-10ml 3-10ml 。v培養(yǎng)儀上陽性報警標本要及時處理：消警、登培養(yǎng)儀上陽性報警標本要及時處理：消警、登記報警時間、用注射器抽取培養(yǎng)液接種平板，記報警時間、用注射器抽取培養(yǎng)液接種平板，血平板分離各類細菌特別血平板分離各類細菌特別-溶血鏈球菌，肺炎溶血鏈球菌，肺炎鏈球菌；巧克力平板于鏈球菌；巧克力平板于COCO2 2環(huán)境分離嗜血桿菌、環(huán)境分離嗜血桿菌、奈瑟菌。真菌培養(yǎng)接種兩個奈瑟菌。真菌培養(yǎng)接種兩個TTC-TTC-沙氏平板，分沙氏平板，分別放室溫別放室溫22

6、22及及3535孵育孵育24-48h24-48h。均需分區(qū)劃。均需分區(qū)劃線。線。v然后涂片革蘭染色鏡檢，把鏡檢結(jié)果及時電話然后涂片革蘭染色鏡檢，把鏡檢結(jié)果及時電話通知臨床醫(yī)生，并填寫初檢結(jié)果臨床通知單。通知臨床醫(yī)生，并填寫初檢結(jié)果臨床通知單。v常規(guī)培養(yǎng)常規(guī)培養(yǎng)5 5天，認為陰性者，報告無菌生長，天，認為陰性者，報告無菌生長， 正常人的血液、骨髓是無菌的，標本中檢出正常人的血液、骨髓是無菌的，標本中檢出 細菌，都應(yīng)視作病原菌細菌，都應(yīng)視作病原菌 需排除污染需排除污染腦脊液：腦脊液：v 涂片查抗酸桿菌：腦脊液涂片查抗酸桿菌：腦脊液以以4000r/min4000r/min離心離心30min30min

7、，取沉淀物涂片，做抗酸染取沉淀物涂片，做抗酸染色。色。v 涂片查新型隱球菌：將腦涂片查新型隱球菌：將腦脊液離心沉淀物進行墨汁脊液離心沉淀物進行墨汁染色，在黑色背景中見到染色，在黑色背景中見到菌體周圍有透明莢膜，有菌體周圍有透明莢膜，有時可見出芽的酵母菌。時可見出芽的酵母菌。v腦脊液培養(yǎng)用血培養(yǎng)儀，陽性報警標本處理同腦脊液培養(yǎng)用血培養(yǎng)儀，陽性報警標本處理同血培養(yǎng)。血培養(yǎng)。v注意：涂片檢到平面相對、成雙排列注意：涂片檢到平面相對、成雙排列G GC,C,可報可報告告“找到找到G GC, C, 形似腦膜炎奈瑟菌形似腦膜炎奈瑟菌”。巧克力平。巧克力平板于板于COCO2 2環(huán)境分離腦膜炎奈瑟菌和嗜血桿菌。

8、環(huán)境分離腦膜炎奈瑟菌和嗜血桿菌。v痰應(yīng)用冷開水漱口咳痰，痰應(yīng)用冷開水漱口咳痰，2h2h內(nèi)送實驗室。內(nèi)送實驗室。 培養(yǎng)前的處理：向痰液內(nèi)加等量的胰酶溶液，培養(yǎng)前的處理：向痰液內(nèi)加等量的胰酶溶液，放置放置35 30min35 30min使痰均質(zhì)化。然后挑選痰液中使痰均質(zhì)化。然后挑選痰液中膿性或帶血部分涂片直接鏡檢看白細胞和上皮膿性或帶血部分涂片直接鏡檢看白細胞和上皮細胞及真菌，待干后革蘭染色檢查細菌和真菌。細胞及真菌，待干后革蘭染色檢查細菌和真菌。標本信息及鏡檢結(jié)果都要登記。標本信息及鏡檢結(jié)果都要登記。v痰涂片目的有二：其一為確定標本是否適合做痰涂片目的有二：其一為確定標本是否適合做細菌培養(yǎng)。符合

9、要求的痰標本應(yīng)在低倍視野中細菌培養(yǎng)。符合要求的痰標本應(yīng)在低倍視野中白細胞白細胞2525個，上皮細胞個，上皮細胞1010個。其二是初步判個。其二是初步判定是否有病原菌存在。定是否有病原菌存在。v痰直接涂片查細菌、真菌：挑選痰液中膿性或痰直接涂片查細菌、真菌：挑選痰液中膿性或帶血部分，涂成均勻薄片，進行革蘭染色，鏡帶血部分，涂成均勻薄片，進行革蘭染色，鏡檢。檢。v痰涂片查抗酸桿菌：把痰前處理液加入痰標本痰涂片查抗酸桿菌：把痰前處理液加入痰標本中，兩者比例約中，兩者比例約2 2：1 1，混合均勻，放室溫靜置，混合均勻，放室溫靜置10-20min10-20min，待粘液完全液化，倒試管離心，待粘液完全

10、液化，倒試管離心3000r/min5-10min3000r/min5-10min，取沉淀物涂片抗酸染色鏡，取沉淀物涂片抗酸染色鏡檢。檢。v培養(yǎng)基選擇：血平板分離各類細菌特別培養(yǎng)基選擇：血平板分離各類細菌特別 溶血鏈溶血鏈球菌，肺炎鏈球菌。加萬古巧克力于球菌，肺炎鏈球菌。加萬古巧克力于COCO2 2環(huán)境分環(huán)境分離嗜血桿菌、腦膜炎奈瑟菌。麥康凱分離革蘭離嗜血桿菌、腦膜炎奈瑟菌。麥康凱分離革蘭陰性桿菌。真菌培養(yǎng)接種兩個陰性桿菌。真菌培養(yǎng)接種兩個TTC-TTC-沙氏平板，沙氏平板，分別放室溫分別放室溫2222及及3535孵育孵育24-48h24-48h。均需分區(qū)。均需分區(qū)劃線。劃線。尿液尿液v中段尿采

11、集：清潔外陰及尿道口周圍，自然排中段尿采集：清潔外陰及尿道口周圍，自然排尿，讓尿流不間停，截留中段尿不少于尿，讓尿流不間停，截留中段尿不少于1ml1ml。2h2h內(nèi)送交實驗室，在內(nèi)送交實驗室，在4C4C也不能超過也不能超過24h24h。實驗室。實驗室接到標本應(yīng)立即處理。細菌培養(yǎng)接種血平板和接到標本應(yīng)立即處理。細菌培養(yǎng)接種血平板和麥康凱，真菌培養(yǎng)選用麥康凱，真菌培養(yǎng)選用TTC-TTC-沙保羅平板。沙保羅平板。v尿定量培養(yǎng)：用尿定量培養(yǎng)：用10ul10ul定量接種環(huán)取尿液標本劃定量接種環(huán)取尿液標本劃線于血平板上呈一條直線，不要劃到底，然后線于血平板上呈一條直線，不要劃到底，然后沿直線左右劃線，從上

12、而下一次完成，不可來沿直線左右劃線，從上而下一次完成，不可來回劃線和分區(qū)劃線。回劃線和分區(qū)劃線。 置置3535培養(yǎng)培養(yǎng)18-24h18-24h，生長，生長菌落數(shù)乘以菌落數(shù)乘以100100，可求出每毫升生長菌落數(shù)。，可求出每毫升生長菌落數(shù)。v涂片查細菌、真菌：尿液以涂片查細菌、真菌：尿液以3000r/min3000r/min離心離心30min30min，取沉淀物涂片革蘭染色鏡檢。，取沉淀物涂片革蘭染色鏡檢。v涂片查抗酸桿菌：尿液以涂片查抗酸桿菌：尿液以4000r/min4000r/min離心離心30min30min，取沉淀物涂片抗酸染色鏡檢。取沉淀物涂片抗酸染色鏡檢。v注意：注意：10%10%的

13、尿路感染患者，可能會在同份尿標的尿路感染患者，可能會在同份尿標本中分離到本中分離到2 2種細菌，并都是病原菌。若同份標種細菌，并都是病原菌。若同份標本中檢到本中檢到3 3種以上不同種微生物，應(yīng)認為收集或種以上不同種微生物，應(yīng)認為收集或處理標本不當被污染，一般認為：尿標本中革處理標本不當被污染，一般認為：尿標本中革蘭陰性桿菌菌落計數(shù)蘭陰性桿菌菌落計數(shù)10105 5 CFU/ml CFU/ml、革蘭陽性球、革蘭陽性球菌計數(shù)菌計數(shù)10104 4CFU/mlCFU/ml有診斷意義，報告鑒定結(jié)果有診斷意義，報告鑒定結(jié)果及藥敏試驗。及藥敏試驗。 糞便糞便v涂片檢查：當檢查霍亂弧菌以及菌群失調(diào)優(yōu)勢涂片檢查：

14、當檢查霍亂弧菌以及菌群失調(diào)優(yōu)勢菌時需作直接涂片檢查。取新鮮標本涂片革蘭菌時需作直接涂片檢查。取新鮮標本涂片革蘭染色鏡檢：染色鏡檢： 有無革蘭陰性呈魚群排列的弧菌；有無革蘭陰性呈魚群排列的弧菌； 各種菌在涂片中所占相對比例、推斷主各種菌在涂片中所占相對比例、推斷主要優(yōu)勢菌；要優(yōu)勢菌； 有革蘭陽性芽生孢子和假菌絲即報告檢有革蘭陽性芽生孢子和假菌絲即報告檢出酵母樣菌。真菌也可濕片檢查。出酵母樣菌。真菌也可濕片檢查。v一般培養(yǎng)：直接挑取標本中膿血部分接種一般培養(yǎng)：直接挑取標本中膿血部分接種SSSS平平板和血平板嚴格按照三區(qū)劃線，保證有單個菌板和血平板嚴格按照三區(qū)劃線，保證有單個菌落的分離，置落的分離，

15、置3535培養(yǎng)。培養(yǎng)。v真菌培養(yǎng)：將標本接種兩個真菌培養(yǎng)：將標本接種兩個TTC-TTC-沙氏平板及血沙氏平板及血平板，置平板，置25-3025-30和和3535孵育孵育24-48h24-48h。真菌性。真菌性腹瀉多繼發(fā)于抗生素治療后，常見有白色假絲腹瀉多繼發(fā)于抗生素治療后，常見有白色假絲酵母菌。酵母菌。v根據(jù)這些部位感染細菌的特點，須用血平板和根據(jù)這些部位感染細菌的特點，須用血平板和巧克力平板作分離培養(yǎng)，必要時加選麥康凱，巧克力平板作分離培養(yǎng)，必要時加選麥康凱，需分區(qū)劃線。巧克力平板在需分區(qū)劃線。巧克力平板在COCO2 2 環(huán)境中孵育，環(huán)境中孵育，利于肺炎鏈球菌、嗜血桿菌和腦膜炎奈瑟菌的利于肺

16、炎鏈球菌、嗜血桿菌和腦膜炎奈瑟菌的生長。生長。v對化驗單上明確要求做霍亂弧菌培養(yǎng)以及霍亂對化驗單上明確要求做霍亂弧菌培養(yǎng)以及霍亂弧菌快檢陽性的均應(yīng)做霍亂弧菌培養(yǎng)，以便確弧菌快檢陽性的均應(yīng)做霍亂弧菌培養(yǎng)，以便確診和做進一步分型。方法是取一環(huán)大便標本或診和做進一步分型。方法是取一環(huán)大便標本或堿性蛋白胨水增菌液接種堿性平板或堿性蛋白胨水增菌液接種堿性平板或TCBSTCBS平板平板及血平板，要求三區(qū)劃線，然后置及血平板，要求三區(qū)劃線，然后置3535孵箱中孵箱中孵育。孵育。v涂片檢查：將拭子直接在玻片上涂片，革蘭染涂片檢查：將拭子直接在玻片上涂片，革蘭染色鏡檢查細菌、真菌，如果查真菌還可以濕片色鏡檢查細

17、菌、真菌，如果查真菌還可以濕片直接在高倍鏡下檢查芽生孢子和假菌絲。直接在高倍鏡下檢查芽生孢子和假菌絲。（正常人的眼內(nèi)正常人的眼內(nèi)，中耳及鼻竇內(nèi)是無菌的。中耳及鼻竇內(nèi)是無菌的。）膿液膿液標本的處理標本的處理v涂片檢查：膿液標本在培養(yǎng)的同時均須涂片，涂片檢查：膿液標本在培養(yǎng)的同時均須涂片，涂片的結(jié)果一方面為臨床提供最初的診治依據(jù)，涂片的結(jié)果一方面為臨床提供最初的診治依據(jù)，另一方面可作為分離培養(yǎng)的質(zhì)量指標。另一方面可作為分離培養(yǎng)的質(zhì)量指標。v涂片直接做革蘭染色，鏡下可觀察細菌和酵母涂片直接做革蘭染色，鏡下可觀察細菌和酵母樣菌。涂片做抗酸染色鏡檢查抗酸桿菌。樣菌。涂片做抗酸染色鏡檢查抗酸桿菌。標本的處

18、理標本的處理v注意：對無菌部位的感染，從分泌物中分離到注意：對無菌部位的感染，從分泌物中分離到細菌，一般均有臨床意義。細菌，一般均有臨床意義。v燒傷創(chuàng)面膿液或分泌物中，以銅綠假單胞菌最燒傷創(chuàng)面膿液或分泌物中，以銅綠假單胞菌最多見，次為金黃色葡萄球菌，再次為變形桿菌，多見，次為金黃色葡萄球菌，再次為變形桿菌，而大腸埃希菌、肺炎克雷伯、糞產(chǎn)堿桿菌及白而大腸埃希菌、肺炎克雷伯、糞產(chǎn)堿桿菌及白色念珠菌感染亦不少見。色念珠菌感染亦不少見。標本的處理標本的處理v淋病奈瑟菌涂片，注意細菌形態(tài)是否典型，革淋病奈瑟菌涂片，注意細菌形態(tài)是否典型，革蘭陰性球菌，平面相對、成雙排列分布在細胞蘭陰性球菌，平面相對、成雙

19、排列分布在細胞內(nèi)或外。內(nèi)或外。v培養(yǎng)：血瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板是基礎(chǔ)的培養(yǎng)：血瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板是基礎(chǔ)的分離培養(yǎng)基，另外應(yīng)接種巧克力平板，置分離培養(yǎng)基，另外應(yīng)接種巧克力平板，置COCO2 2環(huán)環(huán)境中孵育，可分離嗜血桿菌和奈瑟菌。以分區(qū)境中孵育，可分離嗜血桿菌和奈瑟菌。以分區(qū)劃線法接種。劃線法接種。無菌體液標本無菌體液標本v無菌體液是指血液骨髓和腦脊液外的羊膜液、無菌體液是指血液骨髓和腦脊液外的羊膜液、后穹隆穿刺液、透析液、心包液、腹膜穿刺液后穹隆穿刺液、透析液、心包液、腹膜穿刺液和滑膜液。和滑膜液。v涂片檢查：這類標本因原部位是無菌的，只要涂片檢查：這類標本因原部位是無菌的，只要檢出細

20、菌即可做出診斷。所以，直接涂片很重檢出細菌即可做出診斷。所以，直接涂片很重要。要。v標本如為漿液，可先經(jīng)標本如為漿液，可先經(jīng)3000r/min3000r/min離心，取沉淀離心，取沉淀涂片。如為膿液，可直接涂片。涂片固定后，涂片。如為膿液，可直接涂片。涂片固定后，作革蘭染色和抗酸染色。作革蘭染色和抗酸染色。v涂片做抗酸染色很重要，不少感染有結(jié)核性的，涂片做抗酸染色很重要，不少感染有結(jié)核性的，另外奴卡菌和放線菌是部分抗酸性的，作抗酸另外奴卡菌和放線菌是部分抗酸性的，作抗酸染色也有利于發(fā)現(xiàn)這類細菌的存在。染色也有利于發(fā)現(xiàn)這類細菌的存在。v胸水和腹水的涂片在觀察時應(yīng)予注意是單一菌胸水和腹水的涂片在觀察時應(yīng)予注意是單一菌種，還是混合菌感染。因為胸腔和腹腔內(nèi)器官種，還是混合菌感染。因為胸腔和腹腔內(nèi)器官的感染往往是混合菌引起的。胸水涂片中如見的感染往往是混合菌引起的。胸水涂片中如見到梭形革蘭陰性桿菌，說明有厭氧菌的感染可到梭形革蘭陰性桿菌，說明有厭氧菌的感染可能，在報告中應(yīng)表示出來。能，在報告中應(yīng)表示出來。v培養(yǎng)：培養(yǎng)：無菌體液含細菌數(shù)量較少，必須做增菌無菌體液含細菌數(shù)量較少，必須做增菌培養(yǎng)。一般注入培養(yǎng)瓶上血培養(yǎng)儀，標本處理培養(yǎng)。一般注入培養(yǎng)瓶上血培養(yǎng)儀，標本處理如血液。如果標本量太少接種完平板后，可用如